导读:本文包含了基因克隆基因功能分析论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小黑麦,NAC转录因子,TWNAC01基因,亚细胞定位
基因克隆基因功能分析论文文献综述
王萌,任丽彤,凌悦铭,谷海涛,艾尼瓦尔江[1]（2019）在《小黑麦TwNAC01基因克隆与功能分析》一文中研究指出NAC是一类调控植物发育、衰老、生物与非生物逆境以及在激素反应方面具有重要作用的转录因子。本研究以六倍体小黑麦为材料,在RNA-seq基础上,结合RACE与RT-PCR技术克隆出一条长1059bp小黑麦NAC基因,命名为TwNAC01(GenBank登录号:MG736919)。生物信息学分析表明,该基因与小麦(TaNAC20)及叁羊草(AtNAC92)NAC基因氨基酸序列相似性达95%以上,其预测蛋白与小麦、叁羊草、硬粒小麦、大麦蛋白亲缘关系最近。在干旱胁迫下,小黑麦TwNAC01基因在根、茎、叶以及籽粒部位表达量均较对照相比呈现明显上升趋势,其中在根和籽粒中较对照相比表达极显着,茎和叶中表达量较根和籽粒中不显着,但均较对照显着升高。经过胁迫处理,从基因表达数据来看TwNAC01基因受PEG6000、NaCl、低温、MeJA、ABA胁迫上调表达,且根中表达量显着高于叶中,经ABA、MeJA、PEG6000处理12h和24h后表达量达到最高,经NaCl和低温处理1h后表达量出现最高。亚细胞定位在细胞核中。在干旱胁迫下,TwNAC01基因在转TwNAC01基因拟南芥根部的表达量显着高于叶部,表达量均显着高于野生型及转空载体拟南芥。转TwNAC01基因拟南芥植株叶片在干旱胁迫下失水率较转空载体和野生型拟南芥降低,其电导率、H202和MDA含量较转空载体及野生型株系显着降低,但叶片含水量在转TwNAC01基因株系与较转空载体及野生型株系间差异不显着,而转TwNAC01基因拟南芥根系长度分别是野生型和转空载体拟南芥根系长度的1.5倍和1.2倍。沉默该基因的小黑麦中,该基因的表达量显着下调,其主根长更短,叶片H_2O_2和MDA的含量都有显着的增加,叶片含水量降低,叶片的净光合速率、气孔导度、胞间CO_2浓度及其蒸腾速率都随着干旱胁迫的加剧呈逐渐下降的趋势。可见,TwNAC01基因在植物根部优势表达,促进了植物根系的伸长,调节植物叶片气孔的开度,缓解植物对逆境的胁迫。本研究对于理解小黑麦的抗旱分子机制提供了重要依据,也为小黑麦抗旱育种奠定了分子基础。(本文来源于《第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集》期刊2019-08-11）
李云琴,陈中华,原晓龙,王毅[2]（2019）在《蒜头果中3-酮酯酰-CoA还原酶基因克隆与功能分析》一文中研究指出以蒜头果(Malania oleifera)为实验材料,基于转录组数据分析,采用RT-PCR方法克隆获得蒜头果3-酮酯酰-CoA还原基因,命名为MoKCR1,GenBank登录号为:KX421278。序列分析显示MoKCR1基因cDNA开放阅读框全长为963 bp,编码320个氨基酸,属于KCR家族。序列比对分析显示MoKCR1具有KCR蛋白所具有的NADH结合结构域[G(X)3GXG(X)3A(X)3A(X)2G]和裂解有关的关键结构域[Y(X)3K],蒜头果KCR与木薯(Manihot esculenta) KCR的蛋白序列同源性为82.81%。与已知超长链KCR蛋白进行系统进化分析显示Mo KCR1与巨尾桉(Eucalyptus grandis)关系较近。荧光定量PCR分析表明MoKCR1在蒜头果果实膨大期的表达量最高。本研究为最终揭示蒜头果神经酸生物合成提供了研究基础。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年14期）
方智振,姜翠翠,周丹蓉,潘少霖,林炎娟[3]（2019）在《‘秋姬李’PsMYB18基因克隆与功能分析》一文中研究指出【目的】克隆在采后‘秋姬李’果皮积累花色苷过程中高表达的MYB抑制因子PsMYB18基因,研究其序列特征、表达特点与功能。【方法】以‘秋姬李’为试材,采用qRT-PCR分析不同温度和光照处理条件下‘秋姬李’果皮中PsMYB18基因的转录水平,采用RT-PCR克隆PsMYB18基因,并通过烟草叶片瞬时表达试验分析PsMYB18的功能。【结果】q RT-PCR分析表明20℃和光照处理可促进‘秋姬李’果皮PsMYB18基因表达。PsMYB18基因的开放阅读框(ORF)为702 bp,编码233个氨基酸的蛋白。进化树分析表明PsMYB18与其他植物的花色苷合成抑制因子亲缘关系较近。序列比对结果表明其具有保守的R2R3结构域和抑制基序C1和C2。烟草瞬时表达试验表明,PsMYB18可抑制正调控因子PsMYB10.1和PsbHLH3的花色苷合成诱导功能。【结论】‘秋姬李’PsMYB18为花色苷合成抑制因子。(本文来源于《果树学报》期刊2019年07期）
袁梦如[4]（2019）在《沙柳SpsTAC2基因克隆、表达及功能分析》一文中研究指出沙柳是我国西北地区防沙治沙的主要树种之一,对维持沙地生态系统的稳定起着重要作用。沙柳的分枝角度异常多样化,研究其分枝相关遗传机制对于开发沙柳潜在价值有着重要意义。因此,本论文的主要研究对象为沙柳中具有调控分枝角度功能的IGT家族TAC基因。本研究利用同源克隆技术由沙柳中克隆获得Sps TAC2基因,对该基因进行生物信息学分析,组织表达特异性分析,亚细胞定位及目标基因的超量表达研究。研究结果如下:1.沙柳中SpsTAC2基因的CDS序列长度为783bp,编码260个氨基酸,为亲水性蛋白,未发现跨膜结构域,无信号肽区域,内含IGT基因家族典型结构域,系统进化树将SpsTAC2氨基酸序列与杨、柳位于第二条染色体上的TAMC-like基因所编码氨基酸序列聚为一类。SpsTAC2基因组基因序列长度为1332bp,包含4个外显子、3个内含子,基本结构与SpsTAC1相似。2.RT-qPCR及半定量RT-PCR结果表明,Sps TAC2基因在成熟叶及韧皮部表达量最高,在根部几乎不表达。3.本研究所构建的亚细胞定位载体N-YFP::SpsTAC2在洋葱内表皮细胞中的瞬时表达与亚细胞定位定位预测同时显示,SpsTAC2基因主要定位在细胞核中。4.本研究构建超量表达载体转化获得Sps TAC2超量表达转基因拟南芥株系4个。研究发现SpsTAC2在拟南芥中的超量表达增大了其一级侧枝的分枝角度平均8°左右;解剖结构显示,转基因株系与野生型相比,茎基的木质部及韧皮部细胞层数较少,下胚轴进入次生生长较晚,木质部具有更密集的导管。5.本研究获得了6个Sps TA C个超量表达转基因84K杨树阳性株系。上述研究结果表明,本研究克隆所得的SpsTAC2隶属于IGT基因家族。SpsTAC2基因的超量表达可以增大拟南芥的一级分枝角度;对拟南芥茎基部与下胚轴的韧皮部及木质部发育具有一定影响,对下胚轴导管发育有促进作用。本研究进一步丰富了IGT基因家族的分子遗传学信息,为沙柳中TAC基因的功能研究奠定了基础,为沙柳育种工作提供了理论依据。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
董轩名[5]（2019）在《独脚金内酯（SLs）调节黄瓜叶片衰老和相关基因克隆及功能分析》一文中研究指出黄瓜(Cucumis sativus L.)葫芦科黄瓜属植物,广泛种植于温带和热带地区,是我国的重要蔬菜作物之一,因其丰富的营养价值深受人们喜爱。在农业生产上黄瓜的产量和品质就尤为重要,叶片衰老提前出现将导致其产量和品质下降。叶片早衰严重影响黄瓜的光合作用进程,有机物积累能力下降,强制缩短植株发育周期,加大了营养消耗,进而限制了黄瓜产量和品质,因此延缓植物衰老,为黄瓜在生产中保产保质提供新思路。独脚金内酯(Strigolactones,SLs)是植物内源信号因子,具有抑制植物分枝、调节叶片衰老,诱导根寄生性种子萌发、调节丛枝菌根共生与根部网络结构、缓解非生物胁迫的伤害等多种生物学功能。本实验通过外源施加SLs类似物GR24处理使黄瓜叶片出现早衰表型以及对SLs生物合成关键基因CsCCD7、CsCCD8的功能研究,为进一步研究SLs调节叶片衰老的分子机制提供参考。本实验具体结果如下:(1)成功克隆黄瓜SLs生物合成关键基因CsCCD7、CsCCD8编码区全长分别为1801bp和1621bp,编码614和545个氨基酸,经生物信息学分析得出,两基因均属于CCDs基因家族;揭示了CsCCD7、CsCCD8及其编码蛋白的特性,二级结构结果表明两种蛋白均含有大量延伸链结构和无规则卷曲;叁级结构结果表明,CsCCD7蛋白与己知蛋白质RPE65的叁级结构有较高的同源性;同源性分析和系统进化分析显示,CsCCD7、CsCCD8均与同为葫芦科植物甜瓜的CmCCD7、CmCCD8同源性最高;基因启动子顺势作用元件的分析显示,CsCCD7、CsCCD8基因与脱落酸、茉莉酸甲酯、水杨酸等多种激素调节通路相关和光相关顺势作用元件联系密切。(2)外源GR24处理可以加速黑暗下离体黄瓜叶片衰老的进程,亚显微结构观察显示,GR24蘸根处理后移至育苗基质10d的叶片中叶绿体基粒片层开始出现断裂分散,在15d时叶绿体基粒片层结构受损解体,基粒数量减少。同时测定相关衰老生理指标显示叶绿素含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm、净光合速率都相对于对照组显着下降,导致光合能力减弱,衰老提前。其中1μM处理效果最为显着,故选定为最终的处理浓度,进行后续实验。(3)经1μMGR24蘸根处理48h后的黄瓜的根、第5叶中CsCCD7、CsCCD8基因的表达量相对于对照组显着上调,其中根部CsCCD7基因最早响应GR24,在处理3h时CsCCD7基因表达量相对于对照组显着上调,而根部CsCCD8和第5叶CsCCD7、CsCCD8基因的表达量在处理24h时才显着高于对照组,说明外源GR24处理可能促使黄瓜内源性SLs含量升高;同时测定GR24处理的黄瓜第五叶片中的衰老相关基因(SGR1、CsPAO、CsPPH)的表达量,结果发现表达量均显着上调,其中CsPAO和CsPPH在GR24处理3h时基因表达量显着上调,应答速度高于叶片中SGR1的表达情况,说明GR24处理可能导致叶绿素加速降解,叶片衰老提前出现。(4)黄瓜CsCCD7、CsCCD8基因在侧根、主根、茎、顶芽、新叶、成熟叶、节间和叶腋处各器官中均有表达,其中侧根和主根的表达量最大且显着高于其他器官,同时叶腋处、顶芽和成熟叶也有较高的表达量水平。经蘸根处理48h后移至土培的黄瓜各组织中CsCCD7、CsCCD8基因表达量基本随时间的推移稳步升高,说明GR24处理对黄瓜中各组织的CsCCD7、CsCCD8基因表达量并非瞬时应答,而是出现持续升高变化。(5)成功构建了CsCCD7、CsCCD8基因的过表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化方式将其转化野生型拟南芥,获得了两基因过表达拟南芥5个阳性株系。经过PCR鉴定和表达量鉴定,转基因结果可靠。CsCCD7、CsCCD8转基因拟南芥在出芽后20、32天时相对于对照组WT提早进入生殖生长阶段,部分叶片并出现黄化表现,其中CsCCD7转基因植株衰老程度最大。说明过表达CsCCD7、CsCCD8基因可以使拟南芥加速衰老。(本文来源于《哈尔滨师范大学》期刊2019-06-01）
尹航[6]（2019）在《紫花苜蓿MsTHI1基因克隆及抗旱功能分析》一文中研究指出近年来全球气候变暖而引发的干旱等问题日渐严重,由干旱问题所引发的经济损失占气象灾害的50%以上。苜蓿是全球种植的饲料作物,具有较高生物量和营养价值,是我国北方地区大面积栽培的优良豆科牧草,因此,提高干旱半干旱地区苜蓿生产力的关键在于增强苜蓿的抗旱能力。THI1基因参与硫胺素的合成,硫胺素可缓解外界胁迫对生物体的压力,对植物生长和发育有至关重要的作用。本文选择功能已知的蒺藜苜蓿THI1基因(Medicago truncatula L.,Medtr4g081130.1)作为参考序列,克隆紫花苜蓿中其同源的MsTHI1基因并进行功能验证。本研究得到的主要结果如下:(1)紫花苜蓿MsTHI1基因的表达分析在不同胁迫处理条件下,紫花苜蓿中MsTHI1基因的表达量呈现出了不同的变化趋势。干旱胁迫下,基因在茎中表达量低于其在根部及叶片表达量,胁迫处理3 h时,基因在叶片中相对表达量最高,是对照处理条件下的3.85倍。低温胁迫会抑制MsTHI1基因在紫花苜蓿中的表达,4℃胁迫处理下,基因在紫花苜蓿不同部位的相对表达量均低于其对照处理的相对表达量。150 mmol/L NaCl胁迫12 h时,基因在茎中的相对表达量最高,是对照处理条件下的70.85倍。150 mmol/L NaHCO_3胁迫6 h时,基因在根部的相对表达量最高,是对照处理条件下的3.65倍。(2)紫花苜蓿MsTHI1基因的克隆与序列分析以蒺藜苜蓿THI1基因作为参考序列,运用同源克隆的方法获得紫花苜蓿MsTHI1基因序列(Gene Accession:MH206189)。序列比对发现该基因编码氨基酸序列与蒺藜苜蓿序列相似度高达98.9%。生物信息学分析表明,此基因包含了一个1052 bp的开放阅读框,编码350个氨基酸,分子量为36.90 kD,理论等电点为5.68。其蛋白质序列中α螺旋占32.86%,延伸链占18.57%,β转角占8.29%,无规则卷曲占40.29%。将MsTHI1基因在烟草中的瞬时表达发现,其在烟草的叶绿体及细胞膜中均有表达,表明该基因可能参与了植物的光合作用以及物质跨膜运输、细胞的渗透调节等多条通路。(3)MsTHI1基因对苜蓿、烟草的转化本试验利用pCAMBIA1300为载体骨架,BamHI、PstI为酶切位点构建MsTHI1基因烟草过表达载体,在K326烟草中进行农杆菌遗传转化,对转化得到的烟草进行PCR鉴定得到19株MsTHI1基因过表达烟草,将其种子种植在含有20ug/ml潮霉素萌发培养基中进行筛选,将得到3株T1代转基因烟草干旱胁迫处理,进行生理指标的测定。利用pMDC123为载体骨架,SpeI、XbaI为酶切位点构建紫花苜蓿过表达载体,在龙牧801紫花苜蓿中进行农杆菌遗传转化,对生根的植株进行PCR鉴定,得到9株MsTHI1基因过表达紫花苜蓿,进行扦插,为进一步研究MsTHI1基因,提供植物材料。(4)转MsTHI1基因烟草干旱胁迫下生理指标变化不同干旱胁迫时间下,各时间点过表达植株维生素B1含量均高于野生型植株,证明MsTHI1基因可以提高烟草VB1含量。在胁迫处理3 d、5 d时,过表达植株SPAD值均高于野生型植株,由此可知长时间干旱胁迫情况下,MsTHI1基因过表达可以提高植株叶片SPAD值。野生型、3号与7号植株的Fv/Fm随着胁迫时间的增加呈现减少的趋势。在同一干旱胁迫处理条件下,各植株之间比较可知,在对照处理时间点、胁迫处理1 d、3 d叁个时间点时,野生型植株MDA含量最高。对照处理时,野生型植株O_2~-含量显着(P<0.05)高于过表达植株,过表达植株O_2~-含量差异显着(P<0.05)。野生型、过表达植株SOD含量随胁迫时间增加均呈现增加的趋势,同一时间点下,野生型植株SOD含量最高。对照处理时,野生植株POD含量显着低于过表达植株,说明MsTHI1基因过表达使植株POD含量增加。随着胁迫处理时间的增加,野生型植株在胁迫处理3 d时,Pro含量最高,随之着Pro含量减少,而过表达植株Pro含量一直呈现增加趋势,说明MsTHI1基因过表达提高烟草的抗旱性。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
徐丽霖[7]（2019）在《黄瓜矮化突变体基因克隆及功能分析》一文中研究指出黄瓜拉丁文学名为Cucumis sativus L.(2n=14),属葫芦科甜瓜属,一年生攀援草本植物,是中国各地夏季主要食用蔬菜之一,也是重要的经济蔬菜作物之一。本研究以课题组前期构建的黄瓜EMS诱变突变体库中筛得的矮化突变体Csdw及其野生型为研究材料,通过表型观察、细胞学观察、外源激素处理及内源激素测定等生理学实验对Csdw的表型进行分析,随后对黄瓜矮化表型的遗传特性进行了分析,根据遗传分析结果,采用Mutmap和KASP等技术对黄瓜矮化候选基因进行了鉴定,并利用生物信息学和转基因等手段对黄瓜矮化候选基因的序列、表达量及功能等进行了进一步的分析,主要研究结果如下:(1)黄瓜矮化突变体Csdw表型分析结果表明,矮化突变体Csdw株高为42.4±2.30 cm,野生型植株的株高为150.6±3.20 cm,Csdw的株高显着低于其野生型;Csdw的平均节间长度为2.21±0.25 cm,野生型植株平均节间长度为7.50±0.29 cm,Csdw的平均节间长度显着短于其野生型;然而在节间数量上Csdw与其野生型均为20个左右,无显着性差异,说明Csdw主要是由于平均节间长度的缩短使植株表现为矮化表型。(2)细胞学观察发现,与野生型相比,Csdw主茎纵切面细胞数目从野生型中的125.7±3.50个显着减少为76±3.41个,表明Csdw主茎细胞的分裂过程受到了抑制,从而使细胞数目减少,影响节间长度。(3)不同浓度外源GA_3处理Csdw后使其在株高及平均节间长度上得到了一定的恢复,且400 mg.L~(-1)浓度GA_3处理后Csdw的恢复程度最大。在株高性状上,Csdw对照组的株高为42.4±2.30 cm,400 mg.L~(-1)浓度GA_3处理后Csdw的株高为64.2±4.40 cm,相比于Csdw对照组显着增加了51.4%,然而却没有恢复至野生型状态(150.6±3.20 cm);在平均节间长度上,野生型对照组平均节间长度为7.5±0.29 cm,Csdw对照组的平均节间长度为2.21±0.25 cm,400 mg.L~(-1)浓度GA_3处理后Csdw的平均节间长度为3.24±0.08 cm,相比于Csdw对照组显着增加了46.6%,同样没有完全恢复至野生型状态。在节间数量上,野生型对照组、Csdw对照组及处理组均为20个左右,无显着性差异。内源激素检测结果表明野生型植株体的内源GA_3含量为4.87±0.44ng.g~(-1).FW~(-1),而Csdw的内源GA_3含量显着减少为2.89±0.25 ng.g~(-1).FW~(-1);内源BR、IAA及ZR含量在野生型和Csdw间均表现无差异。此外,不同浓度外源BR和IAA处理后Csdw没有出现任何恢复现象,说明Csdw对外源激素BR和IAA的处理不敏感。综上结果说明Csdw对于GA_3外源激素处理具有一定的敏感性且体内GA_3含量显着低于野生型。(4)遗传分析表明Csdw突变体矮化表型为单基因隐性遗传。利用全基因组重测序技术将黄瓜矮化突变体基因定位在了黄瓜基因组的第3染色体,后续KASP基因分型技术检测结果表明Csa3G872760包含的SNP基因型与F_2单株表型共分离,表明Csa3G872760为调控黄瓜矮化表型的候选基因。膜蛋白预测及进化树分析结果表明Csa3G872760编码CLAVATA1型类受体蛋白激酶,因此将Csa3G872760命名为CsCLAVATA1。CsCLAVATA1在黄瓜野生型植株不同部位中均可表达,且在茎中的表达量显着低于野生型。(5)利用根癌农杆菌介导的花序浸染法将连有CsCLAVATA1目的片段的RNAi载体PTCK303-CsCLAVATA1转化哥伦比亚野生型拟南芥,通过潮霉素抗性筛选及PCR鉴定共获得5个转基因株系。通过比较拟南芥野生型及5个纯合转基因株系的生长势发现,定植后17-38 d,转基因株系的株高均显着高于野生型,而随着时间的推移,转基因株系植株的株高与野生型的株高渐渐趋于一致。通过比较转基因株系与野生型的抽薹时间发现所有转基因株系植株较野生型提前6 d进入抽薹期。不仅如此,野生型中的茎生叶侧枝数为4条左右,5个转基因株系的茎生叶侧枝数量均为6条以上,最多达9条,转基因株系的茎生叶侧枝数量相比于野生型显着增加。此外,扫描电镜观察顶端花序大小结果表明,野生型植株中的顶端花序平均直径为1.5 mm,转基因株系的顶端花序平均直径均为2 mm以上,最大的接近4 mm,因此转基因株系的顶端花序较野生型显着增大。与CsCLAVATA1同源性最高的拟南芥基因(LOC9329593)在转基因株系中的表达量较野生型明显下调了3.13倍以上,说明了干扰载体在拟南芥转基因株系中发挥了抑制同源基因表达的作用。上述研究结果表明CsCLAVATA1参与调节了植物体SAM的生长发育。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
张梦娜,沈丽,Nnaemeka,Ekene,Vitalis,孙玉强,柯丽萍[8]（2019）在《陆地棉GhrbcMT基因克隆、表达与功能初步分析》一文中研究指出植物的rbcMT基因编码核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基N-甲基转移酶(ribulose1,5 bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunitε-N-methyltransferase, rbcMT),可能催化双功能酶核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基14位赖氨酸的ε-氨基的甲基化过程,目前在豌豆、小麦、烟草等中被鉴定出,可能参与调控植物生长发育,但有关GhrbcMT基因生物学功能研究尚未报道。该研究以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)为材料,提取叶片总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR技术克隆棉花核酮糖1,5-二磷酸加氧酶/羧化酶大亚基甲基转移酶基因(GhrbcMT)全长cDNA,对该基因进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)对GhrbcMT基因进行组织特异性表达分析,并用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术降低GhrbcMT在植株中的表达水平,同时用乙醇浸泡法提取野生型与GhrbcMT干涉株系的叶片叶绿素进行含量分析。结果显示, GhrbcMT蛋白质序列存在多个潜在磷酸化与糖基化位点, Loop结构占56.94%,构象灵活。GhrbcMT基因在棉花叶片中特异性表达, GhrbcMT干涉株系的GhrbcMT表达水平显着降低,棉花出现明显的生长缓慢、节间距缩短、植株矮小、花药败育等表型, GhrbcMT基因表达水平的降低对棉花植株的营养生长和育性具有显着影响。该研究通过对1,5-二磷酸核酮糖加氧酶/羧化酶大亚基甲基转移酶功能初步探究,为进一步探究植株生长发育和育性调控机理提供参考。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年07期）
李罗刚,王淑燕,潘伟荣,王配,张霞[9]（2019）在《版纳微型猪近交系STRA8基因克隆及功能生物信息学分析》一文中研究指出【目的】以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,初步研究STRA8基因的功能,为该基因在猪精子形成过程的作用研究奠定基础。【方法】以GenBank下载的猪STRA8基因序列JQ965783及多条猪EST序列为参考序列,设计特异性引物扩增版纳微型猪近交系(BMI) STRA8基因。对STRA8蛋白质进行理化特性和功能生物信息学分析,包括二级结构、蛋白功能域、疏水性、跨膜结构、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点以及蛋白质功能分析;搜索并下载其他物种的STRA8蛋白质序列构建多物种系统进化树。应用实时荧光定量PCR技术检测BMI STRA8在版纳微型猪近交系15个组织中的mRNA转录表达水平。【结果】获得了包含编码序列1 101 bp的全长序列1 316 bp,编码366个氨基酸,序列已提交GenBank,基因登录号KU705622,蛋白质分子量(Mw) 41.06 ku,等电点(pI) 4.52。STRA8二级结构中α螺旋含量最高,占52.19%;含有1个蛋白功能域;在氨基端有1个HLH结构域和1个卷曲螺旋区域,在羧基端有2个低复杂度区域;疏水性结果表明STRA8基因N末端、C末端均亲水;无跨膜结构,无信号肽序列;该蛋白质位于细胞核中的概率是56.5%;STRA8蛋白共有34个磷酸化位点;系统进化结果表明:BMI与羊、水牛的相似度最高。STRA8基因mRNA在检测的BMI 15个组织中呈现差异表达现象,睾丸中表达量最高。【结论】结果将为进一步研究STRA8基因在猪精子发生方面的作用及功能提供参考。(本文来源于《云南农业大学学报(自然科学)》期刊2019年03期）
张秋楠[10]（2019）在《菠菜SpoRaf28基因克隆及其高温应答功能分析》一文中研究指出非生物胁迫对植物生长有明显影响,其中高温胁迫严重影响植物生长发育和产量。研究植物高温应答分子机制对于农作物改良具有重要意义。菠菜(Spinacia oleracea L.)是耐冷不耐热的蔬菜,在我国北方广泛种植。菠菜不适合长距离运输,导致夏季南方菠菜供应不足,培育耐热菠菜品种并在南方推广种植具有重要意义。我们培育了菠菜耐热材料Sp75,并开始利用分子生物学手段研究菠菜高温应答机制。促丝裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联信号通路在植物发育与高温应答过程中都具有重要作用。该通路由逐级激活的叁级激酶MAP3K、MAP2K和MAPK通过顺序磷酸化发挥功能。菠菜基因组中有35个MAP3K和5个MAP2K,其高温应答模式和相互调控关系并不清楚。本研究在全基因组范围内分析了SpoMAP3K家族的35个成员,其与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、甜菜(Beta vulgaris L.)、藜麦(Chenopodium quinoa Willd)、南瓜(Cucurbita moschata L)、笋瓜(Cucurbita maxima Duch.)、黄瓜(Cucumis sativus L)等植物的MAP3K蛋白同源性较高,该蛋白的激酶结构域、磷酸化功能位点、半胱氨酸位点都较为保守。我们克隆了SpoMAP3K家族中SpoRaf28基因,其最大开放阅读框为1101bp,共编码366个氨基酸。利用烟草瞬时表达技术,对SpoRaf28进行亚细胞定位,结果显示该蛋白定位于细胞质中。荧光定量PCR分析表明,高温胁迫下在菠菜热敏感材料Sp73中SpoRaf28基因表达水平没有显着差异,而在耐热型材料Sp75中,SpoRaf28基因表达量显着上升。菠菜材料Sp75在六叶期和抽薹期SpoRaf28基因表达量在不同组织器官中表达量差异明显,两种时期均在叶片表达量最高。菠菜材料Sp75经37℃高温处理72h后,叶片明显发生萎蔫现象,SpoRaf28基因表达量呈上升趋势,但在不同盐碱(NaCl、Na_2CO_3、NaHCO_3)与重金属(CdCl_2)胁迫条件下,叶片表型无明显现象,SpoRaf28基因表达量下降,这表明SpoRaf28受到高温诱导,但是受盐和重金属胁迫抑制。37℃高温处理下,过表达SpoRaf28基因的酵母菌株和拟南芥植物的生长都受到促进,这表明SpoRaf28在高温应答过程中起正调控作用。酵母双杂交试验的结果表明SpoRaf28与SpoMAP2Ks不相互作用。我们的结果表明,SpoMAP3K家族成员SpoRaf28在菠菜高温应答信号通路中起到了正调控作用,为研究MAPK级联途径的分子调控机理提供了新的证据。(本文来源于《上海师范大学》期刊2019-05-01）
基因克隆基因功能分析论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以蒜头果(Malania oleifera)为实验材料,基于转录组数据分析,采用RT-PCR方法克隆获得蒜头果3-酮酯酰-CoA还原基因,命名为MoKCR1,GenBank登录号为:KX421278。序列分析显示MoKCR1基因cDNA开放阅读框全长为963 bp,编码320个氨基酸,属于KCR家族。序列比对分析显示MoKCR1具有KCR蛋白所具有的NADH结合结构域[G(X)3GXG(X)3A(X)3A(X)2G]和裂解有关的关键结构域[Y(X)3K],蒜头果KCR与木薯(Manihot esculenta) KCR的蛋白序列同源性为82.81%。与已知超长链KCR蛋白进行系统进化分析显示Mo KCR1与巨尾桉(Eucalyptus grandis)关系较近。荧光定量PCR分析表明MoKCR1在蒜头果果实膨大期的表达量最高。本研究为最终揭示蒜头果神经酸生物合成提供了研究基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因克隆基因功能分析论文参考文献
[1].王萌,任丽彤,凌悦铭,谷海涛,艾尼瓦尔江.小黑麦TwNAC01基因克隆与功能分析[C].第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集.2019
[2].李云琴,陈中华,原晓龙,王毅.蒜头果中3-酮酯酰-CoA还原酶基因克隆与功能分析[J].分子植物育种.2019
[3].方智振,姜翠翠,周丹蓉,潘少霖,林炎娟.‘秋姬李’PsMYB18基因克隆与功能分析[J].果树学报.2019
[4].袁梦如.沙柳SpsTAC2基因克隆、表达及功能分析[D].内蒙古农业大学.2019
[5].董轩名.独脚金内酯（SLs）调节黄瓜叶片衰老和相关基因克隆及功能分析[D].哈尔滨师范大学.2019
[6].尹航.紫花苜蓿MsTHI1基因克隆及抗旱功能分析[D].东北农业大学.2019
[7].徐丽霖.黄瓜矮化突变体基因克隆及功能分析[D].东北农业大学.2019
[8].张梦娜,沈丽,Nnaemeka,Ekene,Vitalis,孙玉强,柯丽萍.陆地棉GhrbcMT基因克隆、表达与功能初步分析[J].中国细胞生物学学报.2019
[9].李罗刚,王淑燕,潘伟荣,王配,张霞.版纳微型猪近交系STRA8基因克隆及功能生物信息学分析[J].云南农业大学学报(自然科学).2019
[10].张秋楠.菠菜SpoRaf28基因克隆及其高温应答功能分析[D].上海师范大学.2019