湖南省安化县人民医院湖南安化413500
【摘要】目的探讨生存素（Survivin）和第二线粒体来源的胱氨酸酶激活剂（Smac）在人脑胶质瘤组织中的表达及其相互间的关系。方法采用免疫组化SP法检测100例脑胶质瘤患者组织中Survivin和Smac的表达。结果Ⅲ＋Ⅳ分级胶质瘤组织中的Survivin表达阳性率和表达强度明显高于Ⅰ＋Ⅱ分级，而Smac表达阳性率和表达强度明显下降，差异有统计学意义，P<0.01；人脑胶质瘤组织中Survivin表达与Smac（γ=-0.771，P=0.000）呈显著负相关。结论人脑胶质瘤组织中Survivin表达上调而Smac下调，两者呈明显负相关，可能共同参与了脑胶质瘤的发生和发展。
【关键词】脑胶质瘤；生存素；第二线粒体来源的胱氨酸酶激活剂
脑胶质瘤是一种颅内最常见的神经系统恶性肿瘤，其发病率高达40.49％，其复发率、病死率亦较高，严重危害人类健康。尽管包括手术辅以放疗和化疗可以明显改善恶性脑胶质瘤患者的生存率[1]，但是患者常有术后复发。因此，深入研究胶质瘤的发病机制对提高其诊治水平和延长患者中位生存期具有重要的临床意义。生存素（Survivin）是目前发现的最强的凋亡抑制蛋白，与脑胶质瘤细胞的分裂和增殖的调节密切相关[2]，与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）同属凋亡蛋白家族成员。第二线粒体来源的胱氨酸酶激活剂（Smac）是位于线粒体膜间的细胞凋亡负性调节蛋白，具有抑制凋亡蛋白的生物学作用。目前国内外有关Survivin和Smac在人脑胶质瘤组织中的表达和相关性研究较少。作者采用免疫组化SP法检测100例脑胶质瘤患者组织中Survivin和Smac的表达水平，旨在探讨两者在人脑胶质瘤发生、发展过程中所起的作用，以期为进一步阐明人脑胶质瘤的发病机制并为其诊疗和预后判断提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料收集我院神经外科2010年8月～2014年8月术后经两位以上有经验的病理医师同时确诊的人脑胶质瘤标本100例，其中男62例，女38例，年龄20～74（46.2±12.5）岁。肿瘤组织按按2000年WHO中枢神经系统病理分级标准：低分级组，Ⅰ～Ⅱ级45例；高分级组，Ⅲ～Ⅳ级55例。两组在性别、年龄和肿瘤大小等方面差异无统计学意义，P>0.05。
1.2方法（1）标本制备标本采用10%福尔马林甲酸溶液浸泡固定固定后用石蜡包埋。用石蜡切片机连续行4µm连续厚切片，每例切片3张，分别用于Survivin、Smac免疫组化染色和HE染色；（2）Survivin和Smac检测采用免疫组化SP法检测Survivin和Smac的表达。兔抗人Survivin多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，鼠抗人Smac单克隆抗体购自美国Sigma公司，二氨基联苯胺（DAB）显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。检测时设阴、阳性对照，操作严格按试剂盒说明书进行；（3）免疫组化结果判定按随机双盲的原则由高年资的专业病理科医生独立观察。Survivin和Smac阳性染色参照王红霞等[3]所述评定标准，每张切片高倍镜下随机选取5个视野，连续计数100个肿瘤细胞。Survivin蛋白以细胞质或细胞核出现淡黄至棕黄色为阳性，Smac蛋白以胞浆中出现突出于背景的棕黄色为阳性。根据Survivin和Smac阳性细胞所占比例评估表达强弱，分为4级：～5%为阴性（－），6%～25%为弱阳性（+），26％～50％为阳性（++），大于50％为强阳性（+++）。
1.3统计学处理采用SPSS16.0统计分析软件进行数据处理。Survivin和Smac阳性率比较采用Chi-square和Fisher’s确切法，采用Mann-WhitneyU法比较不同分级间表达强弱程度，采用Spearman等级相关非参数检验分析Survivin和Smac之间的相关性。以α=0.05为检验水准。
2结果
2.1不同病理分级脑胶质瘤的Survivin和Smac表达情况比较Ⅲ＋Ⅳ级脑胶质瘤患者的Survivin和Smac表达阳性率为85.0%（85/100），明显高于Ⅰ＋Ⅱ级组的76.0%（76/100），，而Smac表达阳性率为88.0%（88/100），明显低于骨软骨瘤组的95.0%（95/100），P<0.01。见表1。
表1不同病理分级脑胶质瘤的Survivin和Smac表达情况比较
3讨论
细胞调亡是指基因控制的细胞为维持内环境稳定而自主、程序性死亡过程。细胞凋亡调控障碍会引起细胞过度增殖、细胞周期延长和凋亡减少，是导致肿瘤的发生和发展的重要原因。诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤的化疗、放疗和生物治疗的目的之一，具有良好的临床应用前景。因此，深入研究在胶质瘤发生和发展过程中的凋亡机制和细胞凋亡相关因子对诱导胶质瘤细胞凋亡和阻遏肿瘤无限生长具有重要的临床价值，可为胶质瘤治疗提供新的靶标和治疗方向。Survivin是目前已知的最强有力的凋亡抑制因子，具有抑制细胞凋亡和调控细胞周期的双重生物学作用。在肿瘤组织和正常组织中，Survivin的表达存在明显差别，检测其表达能准确反映肿瘤恶性程度分级、淋巴转移与否、监测放化疗的疗效和预测复发[4]。本组资料显示，Ⅲ＋Ⅳ分级胶质瘤组织中的Survivin表达阳性率和表达强度明显高于Ⅰ＋Ⅱ分级，这与王新华等[5]的研究结果相符，表明检测脑胶质瘤组织中Survivin表达强弱有助于肿瘤的病理分级，进一步证实了Survivin在脑胶质瘤组织中具有抗凋亡作用，参与了脑胶质瘤的发生和发展。Smac是在凋亡信号的刺激下由线粒体释放入胞质的促凋亡调节因子，可通过结合凋亡抑制蛋白（IAPs）尤其是X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）使其丧失抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）活性，继而发挥其促凋亡作用。近年来，Smac在肿瘤的发生、发展和治疗的作用是细胞凋亡研究中的一个热点，倍受关注[6]。夏开来等[7]研究发现，Smac可以剂量、时间依赖方式抑制C6胶质瘤细胞的增殖，可通过将C6胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期来发挥其凋亡作用。本组资料显示，Ⅲ＋Ⅳ分级胶质瘤组织中的Smac表达阳性率和表达强度明显高于Ⅰ＋Ⅱ分级，表明不同病理分级脑胶质瘤的Smac表达水平存在明显差异，病理分级越高，其表达阳性率和表达强度越低，提示检测Smac表达水平有助于脑胶质瘤的病理分级。王红霞等[3]的研究结果表明，随着卵巢黏液性肿瘤的恶性进展，Survivin表达上调而促凋亡蛋白Smac表达下调，且两者间呈显著负相关。本组资料显示，人脑胶质瘤组织中Survivin表达与Smac呈显著负相关，表明Survivin表达越强，其Smac表达强度越弱，提示两者相互调节、相互拮抗机制可能是脑胶质瘤的发生发展过程中的一个重要环节。其原因可能与胞质中的Smac蛋白通过与Survivin结合继而减弱对Caspase活性的抑制作用有关。
综上所述，人脑胶质瘤组织中Survivin表达上调而Smac下调，两者呈明显负相关，可能共同参与了脑胶质瘤的发生和发展。
参考文献：
[1]杨群英，沈冬，赛克等.初诊恶性脑胶质瘤患者综合治疗的生存情况分析.中华医学杂志.2013.93（1）：8-10.
[2]张贺春，窦长武.凋亡蛋白抑制因子Survivin在脑胶质瘤中的作用研究进展.内蒙古医科大学学报.2014.（3）：283-287.
[3]王红霞，陈钢，李国利，江亚军.Survivin和Smac在卵巢黏液性肿瘤中的表达及意义.中华病理学杂志.2010.39（6）：387-390.
[4]卢浩，刘士维，张伟.凋亡抑制因子Survivin的研究进展.山东医药.2014.（21）：102-104.
[5]王新华，杨炼球，邱令云，等.生存素和磷酸化信号传导与转录激活因子3在脑胶质瘤组织中表达与相互关系的研究.中国医药.2010.05（8）：687-688.
[6]王娜，杨俭.Smac在肿瘤进展及治疗中的意义.河北医科大学学报.2011.32（6）：739-742.
[7]夏开来，黄书岚，孙建波，等.Smac蛋白对C6胶质瘤细胞的影响.中华实验外科杂志.2009.26（5）：621-623.