导读:本文包含了胆固醇蓄积论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:乙肝病毒x蛋白,环氧合酶2,肝细胞脂质蓄积,胆固醇转运
胆固醇蓄积论文文献综述
詹登林,王伟华,张力引,陈圆圆,陈燕玲[1]（2019）在《COX-2参与调节胆固醇转运介导HBx表达肝细胞中脂质蓄积的研究》一文中研究指出目的:乙型肝炎病毒(HBV)长期感染导致肝脏脂肪变性、肝硬化和肝细胞致癌作用,其中HBV基因组编码的乙肝病毒x蛋白(HBx)在此过程中发挥重要作用;肝细胞脂质蓄积可由脂质调节障碍介导,其中胆固醇转运障碍引起游离胆固醇(FC)增加而与脂质蓄积有关。我们前期发现HBx可诱导肝细胞中环氧合酶2(COX-2)表达增高;本研究旨在探索HBx诱导COX-2的表达在肝细胞中胆固醇转运调节和介导脂质蓄积中的作用。方法:采用人肝癌HepG2细胞株、以及稳定进行HBV基因组复制(含HBx表达)的HepG2.2.15细胞和带有Teton开关的HepG2-Tet-ON-HBx细胞。如下处理建立模型:HepG2细胞,分别瞬转HBV、HBV-x-null和HBx表达质粒;HepG2-Tet-ON-HBx细胞,DOX(1μg/mL)处理48h诱导HBx表达;HepG2.2.15细胞瞬转HBx单克隆抗体(anti-HBx)表达,干预HBx表达;HepG2-Tet-ON-HBx细胞给予PTGS2小干扰RNA(siPTGS2)转染,干预COX-2表达。WB检测COX-2蛋白水平,qRT-PCR检测PTGS2m RNA水平;检测细胞内FC、总TC和TG含量,激光共聚焦显微镜观察细胞中脂滴(LDs)。结果:(1)与对照组相比,HBV蛋白表达的HepG2.2.15细胞中、HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞中,FC、总TC和TG水平增高、脂滴(LDs)增加;anti-HBx处理组细胞中,各指标均降低;提示HBV相关蛋白表达可诱导肝细胞中脂质和FC代谢的改变,与HBx蛋白作用有关;(2)与对照组相比,HBV蛋白表达和HBx表达的HepG2细胞中,PTGS2 mRNA水平和COX-2蛋白表达增高;anti-HBx处理组COX-2蛋白水平下降;与HBV/HBx表达组相比,缺失HBx表达的HBV-xnull组细胞中COX-2未见表达增高;提示HBV相关蛋白表达可诱导肝细胞中COX-2表达,与HBx蛋白作用有关;(3)与siNC组相比,siPTGS2处理组HepG2-Tet-ON-HBx细胞中FC、总TC和TG含量、以及LDs水平均降低。结论:HBx表达参与HBV诱导的肝细胞中COX-2表达增强,经由参与胆固醇转运的调节介导FC依赖性肝细胞胆固醇和脂质蓄积;靶向COX-2表达干预可为HBV/HBx相关肝细胞脂质代谢调节提供潜在靶点。(本文来源于《2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集》期刊2019-10-25）
詹登林,王伟华,兰尤,陈燕玲,郭晓璟[2]（2019）在《CAV1调节MAM胆固醇转运功能致HBx表达肝细胞中脂质蓄积的作用研究》一文中研究指出目的乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)作为关键调节因子可介导肝细胞脂质蓄积过程,其中胆固醇转运功能障碍引起的游离胆固醇(FC)增加与HBx所致脂质蓄积有关。小窝蛋白1(CAV1)存在于线粒体相关性内质网膜(MAM)中,参与胆固醇转运;本研究旨在探讨CAV1作为MAM组分调控胆固醇转运功能在HBx诱导肝细胞脂毒性中的作用。方法利用GEO数据库分析NASH患者肝组织中胆固醇转运和合成相关基因CAV1和SREBF2的相对表达情况。采用人肝癌HepG2细胞、HBV基因组稳定复制的HepG2.2.15细胞和带有Teton开关的HepG2-Tet-ON-HBx细胞,以及构建CAV1稳定高表达HepG2-CAV1细胞进行体外试验。如下处理建立模型:HepG2细胞瞬转pcDNA3.1-HBx质粒、HepG2-Tet-ONHBx细胞给予DOX(1μg/mL)处理48 h诱导HBx表达;HepG2.2.15细胞瞬转anti-HBx表达质粒干预HBx表达。qRT-PCR检测细胞中脂代谢相关基因mRNA水平,差速超速离心法提取MAM组分经WB检测COX-2和CAV1蛋白表达,邻位连接试验(PLA)观察位置邻近、以及免疫共沉淀(IP)检测蛋白的相互作用,免疫荧光(IF)实验观察CAV1与MAM(以红色MitoTracker和绿色ERTracker共定位表征)共定位、脂滴分布和FC分布,试剂盒检测细胞内TC、TG及FC水平。结果 GEO数据库(GSE89632)分析发现,与正常对照(n=24)相比,NASH患者(n=19)肝组织样本中基因表达水平在CAV1明显降低、SREBF2显着升高、且二者具有显着负相关性(均P<0.05),提示NASH病人肝组织中CAV1与胆固醇代谢的潜在关联性。体外试验中,与对照组细胞相比,①HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞中CAV1 mRNA水平降低,CAV1蛋白水平在HBV/HBx表达的HepG2细胞中降低、anti-HBx处理组细胞中增加,提示HBx表达肝细胞中CAV1表达受抑制;②HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞中,PLA实验观察到COX-2与CAV1红色荧光焦点数量增多,提示二者空间位置邻近效应增加,且IP结果显示二者互作增强;③HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞MAM组分中CAV1蛋白减少、COX-2蛋白水平增加,IF实验观察到CAV1与MAM的共定位(即白色荧光焦点)减少,而FC与MAM的共定位(即白色荧光焦点)增加,提示HBx表达可抑制MAM上CAV1的胆固醇转运功能,诱导mito-ER中胆固醇聚集和引发细胞中TC、TG及脂滴增加;④与HepG2-pB细胞相比,HBx转染的HepG2-CAV1细胞中TC、TG和脂滴及FC水平降低,提示CAV1参与HBx表达肝细胞中脂质代谢的调节作用。结论 HBx表达参与HBV感染肝细胞中COX-2和CAV1互作的调节,经由降低MAM上CAV1组分的分布抑制MAM中胆固醇转运过程,介导FC依赖性肝细胞中脂质蓄积;提示靶向MAM中CAV1-COX-2复合物形成和分布的干预,可为HBV/HBx相关肝细胞脂质代谢调节提供潜在靶点;同时为探明外源因素(如HBx等)暴露经由脂质代谢途径(如胆汁酸代谢)诱发肝脏脂毒性相关损伤和疾病的机制提供线索。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
杨倩,胡继佳,杨英杰,马屹茕,范燕琴[3]（2018）在《ARF6在血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞胆固醇蓄积中的作用》一文中研究指出【研究背景及目的】我们既往研究发现Ang Ⅱ可诱导足细胞胆固醇蓄积及足细胞损伤,但AngⅡ诱导足细胞胆固醇代谢失衡的机制仍不清楚。我们前期通过对既往报道的25个胆固醇转运相关基因筛查,发现ARF6在AngⅡ刺激的足细胞中表达显着下调,且AngⅡ可诱导足细胞内胆固醇蓄积及损伤,提示ARF6表达变化与足细胞胆固醇蓄积相关。本实验拟探讨ARF6在AngⅡ诱导足细胞胆固醇蓄积中的作用。(本文来源于《中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编》期刊2018-10-11）
彭小珊[4]（2018）在《S1P经LXRα/SIRT1途径抑制THP-1源性巨噬细胞胆固醇蓄积》一文中研究指出目的:1-磷酸神经鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)是血细胞和内皮细胞释放的具有调节免疫和保护血管功能的鞘脂类血源性化学信号分子。研究发现S1P与巨噬细胞胆固醇的转运过程密切相关,但其具体机制尚不明确。因此,本研究的目的是探讨S1P对巨噬细胞脂质蓄积的影响及可能机制。方法:1.THP-1细胞用60μg/ml ox-LDL(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)处理不同时间(0,12,24,48h)使其荷脂,采用油红O染色法检测细胞内的脂质蓄积及高效液相色谱检测胞内胆固醇含量。2.不同浓度的S1P(0.5,1.0,2.0μM)处理THP-1源性泡沫细胞24h,用1μM的S1P处理不同时间(0,6,12,24h)。采用Western blot免疫印迹检测细胞中SR-BI(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)和ABCA1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)的表达。3.VPC23019干预S1P1/3受体的表达,采用Western blot检测以及实时定量PCR(Quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测ABCA1及SR-BI蛋白以及mRNA的表达。4.采用相应的抑制剂和激动剂干预LXRα/SIRT1分子用以检测ABCA1和SR-BI的表达,Western blotting检测p-LXRα、p-SIRT1,油红O染色法检测实验组细胞脂质蓄积情况。结果:1.与control组相比,60μg/ml ox-LDL处理THP-1诱导形成泡沫细胞后脂质蓄积明显增加,且胆固醇含量也明显增加。2.S1P影响SR-BI/ABCA1的表达呈浓度和时间依赖性。VPC230193阻断S1P受体可影响THP-1细胞中ABCA1/SR-BI的表达。3.LXRα抑制剂(K1327)可显着抑制THP-1细胞ABCA1的表达,使胞内脂质蓄积增加。SIRT1激动剂(Resveratrol)抑制SR-BI的表达,且在一定程度上削弱了LXRα激动剂(T0901327)对SR-BI的上调作用,使胞内脂质蓄积减少。4.经ox-LDL处理下调p-SIRT1、p-LXRα的表达,而S1P可上调p-SIRT1、p-LXRα的表达。结论:S1P通过上调ABCA1的表达及抑制SR-BI的表达,减少细胞胆固醇蓄积,并且LXRα/SIRT1参与S1P对巨噬细胞脂质蓄积的调控。(本文来源于《南华大学》期刊2018-05-01）
陆开航[5]（2018）在《孕期尼古丁暴露致子代雄性大鼠骨关节炎易感的胆固醇蓄积机制》一文中研究指出骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨退行性变为主要特征的慢性关节退行性疾病,常引起关节疼痛甚至残疾,严重影响患者生活质量,以及给社会和家庭带来巨大经济负担。在OA病因学研究中,OA与代谢综合征(metabolic syndrome,MS)的联系愈来愈受到人们重视。越来越多的学者认为,OA属于MS范畴。英国学者Barker基于大规模流行病学调查结果发现,宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)患儿成年后MS的发病率增加,并提出“成人疾病发育起源”假说。尽管OA与MS、MS与IUGR之间的相关性研究报道日益剧增,但至今OA与IUGR间直接联系的研究较少。一项流行病学研究表明,男性低出生体重者发生手部OA的比例明显较高于对照组,女性也有类似的趋势。提示,OA与MS一样存在胎儿起源。关节软骨是OA病理改变的主要组织,其质量和OA的发病密切相关。有研究提示,关节软骨的质量高低与OA发生具有相关性。关节软骨组织主要形成于胚胎时期,宫内关节软骨发育异常可能是成年OA易感的重要原因之一。有研究表明,软骨胆固醇代谢异常,其所致的软骨胆固醇蓄积与成年OA的发生关系密切。提示,胎源性OA的发生机制还,包括关节软骨的胆固醇蓄积。已知正常软骨细胞主要通过分泌蛋白聚糖(aggrecan)和Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)组成细胞外基质,以维持关节软骨的生理功能。转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGFβ)信号通路在软骨细胞的发育分化过程中起到重要作用。TGFβ-Smad2/3是启动软骨基质合成基因转录的关键通路,对于关节软骨发育具有重要意义。研究发现,软骨胆固醇流出通路障碍也参与介导了成人OA软骨胆固醇蓄积的发生。而TGFβ信号通路也可促进胆固醇流出相关基因的表达。流行病学调查显示,尼古丁的摄入不利于个体本身的软骨健康,吸烟的骨关节炎患者,其软骨丢失和疼痛的风险要远高于不吸烟的患者。动物实验也表明,对于预先暴露于尼古丁刺激的大鼠,关节炎发病时炎症反应更为明显,关节损伤也更为严重。一项流行病学研究提示,母亲孕期吸烟可显着增加子代肌肉骨骼系统异常发育的风险,并且表明,孕期尼古丁暴露(prenatal nicotine exposure,PNE)是导致IUGR的确切和危险诱因之一。本实验室前期系列研究证实,PNE能削弱胎盘糖皮质激素(glucocorticoids,GC)屏障作用,并并且引起胎儿“母源性高GC”,使IUGR胎儿成年后MS易感性增加,存在“神经内分泌代谢编程机制”;本实验室还发现,PNE可致胎鼠生长板软骨发育迟缓,其机制可能与母源性高GC有关。大量研究已证实,孕期不良环境下出现的母源性高GC与子代宫内编程改变之间存在密切关系。有研究还发现,孕期高GC可抑制胎儿骨骼的纵向生长母源性高GC可导致软骨细胞增殖下降、基质合成减少、关节软骨变薄并导致软骨外基质含量下降,其机制可能为过高的GC抑制了胎鼠软骨细胞增殖和其TGFβ信号通路;并并且细胞实验证实,过高的GC水平可抑制细胞TGFβR的表达。鉴于上述,那么PNE是否可通过“母源性高GC”导致子代出生后的OA易感性增加?其发生机制可能与软骨TGFβ信号通路以及胆固醇流出通路编程改变有关?PNE子代成年后的胆固醇流出通路低编程改变是否加重了 OA易感性增加?这些问题均未见到相关研究文献。为此,本课题拟进行如下工作:利用PNE所致子代IUGR模型和关节腔内木瓜蛋白酶注射OA模型,证实PNE所致子代软骨胆固醇蓄积和OA易感现象;进一步观察PNE子代软骨TGFβ信号通路和胆固醇流出通路在宫内的变化,探讨PNE子代OA易感的宫内编程机制;通过给予子代出生后降脂药普伐他汀,通过反证探PNE子代OA易感的胆固醇蓄积机制。本课题的实施有助于我们更全面的认识PNE子代OA易感现象及其宫内编程机制,更好的理解胎源性OA,也对进一步探索OA的早期预防和治疗具有指导意义。第一部分孕期尼古丁暴露可致子代雄性大鼠关节软骨胆固醇蓄积及骨关节炎易感目的:本部分研究拟利用PNE所致子代IUGR大鼠模型和膝关节腔内注射木瓜蛋白酶诱导OA模型,观察PNE是否可引起IUGR子代成年后软骨发育不良,及软骨胆固醇蓄积和OA易感性增加。方法:宫内:Wistar母鼠自然受孕后,随机分为对照组和尼古丁组。自GD9起至GD20,尼古丁组分别皮下注射给予尼古丁 2mg/kg.d,对照组给予等体积蒸馏水。出生后:PNE组随机留取部分孕鼠让其自然生产,仔鼠生后12周(postnatal week,PW12),乙醚麻醉处死,取膝关节组织。OA造模:PNE雄性仔鼠(2mg/kg.d)及对照组雄性仔鼠自断奶后,给予正常饮食至8周龄,于PW8时行膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造OA模型[80],对照组和PNE组大鼠分别于造模开始的第1、4、7、10和13日经左膝关节腔内内注射4%木瓜蛋白酶溶液100μl;大鼠右膝于上述时间点注射等量生理盐水。在PW12,经乙醚麻醉处死大鼠,取下肢膝关节。结果:①与对照组相比,PNE组大鼠成年后未接受木瓜蛋白酶刺激时,其关节软骨大体形态较对照组改变较少;给予木瓜蛋白酶刺激后,PNE组关节软骨行墨汁染色出现肉眼可见,软骨表面严重磨损,关节软骨表面失去光泽并毛糙;②给予木瓜蛋白酶刺激后,行番红O-固绿染色发现,与对照组相比,PNE组出现明显的软骨表面磨损,软骨基质结构紊乱,软骨厚度变薄,基质染色变浅,软骨细胞数明显减少和潮线模糊,并且PNE组改良Mankin's评分较对照组升高更显着(P<0.01);③并并且PNE组软骨Col2a1和Aggrecan的mRNA表达显着降低(P<0.01);④与对照组相比,PNE组子代软骨出生后胆固醇流出通路表达明显降低;胆固醇蓄积指标,以及软骨炎症,凋亡指标,明显升高(P<0.05)。结论:PNE可致子代关节软骨发育不良,并且软骨出现胆固醇蓄积,在给予膝关节腔内注射木瓜蛋白酶刺激后,更易导致OA的发生。第二部分孕期尼古丁暴露致子代雄性大鼠骨关节炎易感的宫内编程机制目的:本部分拟通过整体动物实验,观察PNE子代胎鼠在宫内时期软骨TGFβ信号通路和胆固醇流出通路表达,以探讨PNE所致子代大鼠成年软骨胆固醇蓄积和OA易感的宫内编程机制。方法:宫内:Wistar母鼠自然受孕后。自GD9起至GD20,皮下注射给予尼古丁 2mg/kg.d,对照组给予等体积蒸馏水。在GD20时,采用乙醚麻醉孕鼠,剖腹取出胎鼠留取每窝胎仔数为8-14只的母鼠及其胎鼠。记录胎鼠的体重和性别,取雄性胎鼠膝关节组织。结果:①与对照组相比,PNE组关节软骨Col2a1、Aggrecan的mRNA和蛋白表达均显着降低(P<0.01);②软骨TGFβ信号通路表达:与对照组相比,PNE组子代在宫内关节软骨TGFβRI、Smad2、Sox9的mRNA和蛋白表达均显着降低(P<0.01);③软骨胆固醇流出通路表达:PNE组子代在宫内关节软骨LXRa的mRNA和蛋白表达均显着降低(P<0.01),并且SR-B1和ABCA1的mRNA和蛋白也有明显降低(P<0.01)。结论:我们发现,在宫内PNE可能通过母源性GC导致子代软骨TGFβ信号通路和胆固醇流出通路的低功能编程,进而导致子代软骨发育不良以及胆固醇蓄积。第叁部分普伐他丁可改善孕期尼古丁暴露所致子代雄性大鼠关节软骨胆固醇蓄积及骨关节炎易感目的:本部分拟通过整体动物实验给予降脂药普伐他汀,观察子代大鼠软骨质量以及胆固醇流出通路及OA的表现,并探讨其可能的原因和机制。方法:Wistar母鼠自然受孕后,随机分为对照组和PNE组。自GD9起至GD20,分别皮下注射给予尼古丁 2 mg/kg.d,对照组给予等体积蒸馏水。待孕鼠自然生产后,PNE雄性仔鼠给予正常饮食至8周龄,于PW8时行普伐他汀(20mg/kg.d)或等体积生理盐水皮下注射处理至PW12,期间分组予以关节腔内注射木瓜蛋白酶OA造模。即随机将对照组和PNE组大鼠分为对照+生理盐水组、对照+普伐他汀组、PNE+生理盐水组和PNE+普伐他汀组。在PW12,经乙醚麻醉处死大鼠,取双侧下肢膝关节,待行后续指标检测。结果:①给予木瓜蛋白酶刺激后,与PNE+生理盐水组相比,PNE+普伐他汀组关节软骨行墨汁染色出现肉眼可见的软骨表面尤其是胫骨平台软骨表面磨损明显减轻;②在生理盐水组,PNE组软骨胆固醇流出通路LXRa、SR-B1、ABCA1的mRNA表达较对照组均显着降低(P<0.01),并且PNE组软骨Col2a1和Aggrecan的mRNA表达也较对照组显着降低(P<0.01);而在普伐他汀组,PNE组软骨胆固醇流出通路LXRa、ABCA1和SR-B1显着降低(P<0.01),而PNE组软骨Col2a1和Aggrecan也显着降低(P<0.01);③在PW12时,与PNE+生理盐水组相比,PNE+普伐他汀组软骨炎症及基质降解指标IL-1、IL-6、MMP-3和MMP-13表达显着降低(P<0.01);并且软骨胆固醇蓄积指标LDL、oxLDL、LOX-1表达也显着降低(P<0.01)。结论:他汀类药物可改善PNE所致的成年子代大鼠软骨胆固醇流出通路抑制,从而减轻软骨胆固醇蓄积,减轻OA易感。(本文来源于《武汉大学》期刊2018-04-01）
刘巧,欧阳南,何泉,周超[6]（2017）在《高磷环境下胆固醇敏感器SCAP功能失调促进巨噬细胞内胆固醇蓄积》一文中研究指出目的观察高磷环境对巨噬细胞内胆固醇蓄积的影响及其分子机制。方法将人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞分为对照组(磷1.0mmol/L)、高磷处理组(磷3.0mmol/L)、磷甲酸钠(PFA)处理组(磷1.0mmol/L加PFA 1.0mmol/L)以及高磷联合PFA处理组(磷3.0mmol/L加PFA 1.0mmol/L),按不同要求分别处理各组细胞。培养24h后,油红O染色观察细胞内中性脂质的分布,酶催化比色法定量测定细胞内的胆固醇含量,qPCR检测细胞内羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCoAR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)mRNA的表达,蛋白质印迹法测定细胞内SCAP、LDLR、HMGCoAR及核内固醇调节元件结合蛋白2(N-SREBP2)的蛋白水平,激光共聚焦法检测SCAP从内质网向高尔基体的移位情况。结果与对照组相比,高磷处理组巨噬细胞内中性脂质明显聚集,细胞内总胆固醇与胆固醇酯的含量增加(P<0.05),LDLR、HMGCoAR mRNA与蛋白的表达增高(P<0.05,P<0.01),细胞核内N-SREBP2的蛋白表达水平增加(P<0.05),SCAP从内质网向高尔基体的移位增加;PFA处理(高磷联合PFA处理组)可阻断高磷引起的上述作用(P<0.05,P<0.01)。高磷处理组巨噬细胞内SCAP的蛋白水平相比对照组增高(P<0.05),PFA处理能抑制高磷导致的SCAP蛋白水平增高,但SCAP mRNA的表达在各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高磷环境下,钠磷转运体介导磷离子进入巨噬细胞内,通过基因转录后机制增加SCAP的蛋白水平,诱导其功能失调并促使其异常转运SREBP2至高尔基体裂解释放NSREBP2,后者转位入核促进HMGCoAR和LDLR的表达,促使细胞内源性胆固醇合成和外源性LDL经LDLR摄入的增加,最终导致细胞内胆固醇异常蓄积。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2017年12期）
庞琦,张光亚,刘卉芳[7]（2017）在《microRNA-152对影RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的响及其靶基因验证》一文中研究指出目的探讨micro RNA-152(mi R-152)对ox-LDL刺激下的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及其靶基因的确定。方法小鼠RAW264.7巨噬细胞分为两组,mi R-152组和阴性对照组。ox-LDL刺激两组细胞48 h后,酶荧光学法测定各组细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、胆固醇酯(cholesterolester,CE)的含量和TC/CE比例。生物信息学方法、双荧光素酶报告及实时荧光定量PCR和Western blot证实mi R-152的下游靶基因。结果与对照组相比,mi R-152组巨噬细胞内TC和CE含量增加,CE/TC的比值明显升高;并且,mi R-152组ABCAl的m RNA和蛋白表达水平较对照组明显降低。结论 mi R-152能够促进ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积,其机制可能与靶向调控ABCA1有关。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年19期）
李恒,罗齐军,卢向阳,曾富华[8]（2017）在《仙人掌多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积及其相关基因表达的影响》一文中研究指出采用PMA和ox–LDL构建THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP–Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达的影响。结果显示:THP–1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP–Ia能够显着减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR–BI m RNA及蛋白表达(与单独ox–LDL处理组比较,P<0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P<0.05),低、中剂量(5、10 nmol/L)ODP–Ia作用效果均不显着。本研究结果表明,ODP–Ia可通过增强ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达来减少胞内胆固醇蓄积。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2017年02期）
黄川[9]（2017）在《长链非编码RNA HOXC-AS1通过促进HOXC6表达影响OX-LDL诱导的THP-1巨噬细胞中胆固醇蓄积》一文中研究指出研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种常见的危害人类健康的心血管疾病,胆固醇等脂质代谢紊乱是导致AS发生发展的重要因素,寻找通过调控胆固醇等脂质代谢平衡从而防治AS发生发展的新靶点具有重要的意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是不具有编码蛋白质功能且长度大于200nt的RNA,研究发现lncRNA在个体生长发育和细胞生命活动中发挥重要作用。有研究表明一些lncRNA通过参与调控血管形成、脂质代谢以及炎症反应从而影响AS的发生发展。HOXC6属于同源盒基因家族(homeobox family)成员,该家族编码的蛋白在多细胞生物的形态发生中起重要作用。有研究表明其部分家族成员参与调控血管形成、内皮细胞迁移和脂肪组织形成等过程。由减肥手术引起的脂肪减少会促进HOXC6的表达。然而,关于HOXC6与AS之间的关系还未见报道。研究方法1、细胞培养(1)THP-1细胞培养:生长于含10%胎牛血清的RPMI(Roswell Park Memorial Institute)1640培养基,加入一定量青霉素和链霉素,置于培养箱中培养。(2)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞:用浓度为100ng/ml的佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)处理 THP-1 细胞,24-48h 后 THP-1 单核细胞分化成为巨噬细胞。2、组织来源8例无动脉粥样硬化斑块的正常动脉内膜组织和8例有动脉粥样硬化斑块的内膜组织标本在2013年4月至2014年4月期间采集自南方医科大学南方医院。3、RNA的提取和实时荧光定量PCR使用TRIzol试剂盒提取人动脉内膜组织和细胞的总RNA,逆转录为cDNA。在ABI 7500 FAST PCR仪上进行实时定量PCR反应。4、免疫印迹蛋白提取试剂盒提取细胞和人动脉内膜组织的蛋白,10%琼脂糖凝胶电泳将目的蛋白分离,按顺序进行电泳、湿转膜、封闭、孵育一抗、洗膜、孵育二抗,曝光显影,根据相对灰度值计算目的蛋白的相对表达量。5、病毒构建和转染HOXC-AS1过表达慢病毒载体(LV-HOXC-AS1)和相应的对照载体(LV-Mock)由莱德尔生物有限公司构建合成。转染时感染复数为100。6、高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)按照说明书进行检测,检测216nm处吸光度。结果用TotalChrom software软件进行数据分析。7、统计分析计量数据用均数±标准差(x±s)表示,各蛋白免疫印迹条带相对灰度值、1ncRNA和基因mRNA相对表达量的比较采用两独立样本t检验。每组实验重复5次,采用SPSS 17.0统计软件分析数据,P<0.01认为差异有统计学意义。结果1、IncRNA HOXC-AS1和HOXC6在动脉粥样硬化斑块中表达下降。我们首先采用基因芯片检测3对动脉粥样硬化斑块组织和正常动脉内膜组织中差异表达的RNA。结果显示,lncRNAHOXC-AS1在斑块组织中下降31.77倍,HOXC6下降4.64倍。在5对动脉粥样硬化斑块和正常动脉内膜组织中进行验证,qRT-PCR和免疫印迹结果显示lncRNAHOXC-ASl和HOXC6在斑块中表达水平下降。2、IncRNA HOXC-AS1促进THP-1巨噬细胞中HOXC6表达。生物信息学分析发现lncRNAHOXC-AS1和HOXC6基因定位于同一条染色体并且转录方向相反。在THP-1巨噬细胞中转染1ncRNA HOXC-AS1过表达慢病毒载体,qRT-PCR和免疫印迹结果显示HOXC6的mRNA和蛋白水平上调。3、OX-LDL抑制THP-1巨噬细胞中IncRNAHOXC-AS1和HOXC6CD的表达。用50μg/mlOX-LDL分别处理THP-1巨噬细胞Oh、12h、24h和48h,结果表明在48h以内,OX-LDL能够时间依赖性地下调1ncRNA HOXC-AS1和HOXC6的表达水平。此外,OX-LDL对HOXC6的抑制作用能够被lncRNAHOXC-ASl逆转。4、IncRNA HOXC-AS1能够部分消除OX-LDL对胆固醇蓄积的促进作用。采用高效液相色谱(HPLC,High Performance Liquid Chromatography)检测细胞内胆固醇含量,结果显示50μg/ml OX-LDL上调THP-1巨噬细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesterol ester,CE)水平。此外,OX-LDL对胆固醇的上调作用能被IncRNA HOXC-AS1部分抑制。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-02-16）
王慧清,张宗棨,黄文红,王晓菲,朱燕[10]（2014）在《Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响》一文中研究指出背景:研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的:观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法:取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。结果与结论:与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显着增加(P<0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P<0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显着性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年51期）
胆固醇蓄积论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)作为关键调节因子可介导肝细胞脂质蓄积过程,其中胆固醇转运功能障碍引起的游离胆固醇(FC)增加与HBx所致脂质蓄积有关。小窝蛋白1(CAV1)存在于线粒体相关性内质网膜(MAM)中,参与胆固醇转运;本研究旨在探讨CAV1作为MAM组分调控胆固醇转运功能在HBx诱导肝细胞脂毒性中的作用。方法利用GEO数据库分析NASH患者肝组织中胆固醇转运和合成相关基因CAV1和SREBF2的相对表达情况。采用人肝癌HepG2细胞、HBV基因组稳定复制的HepG2.2.15细胞和带有Teton开关的HepG2-Tet-ON-HBx细胞,以及构建CAV1稳定高表达HepG2-CAV1细胞进行体外试验。如下处理建立模型:HepG2细胞瞬转pcDNA3.1-HBx质粒、HepG2-Tet-ONHBx细胞给予DOX(1μg/mL)处理48 h诱导HBx表达;HepG2.2.15细胞瞬转anti-HBx表达质粒干预HBx表达。qRT-PCR检测细胞中脂代谢相关基因mRNA水平,差速超速离心法提取MAM组分经WB检测COX-2和CAV1蛋白表达,邻位连接试验(PLA)观察位置邻近、以及免疫共沉淀(IP)检测蛋白的相互作用,免疫荧光(IF)实验观察CAV1与MAM(以红色MitoTracker和绿色ERTracker共定位表征)共定位、脂滴分布和FC分布,试剂盒检测细胞内TC、TG及FC水平。结果 GEO数据库(GSE89632)分析发现,与正常对照(n=24)相比,NASH患者(n=19)肝组织样本中基因表达水平在CAV1明显降低、SREBF2显着升高、且二者具有显着负相关性(均P<0.05),提示NASH病人肝组织中CAV1与胆固醇代谢的潜在关联性。体外试验中,与对照组细胞相比,①HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞中CAV1 mRNA水平降低,CAV1蛋白水平在HBV/HBx表达的HepG2细胞中降低、anti-HBx处理组细胞中增加,提示HBx表达肝细胞中CAV1表达受抑制;②HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞中,PLA实验观察到COX-2与CAV1红色荧光焦点数量增多,提示二者空间位置邻近效应增加,且IP结果显示二者互作增强;③HBx表达的HepG2-Tet-ON-HBx细胞MAM组分中CAV1蛋白减少、COX-2蛋白水平增加,IF实验观察到CAV1与MAM的共定位(即白色荧光焦点)减少,而FC与MAM的共定位(即白色荧光焦点)增加,提示HBx表达可抑制MAM上CAV1的胆固醇转运功能,诱导mito-ER中胆固醇聚集和引发细胞中TC、TG及脂滴增加;④与HepG2-pB细胞相比,HBx转染的HepG2-CAV1细胞中TC、TG和脂滴及FC水平降低,提示CAV1参与HBx表达肝细胞中脂质代谢的调节作用。结论 HBx表达参与HBV感染肝细胞中COX-2和CAV1互作的调节,经由降低MAM上CAV1组分的分布抑制MAM中胆固醇转运过程,介导FC依赖性肝细胞中脂质蓄积;提示靶向MAM中CAV1-COX-2复合物形成和分布的干预,可为HBV/HBx相关肝细胞脂质代谢调节提供潜在靶点;同时为探明外源因素(如HBx等)暴露经由脂质代谢途径(如胆汁酸代谢)诱发肝脏脂毒性相关损伤和疾病的机制提供线索。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胆固醇蓄积论文参考文献
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[2].詹登林,王伟华,兰尤,陈燕玲,郭晓璟.CAV1调节MAM胆固醇转运功能致HBx表达肝细胞中脂质蓄积的作用研究[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
[3].杨倩,胡继佳,杨英杰,马屹茕,范燕琴.ARF6在血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞胆固醇蓄积中的作用[C].中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编.2018
[4].彭小珊.S1P经LXRα/SIRT1途径抑制THP-1源性巨噬细胞胆固醇蓄积[D].南华大学.2018
[5].陆开航.孕期尼古丁暴露致子代雄性大鼠骨关节炎易感的胆固醇蓄积机制[D].武汉大学.2018
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[7].庞琦,张光亚,刘卉芳.microRNA-152对影RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积的响及其靶基因验证[J].实用医学杂志.2017
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[10].王慧清,张宗棨,黄文红,王晓菲,朱燕.Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响[J].中国组织工程研究.2014