本文主要研究内容
作者黄瑜烨,李碧舟,何颖,孟繁梅,邹泽红,陶爱林,艾云灿（2019）在《基于CRISPR/Cas9技术的HaCaT的TLR4基因定向敲除及其功能初步研究》一文中研究指出：[目的]构建敲除Toll Like Receptor 4(TLR4)基因的Ha Ca T细胞株,为后续利用该细胞株进行过敏原性研究提供材料。[方法]利用CRISPR/Cas9系统,根据靶向原理设计并合成4条特异性识别TLR4基因的向导RNA(single-molecule guide RNAs,sgRNAs),构建p X459-sgRNAh TLR4重组质粒,并转入Ha Ca T中,用嘌呤霉素筛选出单克隆阳性细胞。测序确认突变位点,然后利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激对TLR4进行功能验证来进一步确认敲除效果。[结果]测序结果表明#26单克隆细胞株在靶点附近缺失1 bp,造成TLR4编码基因的移码突变,蛋白翻译提前终止。功能性验证结果表明,在LPS的刺激下,IL-8和CCL20的mRNA水平分别下降约85%和90%,且IL-8的蛋白分泌水平也显著性下调(87%)。[结论]成功构建了敲除TLR4的稳定细胞株,并且验证TLR4的功能缺损。
Abstract
[mu de ]gou jian qiao chu Toll Like Receptor 4(TLR4)ji yin de Ha Ca Txi bao zhu ,wei hou xu li yong gai xi bao zhu jin hang guo min yuan xing yan jiu di gong cai liao 。[fang fa ]li yong CRISPR/Cas9ji tong ,gen ju ba xiang yuan li she ji bing ge cheng 4tiao te yi xing shi bie TLR4ji yin de xiang dao RNA(single-molecule guide RNAs,sgRNAs),gou jian p X459-sgRNAh TLR4chong zu zhi li ,bing zhuai ru Ha Ca Tzhong ,yong piao ling mei su shai shua chu chan ke long yang xing xi bao 。ce xu que ren tu bian wei dian ,ran hou li yong zhi duo tang (lipopolysaccharide,LPS)ci ji dui TLR4jin hang gong neng yan zheng lai jin yi bu que ren qiao chu xiao guo 。[jie guo ]ce xu jie guo biao ming #26chan ke long xi bao zhu zai ba dian fu jin que shi 1 bp,zao cheng TLR4bian ma ji yin de yi ma tu bian ,dan bai fan yi di qian zhong zhi 。gong neng xing yan zheng jie guo biao ming ,zai LPSde ci ji xia ,IL-8he CCL20de mRNAshui ping fen bie xia jiang yao 85%he 90%,ju IL-8de dan bai fen bi shui ping ye xian zhe xing xia diao (87%)。[jie lun ]cheng gong gou jian le qiao chu TLR4de wen ding xi bao zhu ,bing ju yan zheng TLR4de gong neng que sun 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物技术的黄瑜烨,李碧舟,何颖,孟繁梅,邹泽红,陶爱林,艾云灿，发表于刊物生物技术2019年01期论文，是一篇关于系统论文,基因论文,基因敲除论文,细胞株论文,生物技术2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物技术2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：系统论文; 基因论文; 基因敲除论文; 细胞株论文; 生物技术2019年01期论文;