胡颖
浙江省杭州市正大青春宝药业有限公司浙江杭州310023
摘要：精准、快捷的微生物鉴别工作，对处理和应对社会公共卫生事件有重大的意义。所以制药企业必须要保存一些有生物，化学，血清的，且化学和物理性质比较稳定的标准对照菌种。同时，如果我们的管理与保存方法不恰当，这些具有优良品种的菌种就会遭到破坏，这就会对菌种的鉴定有一定的影响。
关键词：制药企业微生物实验室菌种保存
引言：制药企业微生物实验室菌种的保存很重要，方法种类居多，但是我们要找到适合的方法，做好菌种的保存工作，为制药提供基本的保证和支持，在此文中，我们会着重几种保存方法与大家进行讨论。
一、菌种来源及保存
1.1来源登记
一定要确定菌种的来源性问题，每种菌种要在适当的温度和情况下进行培育，培育一定时间之后就可以得到使用，要给每个菌种标上标签，并要保存好每个菌种的初始记录。
1.2接受菌种
一般而言，我们从菌种保藏中心购买来的初始菌种都是用玻璃安瓿装的冻干粉剂，与此同时它们还应该附有一定的菌种资料。当购买菌种以后，要根据每种菌种安瓿的数量，名字等做好记录，比如购买菌种的数量，厂家，种类，完整性，日期等等，最后将安瓿贴好标签，并放置于负2摄氏度的容器内保存，等到需要的时候再打开使用。通常来说，一瓶安瓿冻干品可保存在5年之内。
使用多种方法，科学合理的保存冷藏微生物菌种，菌种保存冷藏的要求和目的要达到以下的标准①不变形：就是要保持菌种的原样②不死：保持一定的活力而不至于死③不杂：正确地培养菌种，防止菌种受到污染。根据菌种的不同情况和实验室的条件不同，我们需要熟练地掌握以下几种科学的菌种保留和保藏方法
二、菌种的保存方法
2.1.1传代法
传代保存法：菌种中的某些个微生物当遭遇低温，干燥等情况时会受到毁灭，所以，为了应对这种情况，我们使用传代保存法。顾名思义传代保存法就是要把菌种进行定期的传代繁衍，先培养出一批又一批的菌种，再进行保存。这是一种最基本的微生物保存法，在我们日常生活中随处可见的酸奶就是采用这种方法。当采用这种方法时，要注意培养基中的浓度问题，营养成分问题，尤其是培养基中的碳水化合物的浓度问题，这些都要适度。培养基中的温度最好以适于菌种生存的温度为好，如果是那种具有产酸功能的菌种，那么应该在培养液中添加适量的碳酸钙。一般而言，绝大多数的菌种的冷藏温度以5摄氏度为好，比如厌氧菌和某些的病原真菌等微生物菌种就可以使用37摄氏度进行保存，蕈类等大型食用菌的菌种就可以直接进行常温保存。传代培养法虽然很简单，但是它也有很大的缺点，比如①菌种管的棉花塞很容易发霉②菌种容易发生变异，不稳定性极大③进行反复的传代时，菌种自身所携带的一些物理或者化学属性受到一定的影响，比如菌种的病原性，形成孢子的能力降低；④工作量较大，需要定期；⑤受到污染的可能性比较大
2.1.2液体石蜡覆盖法
液体石蜡覆盖法：这一种保存方法比较于传代保存方法而言保存的时间更长，它更加适用于霉菌，酵母菌等需氧菌的保存，这一种方法可以防止干燥主要是通过限制氧气的攻击来削弱菌种微生物的代谢功能。由于其方法等我简单便捷，所以它并不适合于那种不能冷冻的微生物的保存，而某些真菌比如根霉，毛霉等和某些细菌等也不适合采用此种方法的保存。
2.1.3、载体保存法
载体保存法：就是把微生物放在某种载体上进行保存，通常使用载体所保存的方法有以下几种：
①土壤保存法：用来保存形成孢子的微生物菌种的方法通常是使用土壤保存法，就是在杀过菌的泥土中加入一定量的菌液，然后在常温情况下保存，进行菌体的繁衍，也可以选择先干燥然后再繁衍。最后以常温状态保存或者选择冷藏。使用的泥土必须是比较富饶的，具有肥力的泥土，一定要经过风干，碎裂，过筛和灭菌等处理才能得到使用。
微生物在泥土中繁衍完成之后的进行干燥工作的方法就是：先取一定的泥土放入试管中，然后再加入定量的水或者培养液，进行灭菌工作。再然后就是要大量培养菌种，直到培养出能用肉眼看到的，再经过几天的风干或者放到干燥器中风干密封，最后常温保存冷藏。
②砂土保存法：取一定额度的砂，利用工具去掉较大的砂子，利用磁铁吸掉小的铁屑，再使用溶液和水依次冲洗清洗，再经过几天的干燥或者干燥器之后，放到试管中，保持一半的高度，再经过高温灭菌后，加入一点点培养液，搅拌均匀，放到真空干燥剂中，等到其自然风干保存。也可以选择一份经过hcl处理过的砂和旱季的泥土，再灭菌，最后做好保存工作。
③硅胶保存法：用7-17目的无色硅胶替代砂子，在经过高温杀菌之后，加入适量的菌液，加菌液的时候要注意冷却后再加入，因为硅胶的吸热性会使试管内壁的温度升高。
三、培养基与菌种
1、培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物实验结果，培养基的配制、储存和质量控制是提供优质培养基的保证。微生物实验室使用的培养基可以按处方配置，也可用按处方生产的符合规定的脱水培养基。培养基自制要点：
A、培养基制备用水为1、2级纯化水或双蒸水
B、培养基灭菌一般选用高压蒸汽灭菌或过滤除菌（不耐热）
C、培养基应保存在2-25℃、避光、一般在3周内使用，若密封可保存一年。D、培养基制备所需
2、实验过程中，生物样品是最敏感的，它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和储存条件。菌种储存要点：
A、药品微生物检验用的试验菌种应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株。
B、建议培养菌株可分装于小瓶中，低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻等方法保存。低于-70℃或低温冷冻干燥方法可延长菌种保存时间。
四、菌种的采购和接收
4.1菌种的采购
4.1.1从药检所或菌种保藏中心等外单位购入菌种斜面或冻干菌种。
4.1.1.2根据工作需要对购买国内保藏中心提供的菌种斜面提前1个月填写采购申请单，冻干菌种提前2个月申请购买，国外保藏中心提供的菌种应提前3个月申请购买。
4.2菌种的接收
4.2.1检定菌应设专人保管，管理人员应接受过专业培训，有足够的菌种保存经验。
4.2.2.接收菌种时，应核实菌种的名称、编号、传代代数、数量、有效期等，并调查清楚菌种的保存条件和注意事项。
接收时应填写菌种接收登记表。内容包括：菌种名称、菌种保藏中心编号、传代次数、接收日期、菌种来源等。
五，结束语
通过以上的几种制药企业实验室微生物实验室菌种保存的方法研究，我们看到了微生物的几种保存方法，也有某些微生物特定的保存方法，所以我们要根据微生物种类的不同来使用不同的微生物菌种保存方法，菌种的保存工作对于制药企业和社会公共卫生事业是很重要的，它影响到制药企业的核心，制药的能力和水平，它也影响到公共卫生事业的安全与稳定。所以，对于微生物菌种的保存方法我们一定要谨慎，为公共卫生安全事业以及人类的生命安全做出自己的一份力量。
参考文献：
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