导读:本文包含了大鼠原代肝细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:利福平,丹参酮ⅡA,BSEP,普伐他汀
大鼠原代肝细胞论文文献综述
刘蕾,杨玉洁,王凌,蒋学华[1]（2019）在《在“叁明治”培养大鼠原代肝细胞中研究利福平及联用丹参酮ⅡA对普伐他汀经BSEP转运的影响》一文中研究指出目的以普伐他汀为BSEP底物,在"叁明治"培养大鼠原代肝细胞模型上(sandwich-cultured rat hepatocytes,SCRH),研究利福平及联用丹参酮ⅡA对BSEP转运能力的影响。方法构建SCRH模型,利用MTT筛选给药剂量;建立普伐他汀的HPLC-MS/MS检测方法并进行方法学验证;考察利福平及联用丹参酮ⅡA对胆管内普伐他汀浓度的影响,并计算胆管外排指数(biliary excretion index,BEI)。结果成功构建了SCRH模型,并确定了利福平、丹参酮ⅡA、格列本脲及普伐他汀的合适给药剂量;建立了稳定可靠的普伐他汀HPLC-MS/MS检测方法;与空白组相比,利福平能够降低胆管内普伐他汀的浓度和普伐他汀的BEI,高浓度利福平的降低效果最明显(P <0. 01);与利福平高浓度组相比,联用丹参酮ⅡA后,胆管中普伐他汀的浓度以及普伐他汀的BEI增大,高浓度丹参酮ⅡA的增加效果最明显(P <0. 01)。结论在SCRH中,利福平能够抑制BSEP的转运能力,丹参酮ⅡA可以逆转利福平对BSEP转运能力的抑制作用。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2019年07期）
吴杰[2]（2019）在《CD38基因敲除对酒精引起的小鼠原代肝细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究》一文中研究指出研究背景与研究目的:酒精性肝病是由长期大量饮酒造成的一类代谢性疾病,其主要病变包括脂肪堆积,纤维化和肝硬化等。据统计,至少60%的肝脏疾病相关死亡是由于过量饮酒造成的,目前认为氧化应激是造成酒精性肝病发生和发展的主要原因,抗氧化应激被认为是最直接和最有效的酒精性肝病治疗策略。我们实验室前期研究发现,CD38基因缺失的小鼠胚胎成纤维细胞对H_2O_2和缺氧复氧诱导的氧化应激损伤具有显着的保护作用,同时CD38干扰可以改善由心脏脂质超载诱导的氧化应激损伤,然而CD38是否可以通过影响氧化应激影响酒精在肝损伤中的作用尚无文献报道。本课题拟在体外制备酒精诱导的肝细胞损伤模型,利用原代CD38基因敲除肝细胞研究其在酒精引起肝细胞氧化应激损伤中的作用及其具体机制,从而为酒精性肝病的防治提供新的作用靶点与研究思路。实验方法:1.肝原代细胞的提取与酒精诱导的肝细胞损伤模型的制备:1)通过在体灌流法分离培养6-8周龄C57BL/6小鼠原代肝细胞;2)梯度浓度酒精处理体外培养的原代肝细胞10小时,用DCFH-DA荧光探针标记细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),荧光显微镜检测细胞荧光强度;3)以1%酒精处理体外培养的原代肝细胞,检测不同时间点细胞ROS;4)Q-PCR和Western Blot法检测酒精对CD38转录与表达的影响。2.CD38敲除对酒精诱导细胞氧化应激损伤作用的分析:分离培养野生型和CD38基因敲除小鼠原代肝细胞,1%酒精处理10小时以诱导细胞氧化应激损伤模型。1)Q-PCR和Western Blot检测细胞中CD38敲除效率;2)流式细胞仪检测细胞ROS含量;3)多功能酶标仪检测线粒体膜电位;4)TBA法检测细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。3.机制分析:1)Western Blot检测酒精处理后野生型和CD38敲除组氧化应激相关蛋白SOD2、NOX2和FOXO3的表达;2)WST法检测超氧化物歧化酶活性(SOD);3)Q-PCR检测CD38基因敲除或过表达对酒精代谢相关基因ALDH2 mRNA水平的影响。实验结果:1.酒精浓度梯度处理原代肝细胞10小时后,细胞ROS水平随酒精浓度增加明显升高,并且CD38 mRNA表达量随酒精浓度增加而降低。1%酒精处理原代肝细胞,随着时间延长细胞ROS累积增加,并且在十小时左右达到最大量。2.1%酒精处理原代肝细胞十小时后,相比于野生型对照组,CD38基因敲除能够明显降低细胞ROS,MDA含量,并改善酒精诱导的线粒体膜电位降低。3.CD38基因敲除可以促进总SOD活性,但抑制SOD2的蛋白表达,然而并不影响FOXO3蛋白表达。酒精处理肝细胞后CD38基因敲除可以抑制NOX2表达。4.CD38基因敲除促进肝细胞ALDH2 mRNA表达,过表达CD38抑制ALDH2 mRNA表达。结论:CD38基因敲除对酒精诱导的肝细胞细胞氧化应激损伤具有保护作用。敲除CD38基因可促进肝细胞超氧化物歧化酶活性,加速ROS清除;同时CD38敲除促进ALDH2表达,从而改善酒精诱导的氧化应激损伤。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-06-01）
张毅,张晓妹,陈良,郑俊,杨卿[3]（2019）在《化合物BAM15减轻大鼠原代肝细胞冷保存损伤的实验研究》一文中研究指出目的探讨化合物BAM15对大鼠离体肝脏原代细胞冷保存损伤的影响。方法采用胶原酶灌注法提取大鼠肝脏原代细胞,根据细胞培养条件的不同,将细胞分为4组:A组(含250 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);B组(含500 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);C组(含1 000 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);对照组(Hibernate细胞培养液)。各组细胞均冷保存12 h。荧光显微镜下观察肝脏原代细胞的纯度。同时测定各组细胞的增殖能力、凋亡情况以及线粒体活性氧(ROS)变化情况。结果 B组和C组的细胞增殖能力均强于对照组(均为P<0.05)。A、B、C组的细胞凋亡率分别为(33.7±2.2)%、(19.7±1.1)%、(28.7±1.2)%,均明显低于对照组[(82.7±4.2)%,均为P<0.05]。A、B、C组的细胞内ROS阳性率分别为(11.8±4.0)%、(7.6±1.3)%、(8.9±1.6)%,均明显低于对照组[(27.4±4.5)%,均为P<0.05]。结论化合物BAM15能有效减轻大鼠肝脏原代细胞的冷损伤,其保护机制可能与BAM15减少冷缺血期间ROS生成有关。(本文来源于《器官移植》期刊2019年03期）
张秀莉,郭红云,张永东,王涛,梁涛[4]（2019）在《一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法》一文中研究指出目的:寻找一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法。方法:在Seglen两步胶原酶灌注法的基础上加以改进,按门静脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果。采用胰酶、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,大鼠肝脏肝门部结构、肝上及肝下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离获取肝细胞,经80目和200目的筛网依次过滤细胞后,细胞悬液分别以1 000、500、300 r/min离心各5 min以纯化肝细胞,以台盼蓝排染法测定细胞活性,HE染色鉴定肝细胞纯度。结果:平均每只成年Wistar雄性大鼠可以获得(1.53±0.31)×10~8个肝细胞,平均获得肝细胞活率可达到94.63%,平均获得肝细胞纯度为96.7%。结论:本实验介绍的方法简便易行,且肝细胞产量较高,活力好,纯度高,适宜在一般条件的实验室推广和应用。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年09期）
周龙,王立林,胡序怀,李亚文[5]（2019）在《PTEN基因沉默对小鼠原代肝细胞Akt/GSK-3β信号通路的影响》一文中研究指出目的探讨第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物蛋白(PTEN)对小鼠原代肝细胞蛋白激酶B/糖原合酶激酶-3β(Akt/GSK-3β)信号通路的影响。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,均分为4组:阴性对照组(NC-C组)、阴性对照白细胞介素-6(IL-6)组(NC-IL组)、siR-996对照组(996-C组)、siR-996与IL-6组(996-IL组)。采用HiPerFect转染试剂将siRNA-996转入小鼠原代肝细胞,24h后提取蛋白,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)、PTEN蛋白水平。结果在PTEN蛋白水平上,与NC-C组相比,NC-IL组升高(P<0.05),996-C组和996-IL组降低(P<0.01)。在p-Akt/Akt上,与NC-C组相比,NC-IL组降低(P<0.05),996-C组和996-IL组升高(P<0.05)。在p-GSK-3β/GSK-3β上,与NC-C组相比,NC-IL组降低(P<0.05),996-C组和996-IL组升高(P<0.01)。结论 PTEN基因沉默可逆转IL-6对小鼠原代肝细胞Akt/GSK-3β信号通路的抑制,增强小鼠原代肝细胞Akt/GSK-3β信号通路的表达。(本文来源于《重庆医学》期刊2019年07期）
陈永华,杨文明,江海林,唐露露[6]（2019）在《肝豆灵片对硫酸铜模拟铜负荷诱导TX小鼠原代肝细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨肝豆灵片对硫酸铜模拟铜负荷诱导TX小鼠原代肝细胞凋亡的影响。方法 DL小鼠原代肝细胞中加入铜负荷,作为正常组; TX小鼠原代肝细胞中加入铜负荷,作为对照组;TX小鼠原代肝细胞铜负荷中加入0.60、1.20、2.40 g/kg肝豆灵片,分别作为肝豆灵片低、中、高剂量组;TX小鼠原代肝细胞铜负荷中加入Salubrinal,作为Salubrinal组,各组培养原代肝细胞24 h后,流式细胞仪检测肝细胞凋亡,Western Blot法检测PERK、p-eIF2a蛋白表达,Real-timePCR法检测CHOP mRNA水平。结果与对照组比较,肝豆灵片组显着抑制原代肝细胞凋亡及PERK、p-eIF2a蛋白表达(P<0.05,P<0.01),显着降低CHOP mRNA水平(P<0.05,P<0.01),并均呈剂量依赖性。结论肝豆灵片可抑制硫酸铜模拟铜负荷诱导TX小鼠原代肝细胞凋亡,其机制可能与它干预内质网应激PERK/eIF2a凋亡信号通路有关。(本文来源于《中成药》期刊2019年03期）
周龙,王立林,胡序怀[7]（2019）在《小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需siRNA的筛选》一文中研究指出目的筛选出小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,放入25 cm~2胶原包被瓶中(1×106个/瓶),均分为5组:对照组(C组)、阴性对照组(NC组)、siR-996组、siR-1381组、siR-1519组。采用Hi PerFect转染试剂将各组对应的siRNA序列转入小鼠原代肝细胞,24 h后提取RNA和蛋白,通过Real-time PCR检测各组PTEN mRNA表达,通过Western blot检测各组PTEN蛋白含量。结果siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN蛋白含量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.01),siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN mRNA水平低于NC组,差异有统计学意义(P<0.01)。siR-996组的PTEN蛋白含量及PTEN mRNA水平最低,其PTEN蛋白含量及PTEN m RNA水平的沉默效率高于siR-1381组和siR-1519组。结论 siR-996是小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA。(本文来源于《中国当代医药》期刊2019年08期）
郭丽平[8]（2019）在《新生大鼠原代肝细胞分离和培养实验研究》一文中研究指出目的:尝试建立分离并获得稳定培养的新生大鼠原代肝细胞(Hepatocyte,HC)的简易方法。研究方法:采用多步酶消化法分离大鼠原代HC,经低速离心、选择性贴壁法纯化及培养肝细胞。结果:最初获得单细胞数量约1~2×10~6个/只,经0.4%台盼蓝染色细胞瞬时活率>70%,细胞悬液贴壁生长培养,在3~5 d细胞可长满瓶底的70%~80%,原代肝细胞经传代纯化、糖原染色和抗CK-18免疫组化染色鉴定,发现HC纯度>95%,细胞生长状态良好。结论:成功建立了分离、培养原代HC的简易方法,细胞数量、纯度、活率较好,可供一般实验室应用,为肝脏疾病的研究提供基本保障。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01）
周龙,王立林,李亚文,胡序怀[9]（2019）在《丙泊酚对小鼠原代肝细胞PTEN表达的影响》一文中研究指出目的探讨丙泊酚对小鼠原代肝细胞PTEN表达的影响。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,均分为叁组:对照组(C组)、溶剂对照组(D组)、丙泊酚组(P组)。首先用MTT法检测不同培养浓度[(1～100)μg/mL]下丙泊酚对小鼠原代肝细胞活性的影响,接着选取10μg/mL的丙泊酚(终浓度)作为培养条件,用MTT法检测不同培养时间[(1～32)h]下小鼠原代肝细胞活力变化。P组选用10μg/mL的丙泊酚(终浓度)处理小鼠原代肝细胞24 h。用Real-time PCR检测各组PTEN mRNA表达,用Western blot检测各组PTEN蛋白含量。结果在所有检测项目上,C组与D组的差异均无统计学意义(P>0.05)。与C组相比,丙泊酚浓度为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL时小鼠原代肝细胞活性的差异无统计学意义(P>0.05),丙泊酚浓度为100μg/mL时小鼠原代肝细胞活性显着降低(P<0.01)。不同培养时间的各组与C组相比,小鼠原代肝细胞活性的差异无统计学意义(P>0.05)。P组PTEN蛋白含量显着高于D组(P<0.01),P组PTEN mRNA水平高于D组(P<0.05)。结论丙泊酚可引起小鼠原代肝细胞PTEN表达增强。(本文来源于《中国现代医生》期刊2019年03期）
苗良生,王晓娟,关新江,李万鹏,董小章[10]（2018）在《儿茶素对软脂酸导致的大鼠原代肝细胞损伤的保护作用》一文中研究指出目的探讨儿茶素能否对软脂酸所导致的大鼠原代肝细胞毒性具有保护作用。方法使用大鼠原代肝细胞分别与毒胡萝卜素和软脂酸以及儿茶素共孵育16 h后检测内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94和CHOP,同时检测细胞凋亡和坏死。结果软脂酸与毒胡萝卜素类似,均可使共孵育的大鼠原代肝细胞GRP78、GRP94和CHOP的水平升高,而儿茶素的加入可以减少细胞凋亡和坏死并显着减少这叁种标志物的产生(P <0. 05)。结论儿茶素可经由抑制内质网应激从而保护细胞不受软脂酸的毒性影响。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2018年04期）
大鼠原代肝细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景与研究目的:酒精性肝病是由长期大量饮酒造成的一类代谢性疾病,其主要病变包括脂肪堆积,纤维化和肝硬化等。据统计,至少60%的肝脏疾病相关死亡是由于过量饮酒造成的,目前认为氧化应激是造成酒精性肝病发生和发展的主要原因,抗氧化应激被认为是最直接和最有效的酒精性肝病治疗策略。我们实验室前期研究发现,CD38基因缺失的小鼠胚胎成纤维细胞对H_2O_2和缺氧复氧诱导的氧化应激损伤具有显着的保护作用,同时CD38干扰可以改善由心脏脂质超载诱导的氧化应激损伤,然而CD38是否可以通过影响氧化应激影响酒精在肝损伤中的作用尚无文献报道。本课题拟在体外制备酒精诱导的肝细胞损伤模型,利用原代CD38基因敲除肝细胞研究其在酒精引起肝细胞氧化应激损伤中的作用及其具体机制,从而为酒精性肝病的防治提供新的作用靶点与研究思路。实验方法:1.肝原代细胞的提取与酒精诱导的肝细胞损伤模型的制备:1)通过在体灌流法分离培养6-8周龄C57BL/6小鼠原代肝细胞;2)梯度浓度酒精处理体外培养的原代肝细胞10小时,用DCFH-DA荧光探针标记细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),荧光显微镜检测细胞荧光强度;3)以1%酒精处理体外培养的原代肝细胞,检测不同时间点细胞ROS;4)Q-PCR和Western Blot法检测酒精对CD38转录与表达的影响。2.CD38敲除对酒精诱导细胞氧化应激损伤作用的分析:分离培养野生型和CD38基因敲除小鼠原代肝细胞,1%酒精处理10小时以诱导细胞氧化应激损伤模型。1)Q-PCR和Western Blot检测细胞中CD38敲除效率;2)流式细胞仪检测细胞ROS含量;3)多功能酶标仪检测线粒体膜电位;4)TBA法检测细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。3.机制分析:1)Western Blot检测酒精处理后野生型和CD38敲除组氧化应激相关蛋白SOD2、NOX2和FOXO3的表达;2)WST法检测超氧化物歧化酶活性(SOD);3)Q-PCR检测CD38基因敲除或过表达对酒精代谢相关基因ALDH2 mRNA水平的影响。实验结果:1.酒精浓度梯度处理原代肝细胞10小时后,细胞ROS水平随酒精浓度增加明显升高,并且CD38 mRNA表达量随酒精浓度增加而降低。1%酒精处理原代肝细胞,随着时间延长细胞ROS累积增加,并且在十小时左右达到最大量。2.1%酒精处理原代肝细胞十小时后,相比于野生型对照组,CD38基因敲除能够明显降低细胞ROS,MDA含量,并改善酒精诱导的线粒体膜电位降低。3.CD38基因敲除可以促进总SOD活性,但抑制SOD2的蛋白表达,然而并不影响FOXO3蛋白表达。酒精处理肝细胞后CD38基因敲除可以抑制NOX2表达。4.CD38基因敲除促进肝细胞ALDH2 mRNA表达,过表达CD38抑制ALDH2 mRNA表达。结论:CD38基因敲除对酒精诱导的肝细胞细胞氧化应激损伤具有保护作用。敲除CD38基因可促进肝细胞超氧化物歧化酶活性,加速ROS清除;同时CD38敲除促进ALDH2表达,从而改善酒精诱导的氧化应激损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大鼠原代肝细胞论文参考文献
[1].刘蕾,杨玉洁,王凌,蒋学华.在“叁明治”培养大鼠原代肝细胞中研究利福平及联用丹参酮ⅡA对普伐他汀经BSEP转运的影响[J].中国药理学通报.2019
[2].吴杰.CD38基因敲除对酒精引起的小鼠原代肝细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究[D].南昌大学.2019
[3].张毅,张晓妹,陈良,郑俊,杨卿.化合物BAM15减轻大鼠原代肝细胞冷保存损伤的实验研究[J].器官移植.2019
[4].张秀莉,郭红云,张永东,王涛,梁涛.一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法[J].现代肿瘤医学.2019
[5].周龙,王立林,胡序怀,李亚文.PTEN基因沉默对小鼠原代肝细胞Akt/GSK-3β信号通路的影响[J].重庆医学.2019
[6].陈永华,杨文明,江海林,唐露露.肝豆灵片对硫酸铜模拟铜负荷诱导TX小鼠原代肝细胞凋亡的影响[J].中成药.2019
[7].周龙,王立林,胡序怀.小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需siRNA的筛选[J].中国当代医药.2019
[8].郭丽平.新生大鼠原代肝细胞分离和培养实验研究[D].中国医科大学.2019
[9].周龙,王立林,李亚文,胡序怀.丙泊酚对小鼠原代肝细胞PTEN表达的影响[J].中国现代医生.2019
[10].苗良生,王晓娟,关新江,李万鹏,董小章.儿茶素对软脂酸导致的大鼠原代肝细胞损伤的保护作用[J].延安大学学报(医学科学版).2018