导读:本文包含了解脂耶罗威亚酵母论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:解脂耶罗维亚酵母,神经酸,质粒构建,GC-MS
解脂耶罗威亚酵母论文文献综述
乔建文[1]（2017）在《解脂耶罗维亚酵母产神经酸代谢工程研究》一文中研究指出神经酸(nervonic acid)是大脑神经细胞和组织中的一种天然成分,也是世界公认的具有修复疏通受损大脑神经通路、恢复神经末梢活性、促进神经细胞生长和发育功能的重要物质。为此,神经酸已然成为预防和治疗大脑相关疾病的最佳选择。自然界中神经酸来源稀少,远远不能满足市场对其的需求。本文通过基因工程技术对解脂耶罗维亚酵母(yarrowia lipolytica)代谢途径进行改造,获得了产神经酸的解脂耶罗维亚酵母工程菌株。具体研究结果如下:(1)通过同源重组技术敲除URA3基因,获得了解脂耶罗维亚酵母尿嘧啶营养缺陷型菌株URA3ˉpo1g。(2)采用Gibson Assembly方法,对解脂耶罗维亚酵母内源基因SCD(stearoyl-CoA desaturase)和DGA1(diacylgycerol acyltransferase 1),外源基因AtFAE1(fatty acid elongase 1 from Arabidopsis thaliana)、BtFAE1(fatty acid elongase 1 from Brassica tournefortii)、MaKCS(β-ketoacyl-CoA synthase from Microalgae)、MoKCS(β-ketoacyl-CoA synthase from Malania oleifera)和CgKCS(β-ketoacyl-CoA synthase from Cardamine graea)进行了表达质粒构建,获得了以下重组表达质粒:pMT-DGA1-SCD_HGR、pMT-BtFAE1-AtFAE1_LEU、pMT-MaKCS_URA、pMT-MoKCS_URA和pMT-CgKCS_URA。(3)采用醋酸锂转化法,将重组表达质粒pMT-DGA1-SCD_HGR、pMT-BtFAE1-AtFAE1_LEU成功导入URA3ˉpo1g酵母,获得了重组菌株URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1),在此基础上,分别导入重组表达质粒pMT-MaKCS_URA、p MT-MoKCS_URA和pMT-CgKCS_URA,成功获得了重组菌株URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1/pMT-MaKCS)、URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1/pMT-MoKCS)和URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1/pMT-CgKCS)。(4)通过摇瓶发酵培养,分别采用氯仿-甲醇法和硫酸-甲醇法提取油脂和脂肪酸甲脂化,将得到的脂肪酸甲酯通过气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测,筛选到产神经酸的解脂耶罗维亚酵母工程菌株URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1/pMT-CgKCS),其中URA3ˉPo1g(pMT-DGA1-SCD/pMT-BtFAE1-AtFAE1/pMT-CgKCS)7号单克隆神经酸含量最高,占其油脂的1.5%,并且其油脂占细胞干重的比重是对照菌株URA3ˉPo1g的3倍。(5)建立了一套完整有效的解脂耶罗维亚酵母的分子生物学研究机制,为之后进行解脂耶罗维亚酵母产神经酸的产业化提供了理论和实验依据。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2017-05-01）
衣启麟,刘瑞,孙瑞,王玲玲,刘聪辉[2]（2015）在《自然养殖水体投喂CpG ODN和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗WSSV的免疫保护作用》一文中研究指出用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验。投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)%(P<0.05),这暗示CpG ODN可能具有促生长作用。WSSV攻毒后,CpG ODN和VP28-yl投喂组对虾中WSSV拷贝数与对照组相比均显着降低(P<0.05),相对免疫保护率分别可达到26.7%和36.7%。在投喂结束和WSSV刺激后,CpG ODN组对虾中的呼吸爆发水平均显着升高(P<0.05)。而在VP28-yl投喂组,WSSV引起的细胞凋亡则显着受到抑制(P<0.05)。此外,WSSV刺激后,STAT基因在CpG ODN组和VP28-yl组对虾中的表达水平均显着上调(P<0.05),分别在第5天和第3天达到最大值,而对照组中则显着下调。研究结果表明,CpG ODN和VP28-yl增强了凡纳滨对虾抗病毒免疫力,对养殖对虾病毒性疫病的防控具有显着作用,可以作为免疫增强剂添加在饵料中,具有在养殖生产中推广使用的前景。(本文来源于《渔业科学进展》期刊2015年02期）
Beopoulos,A,许俊[3]（2015）在《产油酵母解脂耶罗威亚酵母生产蓖麻油酸的代谢工程》一文中研究指出本研究构建了产油酵母解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica)的基因修饰菌株。该菌株不能进行β-氧化,可使天然的甘油叁酯酰基转移酶和△12脱氢酶失活。本研究利用该菌株在TEF组成型启动子的控制下表达蓖麻(Ricinus communis)△12羟化酶(RcFAH12)。然而,蓖麻油酸只占该修饰菌株所产总油脂的7%。而在同等条件下表达麦角菌(Claviceps purpurea)羟(本文来源于《中国医药工业杂志》期刊2015年01期）
王星星[4]（2013）在《表面展示甲基对硫磷水解酶的解脂耶罗威亚酵母工程菌的构建及全细胞酶固定化研究》一文中研究指出本文利用表面展示质粒pINA1317-YICPW110将来源于假单胞菌(Pseudomonas sp.)WBC-3的甲基对硫磷水解酶(methyl parathion hydrolase, MPH)展示在解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica)Po1h细胞表面，研究了重组工程菌的催化特性和降解性能。该工程菌安全无害、不携带抗性基因、目的基因表达无需诱导且可稳定遗传，而且避免了采用非表面展示重组工程菌进行甲基对硫磷降解时需要破碎细胞、酶纯化时活性降低、酶与底物接触不充分等问题；为进一步提高全细胞酶的重复使用性和连续操作的稳定性，通过将绿色木霉(TrichodermaViride)内切葡聚糖酶IV(EG IV)的纤维素结合域(cellulose binding domain, CBD)与甲基对硫磷水解酶的融合蛋白展示在Y. lipolytica Po1h细胞表面，构建了可特异吸附于纤维素基质上的全细胞甲基对硫磷水解酶，采用固定化全细胞酶对甲基对硫磷进行降解研究，解决了甲基对硫磷水解酶采用常规固定化方法出现的活力下降、操作繁琐、费用昂贵等问题。本文构建了一种操作简便、稳定高效、安全无害的固定化全细胞甲基对硫磷水解酶，开辟了国内甲基对硫磷降解的新思路和新手段，为甲基对硫磷降解提供了理论依据和技术支撑。主要研究结果如下：(1)利用表面展示质粒pINA1317-YlCWP110将Pseudomonas sp.WBC-3的甲基对硫磷水解酶在Y. lipolytica Po1h上进行了表面展示，通过免疫荧光检测和蛋白酶敏感性分析确定甲基对硫磷水解酶已成功展示于Y. lipolytica Po1h细胞表面。筛选得到甲基对硫磷水解酶酶活力最高的转化子Z51，其甲基对硫磷水解酶比酶活力为36.5±0.5U/mg cells(450.6±7.3U/mL cell suspension)，酶活力优于已有的多种重组表达的甲基对硫磷水解酶活力。(2)表面展示甲基对硫磷水解酶的最适作用pH为9.5，在pH4.0-11.5之间较稳定；最适作用温度为40℃，在40℃以下稳定性较好。Co2+、Mn2+、 Ni2+、Cu2+对表面展示甲基对硫磷水解酶活性有激活作用，Ag+、Li+、Ba2+、Hg2+对展示酶活力有抑制作用，K+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Fe3+、Na+对展示酶活力没有明显的影响。在10.0mL反应体中的最佳水解条件为100mg/L甲基对硫磷、2.6×107cells/ml表面展示甲基对硫磷水解酶的酵母细胞、反应时间30min，甲基对硫磷水解率可达90.8%。全细胞酶终浓度为2×107cells/ml、甲基对硫磷浓度为20.0mg/L的不同水体40℃、180rpm振荡反应40min，甲基对硫磷的降解率依次为淡水(pH9.5)98.7%、淡水(pH6.8)97.0%、海水(pH9.5)96.5%和海水(pH8.2)94.4%，全细胞酶重复使用4次后，仍可保持70%以上的活力。全细胞酶在4℃放置30天，仍能保持94%的活性。(3)采用重迭延伸PCR技术，构建绿色木霉EG IV的CBD和Pseudomonassp.WBC-3MPH的融合基因片段，利用表面展示质粒pINA1317-YlCWP110将MPH-CBD融合蛋白在Y. lipolytica Po1h酵母上进行了表面展示，通过免疫荧光检测和蛋白酶敏感性分析确定MPH-CBD融合蛋白已成功展示于Y. lipolytica Po1h细胞表面。筛选得到甲基对硫磷水解酶酶活力最高的转化子M3，其甲基对硫磷水解酶比酶活力为33.1±1.1U/mg cells(381.0±9.2U/mL cell suspension)，甲基对硫磷水解酶的活性基本未受到CBD的影响。(4)表面展示MPH-CBD融合蛋白的转化子M3细胞吸附纤维素基质的最适pH为8.0，最适温度为4℃，在4℃-40℃之间具有良好的吸附性。M3细胞通过表面展示的MPH-CBD融合蛋白对纤维素基质具有较高的吸附能力，且细胞与纤维素基质的的结合非常牢固。将M3细胞固定于微晶纤维素上，制成固定化全细胞酶。填充有固定化全细胞酶的柱式生物反应器于流速为120ml/h、pH为9.5、温度为室温25℃时，对26.0mg/L甲基对硫磷的降解率在10min时即可达到80%以上。在随后的60min内，甲基对硫磷的降解率一直保持在80%左右。反应器在30天内对26.0mg/L的甲基对硫磷可保持约77%的降解率。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2013-05-31）
池振明,赵新灵,王凌飞[5]（2012）在《解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)的代谢工程》一文中研究指出本文论述最近几年在解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)代谢工程研究方面的最新进展。解脂耶罗维亚酵母是最安全的微生物,广泛分布在包括海洋和极地等的各种环境中,已经具备很好的基因克隆表达系统;某些菌株在蛋白质、油脂、柠檬酸、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶生产上具有优良特性,并且许多菌株具有很强的降解石油烃的能力。本文介绍了几种对解脂耶罗维亚酵母进行的表达系统改造,改造后该酵母能分解廉价而广泛存在的菊粉,提高细胞中油脂含量和细胞分泌的柠檬酸含量,合成许多生物活性物质,在能源工业、食品工业、医药工业和养殖业具有广泛的应用前途。(本文来源于《中国海洋大学学报(自然科学版)》期刊2012年05期）
蒋方群,李宗伟,王雁萍,谈重芳,金庆生[6]（2011）在《解脂耶罗威亚酵母筛选方法的改良及紫外诱变选育》一文中研究指出解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica)对油脂类化合物、甘油酯有很强的代谢能力,也是工业上较为广泛应用的菌种之一。通过对油脂降解菌的筛选方法进行了改良研究,结果表明,初筛培养基pH值为6.0,维多利亚蓝B溶液加入量为1%,并且将培养基中油脂用组织捣碎机搅拌2min~3min,使培养基呈均匀的白色乳浊液,灭菌后倒出的平板对油脂降解圈的表现效果最好。为进一步提高保藏菌种的油脂降解能力,采用紫外诱变的方法对该菌种进行改良,确定最佳诱变时间为50s,经诱变筛选后将菌株的油脂降解能力从63%提高为79%,该突变菌株在对数期表现出较强的油脂降解能力,并具有良好的遗传稳定性,为生物法处理餐饮废水提供了有用的微生物资源。(本文来源于《中国酿造》期刊2011年11期）
柳志强,田富,李晓宇,张横江,刘美珍[7]（2011）在《响应面法优化解脂耶罗维亚酵母ypy01淀粉酶发酵条件研究》一文中研究指出利用Plackett-Burman(PB)设计和响应面法,对解脂耶罗维亚酵母ypy01淀粉酶生产条件进行了优化。PB设计筛选到3个显着因子,分别为可溶性淀粉浓度、蛋白胨浓度和初始pH。采用响应面法对3个显着因子进一步优化,获得了最佳培养基组成:0.84%可溶性淀粉,2.25%蛋白胨,1%酵母粉,3%NaCl,0.05%MgSO4,0.05%CaCl2,初始pH为6.8,在最优条件下,淀粉酶产量达到2012.50 U/mL。(本文来源于《中国农学通报》期刊2011年17期）
王芳[8]（2011）在《高蛋白海洋解脂耶罗维亚酵母遗传改良以及表达重组抗菌肽的研究》一文中研究指出从分离自海水、海泥、海鱼肠道与海藻的78株海洋酵母中筛选出7株高蛋白海洋酵母(hcx-2, L2-2,Wl-6,Qme,SWJ-1b,W2B和Z172 1-2),经测定它们的粗蛋白含量都超过了40.0%(w/w)。其中菌株SWJ-1b蛋白含量最高,达到47.6%(w/w),其细胞量(g/L)为6.7,其可作为潜在的单细胞蛋白使用。菌株SWJ-1b分离自鱼肠道。根据传统的鉴定方法、Biolog微生物自动分析系统鉴定及分子生物学鉴定,菌株SWJ-1b最终被鉴定为解脂耶罗维亚酵母菌(Yarrowia lipolytica)。利用表面展示系统对得到的高蛋白海洋Y. lipolytica菌株SWJ-1b进行了遗传改造。编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的基因被插入表面展示质粒pINA1317-YlCWP110中,并在Y. lipolytica菌株SWJ-1b的尿嘧啶缺陷型中表达,EGFP被成功展示在酵母细胞表面,且发现100%的转化菌株细胞表面都展示有此锚定的目标蛋白。对海洋酵母Y. lipolytica SWJ-1b菌株,其尿嘧啶缺陷型菌株22a-2和筛选出的展示有EGFP的阳性转化子106进行了粗蛋白含量、细胞量、氨基酸含量、脂肪酸含量等营养组分分析,发现叁者粗蛋白含量(w/w)分别为: 54.9±1.3%、54.9±1.6%、51.1±0.8%,细胞量(g/L)分别为:12.0±0. 1、12.0±0.2、16.0±0.1。叁者氨基酸组分仍基本一致,特别是必需氨基酸,如赖氨酸、甲硫氨酸和亮氨酸等。筛选的转化子106的C18:1和C18:3脂肪酸含量高于野生型SWJ-1b菌株,C16:0和C16:1脂肪酸含量低于SWJ-1b。表明海洋酵母SWJ-1b可经过基因改良锚定外源蛋白而且仍可进一步作为单细胞蛋白使用。将编码来自栉孔扇贝(Chlamys farreri)组蛋白H2A N-端抗菌肽的DNA片段连接到表达质粒pINA1317中,在Y. lipolytica SWJ-1b菌株中表达。在PBB培养基中培养120h后,转化子Yl-H2A-29a产生了较多的抗菌肽,获得的上清对哈维氏弧菌、鳗弧菌和副溶血弧菌都具有抗菌活性。对叁者最小抑菌浓度(μg of protein/mL)分别是4.47±0.4、8.95±1.4和1.12±0.2。对叁者的抑菌圈直径分别为:14.0 mm、11.0mm和24.0 mm。然而我们发现上清对革兰氏阳性菌大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均无抑菌活性。用Ni2+亲和层析纯化带有6×His标签的重组抗菌肽,纯化的重组抗菌肽分子量为4.5 kDa。透射电子显微镜观察发现,利用抗菌肽处理副溶血弧菌完整细胞和原生质体细胞后,抗菌肽造成了完整细胞和原生质体细胞的细胞内溶物泄露,并导致细胞死亡。这表明抗菌肽能够通过细胞外基质或细菌脂多糖、外膜和肽聚糖等不同屏障,在细胞膜上形成孔洞。SWISS模型分析表明抗菌肽中具有α螺旋结构,抗菌肽氨基酸的疏水性分布表明抗菌肽具有很多疏水性氨基酸,这可能和抗菌肽的抑菌活性机制相关。将已证实成功表达了抗菌肽基因的酵母转化子Yl-H2A-29a培养在YPD培养基,PPB培养基和含有硫酸铵的豆饼粉水解液中,经测定细胞蛋白含量(w/w)分别为48.9±0.3%、45.3±0.8%和46.1±1.4% ,细胞干重(g/L)分别为12.0±0.9、11.5±0.7和9.9±0.6。能产生抗菌肽的Y. lipolytica SWJ-1b菌株仍能作为单细胞蛋白使用。这是关于利用高蛋白海洋解脂耶罗维亚酵母产生重组抗菌肽的首次报道。将编码来自栉孔扇贝(Chlamys farreri)组蛋白H2A N-端的抗菌肽和编码菊粉酶基因INU1的DNA片段分别连接到表达质粒pINA1317中,并在Y. lipolytica SWJ-1b中共表达。获得的重组产物对哈维氏弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌具备抑菌活性,对哈维氏弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌作用产生的抑菌圈直径分别为:12.0 mm、8.0 mm和15.0mm,最小抑菌浓度(μg of protein/mL)为: 6.28±0.2、13.63±0.4和2. 51±0.7。对大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均无抑菌活性。重组产物具备菊粉酶活性,菊粉酶活力为32.7±0.3 U/mL。使用2-L发酵罐发酵,发现发酵72 h重组产物菊粉酶活力最高,为38.6±0.4U/mL。此时发酵罐中的蛋白含量为46.3±0.2%,细胞干重为19.2±0.3 g/L。发酵培养120h重组产物的抑菌活性最强,对哈维氏弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌的抑菌圈直径分别为:13.0 mm、10.0 mm和16.0mm。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2011-03-01）
解脂耶罗威亚酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验。投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)%(P<0.05),这暗示CpG ODN可能具有促生长作用。WSSV攻毒后,CpG ODN和VP28-yl投喂组对虾中WSSV拷贝数与对照组相比均显着降低(P<0.05),相对免疫保护率分别可达到26.7%和36.7%。在投喂结束和WSSV刺激后,CpG ODN组对虾中的呼吸爆发水平均显着升高(P<0.05)。而在VP28-yl投喂组,WSSV引起的细胞凋亡则显着受到抑制(P<0.05)。此外,WSSV刺激后,STAT基因在CpG ODN组和VP28-yl组对虾中的表达水平均显着上调(P<0.05),分别在第5天和第3天达到最大值,而对照组中则显着下调。研究结果表明,CpG ODN和VP28-yl增强了凡纳滨对虾抗病毒免疫力,对养殖对虾病毒性疫病的防控具有显着作用,可以作为免疫增强剂添加在饵料中,具有在养殖生产中推广使用的前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
解脂耶罗威亚酵母论文参考文献
[1].乔建文.解脂耶罗维亚酵母产神经酸代谢工程研究[D].西北农林科技大学.2017
[2].衣启麟,刘瑞,孙瑞,王玲玲,刘聪辉.自然养殖水体投喂CpGODN和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母对凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)抗WSSV的免疫保护作用[J].渔业科学进展.2015
[3].Beopoulos,A,许俊.产油酵母解脂耶罗威亚酵母生产蓖麻油酸的代谢工程[J].中国医药工业杂志.2015
[4].王星星.表面展示甲基对硫磷水解酶的解脂耶罗威亚酵母工程菌的构建及全细胞酶固定化研究[D].中国海洋大学.2013
[5].池振明,赵新灵,王凌飞.解脂耶罗维亚酵母(Yarrowialipolytica)的代谢工程[J].中国海洋大学学报(自然科学版).2012
[6].蒋方群,李宗伟,王雁萍,谈重芳,金庆生.解脂耶罗威亚酵母筛选方法的改良及紫外诱变选育[J].中国酿造.2011
[7].柳志强,田富,李晓宇,张横江,刘美珍.响应面法优化解脂耶罗维亚酵母ypy01淀粉酶发酵条件研究[J].中国农学通报.2011
[8].王芳.高蛋白海洋解脂耶罗维亚酵母遗传改良以及表达重组抗菌肽的研究[D].中国海洋大学.2011