导读:本文包含了合成酶基因克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人参皂苷,β-葡萄糖苷酶,基因克隆,重组表达
合成酶基因克隆论文文献综述
朱志强,鄢欣,李振伟,傅荣昭[1]（2019）在《人参皂苷Rh2合成酶突变体的基因克隆与表达》一文中研究指出通过分子克隆技术将来源于Terrabacter ginsenosidimutans的β-葡萄糖苷酶突变基因序列Rh2-015经过PCR扩增技术插入到表达载体p ET22b(+)上的Nde I和EcoR I位点,得到重组质粒p ET22b-Rh2-015。对获得的重组菌进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示其在56.7kDa处具有明显的蛋白质特异性条带,同时对分解人参皂苷Rg3生成人参皂苷Rh2具有较高转化率,为实现工业化酶法生产高含量人参皂苷Rh2奠定了基础。(本文来源于《科学技术创新》期刊2019年19期）
郭晓农,柴薇薇,柏家林,马忠仁[2]（2019）在《罗布麻黄酮醇合成酶基因克隆及其生物信息学分析》一文中研究指出通过RT-PCR技术和RACE方法克隆了罗布麻黄酮醇合酶基因,基因全长1 212 bp,其完整开放阅读框为1 008 bp,该基因被命名为AvFLS,序列分析表明其编码335个氨基酸,预估其蛋白质相对分子量为38.39 kD,等电点p I值为6.11,进化分析表明,AvFLS在进化关系上与马铃薯StFLS和花烟草NaFLS的亲缘关系最近,空间结构分析表明,AvFLS属于依赖2-酮戊二酸的双加氧酶家族,具有该家族蛋白保守的结构域、结合位点、活性位点及氨基酸。其蛋白质二级结构由24.48%的α-螺旋、15.52%的延伸主链和60%的随机卷曲构成。不存在信号肽、跨膜区,属于一种亲水性蛋白,定位在细胞质的概率较大。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年15期）
刘佳[3]（2018）在《中国石竹查尔酮合成酶基因克隆、鉴定及表达分析》一文中研究指出查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是花色素合成途径中的关键酶。中国石竹(Dianthus chinensis)花色众多且抗逆性强,因此广泛应用于花坛、地被等。VIGS(virus-induced genesilencing)可快速、有效地鉴定植物基因功能。获得与中国石竹花色有关基因,对今后石竹属植物花色遗传改良具有重要意义。本试验根据Genbank中香石竹CHS基因(Z67982)设计特异引物,通过RT-PCR、3’-RACE在中国石竹中克隆获得DcCHS,采用VIGS对其功能进行了验证,并对其表达进行了分析,主要研究结果如下:1、克隆得到了片段大小为898bp的Dc CHS基因序列(KX893854)。2、以中国石竹不同花色花瓣为材料进行q RT-PCR分析,发现随花瓣颜色加深Dc CHS的表达量增加,表明Dc CHS可能与石竹花色有关。3、对Dc CHS不同片段设计引物,进行RT-PCR,分别构建了2个TRV2重组载体,农杆菌菌液侵染花蕾后会发现含pTRV2/Dc CHS_(407)的出现白色或颜色变浅的现象,经q RT-PCR分析发现其CHS表达量下降,而含pTRV2/Dc CHS_(412)的沉默效果不明显。表明Dc CHS与石竹花色有关,但不同的基因片段沉默效果不同。4、以中国石竹不同发育时期的花蕾为材料进行q RT-PCR分析,发现Dc CHS的表达量在花蕾生长前期最高,且显着高于生长中期和花前期,而生长中期和花前期的Dc CHS表达量无显着差异,表明查尔酮合成酶基因表达量随花蕾发育时期而下降。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
杨总应,蒋向辉[4]（2018）在《金银花黄酮合成酶LjFNS基因克隆及序列分析》一文中研究指出采用染色体步移的方法,首次从金银花中克隆得到LjFNS的基因组全长序列,并根据基因特异性引物克隆得到LjFNS的编码序列(coding sequence,简称CDS)。LjFNS基因全长为1 701 bp,有2个内含子和3个外显子。编码序列长1 593 bp,编码530个氨基酸。序列同源性分析表明,金银花LjFNS基因编码的CDS序列与拟南芥LOC9307309基因CDS序列相似度达89%。生物信息学分析结果显示,LjFNS基因编码蛋白中含有亚铁血红素配合基结合位点,属于细胞色素P450家族,蛋白含有跨膜结构域。LjFNS基因表达实时荧光定量PCR(q PCR)分析结果显示,LjFNS在金银花中的表达具有组织特异性与时间特异性,在白花中的表达量最高,表明该基因的表达可能与花的发育紧密相关。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2018年10期）
陈红[5]（2018）在《油棕长链脂肪酰基CoA合成酶(LACS)基因克隆及功能分析》一文中研究指出油棕的果实含油量极高,占干重质量可达90%,被誉为“世界油王”,长链脂肪酰基 CoA 合成酶(long chain long-chain acyl-CoA synthetase,LACS)将游离的脂肪酸活化,生成脂肪酰基CoA,进而在高等植物的油脂合成和降解途径中发挥重要的功能。在本研究中,我们成功从油棕中克隆到了油棕LACS蛋白家族中的基因EgLACS1和EgLACS9。这些克隆都包含一个高度保守AMP结合域,一个ACS信号基序和一个特殊的连接区域。进化树显示,EgLACS1与AtLACS1,BnLACS1和AhLACS1属于同一个分支,主要参与植物的超长链脂肪酸(VLCFA)合成蜡和角质,这也说明EgLACS1可能参与了油脂的合成。EgLACS9和AtLACS9,BnLACS9和GmLACS9等属于同一个分支,主要参与质体到内质网的转运。酵母互补实验证明了EgLACS 和EgLACS9编码的长链脂肪酰基辅酶A合成酶能够补偿酵母YB525由于缺乏Faa1和Faa4编码蛋白而失去的功能。浅蓝菌素作用的条件下,在培养基中分别添加棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)或油酸(C18:1),EgLACS1转化子明显提高了酵母生长速率,但对这些脂肪酸底物的利用没有明显的偏好。为了进一步确定EgLACS1和EgLACS9的吸收功能,我们用C18的脂肪酸荧光类似物来取代外源脂肪酸,这个实验进一步完善了互补实验的结果。结果显示,EgLACS1和EgLACS9酵母内的荧光强度显着高于阴性对照,表明EgLACS1和EgLACS9可以吸收外源脂肪酸。本研究实验结果说明EgLACS1和EgLACS9与油棕的油脂代谢有关,具有活化游离脂肪酸以及吸收外源脂肪酸的功能,为今后针对油棕进行遗传改良获得高油品以及特定脂肪酸提供了分子靶标。(本文来源于《海南大学》期刊2018-05-01）
张孟伊[6]（2018）在《桔小实蝇谷氨酰胺合成酶基因克隆、表达及生理功能》一文中研究指出桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)是隶属于双翅目Diptera、实蝇科Tephritidae的世界性农业害虫。目前,由于长期、大量、不科学地使用化学杀虫剂,桔小实蝇对多种常用杀虫剂产生了不同程度的抗药性。以往的研究工作主要关注桔小实蝇的抗药性机理及其治理,近年来研究者逐渐将研究重点转向桔小实蝇新型药剂作用靶标的挖掘等领域。谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)是生物体绝大多数细胞中广泛存在的一种酶,主要催化谷氨酰胺的合成,参与调节细胞生长、能量代谢、蛋白质与核酸合成以及免疫应答。本学位论文对桔小实蝇两种谷氨酰胺合成酶同工酶基因BdGSs进行功能研究,为揭示桔小实蝇BdGSs参与幼虫生长发育及成虫生殖力调控功能的分子机制奠定基础,同时为使用RNAi技术防治桔小实蝇提供新型候选基因。本学位论文主要结果如下:1桔小实蝇BdGSs的cDNA克隆及系统发育分析采用PCR技术,克隆获得桔小实蝇线粒体GS(BdGS-m)和细胞质GS(BdGS-c)基因的cDNA序列。基于氨基酸序列的同源性分析结果显示,桔小实蝇BdGS-m与铜绿蝇LcGS-m的相似性高达82%,与黑腹果蝇DmGS-m的相似性高达80%。桔小实蝇BdGS-c与铜绿蝇LcGS-c和黑腹果蝇DmGS-c的相似性均高达90%。多序列比对结果显示,桔小实蝇两种亚型的GS氨基酸序列均含有5个保守结构域。基于BdGSs编码的氨基酸序列,预测桔小实蝇GS蛋白为无跨膜结构域与信号肽的亲水性蛋白。2桔小实蝇BdGSs时空表达模式分析采用RT-qPCR技术,解析桔小实蝇2种同工酶基因BdGS-m和BdGS-c在不同发育时期的表达模式。结果显示,BdGS-m在卵及成虫期相对表达量较高,BdGS-c在幼虫及成虫期相对表达量较高。桔小实蝇2种同工酶基因均在成虫期有较高的相对表达量,说明这2种同工酶均可能参与调控桔小实蝇成虫的生长发育及繁殖。BdGS-c在幼虫期表达量高于BdGS-m,且随虫龄增长表达量逐渐升高,说明BdGS-c可能对幼虫生长发育的调控起主导作用,BdGS-m则可能参与调控桔小实蝇胚胎的早期发育。分析桔小实蝇2种同工酶基因BdGS-m和BdGS-c在幼虫不同组织的表达模式,结果显示,BdGS-m在马氏管具有较高的表达量,而BdGS-c在中肠、脂肪体以及马氏管的表达量没有明显差异。在马氏管表达的BdGSs可能参与调控马氏管代谢物质的分泌,在中肠和脂肪体表达的BdGSs则可能通过不同的代谢途径去除机体中过量的铵离子与有毒物质,在中肠表达的BdGSs可能还参与围食膜的形成。分析2种同工酶基因BdGS-m和BdGS-c在成虫不同组织的表达模式,结果显示,BdGS-m在脂肪体有较高的表达量,可能参与氨代谢与卵黄原蛋白的合成以调节成虫生殖力,而在头部表达的BdGSs可能参与调节神经系统的修复、再生和免疫应答。3桔小实蝇BdGSs对环境胁迫的响应桔小实蝇幼虫受到高温、UV-B以及药剂胁迫后,其体内BdGS-m和BdGS-c的表达量均显着上调。由于极端温度、UV-B与杀虫剂均能引起桔小实蝇体内活性氧的大量积累,因此推测桔小实蝇BdGSs参与调节抗氧化作用。值得注意的是,桔小实蝇幼虫经低温处理后其体内BdGSs的表达量未发生显着变化,可能是由于在低温条件下,幼虫体内氨代谢速率与活性氧积累速率降低,因此BdGSs的表达量短时间内无明显差异。4桔小实蝇BdGSs参与幼虫生长发育过程桔小实蝇2日龄幼虫连续取食5 d含有专性抑制剂的人工饲料后,虫体较对照明显偏小、化蛹率显着降低、蛹重减轻、化蛹延迟、羽化率降低,且幼虫体内GS酶活性降低。推测是由于血淋巴中铵离子含量过高,对虫体产生毒害从而影响幼虫的生长发育。采用RNAi技术,将靶向BdGS-c的外源dsRNA注射入桔小实蝇幼虫体内,使BdGS-c表达受抑制后,幼虫发育历期延长、蛹重减轻。推测干扰BdGS-c可能引起幼虫氨代谢受阻,马氏管内的代谢物质不能正常分泌从而影响幼虫的生长发育。桔小实蝇幼虫体内Halloween基因家族关键基因BdSpook的表达量在干扰BdGS-c 24 h后显着下调,推测GS也可以通过影响蜕皮激素的合成影响幼虫的生长发育。GS对桔小实蝇幼虫生长速率、蛹化及羽化的影响为挖掘新型药剂作用靶标提供了理论基础。5桔小实蝇BdGSs参与成虫生殖力调控采用RNAi技术,分别将靶向2种BdGSs的外源dsRNA注射进入雌成虫体内,在mRNA水平有效抑制BdGSs基因的表达。观察桔小实蝇雌虫卵巢发育程度及产卵量发现,桔小实蝇雌成虫体内BdGSs表达水平下调后,产卵量显着减少,且卵巢直径偏小,推测桔小实蝇BdGS-m和BdGS-c均参与调控雌虫的生殖力。(本文来源于《西南大学》期刊2018-04-09）
赵孟孟,张雅,谢莎,陈静,夏爽飞[7]（2018）在《猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因克隆与序列分析及其在Marc-145细胞上对PRRSV复制的影响》一文中研究指出旨在探索猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)的复制是否有抑制作用,进而为探索抑制病毒复制寻求新的思路。从PAM猪肺泡巨噬细胞中克隆了猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序与序列分析之后将该基因转染Marc-145细胞,然后接种PRRSV病毒,与对照组比较病毒的抑制效果。结果显示,病毒的滴度明显下降,病毒的RNA水平也明显下降,由此推断猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a可以在Marc-145细胞上抑制PRRS的复制。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年01期）
李明云,苗亮,陈莹莹,侯红红,陈炯[8]（2017）在《大黄鱼肌醇-1-磷酸合成酶(MIPS)基因克隆及低温胁迫下的表达分析》一文中研究指出肌醇-1-磷酸合成酶(myo-inositol-1-phosphate synthase,MIPS)是生物肌醇代谢调节的关键酶,为了解MIPS基因与大黄鱼(Larimichthys crocea)低温应激的相关性,本研究对大黄鱼进行了模拟越冬期水温缓降的慢性低温胁迫和冷空气突袭下水温骤降的急性低温胁迫实验,在通过cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆了MIPS基因的cDNA全长、进行了序列分析的基础上检测了其表达变化。结果表明,大黄鱼MIPS基因cDNA全长为2 599 bp,含1个长度为1 659bp的开放阅读框为,编码蛋白含553个氨基酸白、分子量为60.5 KD。序列比对显示大黄鱼与其他硬骨鱼类的MIPS氨基酸相似性较(85.5%～88.4%),均含有3个高度保守核心区。系统进化树中大黄鱼MIPS最先与红鳍东方纯(Takifugu rubripes)相聚,表明二者起源进化关系最近。慢性低温胁迫中(12℃缓降至6℃),大黄鱼MIPS基因在鳃、皮肤和心脏组织中均呈先显着上升后显着下降的趋势(P<0.05),在8℃时峰值表达量分别为12℃时的13.71、89.50和50.83倍;脑和肌肉中MIPS表达量在整个胁迫过程中持续升高,6℃时表达量比降温前分别升高了99.89倍和110.17倍;肠、肾、肝、脾中MIPS表达量则无显着变化(P>0.05)。急性低温胁迫(由12℃骤降至8℃并持续胁迫4 h)下,MIPS基因在除肠以外的其他组织均出现显着的表达量上调(P<0.05),以脑和肌肉中最为显着(分别升高了54.53倍和32.89倍)。急性和慢性低温胁迫实验的结果提示MIPS基因参与了大黄鱼的低温胁迫应激响应,并可能与大黄鱼的低温适应性有关,脑和肌肉是大黄鱼应对低温胁迫调节中的重要部位。该研究结果为研究大黄鱼MIPS基因的功能及研究低温耐受性、选育耐低温品种提供了参考资料。(本文来源于《浙江省第四届动物学博士与教授论坛、动物学与经济强省-浙江省动物学研究及发展战略研讨会论文摘要集》期刊2017-11-17）
王毅,肖良俊,马婷,宁德鲁[9]（2018）在《低温诱导泡核桃中查尔酮合成酶基因克隆及功能分析》一文中研究指出查尔酮合成酶是植物中黄酮类物质生物合成的第一关键酶,在植物抗性生理中扮演重要作用。本研究利用RT-PCR技术从泡核桃中成功克隆获得一个受冷害诱导的查尔酮合成酶基因(Js CHS1),其基因全长1 490 bp,包含1个内含子,开放阅读框全长为1 170 bp,编码389个氨基酸,登录号为:KX657834。JSCHS1与核桃查尔酮合成酶蛋白序列同源性高达98%,而泡核桃和核桃查尔酮合成酶基因内含子DNA同源性为95%,核桃CHS内含子与泡核桃相比有8个碱基的缺失。系统进化树分析显示其与核桃形成一个独立分支。半定量PCR显示:泡核桃在常温及低温(4℃)处理后都有微弱表达,而在低温处理6 h后强烈表达,这说明Js CHS1是典型的受冷害诱导的查尔酮合成酶基因。本研究为揭示泡核桃抗寒机理以及查尔酮合成酶在冷害胁迫下的作用提供研究基础,并为利用基因工程手段培育抗寒新品种提供理论依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年02期）
王东[10]（2017）在《玉米棉子糖合成酶基因克隆及玉米遗传转化》一文中研究指出玉米是我国重要的粮食作物,但我国的干旱和盐渍土地严重影响玉米的产量。棉子糖家族系列寡糖(Raffinose Family Oligosaccharides:RFOs)在植物遭受逆境胁迫过程中大量积累,对植物抵御逆境胁迫起着积极的作用。本实验室通过同源克隆方法在玉米中克隆到了唯一一个玉米棉子糖合成酶基因(ZmRS)。ZmRS基因的表达受到热激、脱水等非生物逆境胁迫的诱导,其突变后会影响种子活力。在拟南芥中超表达ZmRS基因能增强拟南芥对非生物逆境胁迫的耐受能力。本研究将ZmRS基因进行了原核表达,并对ZmRS蛋白进行了纯化回收,用纯化的蛋白对兔子进行免疫,制备了ZmRS抗体。对抗体进行效价检测,显示ZmRS抗体能够检测出含量低至10 ng的ZmRS蛋白,且特异性较高。构建了ZmRS基因的玉米超表达载体。将重组质粒转入玉米叶肉原生质体并提取总蛋白进行western-blot检测,经检测,转入ZmRS基因的玉米叶肉原生质体能高效表达ZmRS蛋白。将ZmRS基因玉米超表达载体转入农杆菌Agl1株系后,利用农杆菌介导的转化方法对玉米自交系A188的幼胚进行侵染。通过对转化材料的筛选和再生,最终获得18株再生植株,其中13株可育。利用PCR方法对T_1代植株进行鉴定,结果显示ZmRS cDNA已整合到玉米基因组。利用western-blot对转基因后代的ZmRS蛋白表达量进行鉴定,结果显示转基因玉米T_1代幼苗中未检测到Zm RS蛋白。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2017-05-01）
合成酶基因克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过RT-PCR技术和RACE方法克隆了罗布麻黄酮醇合酶基因,基因全长1 212 bp,其完整开放阅读框为1 008 bp,该基因被命名为AvFLS,序列分析表明其编码335个氨基酸,预估其蛋白质相对分子量为38.39 kD,等电点p I值为6.11,进化分析表明,AvFLS在进化关系上与马铃薯StFLS和花烟草NaFLS的亲缘关系最近,空间结构分析表明,AvFLS属于依赖2-酮戊二酸的双加氧酶家族,具有该家族蛋白保守的结构域、结合位点、活性位点及氨基酸。其蛋白质二级结构由24.48%的α-螺旋、15.52%的延伸主链和60%的随机卷曲构成。不存在信号肽、跨膜区,属于一种亲水性蛋白,定位在细胞质的概率较大。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
合成酶基因克隆论文参考文献
[1].朱志强,鄢欣,李振伟,傅荣昭.人参皂苷Rh2合成酶突变体的基因克隆与表达[J].科学技术创新.2019
[2].郭晓农,柴薇薇,柏家林,马忠仁.罗布麻黄酮醇合成酶基因克隆及其生物信息学分析[J].分子植物育种.2019
[3].刘佳.中国石竹查尔酮合成酶基因克隆、鉴定及表达分析[D].内蒙古农业大学.2018
[4].杨总应,蒋向辉.金银花黄酮合成酶LjFNS基因克隆及序列分析[J].江苏农业科学.2018
[5].陈红.油棕长链脂肪酰基CoA合成酶(LACS)基因克隆及功能分析[D].海南大学.2018
[6].张孟伊.桔小实蝇谷氨酰胺合成酶基因克隆、表达及生理功能[D].西南大学.2018
[7].赵孟孟,张雅,谢莎,陈静,夏爽飞.猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因克隆与序列分析及其在Marc-145细胞上对PRRSV复制的影响[J].中国兽医学报.2018
[8].李明云,苗亮,陈莹莹,侯红红,陈炯.大黄鱼肌醇-1-磷酸合成酶(MIPS)基因克隆及低温胁迫下的表达分析[C].浙江省第四届动物学博士与教授论坛、动物学与经济强省-浙江省动物学研究及发展战略研讨会论文摘要集.2017
[9].王毅,肖良俊,马婷,宁德鲁.低温诱导泡核桃中查尔酮合成酶基因克隆及功能分析[J].分子植物育种.2018
[10].王东.玉米棉子糖合成酶基因克隆及玉米遗传转化[D].西北农林科技大学.2017