本文主要研究内容
作者林哲（2019）在《基因编辑基因Cas9背景表达玉米株系的筛选培育及玉米茎尖高通量转化辅助器材的设计与初步测试》一文中研究指出：基因编辑技术指能够定向改变目标基因序列,从而对特定的DNA片段进行敲除、插入等的技术。CRISPR/Cas9技术作为新一代基因组编辑技术,与ZFNs、TALENs技术相比,具有操作简便、结构简单、切割效率高、靶位点多等优点,在生物基因功能的研究方面和性状改良方面能够得到迅速推广与应用。本研究通过构建pSCZ3-Cas9表达载体并转入玉米植株中,共获得235个独立转基因株系。通过遗传分析和实时荧光定量PCR分析,筛选单染色体插入株系并检测Cas9基因表达水平,选择其中表达效率相对较高的单染色体插入转基因株系,可作为基因编辑的Cas9表达背景材料,进行高通量基因编辑材料库创建和基因功能研究。为了建立高效的玉米转基因体系,本研究设计了一套用于高通量玉米茎尖转化的辅助器材,并初步进行了测试。主要结果如下:（1）玉米基因编辑表达载体构建利用本实验室提供的带有2×35S强启动子和Bar基因筛选标记的质粒pSCZ3为骨架,从水稻基因编辑载体pP1C.1中克隆Cas9基因,将之通过酶切连接的方法插入到pSCZ3载体骨架上,成功构建了适于玉米转基因高通量筛选的双元表达载体pSCZ3-Cas9。（2）玉米转基因株系的获得及遗传分析构建成功的pSCZ3-Cas9载体送交北京博美兴奥生物科技公司进行大规模遗传转化,共获得235个独立的转基因株系。对T0植株和T1株系进行PCR检测后,根据孟德尔遗传定律筛选出xx个T0为单染色体插入的转基因株系。（3）转基因株系Cas9基因表达分析利用RT-qPCR对23个阳性转基因株系进行Cas9基因的表达分析。结果表明,不同株系的Cas9基因表达水平存在显著差异,高表达量株系与低表达量株系的表达水平相差55-350倍。对4个株系的T1进行Cas9基因表达水平比较分析表明,表达水平可稳定遗传。（4）高通量玉米茎尖转化辅助器材的设计及使用效果本研究设计了一套能够用来进行高通量玉米茎尖转化的辅助器材。可提高操作效率5-8倍。辅助器材成本低廉,具有良好的推广潜力;受体植株全程在有菌土壤中培育,不仅节省了MS培养基的使用,而且解决了使用现有方法转化过程易发生污染的问题,降低了对转化环境的要求;采用本辅助器材进行操作过程时,仅对植株生长点进行定点损伤,减少了现有方法对整个植株的机械损伤风险,有利于转化后植株的成活和健壮生长。
Abstract
ji yin bian ji ji shu zhi neng gou ding xiang gai bian mu biao ji yin xu lie ,cong er dui te ding de DNApian duan jin hang qiao chu 、cha ru deng de ji shu 。CRISPR/Cas9ji shu zuo wei xin yi dai ji yin zu bian ji ji shu ,yu ZFNs、TALENsji shu xiang bi ,ju you cao zuo jian bian 、jie gou jian chan 、qie ge xiao lv gao 、ba wei dian duo deng you dian ,zai sheng wu ji yin gong neng de yan jiu fang mian he xing zhuang gai liang fang mian neng gou de dao xun su tui an yu ying yong 。ben yan jiu tong guo gou jian pSCZ3-Cas9biao da zai ti bing zhuai ru yu mi zhi zhu zhong ,gong huo de 235ge du li zhuai ji yin zhu ji 。tong guo wei chuan fen xi he shi shi ying guang ding liang PCRfen xi ,shai shua chan ran se ti cha ru zhu ji bing jian ce Cas9ji yin biao da shui ping ,shua ze ji zhong biao da xiao lv xiang dui jiao gao de chan ran se ti cha ru zhuai ji yin zhu ji ,ke zuo wei ji yin bian ji de Cas9biao da bei jing cai liao ,jin hang gao tong liang ji yin bian ji cai liao ku chuang jian he ji yin gong neng yan jiu 。wei le jian li gao xiao de yu mi zhuai ji yin ti ji ,ben yan jiu she ji le yi tao yong yu gao tong liang yu mi jing jian zhuai hua de fu zhu qi cai ,bing chu bu jin hang le ce shi 。zhu yao jie guo ru xia :（1）yu mi ji yin bian ji biao da zai ti gou jian li yong ben shi yan shi di gong de dai you 2×35Sjiang qi dong zi he Barji yin shai shua biao ji de zhi li pSCZ3wei gu jia ,cong shui dao ji yin bian ji zai ti pP1C.1zhong ke long Cas9ji yin ,jiang zhi tong guo mei qie lian jie de fang fa cha ru dao pSCZ3zai ti gu jia shang ,cheng gong gou jian le kuo yu yu mi zhuai ji yin gao tong liang shai shua de shuang yuan biao da zai ti pSCZ3-Cas9。（2）yu mi zhuai ji yin zhu ji de huo de ji wei chuan fen xi gou jian cheng gong de pSCZ3-Cas9zai ti song jiao bei jing bo mei xing ao sheng wu ke ji gong si jin hang da gui mo wei chuan zhuai hua ,gong huo de 235ge du li de zhuai ji yin zhu ji 。dui T0zhi zhu he T1zhu ji jin hang PCRjian ce hou ,gen ju meng de er wei chuan ding lv shai shua chu xxge T0wei chan ran se ti cha ru de zhuai ji yin zhu ji 。（3）zhuai ji yin zhu ji Cas9ji yin biao da fen xi li yong RT-qPCRdui 23ge yang xing zhuai ji yin zhu ji jin hang Cas9ji yin de biao da fen xi 。jie guo biao ming ,bu tong zhu ji de Cas9ji yin biao da shui ping cun zai xian zhe cha yi ,gao biao da liang zhu ji yu di biao da liang zhu ji de biao da shui ping xiang cha 55-350bei 。dui 4ge zhu ji de T1jin hang Cas9ji yin biao da shui ping bi jiao fen xi biao ming ,biao da shui ping ke wen ding wei chuan 。（4）gao tong liang yu mi jing jian zhuai hua fu zhu qi cai de she ji ji shi yong xiao guo ben yan jiu she ji le yi tao neng gou yong lai jin hang gao tong liang yu mi jing jian zhuai hua de fu zhu qi cai 。ke di gao cao zuo xiao lv 5-8bei 。fu zhu qi cai cheng ben di lian ,ju you liang hao de tui an qian li ;shou ti zhi zhu quan cheng zai you jun tu rang zhong pei yo ,bu jin jie sheng le MSpei yang ji de shi yong ,er ju jie jue le shi yong xian you fang fa zhuai hua guo cheng yi fa sheng wu ran de wen ti ,jiang di le dui zhuai hua huan jing de yao qiu ;cai yong ben fu zhu qi cai jin hang cao zuo guo cheng shi ,jin dui zhi zhu sheng chang dian jin hang ding dian sun shang ,jian shao le xian you fang fa dui zheng ge zhi zhu de ji xie sun shang feng xian ,you li yu zhuai hua hou zhi zhu de cheng huo he jian zhuang sheng chang 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自烟台大学的林哲，发表于刊物烟台大学2019-08-29论文，是一篇关于玉米论文,荧光定量论文,茎尖转化论文,辅助器材论文,烟台大学2019-08-29论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自烟台大学2019-08-29论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：玉米论文; 荧光定量论文; 茎尖转化论文; 辅助器材论文; 烟台大学2019-08-29论文;