导读:本文包含了木葡聚糖酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:苹果,木葡聚糖酶抑制蛋白基因,克隆,生物信息学分析
木葡聚糖酶论文文献综述
李婷,吴成成,李保华,练森,梁文星[1]（2018）在《苹果木葡聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达分析》一文中研究指出以‘富士’苹果(Malus pumila)树皮总RNA为模版,利用RT-PCR技术克隆木葡聚糖酶抑制蛋白基因,命名为Mp XEGIP1。通过生物信息学软件对基因c DNA序列、系统进化关系及理化性质进行分析,采用荧光定量PCR技术测定Mp XEGIP1的表达量。构建原核表达载体p ET-Mp XEGIP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),利用SDSPAGE和western blot检测和验证融合蛋白的表达。结果表明,获得了Mp XEGIP1的全长c DNA序列(登录号MG515243),开放阅读框1 344 bp,编码447个氨基酸。Mp XEGIP1编码蛋白的理论分子量约48.77 k Da,为亲水的不稳定蛋白;57~419位氨基酸为木聚糖酶抑制蛋白保守域。序列多重比对及系统进化树分析表明,Mp XEGIP1编码氨基酸序列与‘金冠’苹果XEGIP完全一致,其次与梨XEGIP序列相似性81%,叁者亲缘关系较近。‘富士’枝条接种腐烂病菌后,Mp XEGIP1显着上调表达。原核表达和western blot分析表明,该蛋白以包涵体形式存在,能与HIS抗体特异性结合,证实Mp XEGIP1编码蛋白得到成功表达。(本文来源于《植物生理学报》期刊2018年07期）
王宝顺,张梁,丁重阳,顾正华,石贵阳[2]（2012）在《解木聚糖类芽孢杆菌木葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究》一文中研究指出解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)发酵液经硫酸铵分级沉淀、HiPrep26/10 Desalting柱脱盐、HiPrepDEAE FF16/10阴离子交换柱、HiPrep 16/60 Sephacryl S-100凝胶柱、HiPrep 16/10 Source 30S阳离子交换柱等,最终纯化出单一组分的木葡聚糖酶,经过SDS-PAGE电泳分析,此木葡聚糖酶相对分子量约为39 kD。该菌所产木葡聚糖酶的最适反应温度是50℃,在60℃以下较稳定;最适反应pH是7.0,在pH5.0-10.0范围内酶活力较为稳定。酶的动力学研究显示Km为65 g/L,Vmax为6.49μmol/min,kcat=10.86 s-1。底物特异性研究表明对木葡聚糖具有较高比活力。酶蛋白经质谱分析,比对结果显示与来源于Paenibacillus pabuli的木葡聚糖酶有较高同源性。本研究为首次报道解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)产木葡聚糖酶。(本文来源于《生物技术通报》期刊2012年07期）
王宝顺[3]（2012）在《木葡聚糖酶产生菌株的筛选、发酵优化及酶学性质研究》一文中研究指出木葡聚糖酶(xyloglucanase, XEG)(EC3.2.1.151)是一类重要的水解酶类，是水解木葡聚糖主链中β~(-1),4-糖苷键的一类木葡聚糖特异性内切β~(-1),4-葡聚糖苷酶，因其能特异性降解木葡聚糖，而在生物乙醇、食品、医药、纺织、造纸、洗涤剂等领域有着巨大的应用潜力，同时对于植物生长的调控也有着重要作用。目前，国外对于木葡聚糖酶的研究涉及到植物改造、酶及底物结构的分析、酶的作用、产酶基因的高效表达等，而国内对于此酶的研究尚未见到有关报道。木葡聚糖酶在众多行业中具有很大的应用潜力，因此对其进行研究具有重要意义。本研究新建立一种快速筛选产木葡聚糖酶菌株的方法，并对其中一株产酶能力较高的解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)进行了深入研究，包括产酶能力优化、酶的分离纯化、酶学性质、酶的质谱分析等。主要研究内容如下：首先，以自南瓜中提取的木葡聚糖做为唯一碳源配制的初筛培养基进行初筛，以经过雷马素亮蓝(Remazol brilliant Blue)染色的木葡聚糖(AZO-Xyloglucan)做为复筛培养基唯一碳源及指示剂，通过观察是否产透明圈来确定是否产木葡聚糖酶，并对产透明圈的菌株进行发酵产酶，通过检测是否表现出木葡聚糖酶酶活力来进行复筛验证，从而最终筛选出4株野生产酶菌株。同时对3000余株实验室保藏菌株进行产酶筛选，从中筛选出10株产酶菌株，对所筛选出的细菌菌株进行菌落特征及形态学观察，并通过16S rDNA序列鉴定，在NCBI中比对，进而确定所筛选出菌株的种属。选取其中产酶能力较强的一株野生菌株解木聚糖类芽孢杆菌(P. xylanilyticus)进行重点研究。随后将P. xylanilyticus接种在基础产酶培养基中，所表达出的最高木葡聚糖酶酶活力为2.06±0.09U/mL。对其产酶培养基进行优化，通过单因素实验及响应面实验，优化得P. xylanilyticus产木葡聚糖酶的最优条件为：初始pH为7.46，酵母膏2.26%，蛋白胨1.00%，木糖添加量为0.27%，NaCl0.60%。经过发酵实验验证，最优条件下产木葡聚糖酶酶活力为10.88±0.96U/mL，与模型预测值11.04U/mL相近，判定系数R2=0.9871，表明模型可信度较高，培养基经过优化后产酶能力提高了5-6倍。进一步对P. xylanilyticus发酵所产的木葡聚糖酶进行分离纯化，经过硫酸铵沉淀盐析、脱盐柱脱盐、阴离子交换柱层析、凝胶柱层析、阳离子交换柱层析等几步操作处理，得到电泳纯级别的木葡聚糖酶，纯化了21.41倍，木葡聚糖酶比酶活力达到236.31U/mg，回收率为11.34%，SDS-PAGE检测目的蛋白分子量大小为39kDa。同时，对此木葡聚糖酶酶学性质进行研究发现：①该酶最适作用温度为50℃。低于60℃时酶非常稳定，保温2h后酶活力残余90%以上；高于60℃，酶活力稳定性较差，在60℃时保温2h后酶活力仅残余25%；65℃时，酶活力降低较快，10min内酶活力残余31.94%；70℃时10min内检测出无酶活力残余；②该酶最适pH为7.0左右。在pH5.0-9.0之间酶活力较为稳定，而在此pH值范围以外其酶活力则迅速下降。在pH5.5-8.8内保存2h酶活力残余80%以上；③5mmol/L的Cu~(2+)、1mmol/L的Mn~(2+)对酶有较强的抑制作用；1mmol/L的Zn~(2+)、Ca~(2+)、Fe~(2+)、Fe3+及5mmol/L的Fe~(2+)对酶具有一定的激活作用；④此酶对木葡聚糖底物的最大反应速度Vmax为6.71U/mL，Km为0.80mg/mL，转化率kcat为11.21s~(-1)；⑤底物特异性研究发现其最适底物为木葡聚糖。最后，对该酶进行了质谱分析，获得了质谱图，在NCBI中比对，验证该酶即为木葡聚糖酶。(本文来源于《江南大学》期刊2012-06-01）
任旭荣[4]（2010）在《蜗牛肝脏木葡聚糖酶的分离与纯化》一文中研究指出木葡聚糖酶是水解木葡聚糖的酶。它广泛存在于自然界的细菌、真菌和软体动物中。在饲料、食品、制药行业具有良好的应用前景,已被国内外同行重点关注,并取得一些重要研究进展。本文以蜗牛肝脏木葡聚糖酶为研究对象,研究了该酶的提取、分离、纯化、鉴定及部分理化性质,为蜗牛木葡聚糖酶序列测定、基因克隆和单克隆抗体的制备提供了基础性技术支持。蜗牛胃、素囔、肝脏组织经冲洗、称重、破碎,4℃条件下,用pH5.29的1/15M Na2HPO4-KH2PO4缓冲液1:4匀浆蜗牛组织,静置,离心分取提取液,硫酸铵分级分离(0℃),SDS-PAGE,建立了这些组织蛋白分级分离SDS-PAGE电泳图谱。由此,可方便地查阅蜗牛这些组织某蛋白质(亚基)的分子量、含量、分布和存在情况。对肝脏不同部位以不同比例Na2HPO4-KH2PO4缓冲液,提取木葡聚糖酶,硫酸铵分级分离,电透析脱盐,木葡聚糖酶活测定,发现蜗牛肝脏各部位均有木葡聚糖酶的活性,但存在部位差异性。其酶活性肝脏第3部位>第1部位>第2部位>第4部位;在0℃条件下,30%硫酸铵饱和度分级到的木葡聚糖酶的比活力最高。肝脏木葡聚糖酶提取,硫酸铵分级分离(脱盐);Sephadex G-150凝胶层析分离;DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化(比活力28.43U/mg,提纯倍数7.60,回收率6.37%。);聚丙烯酰胺凝胶制备电泳,制备到电泳纯蜗牛肝脏木葡聚糖酶。经部分理化性质测定,该酶相对分子量约22.7KDa,最适反应温度为45℃,最适pH为5.6。本研究设计的分离纯化技术路线和方案,能很好地满足蜗牛木葡聚糖酶的提取、分离和纯化。由电泳制备的蜗牛木葡聚糖酶,达到序列测定和制备单克隆抗体的要求。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2010-05-01）
木葡聚糖酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)发酵液经硫酸铵分级沉淀、HiPrep26/10 Desalting柱脱盐、HiPrepDEAE FF16/10阴离子交换柱、HiPrep 16/60 Sephacryl S-100凝胶柱、HiPrep 16/10 Source 30S阳离子交换柱等,最终纯化出单一组分的木葡聚糖酶,经过SDS-PAGE电泳分析,此木葡聚糖酶相对分子量约为39 kD。该菌所产木葡聚糖酶的最适反应温度是50℃,在60℃以下较稳定;最适反应pH是7.0,在pH5.0-10.0范围内酶活力较为稳定。酶的动力学研究显示Km为65 g/L,Vmax为6.49μmol/min,kcat=10.86 s-1。底物特异性研究表明对木葡聚糖具有较高比活力。酶蛋白经质谱分析,比对结果显示与来源于Paenibacillus pabuli的木葡聚糖酶有较高同源性。本研究为首次报道解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)产木葡聚糖酶。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
木葡聚糖酶论文参考文献
[1].李婷,吴成成,李保华,练森,梁文星.苹果木葡聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达分析[J].植物生理学报.2018
[2].王宝顺,张梁,丁重阳,顾正华,石贵阳.解木聚糖类芽孢杆菌木葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究[J].生物技术通报.2012
[3].王宝顺.木葡聚糖酶产生菌株的筛选、发酵优化及酶学性质研究[D].江南大学.2012
[4].任旭荣.蜗牛肝脏木葡聚糖酶的分离与纯化[D].内蒙古农业大学.2010
标签：苹果; 木葡聚糖酶抑制蛋白基因; 克隆; 生物信息学分析;