导读:本文包含了外切葡聚糖酶基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:真菌形态建成,菌柄伸长,细胞壁作用酶,表达模式
外切葡聚糖酶基因论文文献综述
陶永新,段静怡,仝宗军,严俊杰,宋寒冰[1]（2018）在《金针菇外切-β-1,3-葡聚糖酶家族基因鉴定及在不同发育时期的差异表达》一文中研究指出金针菇具有很高的营养与保健价值,菌柄长短决定金针菇的产量与品质,而菌柄伸长的相关作用酶及分子机理尚不清楚。前期草菇中发现外切-β-1,3-葡聚糖酶基因(exg2)可能与菌柄伸长相关,但在金针菇中尚没有exg基因的相关报道。本研究首先在金针菇全基因组中鉴定到3个外切-β-1,3-葡聚糖酶家族基因(分别命名为:Ffexg1、Ffexg2、Ffexg3),并进行了克隆验证。进一步采用定量PCR对3个基因在金针菇不同发育时期及组织部位的差异性表达进行了分析。结果显示:Ffexg1只在菌柄中高表达,Ffexg2与Ffexg3在菌柄中表达量先上升后下降,在菌盖中呈逐渐上升趋势。3个Ffexg基因均在菌柄发生伸长的部位表达量较高,且在菇体水平放置后菌柄弯曲程度较大的部位表达量较高。结果显示金针菇exg家族3个基因存在时空差异性表达,在菌柄中伸长较快的时期及部位伴随着Ffexg基因的高表达。结合其功能预测,Ffexg家族基因可能作用于细胞壁成分β-1,3-葡聚糖链,从而在金针菇菌柄及菌盖发育中起作用。(本文来源于《菌物学报》期刊2018年12期）
王军,康利琴,刘中华,袁生[2]（2016）在《一种灰盖鬼伞外切β-1,3葡聚糖酶基因的克隆与表达》一文中研究指出为了简单快速地获取大量的β-1,3葡聚糖酶以研究其在真菌形态发生过程中所发挥的作用,本研究以灰盖鬼伞的c DNA为模板克隆了一种编码外切β-1,3葡聚糖酶的基因,并将该基因插入表达质粒p ET28A(+)中,获得了重组表达质粒p ET28A(+)-exg,转化到E.coli Rosetta菌株中并进行异源重组表达.结果显示,克隆基因的c DNA全长2 415 bp,共编码786个氨基酸;SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coli Rosetta菌株中得到了高效表达,重组表达的酶蛋白表观分子量为85 k Da;纯化后获得的表达酶经DNS法测得比活力为45 U/mg.酶学性质测定结果表明,该酶具有β-1,3葡聚糖外切酶活性,以昆布多糖为底物时,最适反应条件为p H 6.0、温度60℃,且有一定的耐热能力和较好的p H稳定性,具有较好的应用前景.(本文来源于《南京师大学报(自然科学版)》期刊2016年03期）
黄鹭强,白洋,原雪,李玮彦,薛婷[3]（2016）在《草酸青霉外切葡聚糖酶CBHⅠ基因的克隆》一文中研究指出以草酸青霉SJ1菌株的基因组DNA和总RNA,利用PCR和RT-PCR技术进行扩增得到外切葡聚糖酶CBHⅠ(ExocellobiohydrolaseⅠ)基因的序列.CBHⅠ基因DNA序列全长1 638 bp,无内含子,编码545个氨基酸的多肽,推测其蛋白分子大小约为57 ku,蛋白的p I值为4.90.预测结果表明,CBHⅠ是一种很强疏水性的蛋白,具有43个磷酸化修饰位点,蛋白质叁级结构以β-折迭为主,根据蛋白质序列比对分析,推测E236、D238和E241这3个氨基酸为酶的活性位点,为后续利用分子改造方法提高青霉产纤维素酶的能力提供理论依据.(本文来源于《福建师范大学学报(自然科学版)》期刊2016年03期）
王瑞杰,Nokuthula,Peace,Mchunu,牛丹丹,Kugenthiren,Permaul,Suren,Singh[4]（2016）在《疏绵状嗜热丝孢菌外切β-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特征》一文中研究指出【目的】疏绵状嗜热丝孢菌是一种嗜热丝状真菌,具有合成与分泌多种耐热酶的能力,从中找寻酶活高、耐热性能优良的β-葡聚糖酶。【方法】对疏绵状嗜热丝孢菌其中一个外切β-葡聚糖酶的编码基因gln B进行克隆,并在毕赤酵母GS115中表达。【结果】在摇瓶水平上重组菌的产酶活为11.5 U/m L,重组酶在SDS-PAGE中的大小约为48 k D。重组Gln B最适作用温度为65°C,最适作用p H为5.0;在低于50°C或p H 3.0-10.0之间具有良好稳定性。重组酶水解海带叁糖,首先生成单糖和二糖,延长酶作用时间,可以进一步将其中的二糖部分水解为单糖。【结论】疏绵状嗜热丝孢菌来源的重组酶Gln B为外切β-葡聚糖酶,具有较好的耐热性能和p H稳定性。(本文来源于《微生物学通报》期刊2016年02期）
霍凤敏,冉超,杨雅麟,胡俊,周志刚[5]（2016）在《一种具有高β-葡聚糖酶活性的几丁质外切酶基因的克隆、表达和性质鉴定(英文)》一文中研究指出【目的】表达并鉴定来源于维氏气单胞菌的几丁质酶Chi92并研究其作为水产饲用酶的有效性。【方法】自A.veronii B565中克隆chi92基因并在Pichia pastoris GS115中进行表达,对表达成功的Chi92进行分离纯化和生化鉴定。最后将Chi92添加到含有毕赤酵母粉的饲料中饲喂斑马鱼2周,研究Chi92添加对斑马鱼生长、饲料利用率、肠道微绒毛形态和抗病性能的影响。【结果】chi92基因编码具有864个氨基酸残基的多肽。Chi92在p H 6.0和40°C时表现最佳酶活。Chi92对蛋白酶有抗性,同时酶活不受金属离子显着影响。Chi92具备高几丁质酶活(69.4 U/m L)。以胶体几丁质和β-1,3-1,4-葡聚糖作为底物时,比活力分别为809.2 U/mg和235.6 U/mg。薄层层析和电喷雾电离质谱联用技术均表明N-乙酰葡糖胺二聚体是Chi92酶解胶体几丁质的主要产物。Chi92在对酵母细胞壁的降解方面比其他几丁质酶性能更加优良。经过2周饲喂,添加有Chi92的饲料显着提高了斑马鱼肠道微绒毛的高度和密度,同时斑马鱼的生长,饲料利用率,以及抗病性能均得到了一定提高。【结论】Chi92具有p H稳定性、抗逆性和高酵母细胞壁降解功能,能较好地作为饲用酶用于温水水产养殖。(本文来源于《微生物学报》期刊2016年05期）
赵楠[6]（2015）在《短小芽孢杆菌外切葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出外切葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分,是纤维素酶解过程中的限速酶。本实验筛选获得一株可以产生外切葡聚糖酶的短小芽孢杆菌AC-4,克隆获得其外切葡聚糖酶基因(Cbh),并使其在甲醇毕赤酵母中实现表达。主要研究结果如下：(1)分离获得一株细菌AC-4,外切葡聚糖酶活力为0.625±0.003U/mL,其粗酶液的最适作用pH为9.5,最适作用温度为50℃。由形态学特征和16SrDNA序列分析,可以确定菌株AC-4为短小芽孢杆菌。(2)经PCR扩增,获得了菌株AC-4的外切葡聚糖酶基因片段,其长度为2106bp,编码701个氨基酸,与菌株Bacillus pumilus SAFR-032的外切葡聚糖酶基因序列相似性为94%。(3)将获得的Cbh基因片段与分泌表达载体pMETaA连接构建重组表达质粒pMETaA-Cbh,从而将基因Cbh成功整合到甲醇毕赤酵母菌株PMAD16中。SDS-PAGE分析显示Cbh基因在酵母菌细胞中成功表达,分子量约为78kDa。重组菌株NM-Cbh发酵培养后,外切葡聚糖酶活力可以达到5.4U/mL。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2015-10-20）
李娟[7]（2014）在《烟曲霉Z5的纤维素酶相关基因的转录分析及外切葡聚糖酶和木聚糖酶基因的异源表达》一文中研究指出纤维素属于可再生的资源,是自然界中最重要的碳源物质,每年由光合作用产生的植物干质量约为220亿吨,其中纤维素的含量达到50%。而纤维素难以降解,利用自然界微生物产生的纤维素酶来分解天然纤维素是有效途径之一,这对解决食品短缺、环境污染、能源危机和人类社会的可持续发展都具有重大意义。烟曲霉Aspergillus fumigatus Z5能产生大量的胞外纤维素酶,酶系较完全,主要包括：内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和p-葡萄糖苷酶,在这几种类型的酶协同作用下能对纤维素进行完全降解并且对结晶纤维素也有较好的酶解活性。本试验用实时荧光定量PCR的技术,以管家基因Actin作为内参基因,检测了在结晶纤维为碳源的条件下培养0-6h,40个预测的纤维素酶相关基因的相对表达水平。其中19号基因预测为外切葡聚糖酶,其相对表达量很高,而在纤维素酶活实验中发现,外切葡聚糖酶的酶活最高为0.59U/ml,是所有纤维素酶中酶活最低的,表明该酶虽然表达量高,但酶的活力很低,成为了Z5降解纤维素的限制性酶。木聚糖酶是半纤维素酶类中的重要组分,烟曲霉Z5分泌的半纤维素酶类中,木聚糖酶的酶活力较高,但与其他菌株相比较仍有一定的差距。因此,有必要通过基因工程技术,构建能够高效表达的外切葡聚糖酶和木聚糖酶的工程菌株,使实现高效表达。巴斯德毕赤酵母表达系统被广泛应用于外源基因的表达。本试验以毕赤酵母GS115’作为表达宿主,设计特异性引物,以烟曲霉RNA反转录得到的cDNA分别扩增外切葡聚糖酶基因和木聚糖酶基因,并连接到毕赤酵母表达载体pPICZaA上,最后转化到GS115中表达。结果表明,外切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中表达成功,其最高酶活为2.27U/ml,而木聚糖酶基因没有表达成功。重组的外切葡聚糖酶的最适水解温度为50℃,最适水解pH值为5.0。以pNPC为底物,在其不同浓度下测定重组外切葡聚糖酶的酶活力,结果表明该重组酶的Km和Vmax值分别为087umol.L-1和0.054umol·min-1·mg-1。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-06-01）
王雨强[8]（2014）在《粗糙脉孢菌外切葡聚糖酶基因的载体构建及表达》一文中研究指出植物纤维素是自然界中最丰富的可再生资源,但其线性巨分子结构使其很难被分解,利用纤维素酶水解纤维素后再利用,对废物纤维素是一种有效,环保的解决方式。粗糙脉孢菌是能产纤维素酶的一种重要模式微生物,本论文主要对粗糙脉孢菌纤维素酶相关基因进行筛选并构建其高效表达菌株。首先从粗糙脉孢菌突变体库中挑选出10株突变体,预测其缺失基因与纤维素酶有关。经产酶检测后发现△NCU09680的外切葡聚糖酶(CBH)活力下降明显,进一步的生长表型对比发现△NCU09680的菌丝生长量和孢子萌发程度均低于野生型菌株,因此认为该基因所编码的蛋白具有纤维素酶活性。根据NeurosporaCrassa Database报道的NCU09680基因序列设计引物,以粗糙脉孢菌野生型菌株WT87-3的基因组DNA为模板,对该基因进行扩增,得到NCU09680基因并与载体qa-2.5myc.6HisdH进行连接。构建的粗糙脉孢菌外切葡聚糖酶基因载体命名为qa-2.5myc.6HisdH-NCU09680,其 DNA 大小为 8759bp,双酶切插入位点为EcoRⅠ和SamⅠ,带有qa启动子、6His标签、抗氨苄青霉素(Amp)序列和组氨酸3(his3)序列。外切葡聚糖酶基因载体构建成功后,经电转化方法转入粗糙脉孢菌组氨酸缺陷型菌株301-6,并通过Western杂交检验,共得到10个蛋白表达克隆子,表达蛋白大小为62kDa。对得到的10株过表达菌株进行液体发酵产酶的初步筛选,结果表明:菌株60产生的外切葡聚糖酶活力明显高于野生型菌株WT87-3,ANCU09680以及其他过表达菌株。发酵液的SDS-PAGE电泳表明:在62kDa分子量处,过表达菌株的蛋白条带亮度高于野生型菌株WT87-3和△NCU09680,说明过表达菌株分泌于菌体外部的外切葡聚糖酶表达量得到了提高。从第一代传至第十代的过程中,CBH过表达菌株的传代稳定性较好。(本文来源于《黑龙江大学》期刊2014-03-27）
孔芹,方浩,夏黎明[9]（2014）在《外切-β-葡聚糖酶基因重组里氏木霉的筛选及其产酶性能》一文中研究指出外切-β-葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分之一,提高该组分的活力是增强纤维素酶协同降解性能、降低纤维素水解成本的关键。分别采用微晶纤维素琼脂平板法和滤纸崩解法,对已有的基因重组转化子进行筛选试验,获得了6个优良转化子,其滤纸崩解速率和微晶纤维素琼脂平板上的生长速率都较大。进一步在摇瓶条件下进行复筛试验,获得了外切-β-葡聚糖酶(C1)高产转化子Trichoderma reesei ZU-101,液体培养48 h,其C1酶活力可达18.24 U·ml-1,是出发菌株的2.16倍;分析结果表明:重组转化子的纤维素酶体系中内切-β-葡聚糖酶和纤维二糖酶的活力与出发菌株相比变化不大,但由于外切-β-葡聚糖酶活力得到了大幅度提高,纤维素酶的总活力(滤纸酶活力FPA)也提高了61.9%。采用纤维素酶对碱预处理玉米秸秆进行酶解试验,当酶用量为20 FPIU·(g底物)-1,水解48 h,重组转化子T.reesei ZU-101纤维素酶的酶解得率高达94.4%。本文的研究结果在可再生纤维素资源的生物转化与利用方面具有广阔的应用前景。(本文来源于《化工学报》期刊2014年08期）
庞浩,陈燕,吴倩倩,刘春宇,郭媛[10]（2013）在《地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)外切葡聚糖酶CelB基因的发掘及功能鉴定》一文中研究指出从地衣芽孢杆菌的基因组数据中寻找与外切葡聚糖酶相似性高的DNA序列,发现在地衣芽孢杆菌基因组中CelB DNA片段具有很高的序列相似性。在大肠杆菌中对来自地衣芽孢杆菌的CelB基因DNA片段进行表达并纯化蛋白质。CelB蛋白质对纤维素底物具有活性。根据糖基水解酶家族48的保守活性位点设计突变策略对CelB进行突变,突变体丧失对底物的活性,说明它具有糖基水解酶家族48的外切葡聚糖酶的典型活性位点。(本文来源于《生物技术通报》期刊2013年09期）
外切葡聚糖酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了简单快速地获取大量的β-1,3葡聚糖酶以研究其在真菌形态发生过程中所发挥的作用,本研究以灰盖鬼伞的c DNA为模板克隆了一种编码外切β-1,3葡聚糖酶的基因,并将该基因插入表达质粒p ET28A(+)中,获得了重组表达质粒p ET28A(+)-exg,转化到E.coli Rosetta菌株中并进行异源重组表达.结果显示,克隆基因的c DNA全长2 415 bp,共编码786个氨基酸;SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coli Rosetta菌株中得到了高效表达,重组表达的酶蛋白表观分子量为85 k Da;纯化后获得的表达酶经DNS法测得比活力为45 U/mg.酶学性质测定结果表明,该酶具有β-1,3葡聚糖外切酶活性,以昆布多糖为底物时,最适反应条件为p H 6.0、温度60℃,且有一定的耐热能力和较好的p H稳定性,具有较好的应用前景.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外切葡聚糖酶基因论文参考文献
[1].陶永新,段静怡,仝宗军,严俊杰,宋寒冰.金针菇外切-β-1,3-葡聚糖酶家族基因鉴定及在不同发育时期的差异表达[J].菌物学报.2018
[2].王军,康利琴,刘中华,袁生.一种灰盖鬼伞外切β-1,3葡聚糖酶基因的克隆与表达[J].南京师大学报(自然科学版).2016
[3].黄鹭强,白洋,原雪,李玮彦,薛婷.草酸青霉外切葡聚糖酶CBHⅠ基因的克隆[J].福建师范大学学报(自然科学版).2016
[4].王瑞杰,Nokuthula,Peace,Mchunu,牛丹丹,Kugenthiren,Permaul,Suren,Singh.疏绵状嗜热丝孢菌外切β-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特征[J].微生物学通报.2016
[5].霍凤敏,冉超,杨雅麟,胡俊,周志刚.一种具有高β-葡聚糖酶活性的几丁质外切酶基因的克隆、表达和性质鉴定(英文)[J].微生物学报.2016
[6].赵楠.短小芽孢杆菌外切葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D].内蒙古大学.2015
[7].李娟.烟曲霉Z5的纤维素酶相关基因的转录分析及外切葡聚糖酶和木聚糖酶基因的异源表达[D].南京农业大学.2014
[8].王雨强.粗糙脉孢菌外切葡聚糖酶基因的载体构建及表达[D].黑龙江大学.2014
[9].孔芹,方浩,夏黎明.外切-β-葡聚糖酶基因重组里氏木霉的筛选及其产酶性能[J].化工学报.2014
[10].庞浩,陈燕,吴倩倩,刘春宇,郭媛.地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)外切葡聚糖酶CelB基因的发掘及功能鉴定[J].生物技术通报.2013