导读:本文包含了酵母表达载体构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:雌激素受体,雄激素受体,酵母,残留检测
酵母表达载体构建论文文献综述
张海洁,崔子鹤,肖霞,李瑞超,刘源[1]（2019）在《人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留检测中的应用》一文中研究指出[目的]:本研究旨在利用配体受体结合活性构建一种可以用于多种具有雌、雄激素样活性物质残留的检测方法。[方法]:以同源重组的方式将人雌激素或雄激素受体基因序列和在受体响应元件调解下的半乳糖苷酶(LacZ)基因整合到同一载体质粒(ER-5ERE、AR-5HRE)中,利用醋酸锂转化法将该质粒转入W303-1A酵母细胞,分别构建雌激素或雄激素受体酵母表达系统;将11种不同浓度的雌激素或8种雄激素分别与重组酵母细胞共同作用,30℃培养12 h后,加入酵母细胞裂解液和底物ONPG,以验证构建成功的雌激素或雄激素受体酵母表达系统是否对各种激素具有反应活性;为了验证尿样前处理方法,将2 mL加标牛尿样品过夜酶解使结合型激素转化为游离型激素后,过经甲醇活化和超纯水平衡的C18固相萃取柱,甲醇水淋洗后用甲醇洗脱,氮吹至干,2mL甲醇复溶,以HPLC-MS检测方法进行方法学验证。[结果]:雌激素受体酵母表达系统对不同浓度的雌酮、雌二醇、雌叁醇、己烯雌酚、己烷雌酚、炔雌醇、马烯雌酮、马萘雌酮、双烯雌酚、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇等11种雌激素类物质具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为2.33μg/L、0.58μg/L、58.60μg/L、0.62μg/L、0.33μg/L、0.33μg/L、0.44μg/L、5.96μg/L、0.73μg/L、273μg/L、147μg/L;雄激素受体酵母表达系统对不同浓度的双氢睾酮、睾酮、甲基睾酮、诺龙、雄烯二酮、美雄酮、宝丹酮、康力龙等8种雄激素具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为7.17μg/L、58.76μg/L、20.64μg/L、15.66μg/L、407.53μg/L、194.20μg/L、271.73μg/L、153.54μg/L。加标浓度为1μg/L、10μg/L、50μg/L的尿样回收率范围分别在78%～117%、78%～107%和70%～101%,变异系数分别为13.04%、8.11%和8.05%。[结论]:本实验分别成功构建了雌激素与雄激素受体酵母表达系统,并验证了该表达系统对性激素具有良好的药理学活性。HPLC-MS方法检测加标尿样中含性激素的浓度并计算回收率,回收率范围和变异系数良好,说明尿样样品前处理方法可行,为后续重组人雌、雄激素受体基因酵母细胞在性激素类药物残留检测中的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集》期刊2019-10-13）
李向茸,李倩,马瑞仙,李生军,谢晶莹[2]（2019）在《脑心肌炎病毒GS01株VP1基因表达载体的构建及酵母表达》一文中研究指出目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)GS01株衣壳蛋白VP1的真核表达载体,并利用酵母真核表达系统获得具有抗原性的分泌性VP1成熟多肽。方法扩增EMCV GS01株VP1基因,与酵母表达载体pPIC9K重组,构建表达质粒p PIC9K-VP1;用醋酸锂转化法转化酵母菌GS115,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子;阳性克隆经甲醇诱导表达后,利用SDS-PAGE及Western blot鉴定培养上清中VP1蛋白的表达情况及抗原性。结果重组质粒pPIC9K-VP1经酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的VP1蛋白相对分子质量约34 000,为分泌性表达,能被兔抗EMCV盐析血清特异性识别,具有天然VP1蛋白的反应原性。结论实现了EMCV GS01株VP1蛋白的酵母真核表达,为在体外研究VP1与宿主细胞的相互作用机制及EMCV基因工程疫苗的研制奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年06期）
尚翠玲,孟佳丽,李昕,王小月,李丹[3]（2019）在《抗菌肽Eumenitin序列修饰后的毕赤酵母重组表达载体构建》一文中研究指出为了构建高效低毒的新型抗菌肽,将抗菌肽Eumenitin及其序列修饰后获得4条新型短肽的毕赤酵母真核表达载体,采用生物信息学方法对Eumenitin及其衍生肽的理化参数进行预测,基因序列经毕赤酵母密码子优化后,克隆至pMD19T-simple载体上,鉴定后连接至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,构建的重组表达质粒经Avr Ⅱ线性化后,电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布于YPDSZ平板上,进行表型筛选和高拷子筛选,并对5条短肽的溶血率进行测定。结果显示:Eumenitin及其衍生肽均为较稳定的疏水性多肽,空间结构以α螺旋为主,且序列中不含有信号肽。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,成功构建了5条短肽的毕赤酵母重组表达载体,经设计改造后的抗菌肽溶血性均较低。本研究结果为后续进行重组蛋白的表达以及抑菌活性研究奠定了基础,以期获得抗菌活性强、溶血性低、高表达的新型抗菌肽。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年06期）
马生健,刘耀光[4]（2018）在《酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J的构建》一文中研究指出S1是水稻(Oryza sativa L.)种间杂种不育一个最重要的基因座,对杂种的雌雄配子都有选择性杀灭作用。通过构建S1基因的酵母诱饵载体,进行相应水稻品种酵母表达文库的筛选,得到S1蛋白作用的下游因子,对S1基因如何控制杂种不育的分子机理了解有重要意义。本研究通过RT-PCR扩增获得了S1基因CDS序列,测序后与pGBKT7酵母诱饵载体连接构建了p GBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J,再双酶切鉴定并转化酵母菌株AH109,S1蛋白在酵母菌株中能正确稳定表达,未表现出毒性和自激活性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续蛋白互作筛选提供理论参考。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年21期）
黄志立,蒋伟,周烨,沈丽,王妍[5]（2018）在《重组人神经生长因子真核表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达与纯化》一文中研究指出研究构建了重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rhNGF)的一种真核表达载体,并转化毕赤酵母GS115.在h NGF基因序列基础上对其进行毕赤酵母偏好密码子分析与改造,然后构建重组质粒p PIC9K-h NGF,经PCR、酶切及测序验证后,转化酵母,利用遗传霉素筛选出高效表达rhNGF的重组酵母.表达产物经SDS-PAGE分析,结果见一条与h NGF分子质量15.7kDa相当的条带,蛋白表达量约为52.86%.将表达产物经初步纯化和进一步精提后,纯度超过98%.分别以鼠NGF产品和人NGF标准品为对照,利用TF-1细胞/MTS比色法检测NGF活性,结果表明rh NGF具有良好的生物学活性,其活性和比活性分别为5.0U/m L和253U/mg,高于鼠NGF产品(2.6 U/mL,130U/mg),与hNGF标准品相当(5.0 U/mL,250 U/mg).(本文来源于《深圳职业技术学院学报》期刊2018年05期）
詹瑶,曹高燚,曹雪松,武俊杰,丁博[6]（2018）在《酿酒酵母起始密码子表达载体pYES2-ATG的构建及应用》一文中研究指出鉴定合成的或通过高通量随机组合方法获得的潜在功能片段的生物学功能需要一套高效便捷的酵母表达专用载体。酵母表达载体pYES2多克隆位点处不含起始密码子,通过设计含有ATG和Eco RⅠ酶切位点的特异性引物扩增一段Intron,利用In-Fusion重组技术(Clontech)将该片段构建至酵母表达载体p YES2,得到一个含有ATG的重组酵母表达载体pYES2-ATG。为了检测该载体的功能,扩增不含起始密码子的DNA序列nlea,该序列由本实验室设计合成,具有潜在的耐盐功能。构建重组表达载体p YES2-ATG-nlea在酵母中进行功能鉴定。研究结果表明,半乳糖诱导后,含pYES2-ATG-nlea的重组酵母菌株耐盐能力明显高于含pYES2-ATG空质粒的菌株,表明在该载体系统上的添加了起始密码子的nlea成功表达,具有一定的耐盐性,同时也证明改造的载体系统可用于没有起始密码子的编码区序列的功能筛选和鉴定。p YES2-ATG酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件的表达,同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达,在大规模进行多个基因的功能鉴定中具有重要的应用价值。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年23期）
孙守勋,刘静,解立威,柏雪婷,单娜[7]（2018）在《人TLR2胞外区基因酵母表达载体的构建及表达研究》一文中研究指出目的在真核生物酵母细胞中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因。方法以重组质粒pAdTrack-TLR2为模板,应用PCR方法扩增TLR2胞外区基因,克隆到pMD18-T载体中并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中并转化酵母菌Y187,测定其在Y187中的自激活现象及毒性,提取酵母蛋白质,行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果成功扩增出TLR2胞外区基因,测序结果与GenBank中序列一致。酶切回收的目的基因成功克隆入酵母表达载体pGBKT7中并转化酵母菌Y187后证实无重组质粒的自激活作用,Western blot分析显示该基因在酵母细胞中表达。结论成功构建了TLR2胞外区基因的酵母表达载体,并在酵母细胞Y187中正确表达,为后续研究奠定了基础。(本文来源于《现代检验医学杂志》期刊2018年03期）
罗展浩,吴清平,张菊梅,丁郁,李程思[8]（2018）在《荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达》一文中研究指出萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,FL)是ATP快速检测技术的核心组件,通过荧光强度与ATP浓度的对应关系,在食品行业检测微生物数量发挥着重大作用。本文为实现荧光素酶在重组毕赤酵母GS115中的异源表达,通过从载体pGL2-control中扩增荧光素酶基因luc,克隆到真核表达载体p PIC9K中,线性化后电击转化毕赤酵母GS115菌株,筛选阳性重组菌株。在甲醇的诱导下进行酶的表达,对粗酶液进行生物活性发光分析,然后对粗酶进行超滤、阴离子层析和分子筛凝胶层析叁步纯化。甲醇诱导表达96 h发现胞外和胞内粗酶液均有相对较高的酶发光活性,酶活分别为1.45×10~6 RLU/mL和1.58×10~9 RLU/mL。SDS-PAGE与Western blot分析重组荧光蛋白大小约为70 ku,最终纯化得到的荧光素酶,其比活为7.0×10~8 RLU/mg,纯化倍数达到19.3倍,产量为48 mg/L。以上结果表明,荧光素酶能够在毕赤酵母表达系统获得较好的表达和纯化效果。(本文来源于《现代食品科技》期刊2018年06期）
刘晓媛[9]（2018）在《家蚕肠道脂肪酶基因（Bmlipase-1）毕赤酵母表达载体的构建及表达分析》一文中研究指出家蚕是一种重要的经济昆虫,蚕桑业是我国重要的经济产业,但是蚕病严重威胁着养蚕业的发展。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染引发的家蚕血液型脓病是蚕业生产中危害最严重的家蚕病毒病,在生产中最常见,传染性强,易造成大面积爆发。因此,控制BmNPV的感染和传播、提高家蚕对BmNPV的抗性对桑蚕业发展具有重要意义。家蚕脂肪酶1(Bmlipase-1)是一种消化酶,在中肠组织中特异性表达。Bmlipase-1在BmNPV感染的起始阶段能抑制病毒,在蚕体第一道免疫防线中具有抵抗病毒的作用,但其抗病毒机制并不清楚。对Bmlipase-1基因的克隆和体外表达有助于进一步探究其抗病毒机制。本研究对Bmlipase-1基因进行克隆、密码子优化,并利用毕赤酵母真核表达系统体外表达家蚕脂肪酶Bmlipase-1,对表达结果进行分析和讨论。主要研究方法和结果如下:1.家蚕脂肪酶基因Bmlipase-1的克隆和生物信息学分析以5龄家蚕中肠组织为实验材料,利用TRIZOL法提取其总RNA,以随机六聚体引物进行反转录获得其第一链cDNA。设计引物,PCR扩增获得Bmlipase-1片段,转化到大肠杆菌DH5α中,成功克隆了Bmlipase-1完整CDS序列。生物信息学分析显示,其CDS序列全长885 bp,编码294个氨基酸,理论蛋白分子量31.74kDa,理论等电点9.33,不稳定指数23.13,脂肪族指数76.90,亲水性指数(GRAVY)-0.373,是稳定的亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主。2.构建毕赤酵母重组菌株GS115/pPICZαA-Bmlipase-1将克隆的Bmlipase-1基因与穿梭质粒载体pPICZαA连接,电转化到毕赤酵母GS115中,使得Bmlipase-1基因整合到毕赤酵母基因组中。通过MM和MD平板筛选甲醇利用表型(Mut~+)转化子,菌液PCR及测序验证成功获得阳性重组毕赤酵母菌株。利用叁丁酸甘油酯乳化平板检测转化子脂肪酶活性,结果显示,重组菌株菌落比对照菌株略大,但透明圈大小差异不明显,推测透明圈的产生是由于酵母自身脂肪酶的分泌,Bmlipase-1没有表达或表达量很低。3.Bmlipase-1基因密码子优化将克隆的Bmlipase-1基因进行密码子优化和全基因合成,以opt-Bmlipase-1命名。优化后的基因以高频密码子替换了低频密码子,其CAI值由0.68增加至0.97,达到了高基因表达水平;GC含量百分比由52.68%调整为39.35%;延长了mRNA的半衰期;除去了影响核糖体结合和mRNA稳定性的颈环结构。4.优化后Bmlipase-1基因的表达及表达分析将优化后的家蚕脂肪酶基因分别与穿梭质粒载体pPICZαA和pPIC9K连接,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-opt-Bmlipase-1和pPIC9K-opt-Bmlipase-1。将重组质粒电转化到毕赤酵母GS115中,通过多拷贝筛选、甲醇利用表型筛选、PCR验证及测序等方法获得阳性转化子。对重组毕赤酵母菌株进行甲醇诱导的摇瓶发酵实验,发酵至144 h。发酵液上清用TCA法浓缩20倍后进行SDS-PAGE。电泳结果显示阳性重组子发酵上清中杂蛋白明显多于空载对照菌株,其中一次的发酵上清在发酵至144 h时有疑似目的蛋白条带,但其他电泳结果中没有出现疑似目的蛋白条带。对照菌株发酵上清中蛋白较少,电泳条带较浅。进行Western Blotting检测和Ni-NTA亲和层析没有检测到目的蛋白的表达。影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素有很多,对此结果我们从目的基因自身特性和发酵条件等方面进行了分析和讨论。(本文来源于《西南大学》期刊2018-04-09）
郑丽娜,刘美辰,王思明,白雪媛,赵雨[10]（2018）在《3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出TSC10基因所编码的3-酮基嘌呤还原酶是酵母中神经酰胺合成的重要因子。设计了一种从酵母中提取神经酰胺经济、便捷、高效的方法:(1)利用构建含有TSC10基因的毕赤酵母GS115表达载体p PIC3.5K-TSC10;(2)电转化法将该表达质粒转化到GS115感受态细胞中;(3)用G418筛选以及PCR鉴定;(4)使用qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测。结果经过G418筛选以及PCR鉴定后确定获得了包含TSC10基因的毕赤酵母转化子,经过qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测后发现TSC10基因在20个阳性菌株中均可以稳定、高效表达。成功构建了3-酮基嘌呤还原酶高表达的毕赤酵母菌株,并为后续获得高收率神经酰胺奠定了基础。(本文来源于《科学技术与工程》期刊2018年10期）
酵母表达载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)GS01株衣壳蛋白VP1的真核表达载体,并利用酵母真核表达系统获得具有抗原性的分泌性VP1成熟多肽。方法扩增EMCV GS01株VP1基因,与酵母表达载体pPIC9K重组,构建表达质粒p PIC9K-VP1;用醋酸锂转化法转化酵母菌GS115,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子;阳性克隆经甲醇诱导表达后,利用SDS-PAGE及Western blot鉴定培养上清中VP1蛋白的表达情况及抗原性。结果重组质粒pPIC9K-VP1经酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的VP1蛋白相对分子质量约34 000,为分泌性表达,能被兔抗EMCV盐析血清特异性识别,具有天然VP1蛋白的反应原性。结论实现了EMCV GS01株VP1蛋白的酵母真核表达,为在体外研究VP1与宿主细胞的相互作用机制及EMCV基因工程疫苗的研制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母表达载体构建论文参考文献
[1].张海洁,崔子鹤,肖霞,李瑞超,刘源.人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留检测中的应用[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集.2019
[2].李向茸,李倩,马瑞仙,李生军,谢晶莹.脑心肌炎病毒GS01株VP1基因表达载体的构建及酵母表达[J].中国生物制品学杂志.2019
[3].尚翠玲,孟佳丽,李昕,王小月,李丹.抗菌肽Eumenitin序列修饰后的毕赤酵母重组表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019
[4].马生健,刘耀光.酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-S1-G/pGBKT7-S1-J的构建[J].分子植物育种.2018
[5].黄志立,蒋伟,周烨,沈丽,王妍.重组人神经生长因子真核表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达与纯化[J].深圳职业技术学院学报.2018
[6].詹瑶,曹高燚,曹雪松,武俊杰,丁博.酿酒酵母起始密码子表达载体pYES2-ATG的构建及应用[J].分子植物育种.2018
[7].孙守勋,刘静,解立威,柏雪婷,单娜.人TLR2胞外区基因酵母表达载体的构建及表达研究[J].现代检验医学杂志.2018
[8].罗展浩,吴清平,张菊梅,丁郁,李程思.荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达[J].现代食品科技.2018
[9].刘晓媛.家蚕肠道脂肪酶基因（Bmlipase-1）毕赤酵母表达载体的构建及表达分析[D].西南大学.2018
[10].郑丽娜,刘美辰,王思明,白雪媛,赵雨.3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达[J].科学技术与工程.2018