导读:本文包含了抗原捕捉论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:IBV,HH06,单克隆抗体,检测方法,ELISA
抗原捕捉论文文献综述
白妍,潘龙,黄小丹,李广兴[1]（2016）在《IBV HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立》一文中研究指出研究目的本研究拟利用常规杂交瘤技术制备抗IBV HH06的单克隆抗体,并依托抗IBV多克隆抗体作为捕捉抗体建立并优化一种IBV的抗原捕捉ELISA检测方法,为今后快速和准确的诊断IBV提供一种方便简易的方法。材料方法试验以IBV HH06株为免疫原,免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合、间接ELISA筛选和有限稀释法克隆,对得到的杂交瘤细胞株进行生物学鉴定,鉴定正确后使用腹水制备法进行(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会论文集》期刊2016-07-01）
白妍[2]（2016）在《鸡传染性支气管炎病毒HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立》一文中研究指出鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,给养禽业造成巨大的经济损失。IBV血清型的复杂与多样性加大了IBV的诊断难度,因此快速和高效的诊断方法对制定针对性的综合防治方案有着深远的意义。本实验以IBV HH06株为免疫原,免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合、间接ELISA筛选和有限稀释法克隆,最终得到3株能够稳定分泌抗IBV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将它们命名为A8、B11和H5,然后利用腹水制备法大量制备单克隆抗体。单克隆抗体细胞上清和腹水抗体效价分别是1:128-1:1 024和1:8 192-1:65 356,腹水抗体效价明显高于细胞上清。Western blot结果显示所有单克隆抗体均与IBV全病毒和S1蛋白发生特异性反应,IFA鉴定表明单抗可检测到感染鸡胚肾细胞(chicken embro kidney,CEK)中的HH06株IBV。Ig亚类鉴定A8、B11和H5均属于Ig M,其杂交瘤细胞染色体计数平均数量在86-101条,病毒中和试验显示单抗A8、B11和H5抗IBV HH06中和效价分别为1:4.45、1:4.86和1:3.06,特异性试验证明3株单抗仅与IBV发生特异性反应,不与禽传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、禽白血病(avian leukosis virus,ALV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)产生交叉反应,以上结果表明本实验所制备的单抗可以用作IBV检测方法的物质材料。抗原捕捉ELISA是一种快速高效的抗原检测手段,兔抗IBV全病毒多抗为捕捉抗体,单克隆抗体B11作为检测抗体,通过对各个条件进行优化,得到最佳反应条件为:兔抗IBV多抗稀释倍数为1:4 000,鼠抗IBV单抗B11检测浓度为5μg/m L,待检样品孵育时间90 min,酶标二抗稀释倍数为1:5 000。该方法板间、板内重复性变异系数均小于10%,最低检出量为0.007 mg/m L,与阴性尿囊液及其他参考鸡病病原无交叉反应。利用建立的AC-ELISA对M41株人工感染IBV雏鸡不同时间肾脏、肺脏和气管组织的多份样本进行检测,结果表明肾脏含毒量高且持续时间长,且检测敏感性最高,肺脏和气管次之,因此,该临床检测所选用的靶器官为肾脏,并将0.158(OD490 nm)作为阴阳性判定标准,因不同毒株侵染的组织器官具有一定的特异性,同时以肺脏和气管作为辅助检测的器官。综上表明,建立的抗原捕捉ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可用于IBV的快速检测。(本文来源于《东北农业大学》期刊2016-06-01）
刘敏,连科迅,李一经,唐立杰,赵丽丽[3]（2013）在《传染性胰腺坏死病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及应用》一文中研究指出传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)属双RNA病毒科(Birnaviridae)水生双RNA病毒属(Aquabirnavirus)的成员,是引起鲑科鱼类以肝胰腺等内脏实质器官出血、坏死为特征的一种高度接触传染性的急性病毒性疾病的病原,IPNV高致病力毒株对鲑鳟稚鱼的致死率高达90%。该病流行范围广,发病和致死率高,是我国及世界各国家鲑鳟幼鱼死亡的重要疫病,给水产养殖业带来重大的经济损失。本研究利用以纯化的多克隆抗体作为包被抗体,单克隆抗体5G10作为检测抗体,进行了抗原捕捉ELISA方法检测IPNV的探索。对多克隆抗体利用辛酸-饱和硫酸铵法进行了抗体的纯化,纯化后的多抗浓度为4.09mg∕mL,经SDS-PAGE电泳分析IgG重链和轻链区带明显,纯度为100%。将纯化后的多抗和5G10细胞上清经方阵法确定5G10单抗最佳工作浓度为1.34μg∕mL(1:200),兔抗IPNV多抗的为1.28μg∕mL(1:800),建立的方法其最低检出量为1.41ug/mL。以OD490nm>0.170949作为阳性判定标准。该检测方法与SVCV、HRV、VHSV和IHNV无交叉反应,多次重复性试验稳定性较好。采用建立的抗原捕捉ELISA方法检测41份临床感染病料样品,与RT-PCR和IPNV检测试剂盒比较,具有很高的符合率。结果表明,建立的抗原捕捉ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可用于IPNV的快速检测。抗原捕捉ELISA的建立不但为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏及应用广泛的IPNV检测方法,而且为进一步建立更快、更直观、更简便的检测方法提供了依据。(本文来源于《中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编》期刊2013-11-05）
陈艳,乔传玲,杨焕良,孔维,辛晓光[4]（2013）在《H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立》一文中研究指出为快速检测H3亚型猪流感病毒(SIV),本研究将一株H3N2亚型SIV特异性单克隆抗体(MAb)进行纯化,建立了以多抗作为包被抗体,MAb作为检测抗体的H3亚型SIV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法。并对该方法的特异性和敏感性进行了分析,其敏感性是血凝试验的4倍,与猪繁殖与综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒以及H1、H5、H9亚型SIV均没有明显的交叉性反应,批间和批内重复试验变异系数均小于10%。应用建立的AC-ELISA方法对84份H3亚型SIV实验室感染样品进行检测与鸡胚滴定病毒结果符合率达90.47%。本实验建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H3亚型SIV的临床检测。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2013年07期）
马玲[5]（2013）在《猪PRRSV HH08株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立》一文中研究指出猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病通过多种途径传播，建立一种快速高效的ELISA检测方法，对PRRSV检测、免疫学研究具有重要意义和应用价值。将浓缩纯化的PRRSV HH08株免疫BALB/c小鼠，每隔2周免疫一次，待血清抗体效价达到1:10000以上，加强免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。经间接ELISA筛选，有限稀释法克隆，获得了5株稳定分泌抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为A7、B4、B8、B12和G12，并对A7、B4、B8和B12四株杂交瘤株制备了腹水。辛酸-饱和硫酸铵法纯化A7和B8腹水，SDS-PAGE分析可见单一且清晰的分子量约55kDa重链和25kDa轻链，纯化效果好。ELISA检测显示，细胞上清和腹水抗体效价分别在1:256~1:2048和1:6400~1:51200，腹水抗体效价明显高于细胞上清。Western blot结果显示所有单克隆抗体均与PRRSV在蛋白分子量97.2~66.4kDa间出现特异性反应条带，IFA鉴定表明单抗能够识别到病毒而出现特异性荧光。Ig亚类鉴定A7、B8和B12属于IgG2b，B4和G12属于IgM。杂交瘤细胞染色体计数平均数量在84~100条，均多于SP2/0细胞的66条染色体。特异性试验证明这5株单抗仅与PRRSV发生特异性反应。以PRRSV免疫兔制备兔抗PRRSV多克隆抗体，并用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化IgG。以纯化的多克隆抗体作为包被抗体，单克隆抗体B8作为检测抗体，建立抗原捕捉ELISA方法。该方法的最佳反应条件为：兔抗PRRSV多抗包被浓度为40μg/mL，鼠抗PRRSV单抗B8工作浓度为1.25μg/mL，待检样品孵育时间90min，酶标二抗工作浓度为1:5000，实验确定OD490nm＞0.175为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数均小于10%，最低检出量为1735TCID50，可用于检测PRRSV经典株和变异株，与Mrac-145细胞及其他参考猪病病原无交叉反应。采用建立的抗原捕捉ELISA方法检测11份临床感染病料样品，与RT-PCR比较，两者具有很高的符合率。结果表明，建立的抗原捕捉ELISA方法具有较好的特异性和敏感性，可用于PRRSV的快速检测。(本文来源于《东北农业大学》期刊2013-06-01）
田莉莉,李丽[6]（2012）在《猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立》一文中研究指出为制备猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体(McAb),建立检测猪细小病毒的抗原捕捉ELISA方法 (AC-ELISA),本研究以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了2株能稳定分泌抗猪细小病毒VP2蛋白的McAb,命名为3C4、5F8。以多克隆抗体作为捕获抗体、单克隆抗体5F8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测猪细小病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法与日本乙脑病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为93.6%、90.9%、94.4%。本研究建立的猪细小病毒AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于猪细小病毒感染的早期诊断。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2012年07期）
田莉莉,李丽[7]（2012）在《新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及其抗原捕捉ELISA方法的建立》一文中研究指出为建立一种快速的新城疫病毒病原检测方法。本研究以原核表达的重组HN蛋白免疫7周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了1株能稳定分泌抗新城疫病毒HN蛋白的McAb杂交瘤细胞,命名为4E8,4E8亚类鉴定为重链属于IgG2a,轻链属于κ链。以多克隆抗体作为包被抗体、单克隆抗体4E8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测新城疫病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法对EDSV、ITLV、IBV、IBDV不发生交叉反应,其敏感性比HA试验要高4倍以上,与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为95.6%、93.3%、96.1%。本研究建立的NDVAC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于新城疫病毒感染的早期诊断。(本文来源于《中国农学通报》期刊2012年17期）
姬媛媛[8]（2011）在《马流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及其初步应用》一文中研究指出马流感是由马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)引起马属动物的一种急性呼吸性传染病,具有国际传播性、高度传染性、发病频率高、发病率不稳定和死亡率低等特点。随着北京奥运会和广州亚运会马术比赛的成功举办,赛马运动在我国逐渐发展为一种异军突起的新兴产业。同时我国又有着丰富的马驴产业,因此马流感防控工作任重而道远,建立一种快速、可靠、适于基层使用的EIV诊断方法对于马流感防治十分必要。本研究以实验室保存的EIV A/马/新疆/07(H3N8)(简称XJ株)为基础毒株,通过RT-PCR方法,扩增出NP基因并克隆至pMD-18T载体。测序鉴定正确后,通过双酶切将NP基因亚克隆至原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET30a-NP并转化Rosetta(DE3)。通过对表达条件的优化,最终获得分子质量约64ku、可溶性形式的重组蛋白NP,并采用镍柱对该蛋白进行纯化。Western blot检测结果表明,重组蛋白NP及纯化NP均能与马流感阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。将纯化NP作为免疫原,腹腔接种4周龄BALB/c小鼠。按照常规杂交瘤细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合。用蔗糖密度梯度纯化的XJ株为筛选抗原,建立间接ELISA方法,筛选出针对NP单克隆抗体的杂交瘤细胞。最终获得叁株能够稳定分泌NP单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2G11、3E10和4A1)。Western blot、间接免疫荧光和间接ELISA结果表明叁株单克隆抗体均能特异性识别重组蛋白NP,与天然EIV结合,而与His标签蛋白和马日本脑炎病毒、马疱疹病毒1/4型及马动脉炎病毒均不发生反应。用蔗糖密度梯度纯化的XJ株和纯化NP为免疫原接种家兔,分别制备针对EIV XJ株的多克隆抗体(简称抗EIV多抗)和抗NP多克隆抗体(简称抗NP多抗)。选取单克隆抗体2G11分别与抗EIV多抗和抗NP多抗建立四种抗原捕捉ELISA方法,即以抗EIV多抗为捕获抗体,2G11为检测抗体的抗原捕捉ELISA1;以2G11为捕获抗体,抗EIV多抗为检测抗体的抗原捕捉ELISA2;以2G11为捕获抗体,抗NP多抗为检测抗体的抗原捕捉ELISA3和以抗NP多抗为捕获抗体,2G11为检测抗体的抗原捕捉ELISA4。将优化的四种方法分别与马疱疹病毒1/4型、马乙型脑炎病毒和马动脉炎病毒进行交叉反应试验,均不发生反应,具有较高的特异性。四种抗原捕捉ELISA方法均与H7N7亚型EIV有交叉反应,且敏感性明显高于血凝试验结果。尤其是第4种方法,对禽源性A/马/吉林/89(H3N8)(简称JL株)、欧洲系A/马/青海/94(H3N8)(简称QH株)和A/马/迈阿密/63(H3N8)(简称Miami株)都具有很高的敏感性。采用喷雾法对无EIV抗体的幼驹进行攻毒试验。攻毒后连续10d采集鼻拭子,同时进行病毒分离、多重RT-PCR和上述四种抗原捕捉ELISA。试验结果表明,第4种抗原捕捉ELISA与病毒分离和多重RT-PCR符合性最好,可检测到攻毒后第3-7d的病毒粒子。初步证明其适于EIV的临床检测。总之,该诊断技术的建立填补了其在我国马流感病原学诊断中的空白,为马流感的快速确诊提供了有效工具。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2011-06-01）
张美晶[9]（2010）在《猪肺炎支原体P97 C末端蛋白抗原表位分析及抗原捕捉ELISA方法初步研究》一文中研究指出本试验设计了10段覆盖P97 C末端蛋白全长的连续或重迭短肽序列,并将其进行了原核表达。将表达后的融合蛋白分别与针对猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P97 C末端蛋白的两株单克隆抗体(A3C9和B4D5)进行Western blotting反应,初步筛选P97 C末端蛋白的抗原表位。为了详细研究P97 C末端蛋白的表位结构,进一步采用了肽探针扫描技术对表位进行精确定位,精确鉴定出两个最小抗原决定区域:F905PMAFSY911 (905～911 aa)和G991TPNQGKKAE1000(991～1 000 aa)。同源性分析表明,两个表位序列在Mhp各毒株中具有较高的保守性,是Mhp保守的种属特异性表位。生长抑制试验结果显示,A3C9和B4D5两株单抗对Mhp的生长有较好的抑制效果(尤其单抗B4D5)。免疫原性与反应原性分析显示:两个表位多肽具有较好的免疫原性和反应原性,可作为多表位疫苗和诊断试剂研究的候选短肽。另外,本研究还以单抗A3C9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗AF11为检测抗体(两株单抗识别Mhp不同抗原决定簇),初步建立了抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化,最后确定单抗A3C9以1:800稀释,抗原以1:16倍稀释,检测抗体以1:400倍稀释时反应条件最佳;同时抗原与检测抗体的最佳孵育时间为60 min;包被液最终确定为pH9.6的碳酸盐缓冲液;封闭液为5%鱼明胶。特异性试验表明,该方法能特异性识别猪肺炎支原体(Mhp)J株,与丝状支原体丝状亚种LC型Y-goat标准株、无乳支原体PG2株、丝状支原体丝状亚种SC型PG1标准株、猪絮状支原体27399株、山羊肺炎亚种87001株和猪鼻支原体BST-7株均无交叉反应。本试验重复性较好,板内板间变异系数均小于10%。敏感性试验表明,该方法检测Mhp活菌的灵敏度能到达6.4×104 CFU /mL(CFU为菌落形成单位)。本方法与分离培养法及PCR方法比较结果显示:阳性符合率分别为50%和75%;统计学分析显示本方法与病原分离方法差异不显着(χ2值为3,P>0.05)。本研究为进一步阐明Mhp P97蛋白抗原结构与功能关系,设计科学合理的基因工程疫苗提供了重要的参考依据。同时,抗原捕捉ELISA方法的初步研究也为Mhp感染的快速确诊提供了新的检测方法,对猪肺炎支原体现地临床检测具有重要参考价值。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2010-06-01）
孔维[10]（2009）在《抗H3亚型猪流感病毒血凝素单抗的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立》一文中研究指出猪流感(swine influenza,SI)是由猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的一种急性传染性呼吸道疾病,临床表现发病率高、死亡率低,导致猪群严重发病往往是由于继发感染了其它的一些细菌或者病毒而引起的;与此同时,猪不仅可感染人流感病毒,还可感染禽流感病毒,作为流感病毒种间传播的中间宿主,具有重要的公共卫生学意义。本研究采用纯化的H3N2亚型SIV A/Swine/Guangdong/9/05(H3N2)(以下简称SW/GD/9/05)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,加强免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆培养后,获得7株亲和力较高抗H3亚型血凝素(HA)的单克隆抗体(McAb),分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1:10~5、1:10~6、1:10~4、1:10~5、1:10~6、1:10~5、1:10~6;特异性试验表明7株单抗均不与其他亚型SIV和其他猪病病毒发生交叉性反应。1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG1,而4E8、5C7、5D12则是IgG2a,所有的单抗轻链均为κ型。Western-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。从已有的7株H3亚型单克隆抗体中取出一株(4E8)用辛酸—硫酸胺联合沉淀法进行纯化,通过对ELISA反应各个工作条件的优化,建立了以多抗作为包被抗体,单抗作为二抗的抗原捕捉ELISA方法。相关试剂最佳工作浓度分别为:血清1:800倍稀释,单抗0.5μg/孔,酶标抗体1:5000稀释;最佳反应条件分别为:单抗37℃作用1.0h,酶标抗体37℃作用1.0h,底物室温作用10min;最佳封闭液选择为5%脱脂乳—PBS稀释液。交叉性试验结果显示该方法与H1、H5、H9亚型SIV及其它猪病病毒均无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10%,重复性好;敏感性试验结果显示,该方法对纯化的H3亚型SIV最低检出量为3.11ng。最后,应用建立的抗原捕捉ELISA方法对72份H3亚型SIV实验室感染SPF鸡的拭子和肺脏样品进行检测,并同时进行病毒分离,结果两种方法的检测符合率为90.28%。表明应用单抗所建立的抗原捕捉ELISA检测方法具有特异、敏感、快速的优点,可用于H3亚型SIV的临床检测。(本文来源于《东北农业大学》期刊2009-04-10）
抗原捕捉论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,给养禽业造成巨大的经济损失。IBV血清型的复杂与多样性加大了IBV的诊断难度,因此快速和高效的诊断方法对制定针对性的综合防治方案有着深远的意义。本实验以IBV HH06株为免疫原,免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合、间接ELISA筛选和有限稀释法克隆,最终得到3株能够稳定分泌抗IBV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将它们命名为A8、B11和H5,然后利用腹水制备法大量制备单克隆抗体。单克隆抗体细胞上清和腹水抗体效价分别是1:128-1:1 024和1:8 192-1:65 356,腹水抗体效价明显高于细胞上清。Western blot结果显示所有单克隆抗体均与IBV全病毒和S1蛋白发生特异性反应,IFA鉴定表明单抗可检测到感染鸡胚肾细胞(chicken embro kidney,CEK)中的HH06株IBV。Ig亚类鉴定A8、B11和H5均属于Ig M,其杂交瘤细胞染色体计数平均数量在86-101条,病毒中和试验显示单抗A8、B11和H5抗IBV HH06中和效价分别为1:4.45、1:4.86和1:3.06,特异性试验证明3株单抗仅与IBV发生特异性反应,不与禽传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、禽白血病(avian leukosis virus,ALV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)产生交叉反应,以上结果表明本实验所制备的单抗可以用作IBV检测方法的物质材料。抗原捕捉ELISA是一种快速高效的抗原检测手段,兔抗IBV全病毒多抗为捕捉抗体,单克隆抗体B11作为检测抗体,通过对各个条件进行优化,得到最佳反应条件为:兔抗IBV多抗稀释倍数为1:4 000,鼠抗IBV单抗B11检测浓度为5μg/m L,待检样品孵育时间90 min,酶标二抗稀释倍数为1:5 000。该方法板间、板内重复性变异系数均小于10%,最低检出量为0.007 mg/m L,与阴性尿囊液及其他参考鸡病病原无交叉反应。利用建立的AC-ELISA对M41株人工感染IBV雏鸡不同时间肾脏、肺脏和气管组织的多份样本进行检测,结果表明肾脏含毒量高且持续时间长,且检测敏感性最高,肺脏和气管次之,因此,该临床检测所选用的靶器官为肾脏,并将0.158(OD490 nm)作为阴阳性判定标准,因不同毒株侵染的组织器官具有一定的特异性,同时以肺脏和气管作为辅助检测的器官。综上表明,建立的抗原捕捉ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可用于IBV的快速检测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原捕捉论文参考文献
[1].白妍,潘龙,黄小丹,李广兴.IBVHH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会论文集.2016
[2].白妍.鸡传染性支气管炎病毒HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立[D].东北农业大学.2016
[3].刘敏,连科迅,李一经,唐立杰,赵丽丽.传染性胰腺坏死病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及应用[C].中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编.2013
[4].陈艳,乔传玲,杨焕良,孔维,辛晓光.H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立[J].中国预防兽医学报.2013
[5].马玲.猪PRRSVHH08株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立[D].东北农业大学.2013
[6].田莉莉,李丽.猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立[J].畜牧与兽医.2012
[7].田莉莉,李丽.新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及其抗原捕捉ELISA方法的建立[J].中国农学通报.2012
[8].姬媛媛.马流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及其初步应用[D].中国农业科学院.2011
[9].张美晶.猪肺炎支原体P97C末端蛋白抗原表位分析及抗原捕捉ELISA方法初步研究[D].中国农业科学院.2010
[10].孔维.抗H3亚型猪流感病毒血凝素单抗的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立[D].东北农业大学.2009