导读:本文包含了不成熟树突细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蜂毒肽,树突细胞,T细胞,免疫调节
不成熟树突细胞论文文献综述
熊浪平,贺守第,关彤,莫丽华,杨平常[1]（2017）在《蜂毒肽对成熟树突细胞诱导T细胞分化的免疫调节的影响》一文中研究指出通过蜂毒肽(Melittin,MT)干预脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激树突细胞(Dendritic Cell,DC)与淋巴细胞共培养,以探究MT对Th1/Th2分化的影响。用MTS检测LPS、MT对DC与淋巴细胞共培养活性;流式细胞术检测MT对LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中Th1、Th2比例;ELISA检测LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中细胞上清液中IL-4、INF-γ浓度。结果显示MT、LPS在一定浓度下刺激DC与淋巴细胞共培养的活性;在成熟的DC诱导下,MT能上调Th1/Th2比例、Th1百分率(P<0.05)及IFN-γ浓度(P<0.01);对IL-4浓度、Th2百分率无影响(P>0.05)。本研究说明MT通过上调Th1细胞比例,IFN-γ浓度,促进Th1/Th2细胞向Th1方向分化途径对T细胞起免疫调节作用。(本文来源于《天然产物研究与开发》期刊2017年11期）
王婷婷,王红灿,路玉蓉,叶东硕,杨登科[2]（2017）在《间充质干细胞与未成熟树突细胞联合胰岛细胞移植治疗小鼠糖尿病》一文中研究指出为建立一种有效的胰岛移植免疫耐受的新方案,利用流式细胞术鉴定未成熟树突细胞(immature dendritic cells,im DCs),成骨诱导鉴定间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),双硫腙(Dithizone,DTZ)染色鉴定胰岛细胞.胰岛细胞与间充质干细胞联合移植治疗小鼠糖尿病,测定移植后糖尿病小鼠血糖及糖化血红蛋白变化,结果发现200个胰岛细胞与2×10~5个未成熟树突细胞共同移植虽然未能显着延长移植物的存活时间(7±2.65d),但能显着降低糖尿病小鼠血糖水平;200个胰岛细胞与2×10~5个间充质干细胞共移植,可使血糖下降到较低水平,并维持移植物存活时间达8±2.31天;200个胰岛细胞与2×10~5个间充质干细胞及2×10~5个未成熟树突细胞共同移植于糖尿病小鼠,可使糖尿病鼠血糖下降并显着延长移植物的存活时间(12.6±3.48 d).结果说明联合移植在一定程度上可延长移植物的存活时间并使血糖维持在较低的水平,有效控制糖化血红蛋白浓度,较单独移植胰岛细胞治疗小鼠糖尿病有积极的作用.(本文来源于《湖南师范大学自然科学学报》期刊2017年01期）
谭诚,胡祖权,龙金华,邱伟,刘丽娜[3]（2017）在《单核细胞与未成熟树突细胞的细胞骨架相关的核心差异基因表达的生物信息学分析》一文中研究指出为进一步深入理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性和免疫学功能的差异。从CEO数据库获得CD14~+单核细胞(monocytes,mon)及其诱导而成的未成熟DCs(immature DCs,im DCs)的m RNA表达数据(芯片编号:GSE15076),利用R语言软件(RGui 3.2.3)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRING online工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。实时荧光定量PCR技术检测mon及im DCs部分核心差异基因CCNB1、CDK5、IL-6和TNF在基因水平上的表达情况。im DCs相对于mon表达的差异的基因共3 371个(im DCs与mon对比,表达变化倍数≥2,p值<0.05),其中上调基因为2 396个,下调基因为975个,通过进一步筛选后获得上调基因655个,下调基因110个,主要涉及m TOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDK5、CCNB1等差异基因与细胞骨架改变密切相关,而下调基因中IL-6、TNF、CXCR4等差异基因与细胞骨架改变密切相关,这对进一步深入理解im DCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2017年01期）
王福鑫[4]（2016）在《大鼠未成熟树突细胞CD80/CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出目前,肝脏移植为终末期肝脏疾病首选的治疗手段。但器官移植后的急慢性排斥反应是影响移植术后受体恢复和成活的主要因素。免疫抑制剂可有效抑制排斥反应,但长期使用最终造成机体一些不良反应。而诱导移植免疫耐受,可以有效克服免疫排斥反应,提高受体生存质量,可能是解决器官移植后排斥问题最佳方法。树突状细胞表面最重要的共刺激分子为CD80和CD86,与细胞表面分子结合可协同激活初始型淋巴细胞成为记忆细胞或效应细胞,从而促进细胞增殖分化,在共刺激作用中起到重要作用。通过抑制DC表面CD80和CD86的表达,阻断共刺激通路,可诱导供者特异性的免疫耐受。近年研究表明,些双链RNA可以通过特定基因下促使降解mRNA从而特异、高效地阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因表型的缺失,即RNA干扰。RNAi技术因其具有高效特异等优点目前已成为后基因组时代功能基因组学研究不可或缺的研究手段。通过RNA干扰技术,构建针对大鼠imDC细胞CD80和CD86基因慢病毒载体,并在体外观察对其大鼠未成熟状态骨髓源性树突状细胞表达表面分子的影响。理论上,只要清楚某一特定基因的mRNA序列,就可以应用RNAi技术对该基因来进行封闭,甚至得到类似于基因敲除的结果。这为通过阻断共刺激通路诱导免疫低反应甚至耐受提供了新的方法。应用RNAi技术敲减供体DC中共刺激通路CD80/CD86基因通路。如能阻断这一环节共刺激分子mRNA的表达,从而阻断共刺激信号,使反应性T细胞无能,从而达到抗排斥的目的。但是,由于不同作用位点干扰效率不同,会直接影响CD80和CD86的干扰效果。因此我们针对其不同作用位点分别设计叁条干扰片段以此来选出最佳干扰片段,为后续实验重组慢病毒预处理的供者DC阻断共刺激通路作用的体外研究及大鼠体内肝移植移植免疫耐受的研究做准备。[目的]通过RNA干扰技术,构建针对大鼠imDC细胞CD80和CD86基因慢病毒载体,并体外观察对其大鼠未成熟状态骨髓源性树突状细胞表达表面分子的影响。[方法]通过筛选确定大鼠imDC细胞CD80、CD86基因RNA干扰的有效靶序列,合成慢病毒载体。慢病毒感染体外培养的大鼠骨髓源性未成熟(imDC),以荧光显微镜及流式细胞仪检测感染效率,以流式细胞仪检测感染前后CD80和CD86的表达变化情况,Western Blot实验检测CD80和CD86基因蛋白质水平的变化。[结果]重组质粒shRNA PCR,shRNA的Oligo DNA序列测序结果证实,构建的LV-GFP-shCD80和LV-GFP-shCD86慢病毒载体正确；慢病毒感染imDC,流式细胞仪检测,叁组干扰CD80和CD86的表达均下降,与其余两对照组imDC相比,有统计学显着性差异(p<0.01),同时OX62和MHC-Ⅱ的表达未受到影响。Western Blot检测提示慢病毒转染后,imDC的CD80、CD86基因的蛋白质表达量较阴性对照组显着降低,其中LV-GFP-shCD80 (c)和LV-GFP-shCD86 (c)下降最为显着。[结论]大鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体构建正确,叁组干扰序列均可明显抑制imDC表面CD80和CD86的表达,而其中shCD80 (c)和shCD86(c)干扰效果最佳。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2016-05-01）
林小军,蔡小燕,叶静华,李芳菲,唐莼[5]（2015）在《系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞来源的未成熟树突细胞活化状态检测及意义》一文中研究指出目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞来源的未成熟树突细胞(monocyte-derived dendritic cells,MDDCs)活化状态及临床意义。方法 SLE患者35例(SLE组)和体检健康者16例(对照组),2组分别抽取外周血分离单核细胞,体外培育MDDCs。2组采用流式细胞术检测未成熟MDDCs表面CD86表达情况,采用ELISA法检测MDDCs细胞因子浓度。结果 SLE组未成熟MDDC数量((0.026±0.100)×106/mL)与对照组((0.043±0.010)×106/mL)比较差异无统计学意义(P>0.05);SLE组未成熟MDDCs表面CD86表达率(87.2%)明显高于对照组(42.8%)(P<0.05);SLE组未成熟MDDCs分泌的白细胞介素-10水平((200.7±81.5)ng/L)高于对照组((101.2±20.5)ng/L),白细胞介素-6水平((122.9±11.5)ng/L)与对照组((121.8±9.3)ng/L)比较差异无统计学意义(P>0.05);SLE组未成熟MDDCs百分比与SLE疾病活动度评分(SLE disease activity index,SLEDAI)评分呈负相关(r=-0.340,P=0.031),MDDC浓度与血清补体C3水平呈负相关(r=-0.510,P=0.018),与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.350,P=0.041);SLE组CD86表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.530,P=0.002),与血清补体水平C3水平(r=0.260,P=0.082)、抗双链DNA(r=0.190,P=0.061)、C反应蛋白水平(r=0.310,P=0.090)和血沉(r=0.200,P=0.098)均无相关性。结论 SLE患者未成熟MDDCs可能存在自发活化状态,即使无活化信号存在亦能有效递呈抗原,有效协同刺激T细胞,导致患者外周免疫耐受被打破。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2015年04期）
付静静[6]（2014）在《骨髓源CD11b~+F4/80~+未成熟树突细胞通过调节Tregs/Th17平衡发挥对小鼠CIA治疗作用》一文中研究指出类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种主要累及小关节的慢性自身免疫病。促炎症细胞与抗炎细胞及其相应的细胞因子间失平衡参与了RA的病理过程。树突细胞（dendritic cells, DCs）是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC)，具有调控固有免疫和适应性免疫的双重作用。目前越来越多的证据表明DCs具有促进耐受，调控炎症反应和免疫细胞平衡的作用。DCs具有免疫原性和耐受性双重作用，成熟树突细胞（mature DCs, mDCs)显示免疫原性，而未成熟树突细胞（Immature DCs, iDCs)显示耐受特性，iDCs促进Tregs细胞的生成，在外周和中枢耐受中发挥重要作用。CD11b+F4/80+DCs能抑制T细胞的增生及限制促炎因子的产生。Th17细胞是介导炎性反应和关节损害的重要效应细胞，能分泌促炎因子IL-17，促进巨噬细胞产生IL-1和肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor, TNF)；而且Th17通过在关节组织释放促炎因子和趋化因子，促进巨噬细胞的产生，中性粒细胞的浸润及活化。相反，Tregs细胞是产生与中枢胸腺及外周组织的主要抗炎细胞，在RA病人和关节炎模型中都发现Tregs的功能受到损害。目前治疗RA的药物主要包括非甾体类抗炎药物、疾病调修药和生物制剂，有较好疗效，但长期使用不良反应较多，患者难以耐受。利用细胞免疫疗法治疗RA，重建免疫耐受机制，已成为一个新策略，iDCs调控炎症反应和免疫细胞平衡的特性，为RA治疗提供前景。本实验从体外诱导小鼠BM CD11b+F4/80+iDC，并显示耐受特性。那么BM CD11b+F4/80+iDC能否通过处理和呈递抗原，调控Tregs和Th17功能，介导免疫耐受发挥对CIA的治疗作用; BM CD11b+F4/80+iDC又是通过怎样的机制实现对Tregs和Th17的功能调控，目前尚不清楚。本实验从体外诱导分离小鼠BM CD11b+F4/80+iDC，研究BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠胶原性关节炎（collagen induced arthritis, CIA）的治疗作用并进一步探讨BM CD11b+F4/80+iDC对Tregs和Th17功能的调控机制。目的：明确骨髓源CD11b+F4/80+未成熟树突细胞(BM CD11b+F4/80+iDC)对CIA小鼠的治疗作用及部分机制方法：体外用rmGM-CSF和rmIL-4诱导BM CD11b+F4/80+iDC，并通过分析TLR-2、IDO、IL-10和TGF-β1的表达以及混合淋巴细胞增殖反应（mixed leukocytereaction，MLR）对BM CD11b+F4/80+iDC的耐受功能进行鉴定。采用注射鸡Ⅱ型胶原乳剂诱导小鼠CIA模型，BM CD11b+F4/80+iDC治疗组在免疫后d14,d21和d28分别尾静脉注射叁次BM CD11b+F4/80+iDC。通过观察关节炎指数、关节和脾脏病理、体重、胸腺指数、胸腺细胞增殖、IL-1β、TNF-α、IL-17A、IL-10和TGF-β1水平以及Tregs和Th17细胞的比较评价BM CD11b+F4/80+iDC对CIA小鼠的治疗作用。体外实验中，通过分析BM CD11b+F4/80+iDC对Tregs和Th17细胞比例及分泌的细胞因子、Foxp3、Helios、IL-17和RORγt mRNA的表达观察BMCD11b+F4/80+iDC对T细胞的调节作用。采用逆转录PCR（reverse transcription PCR, RT-PCR)检测Foxp3、Helios和IL-17mRNA的表达，实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测RORγtmRNA的表达;培养上清和CIA小鼠中IL-1β、TNF-α、IL-17A、IL-10和TGF-β1水平利用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测; CD11b+F4/80+iDC、Tregs和Th17细胞的百分含量采用流式细胞术检测；IDO和CTLA-4的表达采用免疫印迹（Western-blot）法检测；MTT法检测胸腺细胞增殖和MLR；免疫细胞化学法检测TLR-2、IDO和CD83表达。结果：1. rmGM-CSF和rmIL-4体外能够成功诱导BM CD11b+F4/80+iDC并显示耐受特性1.1体外能够成功诱导BM CD11b+F4/80+iDC采用rmGM-CSF(20μg/L)和rmIL-4(20μg/L)联合诱导小鼠后肢股骨和胫骨骨髓细胞，体外成功诱导BM CD11b+F4/80+iDC，并且CD11b+F4/80+iDC百分含量在26.6％，采用流式细胞分选系统分离纯化得到的细胞纯度到达99%。每只小鼠能获得大约1×106个BM CD11b+F4/80+iDC。1.2BM CD11b+F4/80+iDC呈现耐受表型和功能rmGM-CSF和rmIL-4诱导的BM CD11b+F4/80+iDC培养上清IL-10和TGF-β1水平较高，高于LPS诱导的mDCs培养上清IL-10和TGF-β1水平；CD11b+F4/80+iDC高表达TLR-2和IDO，而mDCs表达较少，并且诱导的CD11b+F4/80+iDC几乎不表达CD83，而经LPS诱导的mDCs高表达CD83；mDCs具有强烈刺激同种异体T细胞增殖的能力，而BM CD11b+F4/80+iDC则不能有效刺激同种异体T细胞增殖。提示rmGM-CSF和rmIL-4诱导的CD11b+F4/80+iDC可通过高表达表达IDO、TLR-2、分泌IL-10和TGF-β1而显示耐受潜能。2.体外诱生的BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA的治疗作用及对Tregs和Th17亚群功能的调节2.1BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA有治疗作用BM CD11b+F4/80+iDC治疗组在首次免疫后d14，d21和d28分别注射叁次BMCD11b+F4/80+iDC。CIA小鼠的肿胀高峰在d35至d42天。与正常组相比，CIA小鼠的关节炎指数明显升高，BM CD11b+F4/80+iDC可明显降低CIA小鼠的关节炎指数；与正常组相比，CIA小鼠的滑膜炎、血管翳形成以及软骨和骨质侵蚀明显，BMCD11b+F4/80+iDC治疗可显着改善各项关节病理变化，降低滑膜组织增生、炎性细胞浸润及软骨和骨质侵蚀的评分。CIA小鼠病理显示脾脏白髓增生，生发中心出现，红髓充血。与正常组相比，CIA小鼠淋巴滤泡增生，边缘区及红髓充血的评分显着升高，BM CD11b+F4/80+iDC可以降低生发中心的产生和以上各项脾脏病理评分。与正常组相比，CIA小鼠体重在d35至d46显着降低，BM CD11b+F4/80+iDC可以明显升高CIA小鼠的体重；d46检测CIA小鼠的胸腺指数，与正常组相比，CIA小鼠的胸腺指数明显升高，BM CD11b+F4/80+iDC可以明显降低CIA小鼠的胸腺指数。2.2BM CD11b+F4/80+iDC抑制胸腺细胞增生我们采用ConA诱导的胸腺细胞增殖反应进一步研究BM CD11b+F4/80+iDC在体内对T细胞的影响，结果显示与正常组相比，CIA小鼠的胸腺细胞增殖反应明显升高，BM CD11b+F4/80+iDC可以明显降低CIA小鼠的胸腺细胞增殖反应。2.3BM CD11b+F4/80+iDC调节CIA小鼠Th17和Tregs的平衡与正常组相比， CIA小鼠中CD4+IL-17+Th17细胞比例升高，但CD4+CD25+FoxP3+Tregs细胞比例明显降低， BM CD11b+F4/80+iDC降低CD4+IL-17+Th17细胞比例，升高CD4+CD25+FoxP3+Tregs细胞比例；与正常组相比，CIA小鼠血清中IL-17A水平升高，IL-10和TGF-β1水平降低，BMCD11b+F4/80+iDC治疗的小鼠血清中IL-17A水平降低，IL-10和TGF-β1水平升高;与正常组相比，CIA小鼠脾脏组织中CTLA-4的表达明显降低，BMCD11b+F4/80+iDC治疗的小鼠脾脏组织中CTLA-4的表达明显升高。2.4BM CD11b+F4/80+iDC降低CIA小鼠血清炎性因子水平并升高抗炎因子水平与正常组相比，CIA小鼠血清IL-1β、TNF-α和IL-17A水平明显升高，IL-10和TGF-β1水平明显降低。BM CD11b+F4/80+iDC降低血清中IL-1β、TNF-α和IL-17A表达，并显着升高血清中IL-10和TGF-β1水平；并且，与正常组相比，CIA小鼠巨噬细胞培养上清TNF-α和IL-1β水平显著升高，BM CD11b+F4/80+iDC显着降低巨噬细胞上清中TNF-α和IL-1β的水平。3. BM CD11b+F4/80+iDC体外对Tregs和Th17分化的调节作用3.1BM CD11b+F4/80+iDC体外促进Tregs分化结果显示，在TGF-β1和OVA同时存在的条件下BM CD11b+F4/80+iDC能显着升高共培养Tregs的百分含量，升高共培养上清IL-10的水平，促进共培养T细胞表达CTLA-4，升高共培养T细胞Foxp3mRNA和Helios mRNA的表达。3.2BM CD11b+F4/80+iDC体外抑制Th17细胞的功能结果显示，BM CD11b+F4/80+iDC能抑制ConA诱导的T细胞增殖反应；在PMA，Ion和BFA存在下能降低共培养T细胞中Th17细胞的百分含量，降低共培养上清IL-17A的水平，降低共培养T细胞IL-17mRNA和RORγt mRNA的表达。结论：1. rmGM-CSF和rmIL-4体外能够成功诱导BM CD11b+F4/80+iDC，并显示耐受特性。2. BM CD11b+F4/80+iDC对小鼠CIA有治疗作用。3. BM CD11b+F4/80+iDC对CIA的治疗作用与诱导Tregs细胞的产生，抑制Th17细胞的功能有关。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-03-01）
邓琼,胡何节,方征东,王晓天,孙小杰[7]（2014）在《CD83~+成熟树突细胞和CD11b~+耐受性树突细胞在人颈动脉粥样硬化病变中的分布》一文中研究指出目的探讨CD83+成熟树突细胞(mDC)和CD11b+耐受性树突细胞(tolDC)在人颈动脉粥样硬化病变中的分布。方法收集颈动脉狭窄患者行颈动脉内膜剥脱术的颈动脉内膜标本20例,常规石蜡切片,HE染色,免疫组织化学染色观察CD83和CD11b阳性反应血管树突状细胞的分布。结果 CD83+mDC和CD11b+tolDC主要分布在颈动脉内膜斑块、泡沫细胞以及新生血管周围,成熟的CD83+mDC细胞密度(8.34±1.20)个细胞/HPF较CD11b+tolDC细胞密度(5.31±1.24)个细胞/HPF高。结论 CD83+mDC和CD11b+tolDC在人颈动脉粥样硬化动脉内膜均有分布,mDC的增多和tolDC的减少可能与人颈动脉粥样硬化发生发展有关。(本文来源于《中国临床保健杂志》期刊2014年01期）
严志东,闫佳,颛孙永勋,陈瑞,张蔚[8]（2014）在《小干扰RNA抑制成熟树突细胞表面抗原CD80/CD86的表达》一文中研究指出背景:成熟树突细胞可通过其表面抗原CD80/CD86来启动Th细胞活化,促使Th细胞向Th1细胞分化减少、向Th2细胞方向分化增多。目的:探讨小干扰RNA抑制哮喘小鼠成熟树突细胞表面抗原CD80/CD86表达后对Th1及Th2型细胞因子干扰素γ、白细胞介素4分泌的影响。方法:建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠骨髓成熟树突细胞,流式细胞术检测表面标记物CD11c、CD80、CD86的阳性表达率;设计合成CD80/CD86相关小干扰RNA转染哮喘小鼠成熟树突细胞,荧光定量PCR、流式细胞术检测干扰前后成熟树突细胞中CD80/CD86 mRNA和相应蛋白的表达,将干扰组、未干扰组、转染试剂对照组的成熟树突细胞分别与小鼠T淋巴细胞共培养,ELISA检测上清液中Th1及Th2型细胞因子干扰素γ、白细胞介素4分泌水平。结果与结论:①正常组成熟树突细胞的CD80/CD86的表达与哮喘组相比均明显降低(均P<0.05)。②小干扰RNA转染哮喘小鼠成熟树突细胞后,干扰组CD80/CD86 mRNA及其蛋白表达水平较其他组均明显降低(均P<0.05)。③小干扰RNA转染后干扰组共培养体系中干扰素γ水平明显高于其他组(均P<0.05),白细胞介素4水平则明显低于其他组(均P<0.05)。提示哮喘小鼠成熟树突细胞高表达CD80/CD86,小干扰RNA特异性抑制哮喘小鼠成熟树突细胞中CD80/CD86的表达,能增加干扰素γ并减少白细胞介素4的分泌,从而纠正Th1/Th2失衡。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年05期）
魏玉香,周文强,肖漓,郑德华,齐帜[9]（2013）在《吞噬凋亡淋巴细胞的未成熟树突细胞对脂多糖介导激活的抑制作用研究》一文中研究指出目的探讨吞噬经体外光化学法(PUVA)处理的同种异基因淋巴细胞的未成熟树突细胞(imDC)对脂多糖(LPS)介导的树突细胞(DC)激活的抑制作用。方法分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,经小鼠重组白细胞介素4(rmIL-4)和重组粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)共同诱导培养制备骨髓来源的C57BL/6小鼠imDC。分离BALB/c小鼠脾淋巴细胞(SP),经PUVA处理制备成PUVA-SP。在体外将BALB/c小鼠的PUVA-SP与C57BL/6小鼠骨髓来源的imDC共同培养,获得PUVA-SP DCs。在上述imDC和PUVA-SP DCs中分别加入10ng/ml LPS刺激24h,获得LPS DCs。采用ELISA法检测上清中IL-10和IL-12的浓度,流式细胞仪检测细胞表面MHC-Ⅱ、CD40、CD86和CD80的表达水平。结果 LPS刺激后,PUVA-SP DCs表面分子CD80、CD86、CD40的表达分别为21.26%、38.50%和39.78%,远远低于imDC经LPS刺激后的表达(50.58%、66.29%、71.20%,P<0.01)。LPS刺激后PUVA-SP DCs和imDCs MHC-Ⅱ的表达分别为67.29%和68.64%,差异无统计学意义(P>0.05)。LPS刺激后,PUVA-SP DCs和imDCs分泌IL-10的水平分别为435.6±13.9pg/ml和132.6±2.8pg/ml,与刺激前相比均增高,但前者增高的水平要显着高于后者(P<0.01)。LPS刺激后,imDCs分泌高水平的IL-12,其p70和p40的表达量分别为192.1±5.9和999.8±26.9pg/ml,而PUVA-SP DCs分泌IL-12的水平分别为p7018.56±1.3pg/ml,p40 15.22±1.2pg/ml,显着低于imDCs,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PUVA-SP DCs虽然表达不成熟表型,但其功能不同于imDC,对LPS刺激具有抑制作用,适用于诱导体内免疫耐受。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2013年08期）
董志伟[10]（2013）在《CCR7联合Rel-B基因对小鼠未成熟树突细胞免疫原性和迁移功能的影响》一文中研究指出研究背景及研究目的烧伤是平时生活和战争中比较常见的疾病，浅度烧伤可以经过药物治疗后自愈，然而治愈深度烧伤最好的办法是皮肤移植。现在治愈大面积深度烧伤中皮肤移植是常用的方法，皮肤移植往往是自体皮肤移植，但自体皮肤移植往往存在的一个缺点就是自身可供移植的皮肤不够，不能完全覆盖创面，影响到治疗效果。科学家们曾经尝试用过同种异体皮肤移植来解决皮肤移植中供皮来源不足的问题，但同种异体皮肤往往伴激活免疫应答，免疫应答和免疫排斥导致皮肤移植的失败，为了解决这个问题，科学家们一直探索免疫耐受的机制，包括免疫细胞的特性，特别是抗原提呈细胞(APC)和调节性T细胞(Treg)。树突状细胞(DC)是一种功能强大的抗原提呈细胞，DC能够携带抗原信息，从外周器官迁移到淋巴组织的T淋巴细胞区，将抗原提呈给T淋巴细胞，激活活化初始T淋巴细。同时，DC可以通过诱导形成调节性T淋巴细胞，细胞克隆删除和删除记忆性T细胞，在形成免疫耐受和免疫排斥中起着重要作用[1,2]。这就使DC作为一种治疗方法在移植中探索应用。在动物实验中，输入捐助者或接收者来源的耐受性DC，可以更广泛地延长移植物的存活。在临床实验中，DC在移植中也开始应用，但仍存在很多问题需要解决，包括细胞的分离和纯化技术，细胞的来源和途径，以及如何靶向性的诱导免疫耐受等[3]。未成熟树突状细胞(immature dendritic cell，imDC)有着较高的抗原递呈能力以及较低的共刺激分子，能够诱导低免疫应答和产生免疫耐受，所以imDC成为了现在诱导免疫耐受研究的重点，这已经在我们以前国家自然科学基金项目(No.30271341)中得到证明。而我们在国家自然科学基金项目(No.30672173)也证实imDC转染CCR7后具有较高的迁移能力，将转染CCR7基因的imDC输入同种异体皮肤移植小鼠中后，其皮肤存活时间明显长于输入mDC组以及输入PBS组。因为imDC能够诱导免疫耐受，但具有较低的CCR7，所以在国家自然科学基金项目(No.30672173)中，我们试图通过腺病毒转染CCR7基因使供者源imDC的CCR7表达上升，增强imDCs的迁移及免疫耐受能力，但腺病毒转染imDC也会部分促使imDC向mDC分化，使共刺激分子升高，共刺激分子通过与相应受体结合，可为T细胞激活提供第二信号，再通过引发T细胞分化和相关细胞因子分泌等，对机体免疫起着正性作用，影响了诱导免疫耐受功能的发挥。如何使CCR7基因转染imDC后能够上升CCR7基因表达同时抑制共刺激分子的表达呢？现在研究发现，RelB基因能够调节共刺激分子的表达，下调RelB基因，能够下调共刺激分子。为更好的发挥供者源imDC的作用，我们尝试同时转染上调CCR7基因和下调RelB基因，使imDC有着较高迁移性的同时表达较低共刺激分子，更好的诱导形成免疫耐受，从而为延长同种异体皮肤的存活时间提供一个新的思路和方法。研究方法1、小鼠骨髓来源树突状细胞的形态及功能鉴定在体外，GM-CSF和IL-4联合培养诱导小鼠骨髓来源的单核细胞成为树突状细胞，第5天的细胞为imDC，而在7天时加入LPS刺激，形成mDC,通过光镜、电镜来观察细胞形态。流式细胞仪和蛋白电泳检测特异性标志分子和共刺激分子的表达。混合淋巴细胞反应和ELISA实验检测imDC和mDC功能的变化。2、小鼠趋化因子CCR7重组慢病毒感染对DC2.4细胞免疫原性和迁移功能的影响分别构建空载慢病毒和带有CCR7上升基因的慢病毒，并且带有绿色荧光蛋白，培养小鼠未成熟细胞细胞系DC2.4，用慢病毒感染DC2.4，分为叁组，正常DC2.4组叫做DC2.4组，空载慢病毒感染DC2.4组叫做GFP-DC2.4，带有CCR7上升基因慢病毒感染DC2,4组，叫做CCR7-DC2.4。光镜和荧光显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪，蛋白印迹法分别检测感染前后共刺激分子CD80和CD86的变化，激光共聚焦检测CCR7分子的变化，体外趋化实验检测体外趋化能力的改变。3、上调小鼠CCR7联合下调Rel-B基因对未成熟树突细胞免疫原性和迁移功能的影响设计RelB SiRNA，用CCR7腺病毒和Rel-B SiRNA同时转染imDC，用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和转染效率，用流式细胞仪检测CCR7的变化，趋化实验检测迁移功能的变化。加入LPS刺激使imDC变为mDC，蛋白电泳检测Rel-B的蛋白表达变化，流式细胞仪检测共刺激分子CD80和CD86的变化，混合淋巴细胞反应检测免疫原性的变化。实验结果1、小鼠骨髓来源树突状细胞的形态及功能鉴定1.1小鼠骨髓源树突状细胞体外培养光镜观察情况培养的第3天可见有树突状突起的细胞，形态上体积比较小，比较圆润，疏松贴壁并聚集成团呈集落样生长。至第5天突起逐渐增多，细胞团也逐渐增多，细胞体积增大，表面毛刺状突起明显，但仍然疏松贴壁生长，加入LPS刺激后可见细胞表面伸出比较明显的树突状样结构，长短大小不一，悬浮细胞数目增多和体积增大，突起明显增多增大。1.2小鼠骨髓来源树突状细胞扫描电镜观察结果从扫描电镜结果可见：imDC表面较光滑，但表面凹凸不平，毛刺状突起几乎没有。mDC表面不光滑，并且伸出许多树枝样突起，长短不一，形态各异，比较符合成熟DCs的典型细胞形态，为下一步功能实验奠定了基础。1.3小鼠骨髓源树突细胞按照上述方法分离，经IL-4、GM-CSF作用后，于第5天加入LPS刺激其向成熟转变，流式细胞术检测细胞表面分子CD11C,CD80,CD86,MHCⅡ的表达。在imDC中CD11c、CD80、CD86、MHCⅡ的阳性率分别低于在mDC的表达率，统计学显示，imDC和mDC的CD11C、CD80、CD86、MHCⅡ差异均有统计学意义(p<0.01)，这符合imDC低表达而mDC高表达表面分子的表型特征。1.4从蛋白电泳图上可以看出，成熟树突细胞的CD80、CD86表达明显高于未成熟树突细胞的蛋白表达。imDC的CD80蛋白表达量为（0.65±0.1），而mDC的蛋白表达量为（1.36±0.1），为imDC的2倍，存在明显差异(P<0.01)。imDC的CD80蛋白表达量为（0.54±0.1），而mDC的蛋白表达量为（1.47±0.08），为imDC的2.7倍，存在明显差异(P<0.01)。说明imDC受到刺激后，共刺激分子CD80和CD86会明显上升，为以后的进一步实验奠定基础。1.5通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)来评价培养的imDC对同种异体未致敏T淋巴细胞的刺激能力，imDC刺激T细胞后OD值为：（1.33±0.31），mDC刺激T细胞后OD值为：（2.38±0.4），对T细胞的刺激能力是imDC的1.79倍，存在明显差异(P<0.01)。1.6通过ELISA结果显示，imDC分泌IL-2和IFN-γ量分别为(2848.37±162.67)pg/ml和(156.25±27.09)pg/ml，mDC分泌IL-2和IFN-γ量分别为(3610.36±106.59)pg/ml和(287.33±14.85)pg/ml，成熟树突细胞分泌IL-2和IFN-γ量明显高于未成熟树突细胞(P<0.01)。imDC分泌IL-4和IL-10量分别为:(186.56±6.6)pg/ml和(147.40±23.23)pg/ml，mDC分泌IL-4和IL-10为(106.5±5.3)pg/ml和(77.91±10.88)，imDC分泌IL-4量明显高于mDC(p<0.01)。从以上结果可以看出，mDC刺激T细胞分泌的细胞因子IL-2和IFN-γ明显高于imDC(p<0.01)，而imDC刺激T细胞分泌的IL-10和IL-4明显高于mDC(p<0.01)。2、小鼠趋化因子CCR7重组慢病毒感染对DC2.4细胞免疫原性和迁移功能的影响2.1光镜下观察DC2.4细胞呈贴壁生长，集落式生长，细胞形态呈圆形，慢病毒感染后细胞形态没有明显改变。24h后荧光显微镜下观察，就可以发现明亮的GFP表达，此后逐渐增强，并且在96小时达到荧光强度达到高峰，阳性率可以达到87.4%。2.2经过流式上机检测后，3组细胞CD80、CD86、MHCⅡ的表达阳性率分别为无明显差异。统计结果P值均大于0.05。2.3蛋白印记结果蛋白印记结果显示, CCR7-DC2.4组CCR7蛋白表达量(45.1±2.1)明显高于DC2.4(25.32±1.4)和GFP-DC2.4(28.6±0.9)(P<0.01)。 DC2.4、 GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4的CD80表达量分别为33.9±2.2、33.2±1.6、32.9±1.8，叁组无明显差别(P>0.05)。DC2.4、GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4的CD86表达量分别为39.9±1.3、33.1±2.1、33.9±2.3，叁组无明显变化(P>0.05)。2.4细胞免疫荧光结果细胞免疫荧光显示DC2.4细胞表达很低的CCR7，GFP-DC2.4细胞可表达少量CCR7，CCR7-DC2.4细胞CCR7的表达增加，说明慢病毒载有CCR7基因能够有效的转入DC2.4并表达CCR7蛋白。2.5体外迁移实验结果体外迁移实验表明,CCR7-DC2.4在CCL19作用下体外趋化迁移率(35.33±5.4)%明显高于DC2.4(5.5±0.6)%和GFP-DC2.4(6.34±0.6)%(P<0.01)。说明载有CCR7的慢病毒转染DC2.4后，使其迁移功能明显上升。3、上调CCR7联合下调Rel-B基因对小鼠未成熟树突细胞免疫原性和迁移功能的影响3.1培养的imDC和mDC形态同第一部分描述，用荧光显微镜观察，均能看到腺病毒感染的绿色荧光和SiRNA感染的红色荧光。说明腺病毒和SiRNA能够有效的转染DC。3.2用LPS刺激后，提取蛋白，检测Rel-B，从蛋白电泳结果中可以看出，共转染CCR7腺病毒和RelB SiRNA的DC表达较低Rel-B蛋白，明显低于mDC。3.3流式细胞仪结果显示，在转染后第一天，imDC在转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后，CCR7阳性率表达明显上升，明显高于imDC组。在经过LPS刺激后。imDC在转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后即使经过LPS刺激，其共刺激分子CD80和CD86阳性率低于mDC(P<0.01)，说明共转染转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA能够在LPS刺激时仍然保持较低的共刺激分子表达。3.3体外趋化实验结果在共转染后，用体外趋化实验检测各组细胞的迁移率，结果如下，imDC:(3.92+0.23)%，imDC+空Ad:(10.60+0.83)%，imDC+空SiRNA:(9.13+0.42)%，imDC+空Ad+空SiRNA:(17.50+1.0)%，imDC+Ad-CCR7:(33.83+2.47)%，imDC+Rel-B siRNA:(3.47+0.38)%，imDC+Ad-CCR7+Rel-B siRNA:(32.35+1.59)%，mdc:（29.38+1.02)%imDC在共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后其迁移效率明显高于imDC(P<0.01)，说明共转染转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA能够使imDC有较高的迁移效率。3.4混合淋巴细胞反映结果imDC在转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后即使经过LPS刺激，并检测各组细胞对T细胞的刺激能力，imDC在转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后即使经过LPS刺激，与T细胞共培养OD值明显低于mDC (P<0.01)。说明imDC在转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后即使经过LPS刺激，对T细胞的刺激能力明显低于mDC对T细胞的刺激能力(P<0.01)。说明共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA能够使imDC即使受到LPS等炎症因子刺激，也能够保持较低的刺激T细胞反应和较低的诱导免疫应答的能力。结论1、小鼠骨髓来源的单核细胞在应用GM-CSF和IL-4刺激诱导后能够成为imDC，在经过LPS刺激后能够形成mDC，并且具有典型形态特征2、流式细胞仪，蛋白印迹法和混合淋巴细胞反映结果证实imDC共刺激分子的表达和对T细胞的刺激能力明显低于mDC。3、ELISA结果显示，imDC和T细胞培养后分泌的IL-4和IL-10明显高于mDC，而mDC和T细胞培养后分泌的IL-2和IFN-γ明显高于imDC。4、蛋白印迹法和细胞免疫荧光显示，上调CCR7基因的慢病毒能够高效转染DC2.4，转染后CCR7基因蛋白表达明显上升。5、体外趋化实验显示，上调CCR7基因的慢病毒转染DC2.4后能够使DC2,4具有较高的迁移率。6、流式细胞仪结果和蛋白印迹法显示，上调CCR7基因的慢病毒转染DC2.4后DC2.4细胞的共刺激分子CD80和CD86表达变化不明显，说明慢病毒转染DC2.4对DC2.4的共刺激分子表达影响较小。7、流式细胞仪显示，imDC在共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后CCR7表达阳性率明显上升。共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA的imDC在LPS刺激后，CD80和CD86共刺激分子的表达明显低于mDC，说明共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA能够使imDC具有较高的CCR7的表达，同时当受到LPS刺激时，转染共CCR7腺病毒和RelB-SiRNA的imDC也同时能够保持较低的CD80和CD86的表达。8、体外趋化实验显示，imDC在共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后体外迁移率明显高于imDC。9、混合淋巴细胞反映显示，imDC在共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA后受到LPS刺激后，对T细胞的刺激能力明显低于mDC。10、通过共转染CCR7腺病毒和RelB-SiRNA，我们诱导成了既有较高迁移功能的imDC，在迁移过程中，这种imDC受到炎症刺激，也能够表达较低的共刺激分子，从而能够更好的诱导免疫耐受，为进一步动物实验奠定良好的基础。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2013-05-01）
不成熟树突细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为建立一种有效的胰岛移植免疫耐受的新方案,利用流式细胞术鉴定未成熟树突细胞(immature dendritic cells,im DCs),成骨诱导鉴定间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),双硫腙(Dithizone,DTZ)染色鉴定胰岛细胞.胰岛细胞与间充质干细胞联合移植治疗小鼠糖尿病,测定移植后糖尿病小鼠血糖及糖化血红蛋白变化,结果发现200个胰岛细胞与2×10~5个未成熟树突细胞共同移植虽然未能显着延长移植物的存活时间(7±2.65d),但能显着降低糖尿病小鼠血糖水平;200个胰岛细胞与2×10~5个间充质干细胞共移植,可使血糖下降到较低水平,并维持移植物存活时间达8±2.31天;200个胰岛细胞与2×10~5个间充质干细胞及2×10~5个未成熟树突细胞共同移植于糖尿病小鼠,可使糖尿病鼠血糖下降并显着延长移植物的存活时间(12.6±3.48 d).结果说明联合移植在一定程度上可延长移植物的存活时间并使血糖维持在较低的水平,有效控制糖化血红蛋白浓度,较单独移植胰岛细胞治疗小鼠糖尿病有积极的作用.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
不成熟树突细胞论文参考文献
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