导读:本文包含了犬新孢子虫吉林株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:犬新孢子虫,SAG1基因,真核表达,免疫水平
犬新孢子虫吉林株论文文献综述
张守发,栾杨,贾立军,鞠玉琳,鲁承[1]（2011）在《犬新孢子虫吉林株SAG1基因在BHK21细胞中的表达及免疫学评价》一文中研究指出将构建成功的重组质粒pVAX-SAG1转染至BHK21细胞上,通过IFAT与RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞上的表达情况。大量提取重组质粒pVAX-SAG1,免疫Balb/c小鼠,分别在首免前、二免前、叁免前以及叁免后的第1、2、3周进行小鼠断尾采血,应用ELISA方法与流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,转染的重组质粒pVAX-SAG1在BHK21细胞中得到瞬时表达,并且重组质粒pVAX-SAG1免疫Balb/c小鼠后,在体液免疫水平上,pVAX-SAG1组与空载体pVAX1和PBS对照组差异极显着(P<0.01);在细胞免疫水平上,pVAX-SAG1组与PBS对照组差异显着(P<0.05)。本试验为新孢子虫基因工程核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2011年08期）
李男礼[2]（2011）在《犬新孢子虫吉林株GRA7基因的克隆及原核表达》一文中研究指出新孢子虫病是目前危害养牛业健康发展的主要原虫病,该病主要造成孕牛流产、死胎以及新生犊牛的运动神经系统障碍。目前,国内外对新孢子虫病的防控尚无有效的方法。因此,筛选抗原基因,制备基因工程疫苗预防新孢子虫病的发生与发展仍是当前的首要问题。GRA7基因是犬新孢子虫的主要致密颗粒蛋白基因,致密颗粒蛋白具有较好的免疫原性,可作为疫苗的免疫原来预防新孢子虫病。本试验根据GenBank(AF176649)上发表的犬新孢子虫GRA7基因序列设计一对含有Xho I和EcoRⅠ双酶切位点的特异性引物,PCR扩增犬新孢子虫吉林株GRA7基因,纯化PCR产物后,克隆至pMD18-T simple载体上,进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列分析,并与GenBank中已发表的序列进行同源性比较及抗原蛋白预测分析。将鉴定正确的GRA7基因与pGEX-4T-1表达载体连接,构建GRA7基因原核表达载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting技术检测表达蛋白的反应原性。结果表明,PCR扩增出大小为701 bp的GRA7基因片断；所克隆的犬新孢子虫吉林株GRA7基因与已发表的序列同源性达98%,经抗原蛋白预测分析该基因表达的蛋白抗原指数较高；将GRA7基因定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定,证明成功构建了原核表达质粒pGEX-GRA7;经SDS-PAGE和Western blotting检测证实,所表达出来的GRA7融合蛋白分子量约为51 kDa,该蛋白可被新孢子虫病阳性血清所识别,具有较好的反应原性。本试验为犬新孢子虫GRA7基因工程疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《延边大学》期刊2011-05-25）
栾杨[3]（2010）在《犬新孢子虫吉林株SAG1基因的真核表达及免疫学评价》一文中研究指出新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于多种动物细胞内而引起孕畜流产、死胎以及新生胎儿运动神经系统紊乱的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重,已经给养牛业造成了巨大的经济损失。而目前尚未有有效的治疗药物和疫苗来控制该病的发生和发展,因此疫苗的研究是当前研究新孢子虫病的热点问题。本试验根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计、合成了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、Bam HⅠ和Eco RⅠ酶切位点的特异性引物,采用PCR技术扩增犬新孢子虫SAG1基因片段,克隆到pMD18-T simple载体上,进行PCR、酶切鉴定及序列分析。将鉴定正确的SAG1基因片段克隆至pVAXl真核表达载体中,PCR、酶切鉴定及序列分析后转染至BHK21细胞,应用IFAT和RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞中表达情况。最后将提取重组质粒pVAX-SAG1免疫BALB/c小鼠,应用间接ELISA和流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列(AF132217)的同源性为99%,氨基酸序列同源性为98.8%。IFAT和RT-PCR证实重组质粒在BHK21细胞中获得表达。表达的重组质粒pVAX SAG1免疫BALB/c小鼠后,诱导产生的体液免疫水平显着高于空载体pVAX1免疫组和PBS对照组,差异极显着(P＜0.01),诱导产生的细胞免疫水平与PBS对照组差异显着(P<0.05)。本试验为新孢子虫核酸疫苗的研制开辟了一条新的途径。(本文来源于《延边大学》期刊2010-04-30）
栾杨,贾立军,薛书江,张守发[4]（2010）在《吉林株犬新孢子虫SAG1基因原核表达载体的构建及表达》一文中研究指出新孢子虫病(neosporaosis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于多种哺乳动物细胞内所引起的一种原虫病。1988年,Dubey J P等从后肢瘫痪的幼犬体内分离出了虫体,将其命名为犬新孢子虫。新孢子虫的终末宿主是犬,牛、羊、犬(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2010年07期）
栾杨,曹世诺,贾立军,张守发[5]（2009）在《犬新孢子虫吉林株SAG1基因真核表达载体的构建》一文中研究指出根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因序列(AF132217),设计了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物。以含有SAG1基因的重组质粒pMD-18T-SAG1为模板,经PCR扩增获得SAG1基因,利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切该片段,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粘性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAX1真核表达载体中,获得重组质粒pVAX1-SAG1,经PCR鉴定、酶切分析和重组质粒的序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2009年09期）
栾杨,张守发,薛书江,贾立军,其木格[6]（2009）在《吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测》一文中研究指出[目的]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆与序列分析。[方法]从细胞培养的吉林株虫体中提取犬新孢子虫DNA,根据已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR技术,扩增犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-Tsimple载体上,对经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。[结果]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆后,获得阳性重组质粒。克隆的SAG1基因片段长780 bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列(AF132217)的同源性为99.0%,氨基酸序列同源性为98.8%。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达。[结论]该试验成功克隆重组质粒,为建立犬新孢子虫的高效表达系统奠定了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2009年23期）
栾杨,贾立军,李月梅,薛书江,张守发[7]（2009）在《吉林株犬新孢子虫SAG1基因的克隆与原核表达》一文中研究指出根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计并合成了一对含有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物。提取吉林株犬新孢子虫基因组DNA,采用PCR方法,扩增吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切测序正确的重组克隆质粒pMD18-T-SAG1,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粞性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的原核表达载体pGEX-4T-1中,获得原核重组表达质粒pGEX-SAG1,经PCR鉴定、酶切鉴定和重组质粒的序列分析。证实成功构建了原核表达载体pGEX-SAG1。将构建成功的原核表达载体,在1mmol/L的IPTG诱导下进行大量表达,应用SDS-PAGE与Western-bloaing对重组原核表达质粒pGEX-SAG1进行鉴定。并采用超声波裂解法破碎经IPTG诱导的大肠杆菌BL21,鉴定蛋白质存在形式。结果表明,克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,大小为27ku,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列的同源性为99%,氨基酸序列同源性为98.8%。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达并且具有良好的抗原性。SDS-PAGE与Western-blotring证实,表达的重组融合蛋白在8h时表达量最大,大小为53ku,且具有良好的反应原性与。而且通过超声波裂解法鉴定,重组融合蛋白以包涵体的形式存在。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集》期刊2009-08-01）
栾杨,王娜,贾立军,张守发[8]（2009）在《吉林株犬新孢子虫SAG1基因真核表达载体的构建》一文中研究指出根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因序列(AF132217),设计了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物。以含有SAG1基因的重组质粒pMD-18T-SAG1为模板,经PCR扩增获得SAG1基因,利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切该片段,回收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粘性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAXⅠ真核表达载体中,获得重组质粒pVAX1-SAG1,经PCR鉴定、酶切分析和重组质粒的序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集》期刊2009-08-01）
丁德,贾立军,田万年,梁晚枫,张西臣[9]（2009）在《吉林株犬新孢子虫的分离与鉴定》一文中研究指出将疑似感染犬新孢子虫而流产的牛胎儿脑组织接种于Vero细胞进行体外培养,同时感染长爪沙鼠进行动物试验。提取牛流产胎儿脑组织DNA、沙鼠脑组织DNA、细胞培养虫体DNA,用犬新孢子虫特异性引物进行PCR扩增。结果显示,PCR扩增出了1条约为681 bp的目的条带;测序结果表明,扩增出的特异性目的基因序列与GenBank中发表的犬新孢子虫NcSAG1基因(AF113004)核苷酸序列的同源性为99.4%。结果表明,在吉林省牛流产胎儿脑组织中分离出犬新孢子虫。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2009年04期）
丁德[10]（2008）在《犬新孢子虫吉林株NcSRS2基因片段的原核表达及初步应用》一文中研究指出新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于犬、牛、马、羊等多种宿主动物细胞内而引起的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重,主要造成孕畜流产、死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,已给畜牧业生产造成了巨大的经济损失。国外学者在新孢子虫的致密颗粒棒状体内以及速殖子表面发现了新孢子虫表面蛋白NcSRS2,NcSRS2表面蛋白介导其粘附及入侵宿主细胞,可以作为酶联免疫吸附试验有效的抗原成分,是最有希望的新孢子虫疫苗的侯选抗原。本研究利用PCR技术扩增和克隆了1 100bp犬新孢子虫吉林株NcSRS2基因片段,对所克隆的NcSRS2基因序列与基因库中已发表的序列(AY940488)进行比较分析。结果表明同源性达到99.8%,证明了该基因片段为犬新孢子虫NcSRS2基因。将NcSRS2基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,经PCR鉴定及酶切鉴定,证明成功构建了融合表达载体pGEX-NcSRS2。将构建好的融合表达载体,在1mmol/L的IPTG诱导下,在大肠杆菌BL21中得到大量表达,经过8 h表达量达到高峰。融合蛋白GST-NcSRS2的分子量为64.4 ku,大部分以可溶性蛋白的形式存在。用亲和层析方法对GST-NcSRS2融合蛋白进行了纯化,获得了理想的纯化结果。经Western blotting免疫印迹分析,融合蛋白与犬新孢子虫阳性血清发生特异性反应,而同刚地弓形虫阳性血清没有交叉反应,说明该蛋白具有很好的抗原性和特异性。本研究应用纯化后的GST-NcSRS2融合蛋白建立了检测犬新孢子虫抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原浓度为4μg/mL、被检血清稀释度为1:40、酶标二抗稀释度为1:2 000为最佳工作浓度。该方法不与牛瑟氏泰勒虫、弓形虫、牛巴贝斯虫等阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;该方法与玄学南等建立的间接ELISA方法平行检测128份牛血清样本,结果表明,所建立方法更加敏感,说明建立的ELISA适用于犬新孢子虫抗体的检测。(本文来源于《延边大学》期刊2008-06-03）
犬新孢子虫吉林株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
新孢子虫病是目前危害养牛业健康发展的主要原虫病,该病主要造成孕牛流产、死胎以及新生犊牛的运动神经系统障碍。目前,国内外对新孢子虫病的防控尚无有效的方法。因此,筛选抗原基因,制备基因工程疫苗预防新孢子虫病的发生与发展仍是当前的首要问题。GRA7基因是犬新孢子虫的主要致密颗粒蛋白基因,致密颗粒蛋白具有较好的免疫原性,可作为疫苗的免疫原来预防新孢子虫病。本试验根据GenBank(AF176649)上发表的犬新孢子虫GRA7基因序列设计一对含有Xho I和EcoRⅠ双酶切位点的特异性引物,PCR扩增犬新孢子虫吉林株GRA7基因,纯化PCR产物后,克隆至pMD18-T simple载体上,进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列分析,并与GenBank中已发表的序列进行同源性比较及抗原蛋白预测分析。将鉴定正确的GRA7基因与pGEX-4T-1表达载体连接,构建GRA7基因原核表达载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting技术检测表达蛋白的反应原性。结果表明,PCR扩增出大小为701 bp的GRA7基因片断；所克隆的犬新孢子虫吉林株GRA7基因与已发表的序列同源性达98%,经抗原蛋白预测分析该基因表达的蛋白抗原指数较高；将GRA7基因定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定,证明成功构建了原核表达质粒pGEX-GRA7;经SDS-PAGE和Western blotting检测证实,所表达出来的GRA7融合蛋白分子量约为51 kDa,该蛋白可被新孢子虫病阳性血清所识别,具有较好的反应原性。本试验为犬新孢子虫GRA7基因工程疫苗的研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
犬新孢子虫吉林株论文参考文献
[1].张守发,栾杨,贾立军,鞠玉琳,鲁承.犬新孢子虫吉林株SAG1基因在BHK21细胞中的表达及免疫学评价[J].中国兽医学报.2011
[2].李男礼.犬新孢子虫吉林株GRA7基因的克隆及原核表达[D].延边大学.2011
[3].栾杨.犬新孢子虫吉林株SAG1基因的真核表达及免疫学评价[D].延边大学.2010
[4].栾杨,贾立军,薛书江,张守发.吉林株犬新孢子虫SAG1基因原核表达载体的构建及表达[J].黑龙江畜牧兽医.2010
[5].栾杨,曹世诺,贾立军,张守发.犬新孢子虫吉林株SAG1基因真核表达载体的构建[J].畜牧与兽医.2009
[6].栾杨,张守发,薛书江,贾立军,其木格.吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测[J].安徽农业科学.2009
[7].栾杨,贾立军,李月梅,薛书江,张守发.吉林株犬新孢子虫SAG1基因的克隆与原核表达[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集.2009
[8].栾杨,王娜,贾立军,张守发.吉林株犬新孢子虫SAG1基因真核表达载体的构建[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集.2009
[9].丁德,贾立军,田万年,梁晚枫,张西臣.吉林株犬新孢子虫的分离与鉴定[J].中国兽医学报.2009
[10].丁德.犬新孢子虫吉林株NcSRS2基因片段的原核表达及初步应用[D].延边大学.2008