导读:本文包含了管样结构形成论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胚胎干细胞,细胞分化,肾脏样结构
管样结构形成论文文献综述
肖枫林,王圣元,李明旭[1]（2018）在《FGF9和CHIR99021诱导胚胎干细胞形成肾脏样结构》一文中研究指出目的在体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向肾脏细胞分化,并自发形成包含肾小球、近端小管、远端小管以及血管网络的肾脏样结构。方法在体外将ESCs培养至40%~50%汇合度。然后在成纤维细胞生长因子9(FGF9)与肝糖原合成激酶3β受体的选择性抑制剂CHIR99021的作用下,诱导ESCs分化形成肾脏样结构,对该肾脏样结构分别进行免疫荧光染色检查与电镜检查,以观察其内部结构并且成像记录。结果通过细胞因子FGF9与CHIR99021的作用,成功诱导ESCs分化形成了肾脏样结构,结构鉴定证实其中有肾小球、近端小管、远端小管以及血管网络的存在。结论利用ESCs分化可以形成包含完整肾单位及血管网络的肾脏样结构,其结构类似于正常肾脏。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2018年06期）
李悦[2]（2018）在《低能量半导体激光促进血管内皮细胞增殖、迁移和管样结构形成的机制研究》一文中研究指出目的探讨低能量半导体激光(Low-level semiconductor laser or Low-level laser therapy,LLLT)对体外血管内皮细胞的增殖、迁移和管样结构形成的影响及其相关的分子机制,从细胞水平和分子水平上为阐明低能量激光疗法促进义眼座血管化并防治义眼座暴露的作用机制提供实验依据,也为临床上治疗血管生成依赖性疾病提供新的思路。方法1.确定最佳的促体外细胞增殖的LLLT的照射方式:体外培养人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC细胞,在不同光照参数和照射方式的LLLT处理HUVEC,以CCK8法检测HUVEC细胞活性,确定低能量激光疗法发挥促进体外细胞增殖作用最佳的照射参数和照射方式,其中激光参数的变量包括:单次照射剂量/能量密度(0.1-20.0J/cm~2)和照射功率密度(2.07、5.25、9.92、20.99和31.35mw/cm~2);照射方式变量包括:照射间隔时间(48h、24h、12h、8h和6h)照射累计次数不同(照射间隔时间为12小时,累计照射次数分别为2、4和6次;间隔时间24小时,累计照射6次)。每项实验均设立不给予激光照射处理的对照组,其他处理同照射组。2.LLLT采用单次照射剂量(分别为1.0、2.0、4.0J/cm~2),照射间隔时间为12小时,累计照射6次的照射方式对HUVEC进行处理,并与无LLLT处理的对照组进行比较。(1)以CCK8法和EdU细胞增殖法检测LLLT对HUVEC增殖活力的影响;(2)划痕实验检测LLLT对HUVEC迁移的影响;(3)内皮细胞管腔形成实验检测对HUVEC管样结构形成能力的影响;(4)Western blot法检测HUVEC内PI3K/Akt通路中主要信号分子PI3K、Akt蛋白磷酸化的表达水平的变化,细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平;(5)ELISA法检测细胞培养上清液中VEGFA的含量变化情况;(6)用LY294002(2μM)预处理1h预处理并给与LLLT处理后检测HUVEC增殖、迁移和管样结构形成以及细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA的表达水平变化情况。结果1.最佳照射方式的确定:(1)促HUVEC增殖最佳剂量为4.0 J/cm~2,单次照射不同剂量的LLLT对HUVEC增殖的影响结果显示,单次照射需达到1.0 J/cm~2的激光剂量才能发挥促细胞增殖效应,在一定范围内加大单次照射剂量(1.0-4.0J/cm~2),可使LLLT促细胞增殖作用提高,继续加大单次照射剂量,LLLT促细胞增殖作用减弱,甚至会抑制细胞的增殖(20.0 J/cm~2);(2)不同功率密度对LLLT诱导细胞增殖结果显示,2.07-31.35mW/cm~2功率密度范围内的LLLT,均可促进细胞增殖,且在单次照射剂量相同条件下,增加激光照射的功率密度,可提高LLLT的促细胞增殖作用;(3)最佳照射间隔时间为12h,在单次照射剂量相同、功率密度相同条件下的LLLT,改变照射间隔时间当间隔时间为24h、12h和8h的LLLT可促进HUVEC的增殖,其中间隔时间为12h的LLLT促细胞增殖效果最佳,且间隔时间过长(48h)促细胞增殖效果不明显,间隔时间过短(6h)甚至会抑制细胞增殖,引起细胞凋亡。(4)最佳累计照射次数为6次,在单次照射剂量、功率密度恒定和照射间隔时间相同条件下,以累计照射次数为6次的照射方式促进细胞增殖效果均优于其他组,且累计照射次数相同条件下,照射间隔时间为12h的LLLT较间隔时间为24h相比,促细胞增殖作用明显提高。根据以上结果分析确定LLLT发挥促进体外细胞增殖作用最佳的照射方式为:单次照射剂量4.0J/cm~2,照射间隔时间为12h,累计照射6次。2.LLLT对HUVEC的增殖、迁移和管样结构形成的影响:(1)CCK8实验和EdU细胞增殖实验结果显示,LLLT处理后细胞活力显着增加,且LLLT促细胞增殖作用具有剂量依赖性;(2)划痕实验结果显示,LLLT处理后细胞迁移能力显着提高,LLLT促细胞迁移作用具有剂量依赖性,且随着激光照射次数的增加,LLLT促细胞迁移作用增强。(3)内皮细胞管腔形成实验结果示,单次照射剂量为2.0和4.0 J/cm~2的LLLT处理后较对照组比细胞管样结构形成能力显着提高,并具有剂量依赖性。3.Western Blot和EILSA结果显示:(1)使用LLLT处理后各组PI3K、Akt蛋白磷酸水平升高,eNOS、HIF-1α和VEGFA的表达水平升高,且蛋白磷酸化水平和蛋白的表达水平的变化与激光单次照射剂量存在依赖性;(2)LY294002预处理1h预处理给与LLLT处理后的HUVEC,与照射组相比较,LLLT促进细胞增殖和细胞迁移作用减弱,但对HUVEC管样结构的形成无明显影响;LY294002预处理1h预处理后可减弱LLLT诱导下细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA蛋白的表达水平的上调以及促进VEGFA的分泌。结论1.LLLT通过PI3K信号通路依赖性方式上调了细胞内HIF-1α、eNOS和VEGFA的表达水平和促进血管内皮细胞增殖、迁移。2.LLLT促血管内皮细胞管样结构形成作用可能是通过激活细胞内其他信号通路发挥作用。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-01）
何恋,周芸,董红霖,伍俊霞,李荣山[3]（2016）在《中介素对缺氧肾小球内皮细胞管腔样结构形成的影响》一文中研究指出目的研究中介素(IMD)对缺氧条件下大鼠肾小球内皮细胞(r RGECs)管腔样结构形成的影响和可能机制。方法在体外培养传代rRGECs后分为正常对照组、缺氧组、IMD组,后2组放置5%O2缺氧环境中培养6 h,对照组在正常氧浓度中培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞存活;小管形成实验检测管腔样结构形成;免疫细胞化学检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮钙黏着蛋白(VE-cadherin)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)检测VEGF、VE-cadherin mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,缺氧组细胞增殖率,管腔样结构的管腔长度、成环数和分支数以及VE-cadherin mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),VEGF mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与缺氧组相比,IMD组细胞存活率,管腔样结构的管腔长度、成环数和分支数以及VEGF、VE-cadherin mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论在缺氧条件下IMD可促进r RGECs增殖和管腔样结构形成,减轻r RGECs损伤,并可能与VEGF、VE-cadherin有关。(本文来源于《中国药物与临床》期刊2016年09期）
何恋[4]（2016）在《中介素对缺氧肾小球内皮细胞管腔样结构形成的影响》一文中研究指出目的:研究中介素(Intermedin,IMD)对缺氧条件下大鼠肾小球内皮细胞(rRGECs)管腔样结构形成的影响和可能机制。方法:在体外培养RGECs后,随机分为:正常对照组、缺氧组、IMD组,后2组放置5%O_2缺氧环境中培养6h,对照组在正常氧浓度中培养,MTT检测细胞存活;小管形成实验检测管腔样结构形成;免疫细胞化学检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)蛋白表达;RT-PCR检测VEGF、VE-cadherin mRNA表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧组细胞增殖率,管腔样结构的管腔长度、成环数和分支数以及VE-cadherin mRNA和蛋白表达下降(p<0.05),VEGF mRNA和蛋白表达升高(p<0.05);与缺氧组相比,IMD组细胞存活率,管腔样结构的管腔长度、成环数和分支数以及VEGF、VE-cadherin mRNA和蛋白表达升高(p<0.05)。结论:在缺氧条件下中介素可促进肾小球内皮细胞增殖和管腔样结构形成,减轻肾小球内皮细胞损伤,并可能与VEGF、VE-cadherin有关。(本文来源于《山西医科大学》期刊2016-05-25）
朱园美[5]（2016）在《EV71诱导宿主细胞形成应激颗粒样结构的分子机制研究》一文中研究指出肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的重要病原体,其引起的手足口病常伴有中枢神经系统并发症,严重时可造成永久性瘫痪或死亡。近年来,手足口病的发病数和死亡数在我国呈大幅上升趋势,该病的流行已成为影响我国社会安全和稳定的重要因素,是我国迫切需要解决的公共卫生问题。目前,手足口病的治疗仍缺乏特异性抗病毒药物,EV71致病机制不清是其主要制约因素,EV71的致病机制仍需要深入研究。细胞应激颗粒(stress granule, SG)是宿主细胞防御体系的重要组成部分,其形成在抗病毒感染中起着重要的作用。已有多种病毒被报道可通过不同方式诱导并调控SG的形成,提示SG和宿主细胞的相互调控可能和病毒的致病性相关,但目前EV71诱导SG形成的分子机制及其与宿主细胞的相互调控关系还不清楚。本研究对EV71感染细胞中SG的形成情况及其与宿主细胞的相互调控关系进行了深入的研究。通过多色免疫荧光检测SG的各类组分在EV71感染细胞中的分布情况,我们发现EV71可以抑制经典SG的形成而诱导细胞形成一种组成成分和形态上都区别于经典SG的新的RNA颗粒,我们称之为“SG样结构”。进一步的研究发现,EV71诱导SG样结构的形成依赖于PKR和eIF2a磷酸化途径,且需要宿主细胞mRNA的持续合成。通过抑制EV71诱导的SG样结构形成,我们发现SG样结构是一种具有抗病毒功能的颗粒,可促进EV71诱导到的宿主细胞凋亡,并且可以抑制EV71在宿主细胞内的扩增。综上所述,本研究初步阐述了EV71诱导SG样结构形成的分子机制及其对宿主细胞和病毒自身的影响,为进一步研究病毒宿主相互作用及EV71的致病机制提供了新的线索。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2016-05-01）
吴丽情,寇亚丽,赵文婧,吴卓,徐亦辰[6]（2015）在《体外定向诱导小鼠胰腺干细胞分化形成胰岛样结构》一文中研究指出目的体外探讨胰腺干细胞形成胰岛样结构并对其进行相关检测,探寻胰腺干细胞分化为胰岛样结构可行性及初步鉴定的技术方法。方法从新生小鼠胰腺组织中通过原位传代扩增培养获得富足数量PSC,以尼克酰胺定向诱导PSC,观察细胞的形态变化、形成的细胞团双硫腙染色、免疫荧光组织化学染色及Mallory染色鉴定。结果PSC集落分布,细胞为单个大核、胞质折光透亮,巢蛋白(nestin)及碱性磷酸酶(AKP)染色阳性;诱导后聚集成团,最终形成具被膜包裹的细胞团;双硫腙染色阳性,胰岛素免疫荧光染色可见胞质被激发出绿色荧光的胰岛素阳性细胞;细胞团中央β样细胞及周围α样细胞,形成类似正常胰岛细胞组成的胰岛样结构。结论胰腺干细胞在适宜条件下可定向分化,形成胰岛样结构。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2015年12期）
蒲盛蓝,刘代顺,龚玲,吴杨,朱红兰[7]（2015）在《黏着斑激酶在HUVEC的增殖、迁移、凋亡和毛细血管样结构形成中的作用》一文中研究指出目的:探讨以黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)特异性抑制剂TAE226处理或siRNA沉默FAK基因对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的增殖、迁移、细胞凋亡及毛细血管样结构形成的影响。方法:应用Real-time PCR检测HUVEC和胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)细胞株Y-MESO-14、NCI-H290中FAK mRNA的表达。以FAK siRNA转染HUVEC细胞致FAK基因沉默或以TAE226处理,采用Western blotting法检测经/未经VEGF预处理的HUVEC中FAK蛋白的表达;采用MTT法检测TAE226或FAK siRNA处理对HUVEC增殖能力的影响,Annexin-V FITC/PI双染色流式细胞术检测两者对HUVEC细胞凋亡的作用,Transwell法检测TAE226及siRNA处理对HUVEC细胞迁移的影响,体外脉管生成实验检测HUVEC中毛细血管样结构形成的数量。结果:在HUVEC中FAK mRNA的表达量显着高于Y-MESO-14和NCI-H290细胞[(0.032±0.006)vs(0.014±0.001)、(0.006±0.002),均P<0.05]。HUVEC在VEGF刺激下,FAK和p FAK的表达量均有增高(P<0.05),FAK siRNA转染可以抑制VEGF预刺激下的FAK蛋白表达[(0.011±0.002)vs(0.036±0.004),P<0.01]。分别给予不同浓度TAE226或FAK siRNA处理,均可呈浓度依赖性地抑制HUVEC增殖、迁移和凋亡(P<0.01)。体外脉管生成实验发现,VEGF可促进HUVEC中毛细血管样结构的生成,TAE226[(14.32±7.83)vs(46.31±39.46)条,P<0.01]而FAK siRNA[(11.83±6.75)vs(42.86±27.63)、(48.32±18.19)条,均P<0.01]转染可明显抑制毛细血管样结构形成。结论:TAE 226处理或FAK siRNA转染可以抑制HUVEC增殖、迁移和诱导细胞凋亡,同时可显着抑制毛细血管样结构的形成,提示FAK可能成为靶向治疗恶性肿瘤的潜在靶点。(本文来源于《中国肿瘤生物治疗杂志》期刊2015年05期）
孟凯[8]（2015）在《Wnt信号通路激活剂BIO在山羊乳腺上皮细胞形成腺泡样结构中的调控作用》一文中研究指出乳腺是一种复杂的分泌器官,它的主要功能是泌乳。其中乳腺导管和小叶腺泡是乳腺执行泌乳过程所必须的,乳腺导管主要参与乳汁的运输而乳腺腺泡则具有泌乳功能。所以对乳腺上皮细胞构成乳腺导管结构和乳腺腺泡结构的机制的研究是非常重要的。在体试验中Wnt信号通路在乳腺腺泡发育和乳腺导管发育方面的作用机制已经被广泛研究,并且取得了很大的进展。由于在体试验中乳腺发育中调控因素较多,它们会对研究Wnt信号通路在乳腺上皮细胞形成腺泡样结构中的调控作用有影响。因此,在体外条件下研究Wnt信号通路对乳腺上皮细胞分化与功能的影响是非常有意义的。为了研究体外条件下Wnt信号通路对乳腺上皮细胞分化与功能的影响,本研究使用关中奶山羊的乳腺上皮细胞作为试验材料,在二维和叁维的培养条件下研究Wnt信号通路激活剂BIO对山羊乳腺上皮细胞生物学特性以及发育能力的影响。研究结果如下:1.通过组织块法和差速消化法分离、纯化得到具有酪蛋白和乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达的山羊乳腺上皮细胞。在二维培养条件下,Wnt信号通路激活剂BIO可促进山羊乳腺上皮细胞形成能够表达酪蛋白和乙酰辅酶A羧化酶mRNA的腺泡样结构;在叁维培养条件下,BIO可以促进山羊乳腺上皮细胞形成能表达酪蛋白和乙酰辅酶A羧化酶的mRNA的乳腺腺泡样结构和导管样结构;与常规叁维培养相比,在添加BIO的培养液中培养的腺泡结构体积更大,并且成腔速度更快。2.通过单细胞克隆培养法分离得到了能表达酪蛋白和乙酰辅酶A羧化酶mRNA的两种增殖特性的山羊乳腺上皮细胞,即扁平状增殖的乳腺上皮细胞和蜂窝状增殖的乳腺上皮细胞。在二维培养条件下对两种增殖特性的山羊乳腺上皮细胞的生物学特性、形态结构和特异性基因表达功能进行了研究,其中扁平状增殖的乳腺上皮细胞高表达N-钙粘素,并且具有雌激素受体α、雌激素受体β和孕酮受体mRNA的表达能力;蜂窝状增殖的乳腺上皮细胞仅能表达雌激素受体β。在三维培养条件下,蜂窝状增殖的乳腺上皮细胞较扁平状增殖的乳腺上皮细胞所能形成的腺泡样结构数量更多,体积更大。3.在二维培养条件下,Wnt信号通路激活剂BIO可以促进蜂窝状增殖的山羊乳腺上皮细胞形成腺泡样结构,但不能促进扁平状增殖的山羊乳腺上皮细胞形成腺泡样结构。在叁维培养条件下,BIO可促进蜂窝状增殖的山羊乳腺上皮细胞形成有功能的腺泡样结构和导管样结构;而扁平状增殖的山羊乳腺上皮细胞所形成的腺泡样结构数量较少,体积较小。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
童海,雷建军,王仁,孟军,张凯[9]（2015）在《氨氯地平拮抗ox-LDL损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成及机制》一文中研究指出目的探索氨氯地平拮抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC)血管样结构形成及其作用机制。方法实验分为对照组、ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL)和氨氯地平组(50 mg/L ox-LDL+0.5μmol/L氨氯地平)。差异贴壁法培养分离EPC,ac-LDL摄取和结合UEA-1鉴定EPC,Transwell测定细胞迁移,Matrigel法测血管生成,Western blot和RT-PCR分别检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平和mRNA表达情况,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,Griess法测定一氧化氮(NO)含量。结果 EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞的迁移能力下降近3倍,血管样结构形成能力明显下降,用0.5μmol/L氨氯地平干预可部分恢复EPC的迁移能力,并显着恢复EPC的血管样结构形成能力(P<0.05)。机制研究发现,ox-LDL下调EPC e NOS mRNA和蛋白表达水平,显着减少NO的含量(P<0.01),氨氯地平显着拮抗ox-LDL的上述作用;EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞内ROS含量显着增加(P<0.01),氨氯地平显着减少胞内ROS的水平(P<0.05)。结论氨氯地平对ox-LDL损伤EPC血管样结构的形成有显着拮抗作用,其作用与上调e NOS表达和降低细胞内ROS水平有关。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2015年03期）
林雪松,汪乐,乔亮[10]（2014）在《高糖及晚期糖基化终末产物环境对血管内皮细胞血管样结构形成的影响》一文中研究指出目的观察高浓度葡萄糖和晚期糖基化终末产物(AGEs)干预对体外培养血管内皮细胞的损伤后愈合、血管样结构形成能力和相关血管化调控因子表达的影响。方法根据培养液中添加不同浓度的葡萄糖和AGES-BSA,将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、AGEs组(150 mg/L AGE-BSA)、高糖+AGEs组(30 mmol/L D-葡萄糖+150 mg/L AGE-BSA)和正常组(5 mmol/L D-葡萄糖),另设甘露醇组(30 mmol/L甘露醇),电子细胞基质阻抗判断法(ECIS)测定HUVECs损伤模型增殖曲线,倒置显微镜下观察HUVECs在Matrigel基质中血管样结构的形成情况;ELISA法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2(Ang-2)的表达,荧光显微镜下观察HUVECs中血管生成素受体Tie2的表达。结果 ECIS法测定结果显示:各组HUVECs增殖曲线形态相似,反映愈合率的斜率无明显差别。倒置显微镜观察发现:高糖组、AGEs组和高糖+AGEs组形成血管样结构的长度显着小于正常组(P<0.05或P<0.01)。ELISA检测结果显示:与正常组比较,高糖组、AGEs组和高糖+AGEs组细胞培养上清液中Ang-2水平显着升高,VEGF水平显着降低(P<0.05)。荧光显微镜观察发现:Tie-2受体在正常组HUVECs的细胞膜和细胞质中均有表达,在AGEs组的HUVECs中仅表达于细胞核中。结论在高糖和(或)AGEs环境下,血管内皮细胞血管样结构形成能力受到抑制,其机制可能与Ang-2表达上调、VEGF表达下调以及Tie-2受体在细胞内不同部位的差异性表达有关。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2014年05期）
管样结构形成论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨低能量半导体激光(Low-level semiconductor laser or Low-level laser therapy,LLLT)对体外血管内皮细胞的增殖、迁移和管样结构形成的影响及其相关的分子机制,从细胞水平和分子水平上为阐明低能量激光疗法促进义眼座血管化并防治义眼座暴露的作用机制提供实验依据,也为临床上治疗血管生成依赖性疾病提供新的思路。方法1.确定最佳的促体外细胞增殖的LLLT的照射方式:体外培养人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC细胞,在不同光照参数和照射方式的LLLT处理HUVEC,以CCK8法检测HUVEC细胞活性,确定低能量激光疗法发挥促进体外细胞增殖作用最佳的照射参数和照射方式,其中激光参数的变量包括:单次照射剂量/能量密度(0.1-20.0J/cm~2)和照射功率密度(2.07、5.25、9.92、20.99和31.35mw/cm~2);照射方式变量包括:照射间隔时间(48h、24h、12h、8h和6h)照射累计次数不同(照射间隔时间为12小时,累计照射次数分别为2、4和6次;间隔时间24小时,累计照射6次)。每项实验均设立不给予激光照射处理的对照组,其他处理同照射组。2.LLLT采用单次照射剂量(分别为1.0、2.0、4.0J/cm~2),照射间隔时间为12小时,累计照射6次的照射方式对HUVEC进行处理,并与无LLLT处理的对照组进行比较。(1)以CCK8法和EdU细胞增殖法检测LLLT对HUVEC增殖活力的影响;(2)划痕实验检测LLLT对HUVEC迁移的影响;(3)内皮细胞管腔形成实验检测对HUVEC管样结构形成能力的影响;(4)Western blot法检测HUVEC内PI3K/Akt通路中主要信号分子PI3K、Akt蛋白磷酸化的表达水平的变化,细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平;(5)ELISA法检测细胞培养上清液中VEGFA的含量变化情况;(6)用LY294002(2μM)预处理1h预处理并给与LLLT处理后检测HUVEC增殖、迁移和管样结构形成以及细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA的表达水平变化情况。结果1.最佳照射方式的确定:(1)促HUVEC增殖最佳剂量为4.0 J/cm~2,单次照射不同剂量的LLLT对HUVEC增殖的影响结果显示,单次照射需达到1.0 J/cm~2的激光剂量才能发挥促细胞增殖效应,在一定范围内加大单次照射剂量(1.0-4.0J/cm~2),可使LLLT促细胞增殖作用提高,继续加大单次照射剂量,LLLT促细胞增殖作用减弱,甚至会抑制细胞的增殖(20.0 J/cm~2);(2)不同功率密度对LLLT诱导细胞增殖结果显示,2.07-31.35mW/cm~2功率密度范围内的LLLT,均可促进细胞增殖,且在单次照射剂量相同条件下,增加激光照射的功率密度,可提高LLLT的促细胞增殖作用;(3)最佳照射间隔时间为12h,在单次照射剂量相同、功率密度相同条件下的LLLT,改变照射间隔时间当间隔时间为24h、12h和8h的LLLT可促进HUVEC的增殖,其中间隔时间为12h的LLLT促细胞增殖效果最佳,且间隔时间过长(48h)促细胞增殖效果不明显,间隔时间过短(6h)甚至会抑制细胞增殖,引起细胞凋亡。(4)最佳累计照射次数为6次,在单次照射剂量、功率密度恒定和照射间隔时间相同条件下,以累计照射次数为6次的照射方式促进细胞增殖效果均优于其他组,且累计照射次数相同条件下,照射间隔时间为12h的LLLT较间隔时间为24h相比,促细胞增殖作用明显提高。根据以上结果分析确定LLLT发挥促进体外细胞增殖作用最佳的照射方式为:单次照射剂量4.0J/cm~2,照射间隔时间为12h,累计照射6次。2.LLLT对HUVEC的增殖、迁移和管样结构形成的影响:(1)CCK8实验和EdU细胞增殖实验结果显示,LLLT处理后细胞活力显着增加,且LLLT促细胞增殖作用具有剂量依赖性;(2)划痕实验结果显示,LLLT处理后细胞迁移能力显着提高,LLLT促细胞迁移作用具有剂量依赖性,且随着激光照射次数的增加,LLLT促细胞迁移作用增强。(3)内皮细胞管腔形成实验结果示,单次照射剂量为2.0和4.0 J/cm~2的LLLT处理后较对照组比细胞管样结构形成能力显着提高,并具有剂量依赖性。3.Western Blot和EILSA结果显示:(1)使用LLLT处理后各组PI3K、Akt蛋白磷酸水平升高,eNOS、HIF-1α和VEGFA的表达水平升高,且蛋白磷酸化水平和蛋白的表达水平的变化与激光单次照射剂量存在依赖性;(2)LY294002预处理1h预处理给与LLLT处理后的HUVEC,与照射组相比较,LLLT促进细胞增殖和细胞迁移作用减弱,但对HUVEC管样结构的形成无明显影响;LY294002预处理1h预处理后可减弱LLLT诱导下细胞内eNOS、HIF-1α和VEGFA蛋白的表达水平的上调以及促进VEGFA的分泌。结论1.LLLT通过PI3K信号通路依赖性方式上调了细胞内HIF-1α、eNOS和VEGFA的表达水平和促进血管内皮细胞增殖、迁移。2.LLLT促血管内皮细胞管样结构形成作用可能是通过激活细胞内其他信号通路发挥作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
管样结构形成论文参考文献
[1].肖枫林,王圣元,李明旭.FGF9和CHIR99021诱导胚胎干细胞形成肾脏样结构[J].基础医学与临床.2018
[2].李悦.低能量半导体激光促进血管内皮细胞增殖、迁移和管样结构形成的机制研究[D].南昌大学.2018
[3].何恋,周芸,董红霖,伍俊霞,李荣山.中介素对缺氧肾小球内皮细胞管腔样结构形成的影响[J].中国药物与临床.2016
[4].何恋.中介素对缺氧肾小球内皮细胞管腔样结构形成的影响[D].山西医科大学.2016
[5].朱园美.EV71诱导宿主细胞形成应激颗粒样结构的分子机制研究[D].北京协和医学院.2016
[6].吴丽情,寇亚丽,赵文婧,吴卓,徐亦辰.体外定向诱导小鼠胰腺干细胞分化形成胰岛样结构[J].基础医学与临床.2015
[7].蒲盛蓝,刘代顺,龚玲,吴杨,朱红兰.黏着斑激酶在HUVEC的增殖、迁移、凋亡和毛细血管样结构形成中的作用[J].中国肿瘤生物治疗杂志.2015
[8].孟凯.Wnt信号通路激活剂BIO在山羊乳腺上皮细胞形成腺泡样结构中的调控作用[D].西北农林科技大学.2015
[9].童海,雷建军,王仁,孟军,张凯.氨氯地平拮抗ox-LDL损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成及机制[J].中国动脉硬化杂志.2015
[10].林雪松,汪乐,乔亮.高糖及晚期糖基化终末产物环境对血管内皮细胞血管样结构形成的影响[J].上海交通大学学报(医学版).2014