廖军义：重组腺病毒过表达Notch1受体胞内结合域(NICD1)外源性激活Notch信号通路论文

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作者廖军义,杜婷婷,黄伟,何通川,徐伟（2019）在《重组腺病毒过表达Notch1受体胞内结合域(NICD1)外源性激活Notch信号通路》一文中研究指出：目的:构建Notch1受体胞内结合域(Notch1 intracellular domain,NICD1)的重组腺病毒AdNICD1,探讨外源性过表达AdNICD1对Notch信号通路激活的影响。方法:利用高保真PCR(high fidelity PCR,Hi-Fi PCR)扩增NICD1编码区,并通过Gibson Assembly方法将其克隆至腺病毒载体中,经过菌落PCR、测序鉴定后,在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,再次通过质粒PCR鉴定,然后运用PacⅠ酶切线性化后用重组腺病毒载体转染过表达pTP基因的人胚肾293细胞(human embryo kidney 293 cell line,HEK293)中进行包装,收取病毒后使用过表达pTP基因的HEK293细胞扩增重组腺病毒AdNICD1。运用AdNICD1感染脂肪来源的间充质干细胞(immortalized multipotent adipose-derived mesenchymal stem cells,iMAD),检测病毒感染效率;通过Q-PCR检测NICD1和Notch下游基因表达情况;利用Westernblot检测NICD1在蛋白水平的表达情况。结果:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒并有效感染iMAD;利用AdNICD1可明显增加NICD1在基因和蛋白水平的表达,并激活Notch信号下游基因的表达。结论:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒,并有效激活Notch信号通路。

Abstract

mu de :gou jian Notch1shou ti bao nei jie ge yu (Notch1 intracellular domain,NICD1)de chong zu xian bing du AdNICD1,tan tao wai yuan xing guo biao da AdNICD1dui Notchxin hao tong lu ji huo de ying xiang 。fang fa :li yong gao bao zhen PCR(high fidelity PCR,Hi-Fi PCR)kuo zeng NICD1bian ma ou ,bing tong guo Gibson Assemblyfang fa jiang ji ke long zhi xian bing du zai ti zhong ,jing guo jun la PCR、ce xu jian ding hou ,zai da chang gan jun BJ5183zhong jin hang tong yuan chong zu ,zai ci tong guo zhi li PCRjian ding ,ran hou yun yong PacⅠmei qie xian xing hua hou yong chong zu xian bing du zai ti zhuai ran guo biao da pTPji yin de ren pei shen 293xi bao (human embryo kidney 293 cell line,HEK293)zhong jin hang bao zhuang ,shou qu bing du hou shi yong guo biao da pTPji yin de HEK293xi bao kuo zeng chong zu xian bing du AdNICD1。yun yong AdNICD1gan ran zhi fang lai yuan de jian chong zhi gan xi bao (immortalized multipotent adipose-derived mesenchymal stem cells,iMAD),jian ce bing du gan ran xiao lv ;tong guo Q-PCRjian ce NICD1he Notchxia you ji yin biao da qing kuang ;li yong Westernblotjian ce NICD1zai dan bai shui ping de biao da qing kuang 。jie guo :cheng gong gou jian guo biao da NICD1de chong zu xian bing du bing you xiao gan ran iMAD;li yong AdNICD1ke ming xian zeng jia NICD1zai ji yin he dan bai shui ping de biao da ,bing ji huo Notchxin hao xia you ji yin de biao da 。jie lun :cheng gong gou jian guo biao da NICD1de chong zu xian bing du ,bing you xiao ji huo Notchxin hao tong lu 。

论文参考文献

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论文作者分别是来自南京医科大学学报(自然科学版)的廖军义,杜婷婷,黄伟,何通川,徐伟，发表于刊物南京医科大学学报(自然科学版)2019年03期论文，是一篇关于受体胞内结合域论文,重组腺病毒论文,信号通路论文,南京医科大学学报(自然科学版)2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自南京医科大学学报(自然科学版)2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。

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