导读:本文包含了基因克隆文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:β-葡萄糖苷酶,宏基因组文库,克隆表达,酶学性质
基因克隆文库论文文献综述
陆坚,路卫卫,李伟亮,郭晓敏,杜丽琴[1]（2018）在《高糖土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶基因克隆表达及酶学性质分析》一文中研究指出【目的】通过宏基因组技术获取土壤微生物总DNA,运用基因克隆、功能筛选、基因表达等手段挖掘新型β-葡萄糖苷酶,为新型微生物资源的开发利用提供科学依据。【方法】提取高糖土壤宏基因组DNA,构建宏基因组文库;筛选文库并对阳性克隆子亚克隆,获得β-葡萄糖苷酶基因;PCR扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌进行表达;采用镍亲和层析对重组酶纯化,研究其酶学性质。【结果】成功构建约含9.2万个克隆的高糖土壤宏基因组文库,获得一个新型β-葡萄糖苷酶基因unbgl3A。该基因大小为2241 bp,在氨基酸水平上,与Gen Bank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性为73%;该酶最适pH为6.0,最适温度为50℃,对对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)的K_m值为6.45 m M,V_(max)为50μmol/(mg·min)。在15～50℃热处理1 h后仍保留90%以上的酶活力,热稳定性较好,且被多种糖激活。【结论】宏基因组技术是获取新酶有效手段,获得的Unbgl3A具有良好酶学性质,可为进一步挖掘其应用潜力及研究耐热机理奠定基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年12期）
马艺飞[2]（2018）在《毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库筛选及SNF2基因克隆表达与功能研究》一文中研究指出毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是7种鸡球虫中致病性最大的虫种之一,主要危害8～18周龄的鸡,引起急性小肠球虫病,给养鸡业造成极大的经济损失,因此迫切需要寻找可行的防控措施。鸡球虫的生活史包括孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖叁个阶段,其生长发育过程中的一些关键性调控因子可能是防控鸡球虫病的有效作用靶点。在本课题组的前期研究工作中,已应用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库。在此基础上,本研究对该文库进一步筛选,以获取毒害艾美耳球虫的功能基因,并对毒害艾美耳球虫SNF2基因进行克隆表达和免疫原性分析,为研究毒害艾美耳球虫亚单位疫苗奠定基础。首先,用免疫学和质粒文库两种方法对毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库进行筛选,获取EST序列。(1)免疫学方法:用制备的鼠抗子孢子可溶性蛋白多抗作为一抗,对文库进行筛选,初筛得到40个疑似阳性克隆,经两次复筛后获得190个阳性克隆;将复筛得到的阳性噬菌体载体λTriplEx2转化为质粒载体pTriplEx2后,送公司测序,得到26条球虫基因组的EST序列,共5个重迭群。(2)质粒文库方法:直接将λTriplEx2噬菌体文库转化为pTripIEx2文库,选出150个克隆,送公司测序,得到53条EST序列,共21个重迭群。比较两种方法获得的EST序列,有5条序列相同。对21个重迭群的生物信息学分析显示,其分别编码参与DNA复制过程的SNF2家族解旋酶、延伸因子G,参与RNA前体剪接过程的剪切因子,调节蛋白如丝氨酸蛋白酶抑制剂,参与细胞周期调控的PUA结构域蛋白,线粒体内膜tim17亚单位,结构域蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、腺苷酸环化酶相关蛋白,子孢子入侵相关的微线体蛋白mic-1、核糖体蛋白、顶体膜抗原、MA2(ma-2)mRNA,Etm033F10 假设蛋白,Etm087F12 假设蛋白,Etm032G09 假设蛋白和Etm128F02假设蛋白。其次,从获得的EST序列中选取毒害艾美耳球虫SNF2基因开展研究。根据GenBank中毒害艾美耳球虫SNF2基因序列设计3对引物,用RT-PCR的方法,通过分段扩增再拼接的方法获得了毒害艾美耳球虫全长SNF2基因序列,并对该基因进行了氨基酸序列、功能结构域等分析研究。该基因全长3 426 bp。接着对SNF2基因N端结构域序列进行截短原核表达,表达的融合蛋白大小为36 kDa左右,主要以包涵体形式存在。用表达产物制备鼠多抗,再以该多抗经Western blot检测子孢子可溶性蛋白,发现天然的SNF2蛋白大小为120 kDa左右,与预测的理论值相符。最后,将纯化复性的重组蛋白rEnSNF2按不同剂量(200、100、50 μg/羽)免疫无球虫感染的雏鸡,免疫2次后,除未免疫未攻虫组外,其余各试验组均感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,以成活率、卵囊减少率、病变记分、平均增重等为指标,评测重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,rEnSNF2以每羽鸡200μg的免疫剂量保护效果最好,与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白rEnSNF2能降低病变记分与卵囊产量,提高存活率,并能诱导机体产生特异性抗体。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-01）
任禛,尹敏,夏体渊,陈泽斌,尹利方[3]（2017）在《玫瑰根系AMF 18S rRNA基因克隆文库构建及分析》一文中研究指出【目的】本文研究了玫瑰根系的AMF多样性和组成结构。【方法】从昆明学院种质资源圃随机采集玫瑰‘卡罗拉’3株,采用CTAB法提取根系DNA,运用巢式PCR扩增AM真菌部分18S rRNA基因区域,扩增产物混合后构建克隆文库,最终确定30个阳性克隆子测序,并对文库进行评价和分析。【结果】文库Coverage C值为80%,但Rarefaction曲线不够饱和,应加大文库克隆子数目;文库多样性参数香农指数和辛普森指数分别为1.432和0.25,物种丰富度为4.0;以98%为界,30条序列被划分为15个OTU,均为Glomus的种类;其中OTU1是文库中的主要类型,OTU2~OTU9代表了常见类型,而OTU10~OTU15为稀有类型;有10个OTU在系统进化树上单独聚类,代表着Glomus较为新颖的种类。【结论】在玫瑰根系发现的15个OTU全为Glomus的种类,其中主要类型1种,常见类型8种,稀有类型6种,具体分类地位均不清楚。(本文来源于《西南农业学报》期刊2017年09期）
邵凌云[4]（2016）在《茶树BAC文库构建与相关基因克隆的筛选及测序》一文中研究指出茶树(Camellia sinensis)是一种重要的经济作物,它的经济价值不仅体现在茶叶上,茶树花、果实也有很高的经济价值。茶被誉为“世界叁大无酒精饮料之一”,现已成为世界上流行的保健饮品。随着生物技术的发展与应用,关于茶树的科学研究已经逐渐深入至分子生物学水平,茶树基因的分离与克隆已成为分子生物学研究的重要内容。本课题是与安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室合作完成,以茶树品种“舒茶早”植株为材料构建茶树BAC(bacterial artificial chromosome)文库。该文库含有161,280个克隆,保存在420块384板中。随机挑选450个BAC克隆检测DNA插入片段,片段大小集中在100~130 kb之间,平均插入片段约为113 kb,空载率小于2.5%,以茶树基因组2.9 Gb计算,该文库大约覆盖整个茶树基因组6.2倍。随机挑选48个BAC克隆测BAC末端序列,参考NCBI数据库中茶树细胞器基因组序列信息,对BAC末端序列进行比对。Blastn分析表明随机挑选的48个克隆中没有检测到细胞器污染的克隆存在。建立高效率的2步PCR筛选基因的方法对“舒茶早”茶树BAC文库进行筛选,获得7个含有茶树功能基因(Csi092H17、Csi020O15、Csi044B12、Csi274K14、Csi271P8、Csi106D7、Csi047O18)的BAC克隆。首先构建420个一级混合池用于第一轮PCR筛选,随后对第一轮PCR筛选出的384板构建行池和列池,用于第二轮PCR筛选。筛选出这些基因的BAC克隆后,再挑选5个BAC克隆(分别包含Csi092H17,Csi020O15,Csi044B12,Csi271P8,Csi106D7基因)构建shotgun文库,进行鸟枪法(shotgun)测定BAC克隆序列。通过测序、组装、拼接及补平缺口得到其全长序列,拼装后的序列供安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室分析使用。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
吴芳,李俊平,汪珍珍,王译彬,焦康礼[5]（2016）在《16S rRNA基因克隆文库分析比较牙周炎患者和健康人口腔唾液微生物多样性》一文中研究指出【目的】通过对同一地区、同一民族牙周炎患者和健康人的唾液微生物群落结构的分析,探寻牙周炎患者口腔微生物的多样性。【方法】采集甘肃东乡族自治县的东乡族牙周炎患者和健康人唾液各5例,分别记作DP(东乡牙周)和DH(东乡健康),提取细菌总DNA,构建16S r RNA基因克隆文库,测序后利用MOTHUR、MEGA 4.0、Clustal X 3.0等软件对测序结果进行分析。【结果】所有样本共检测出115个OTUs(DP 60,DH 75),归属于6个门,27个属。TM7是DP组特有的优势菌门。仅在DP组中检测到的优势菌属是梭菌属(Fusobacterium)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)和TM7_genera。【结论】发现牙周炎患者与健康人口腔唾液微生物存在一定差异。其中,TM7、梭菌属和消化链球菌属在牙周病中的作用值得进一步研究。(本文来源于《微生物学通报》期刊2016年06期）
曹碧璇,胡滨,刘爱平[6]（2015）在《利用16S rRNA基因克隆文库分析东北自然发酵酸菜中细菌多样性》一文中研究指出为了解传统酸菜自然发酵液中细菌多样性和群落的组成结构,采用构建16S rRNA基因文库的方法对酸菜成熟发酵液样品进行了研究。共获得98个克隆子,经过16S rRNA基因全长序列分析,鉴定为7个属,9个种,分别为Lactobacillu scoryniformis、Pediococcus parvulus、Citrobacter murliniae、Clostridium intestinale、Lactobacillu smalefermentans、Lactobacillu splantarum、Leuconostoc citreum、Achromobacter spanius和Enterobacter cloacae。其中,乳酸杆菌属(Lactobacillus)、片球菌属(Pediococcuss)和枸橼酸杆菌属(Citrobacter)为优势菌,分别占64.29%,22.45%和8.16%,其他种类分别占1.02%~2.04%。这些研究结果丰富和完善了酸菜发酵液微生物多样性信息,反映了微生物群落结构特点,为筛选有效的酸菜发酵菌剂提供了技术参考。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2015年11期）
杨承剑,梁辛,韦升菊,李舒露,梁贤威[7]（2014）在《基于16S rRNA基因克隆文库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性》一文中研究指出本研究旨在利用16S rRNA基因克隆库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性。选取3头体况基本一致的健康雌性富钟水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,采用产甲烷菌引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库。结果表明,本试验共获得93个非嵌合体16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为39个分类操作单元(OTU)。其中,60个序列(15个OTU)与已培养细菌16S rRNA序列相似性≥97%,占总序列的64.5%;32个序列(23个OTU)与已培养菌16S rRNA序列相似性处于90%~(<97%);仅有1个序列与Methanomassiliicoccus luminyensis相似性<90%。系统发育树分析表明,98.9%的序列均属于甲烷杆菌目(Methanobacteriales),部分序列与Methanobacteriales中任何已知相似序列都相隔较远,它们可能代表Methanobacteriales中新的属或种。由上述结果可见,富钟水牛瘤胃产甲烷菌以Methanobacteriales为优势菌群,其中有许多未知的产甲烷菌需进一步分离培养并对其功能进行分析。(本文来源于《动物营养学报》期刊2014年12期）
杨承剑,韦升菊,梁辛,梁贤威,邹彩霞[8]（2014）在《利用16S rRNA基因克隆文库技术分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌的多样性》一文中研究指出选取3头5岁左右的健康雌性德昌水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库,分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌区系组成。结果表明:试验共获得99个16S rRNA基因序列,RDP分析表明94.2%的序列为甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为19个分类操作单元,其中96个序列(17个OTUs)占总序列的97.0%,与已知细菌的16S rRNA序列的相似性≥97%;3个序列(2个OTUs)占总序列的3.0%,与已知细菌16S rRNA序列的相似性为90%~97%;系统发育树分析表明,SGMT簇序列和RO簇序列所占总序列的比例分别为75.8%、1.0%,部分序列与Methanobrevibacter中任何已知相似序列都相隔较远,它们可能代表Methanobrevibacter中新的种。以上结果表明,德昌水牛瘤胃产甲烷菌以Methanobrevibacter产甲烷菌为优势菌群,其中有许多未培养的产甲烷菌需进一步分离培养,并对其功能进行分析。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2014年04期）
武小霞,孙晶,刘明,王敏,张超[9]（2014）在《大豆再生相关基因SSH文库构建、基因克隆及初步功能分析》一文中研究指出大豆再生体系存在基因型依赖性强、再生率低、稳定性差等问题,因此,建立一个高效、稳定的大豆再生体系仍是研究的热点。而生物技术作为分子育种的主要手段,在大豆育种中应用的关键保障就是高效稳定的再生体系,由此阻碍了生物技术在多数大豆品种中的应用。本研究利用抑制性消减杂交(SSH)技术,它是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。SSH技术对不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定有着重要意(本文来源于《第24届全国大豆科研生产研讨会论文摘要集》期刊2014-08-20）
孙晶[10]（2014）在《大豆再生基因SSH文库构建、GmVSPB基因克隆及其功能初步分析》一文中研究指出本研究围绕大豆再生相关基因获得了抑制性消减文库(SSH cDNA Library)1个,克隆与大豆再生相关基因GmVSPB1个,实验表明Gm VSPB基因在大豆子叶再生和茎的伸长中发挥重要作用。研究主要结果如下：1.本研究以大豆品种东农50的子叶节为材料,经过细胞分裂素6-BA诱导处理后按小时取材,成功构建了抑制消减杂交文库。从文库中随机挑取917个阳性克隆,利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对,表明这些基因与信号转导、葡萄糖、蛋白质大分子生物合成代谢,光、叶形态发生相关；调控细胞凋亡、细胞自身防御、细胞壁分化；参与各种激素及细胞分裂素介导的信号通路；并通过荧光定量RT-PCR的方法对文库中部分基因进行了表达量分析。2.从文库中挑选GmVSPB基因进行克隆,构建了植物表达中间载体pCAMBIAI121-3300和植物表达载体pCAMBIAI121-3300-GmVSP,转化大肠杆菌和农杆菌,并进行酶切和PCR验证。通过农杆菌介导采用花絮浸染法、叶盘法和子叶节法分别对拟南芥、烟草、大豆进行遗传转化,将目的基因GmVSPB转入植物体中并收获种子,通过PPT筛选和PCR鉴定的方法对过表达植株后代进行鉴定。3.采用荧光定量RT-PCR方法对GmVSPB基因的组织特异性表达进行分析,结果表明基因在子叶中的表达量最高,其次是茎、根；GmVSPB基因在受6-BA处理后4h时表达量开始升高,8h时表达量达到峰值,明显受到了细胞分裂素的诱导。4.对过表达大豆的根长和侧根进行激素处理,结果表明在细胞分裂素处理后大豆的主根和侧根都受到抑制,说明GmVSPB基因是细胞分裂素介导的抑制主根和侧根生长的正调节因子。5.细胞分裂素6-BA对过表达烟草进行不定芽再生实验,结果表明GmVSPB基因受到激素影响,过表达烟草比野生型烟草的再生能力强,并进行了再生率的比较。6.对过表达拟南芥萌发进行激素处理,结果表明GmVSPB基因在细胞分裂素的诱导下对萌发起到一定促进作用,并且过表达的拟南芥种子萌发对高浓度的细胞分裂素敏感性更强。(本文来源于《东北农业大学》期刊2014-06-01）
基因克隆文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是7种鸡球虫中致病性最大的虫种之一,主要危害8～18周龄的鸡,引起急性小肠球虫病,给养鸡业造成极大的经济损失,因此迫切需要寻找可行的防控措施。鸡球虫的生活史包括孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖叁个阶段,其生长发育过程中的一些关键性调控因子可能是防控鸡球虫病的有效作用靶点。在本课题组的前期研究工作中,已应用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库。在此基础上,本研究对该文库进一步筛选,以获取毒害艾美耳球虫的功能基因,并对毒害艾美耳球虫SNF2基因进行克隆表达和免疫原性分析,为研究毒害艾美耳球虫亚单位疫苗奠定基础。首先,用免疫学和质粒文库两种方法对毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库进行筛选,获取EST序列。(1)免疫学方法:用制备的鼠抗子孢子可溶性蛋白多抗作为一抗,对文库进行筛选,初筛得到40个疑似阳性克隆,经两次复筛后获得190个阳性克隆;将复筛得到的阳性噬菌体载体λTriplEx2转化为质粒载体pTriplEx2后,送公司测序,得到26条球虫基因组的EST序列,共5个重迭群。(2)质粒文库方法:直接将λTriplEx2噬菌体文库转化为pTripIEx2文库,选出150个克隆,送公司测序,得到53条EST序列,共21个重迭群。比较两种方法获得的EST序列,有5条序列相同。对21个重迭群的生物信息学分析显示,其分别编码参与DNA复制过程的SNF2家族解旋酶、延伸因子G,参与RNA前体剪接过程的剪切因子,调节蛋白如丝氨酸蛋白酶抑制剂,参与细胞周期调控的PUA结构域蛋白,线粒体内膜tim17亚单位,结构域蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、腺苷酸环化酶相关蛋白,子孢子入侵相关的微线体蛋白mic-1、核糖体蛋白、顶体膜抗原、MA2(ma-2)mRNA,Etm033F10 假设蛋白,Etm087F12 假设蛋白,Etm032G09 假设蛋白和Etm128F02假设蛋白。其次,从获得的EST序列中选取毒害艾美耳球虫SNF2基因开展研究。根据GenBank中毒害艾美耳球虫SNF2基因序列设计3对引物,用RT-PCR的方法,通过分段扩增再拼接的方法获得了毒害艾美耳球虫全长SNF2基因序列,并对该基因进行了氨基酸序列、功能结构域等分析研究。该基因全长3 426 bp。接着对SNF2基因N端结构域序列进行截短原核表达,表达的融合蛋白大小为36 kDa左右,主要以包涵体形式存在。用表达产物制备鼠多抗,再以该多抗经Western blot检测子孢子可溶性蛋白,发现天然的SNF2蛋白大小为120 kDa左右,与预测的理论值相符。最后,将纯化复性的重组蛋白rEnSNF2按不同剂量(200、100、50 μg/羽)免疫无球虫感染的雏鸡,免疫2次后,除未免疫未攻虫组外,其余各试验组均感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,以成活率、卵囊减少率、病变记分、平均增重等为指标,评测重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,rEnSNF2以每羽鸡200μg的免疫剂量保护效果最好,与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白rEnSNF2能降低病变记分与卵囊产量,提高存活率,并能诱导机体产生特异性抗体。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因克隆文库论文参考文献
[1].陆坚,路卫卫,李伟亮,郭晓敏,杜丽琴.高糖土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶基因克隆表达及酶学性质分析[J].西南农业学报.2018
[2].马艺飞.毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库筛选及SNF2基因克隆表达与功能研究[D].扬州大学.2018
[3].任禛,尹敏,夏体渊,陈泽斌,尹利方.玫瑰根系AMF18SrRNA基因克隆文库构建及分析[J].西南农业学报.2017
[4].邵凌云.茶树BAC文库构建与相关基因克隆的筛选及测序[D].华中农业大学.2016
[5].吴芳,李俊平,汪珍珍,王译彬,焦康礼.16SrRNA基因克隆文库分析比较牙周炎患者和健康人口腔唾液微生物多样性[J].微生物学通报.2016
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[7].杨承剑,梁辛,韦升菊,李舒露,梁贤威.基于16SrRNA基因克隆文库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性[J].动物营养学报.2014
[8].杨承剑,韦升菊,梁辛,梁贤威,邹彩霞.利用16SrRNA基因克隆文库技术分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌的多样性[J].湖南农业大学学报(自然科学版).2014
[9].武小霞,孙晶,刘明,王敏,张超.大豆再生相关基因SSH文库构建、基因克隆及初步功能分析[C].第24届全国大豆科研生产研讨会论文摘要集.2014
[10].孙晶.大豆再生基因SSH文库构建、GmVSPB基因克隆及其功能初步分析[D].东北农业大学.2014