本文主要研究内容
作者杨琳（2019）在《吉大豆5号子叶节遗传转化体系的优化及GmPEPC4基因的功能分析》一文中研究指出：大豆是世界上主要的油料作物之一,高油品种选育一直是大豆育种者的重要工作内容。但油分含量是由多基因控制的数量性状,遗传稳定需多个世代,传统品种选育方法育种周期长,工作量大。利用基因工程手段可以定向获得遗传稳定的转基因品系,可提高育种效率。PEPC基因是植物中光合作用的关键酶。前人研究证明,PEPC基因作为中枢碳代谢途径中的关键节点,表达量与油脂含量相关,可将代谢流导向三羧酸循环,使碳通量向非脂积累方向流动,不易油脂积累。干扰该基因的表达可增加油分含量。本研究克隆了Gm PEPC4基因,构建RNAi载体,拟在高油大豆品种吉大豆5号中沉默Gm PEPC4基因,以期进一步提高大豆的油份含量。同时优化了吉大豆5号的遗传转化体系,为大豆品种选育提供技术支持。结果如下:1.本研究以大豆Williams 82为材料,利用PCR法克隆了大豆Gm PEPC4基因,成功构建过表达载体3300-PEPC4和1301-PEPC4、RNA干扰载体PFGC-PEPC4i。2.转化大豆毛状根、分子鉴定得到转基因的阳性材料,检测该外源基因对根的油脂及脂肪酸含量的影响。索氏提取结果显示,沉默Gm PEPC4基因的大豆毛状根粗脂肪含量提高0.97%,过表达Gm PEPC4基因的毛状根中粗脂肪含量提高了0.19%,但均未到达显著水平。GC-MS分析结果表明从大豆新鲜毛状根中分离得到5种主要脂肪酸,其中转基因Gm PEPC4基因导致大豆毛状根粗脂肪含量略有上升,但未达到显著水平。脂肪酸含量鉴定,沉默Gm PEPC4基因,油酸、亚油酸含量显著上升,其中亚油酸上升达到极显著水平。过表达Gm PEPC4基因,亚油酸下降达到了极显著水平。3.优化后吉大豆5号子叶节遗传转化体系,选择75%酒精30s,无菌水洗4-5次,10%次氯酸钠浸泡20min,无菌水洗大豆种子4-5次;萌发1天;侵染浓度OD600为0.6;共培养阶段添加二硫苏糖醇200 mg/L和硫代硫酸钠250 mg/L来降低褐化率;抑菌剂浓度为头孢霉素150 mg/L,特美丁200 mg/L;芽诱导阶段basta筛选最佳浓度为10mg/L;芽伸长期添加玉米素与吲哚乙酸最佳浓度1.5 mg/L和0.2 mg/L,赤霉素1.0mg/L。
Abstract
da dou shi shi jie shang zhu yao de you liao zuo wu zhi yi ,gao you pin chong shua yo yi zhi shi da dou yo chong zhe de chong yao gong zuo nei rong 。dan you fen han liang shi you duo ji yin kong zhi de shu liang xing zhuang ,wei chuan wen ding xu duo ge shi dai ,chuan tong pin chong shua yo fang fa yo chong zhou ji chang ,gong zuo liang da 。li yong ji yin gong cheng shou duan ke yi ding xiang huo de wei chuan wen ding de zhuai ji yin pin ji ,ke di gao yo chong xiao lv 。PEPCji yin shi zhi wu zhong guang ge zuo yong de guan jian mei 。qian ren yan jiu zheng ming ,PEPCji yin zuo wei zhong shu tan dai xie tu jing zhong de guan jian jie dian ,biao da liang yu you zhi han liang xiang guan ,ke jiang dai xie liu dao xiang san suo suan xun huan ,shi tan tong liang xiang fei zhi ji lei fang xiang liu dong ,bu yi you zhi ji lei 。gan rao gai ji yin de biao da ke zeng jia you fen han liang 。ben yan jiu ke long le Gm PEPC4ji yin ,gou jian RNAizai ti ,ni zai gao you da dou pin chong ji da dou 5hao zhong chen mo Gm PEPC4ji yin ,yi ji jin yi bu di gao da dou de you fen han liang 。tong shi you hua le ji da dou 5hao de wei chuan zhuai hua ti ji ,wei da dou pin chong shua yo di gong ji shu zhi chi 。jie guo ru xia :1.ben yan jiu yi da dou Williams 82wei cai liao ,li yong PCRfa ke long le da dou Gm PEPC4ji yin ,cheng gong gou jian guo biao da zai ti 3300-PEPC4he 1301-PEPC4、RNAgan rao zai ti PFGC-PEPC4i。2.zhuai hua da dou mao zhuang gen 、fen zi jian ding de dao zhuai ji yin de yang xing cai liao ,jian ce gai wai yuan ji yin dui gen de you zhi ji zhi fang suan han liang de ying xiang 。suo shi di qu jie guo xian shi ,chen mo Gm PEPC4ji yin de da dou mao zhuang gen cu zhi fang han liang di gao 0.97%,guo biao da Gm PEPC4ji yin de mao zhuang gen zhong cu zhi fang han liang di gao le 0.19%,dan jun wei dao da xian zhe shui ping 。GC-MSfen xi jie guo biao ming cong da dou xin xian mao zhuang gen zhong fen li de dao 5chong zhu yao zhi fang suan ,ji zhong zhuai ji yin Gm PEPC4ji yin dao zhi da dou mao zhuang gen cu zhi fang han liang lve you shang sheng ,dan wei da dao xian zhe shui ping 。zhi fang suan han liang jian ding ,chen mo Gm PEPC4ji yin ,you suan 、ya you suan han liang xian zhe shang sheng ,ji zhong ya you suan shang sheng da dao ji xian zhe shui ping 。guo biao da Gm PEPC4ji yin ,ya you suan xia jiang da dao le ji xian zhe shui ping 。3.you hua hou ji da dou 5hao zi xie jie wei chuan zhuai hua ti ji ,shua ze 75%jiu jing 30s,mo jun shui xi 4-5ci ,10%ci lv suan na jin pao 20min,mo jun shui xi da dou chong zi 4-5ci ;meng fa 1tian ;qin ran nong du OD600wei 0.6;gong pei yang jie duan tian jia er liu su tang chun 200 mg/Lhe liu dai liu suan na 250 mg/Llai jiang di he hua lv ;yi jun ji nong du wei tou bao mei su 150 mg/L,te mei ding 200 mg/L;ya you dao jie duan bastashai shua zui jia nong du wei 10mg/L;ya shen chang ji tian jia yu mi su yu yin duo yi suan zui jia nong du 1.5 mg/Lhe 0.2 mg/L,chi mei su 1.0mg/L。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自吉林大学的杨琳，发表于刊物吉林大学2019-06-25论文，是一篇关于大豆论文,子叶节论文,油分含量论文,遗传转化论文,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶论文,吉林大学2019-06-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林大学2019-06-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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