导读:本文包含了特异性暂态表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:NR2B基因,脑部,特异性暂态表达,大鼠模型
特异性暂态表达论文文献综述
施勇[1]（2007）在《人NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型的建立》一文中研究指出N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体是一种配体门控型离子通道,主要分布在突触后膜,被认为是神经元突触可塑性及长时增强效的主要调控者。NR2B是该受体的主要调节亚单位,M2亚基上天冬氨酸残基形成的Asn环是NMDA受体的中心部分,决定该离子通道的通透性及电导性。血脑屏障是由毛细血管内皮细胞和神经胶质细胞的紧密连接构成的,一般物质不容易通过。在脑部靶向性运载中可以通过血脑屏障上高表达的转铁蛋白受体进行转运,所以带有小鼠抗大鼠转铁蛋白受体单抗(OX26)的免疫脂质体使药物或外源基因到达大鼠脑部是一个较好的方法。本研究通过RT-PCR的方法成功地克隆了NR2B基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1-NR2B(PN),转染CHO、未分化PC12细胞,经RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光(IFA)实验证明了构建的重组质粒可在细胞中表达NR2B基因;流式细胞仪检测到转染的未分化PC12细胞在受体激动剂诱导下能发生部分凋亡,CHO细胞未发生凋亡。用PCR方法扩增增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,构建得到pcDNA3.1-EGFP (PE)载体;用PCR方法克隆人突触素蛋白SynI的启动子,插入到去除CMV启动子的PE载体,得到SynI-pcDNA3.1(-CMV)-EGFP(SPE)载体,将该载体转染CHO,COS,PC12细胞系,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪检测,发现前两种细胞中SynI启动子几乎不能启动EGFP的表达,而在神经样PC12细胞中启动效率较高,说明其更倾向于在神经类细胞中发挥作用。再将NR2B基因插入到SynI-pcDNA3.1(-CMV)载体,得到SynI-pcDNA3.1(-CMV)-NR2B(SPN)重组质粒。用逆相蒸发法将NR2B重组质粒制备成脂质体,将OX26巯基化后与脂质体连接成免疫脂质体,获得的脂质体包封率达30.4%,呈粒径均匀的近球状小囊泡、平均粒径低于100 nm,OX26较为均匀的附着在脂质体周围,免疫脂质体直接ELISA反应呈阳性,SDS能够释放其包裹的DNA,说明成功制备了免疫脂质体。将大鼠分成叁组,第一组为正常对照组,第二、叁组分别尾静脉注射包裹PN,SPN质粒的免疫脂质体,48h取大脑皮层、海马、肝、脾经RT-PCR、定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法(IHC)检测NR2B的表达,在第二组的大脑、肝、脾;第叁组的大脑都能检测到NR2B的表达,CMV启动子下的NR2B表达量明显高于SynI启动子,但是后者能够特异性的表达于大脑,而前者则是广泛性表达。本研究使用组织特异性启动子和免疫脂质体技术而不使用病毒类载体使基因在脑内特异性的表达,在非靶向组织沉默;建立NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型,为与NR2B相关的学习、记忆、神经疾病的治疗寻找一种有效的方法,也为脑部靶向性的基因药物和基因治疗寻找一种有效的DNA投递系统。(本文来源于《扬州大学》期刊2007-05-01）
王铁东[2]（2005）在《抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究》一文中研究指出抗菌肽广泛存在于自然界生物体内,具有抗细菌、抗真菌、抗原生生物、抗病毒、抗肿瘤细胞等生物活性。由于天然抗菌肽的获取比较困难,且抗菌肽对细菌具有杀伤作用,采用常规的大肠杆菌表达体系很难实现表达。本研究根据抗菌肽的生物学特性和乳腺表达的特异性,通过建立乳腺表达系统,探索抗菌肽在反刍动物乳腺组织中的表达,明确其在乳汁中的抗菌活性,为下一步实现其在乳腺中的稳定表达及反刍动物细菌性乳腺炎的预防奠定基础。本试验首先根据已发表的天蚕素B 和牛气管抗菌肽的cDNA 序列和氨基酸序列,依据真核细胞偏爱的密码子对抗菌肽编码序列进行优化,在序列两端引入适当的酶切位点,通过重迭延伸PCR 法扩增获得这两种抗菌肽的全基因,分别将它们连接在pMD18-T 载体上,测序证明了合成的正确性。利用山羊β-酪蛋白基因5ˊ侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRESneo,分别构建了天蚕素B 和牛气管抗菌肽的乳腺组织特异性表达载体及二者的双表达载体,将所构建的抗菌肽表达载体以生理盐水溶液形式,直接注射处于泌乳期的健康山羊乳腺小叶,注射后不同时间收集乳汁,通过Tricine-SDS-PAGE 电泳鉴定其表达,以薄层琼脂板孔穴扩散法检测表达产物抗菌活性。结果显示,乳腺组织特异性表达载体能够有效地指导天蚕素B 和牛气管抗菌肽在乳腺中的表达,表达产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑制作用,对链球菌的抑制效果不明显,表达呈暂态性,可持续3-5 天,乳汁中抗菌肽对高温具有一定耐受性,对酸碱具有较强的抗性,反复冻融可降低抗菌肽的活性。(本文来源于《吉林大学》期刊2005-04-01）
特异性暂态表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
抗菌肽广泛存在于自然界生物体内,具有抗细菌、抗真菌、抗原生生物、抗病毒、抗肿瘤细胞等生物活性。由于天然抗菌肽的获取比较困难,且抗菌肽对细菌具有杀伤作用,采用常规的大肠杆菌表达体系很难实现表达。本研究根据抗菌肽的生物学特性和乳腺表达的特异性,通过建立乳腺表达系统,探索抗菌肽在反刍动物乳腺组织中的表达,明确其在乳汁中的抗菌活性,为下一步实现其在乳腺中的稳定表达及反刍动物细菌性乳腺炎的预防奠定基础。本试验首先根据已发表的天蚕素B 和牛气管抗菌肽的cDNA 序列和氨基酸序列,依据真核细胞偏爱的密码子对抗菌肽编码序列进行优化,在序列两端引入适当的酶切位点,通过重迭延伸PCR 法扩增获得这两种抗菌肽的全基因,分别将它们连接在pMD18-T 载体上,测序证明了合成的正确性。利用山羊β-酪蛋白基因5ˊ侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRESneo,分别构建了天蚕素B 和牛气管抗菌肽的乳腺组织特异性表达载体及二者的双表达载体,将所构建的抗菌肽表达载体以生理盐水溶液形式,直接注射处于泌乳期的健康山羊乳腺小叶,注射后不同时间收集乳汁,通过Tricine-SDS-PAGE 电泳鉴定其表达,以薄层琼脂板孔穴扩散法检测表达产物抗菌活性。结果显示,乳腺组织特异性表达载体能够有效地指导天蚕素B 和牛气管抗菌肽在乳腺中的表达,表达产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑制作用,对链球菌的抑制效果不明显,表达呈暂态性,可持续3-5 天,乳汁中抗菌肽对高温具有一定耐受性,对酸碱具有较强的抗性,反复冻融可降低抗菌肽的活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
特异性暂态表达论文参考文献
[1].施勇.人NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型的建立[D].扬州大学.2007
[2].王铁东.抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究[D].吉林大学.2005