导读:本文包含了靶向粘附论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:硫酸化二糖的酸酯铝盐复合物,硫糖铝,Al3+残留量,胃溃疡
靶向粘附论文文献综述
李艳,林凤云,罗立骏,曾令高,朱照静[1]（2016）在《ICP-AES法考察硫糖铝对SD大鼠胃溃疡粘膜的靶向粘附》一文中研究指出目的:建立硫糖铝中铝离子(Al~(3+))在大鼠胃组织残留量的测定方法,考察硫糖铝对胃溃疡粘膜的靶向粘附作用。方法:采用干法灰化消解胃组织样品,电感耦合等离子体-原子发射光谱法(ICP-AES)测定给药后不同时间点大鼠胃组织中Al~(3+)的残留量。ICP-AES检测波长为396.153 nm,检测器为电感耦合阵列检测器,载气为氩气。结果:干法灰化大鼠胃溃疡组织,样品消解完全,可满足ICP-AES的检测要求;在选定的最佳条件下用ICP-AES检测Al~(3+)的检出限为8 ng·m L~(-1),样品间Al~(3+)残留量相对偏差小于13.4%,回收率在96.0%~99.5%之间;给药0.5~4 h时间段内,溃疡胃组织中的Al~(3+)残留率为正常胃组织的2倍以上;给药6 h后,正常胃组织中Al~(3+)残留率显着下降,仅为0.84%,而溃疡胃组织在给药16 h后仍高达29%。结论:ICP-AES测定大鼠胃组织中Al~(3+)的残留量准确可行;硫糖铝对胃溃疡粘膜的粘附性显着高于正常胃粘膜,具有良好的靶向性。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2016年12期）
张雨薇,申屠伟慧,蒲朝霞,周丽明,黄朝旭[2]（2016）在《平板流动腔评价携重组体GPIba靶向脂质微泡与被激活的假性血友病因子(VWF)之间的粘附效能》一文中研究指出目的检测不同剂量的生物素标记GpIbα抗体与脂质微泡的结合效率,模拟生理血流条件,评价携重组体GPIba靶向脂质微泡与被激活的假性血友病因子(VWF)之间的粘附效能。方法应用声振法制备脂质微泡(裸微泡组),生物素-亲和素桥接法制备生物素化携重组体GPIba靶向脂质微泡(靶向组)和携非特异性IgG的脂质微泡(对照组),库尔特计数仪检测微泡的粒径分布;分别将30μl、60μl、120μ1GpIbα及IgG与微泡200μl混合,应用流式细胞仪检测不同剂量的生物素标记的GpIbα、IgG与脂质微泡的特异性结合率;以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为细胞模型,研究10ml 1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激内皮细胞5h后VWF的表达情况;在平行板血流灌注腔模拟的不同流场环境下(应切速率为300 S-和500 S-),观察叁种不同微泡对炎性HUVEC内皮细胞的黏附作用,应用免疫组织化学分析以确定vWF的表达量差异。结果 30μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为7.2%,60μ1GpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为30.7%,120μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为37.9%;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显着上调;平行板流动腔实验中靶向组炎性内皮细胞平均结合微泡数最多,剪切应力300S-为17个,剪切应力500 S-为4个,免疫组织化学分析显示LPS刺激HUVEC后vWF表达量在叁组不同微泡中无明显差异。结论不同浓度生物素标记的GpIbα均能与脂质微泡特异性结合,结合率呈剂量依赖性;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显着上调;在平板流动腔中,携重组体GPIba靶向微泡可特异性地与被激活的vWF结合,有助于判定下一步动物实验中超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境。(本文来源于《2016年浙江省超声医学学术年会论文汇编》期刊2016-09-23）
赵志鹏[3]（2016）在《人源miR-185通过靶向恶性疟原虫var基因减弱感染红细胞粘附作用的研究》一文中研究指出疟疾是经按蚊叮咬而感染疟原虫所引起的传染病,严重危害人类健康。能感染人的疟原虫有5种,其中恶性疟原虫的毒力最强,致死率最高。红内期恶性疟原虫寄生于人成熟红细胞中,这导致它们之间存在错综复杂的相互作用关系。microRNAs是种广泛存在于真核生物中的长度-22nt的单链非编码RNA,其在细胞质中与Dicer、Argonaute(AGO)等蛋白形成复合物而诱导基因沉默,主要通过碱基互补配对与靶基因mRNA的UTR或者CDS结合,使靶mRNA脱腺苷化、降解和抑制翻译。最近,LaMonte等人的研究显示宿主miRNA-451和let-7i移位到红内期恶性疟原虫虫体中,与恶性疟原虫PKA-R转录本发生嵌合来抑制调节性PKA亚基的翻译,进而抑制虫体的生长；同样,在鼠中,发现鼠的miR-155能够增强小鼠对疟原虫的免疫力：在冈比亚按蚊中,冈比亚按蚊的aga-miR-305能够提高冈比亚按蚊对疟疾虫的免疫力。这些研究结果都表明宿主microRNAs能对疟原虫基因进行调控来对抗疟疾。人miR-185是本实验室在恶性疟原虫3D7里发现的宿主miRNA之一,且含量很高,通过预测得知其和var (pfl1955w)的dbl序列靶向互补,提示人miR-185可能调控恶性疟原虫var基因和功能。有相关文献报道称,人miR-185在对肿瘤和代谢性疾病的调控起重要作用,如miR-185负向调控雄激素受体抑制前列腺癌细胞；miR-185靶向原癌基因Sixl抑制肿瘤的生长,靶向SOCS3基因抑制糖尿病功能紊乱等等。为了探讨人miR-185对恶性疟原虫var (pfl1955w)基因表达调控并观察感染红细胞粘附所受到的影响,我们体外培养293T细胞和恶性疟原虫3D7,构建双荧光素酶报告质粒和表达质粒,再分别用Lipofectamine 2000转染293T细胞和Cytomix电转到恶性疟原虫3D7,流式细胞仪检测转染效率,用双荧光素酶报告验证人miR-185对var(pfl1955w)的dbl区域直接调控作用,Q-PCR检测var (pfl1955w) mRNA的表达,细胞粘附实验检测感染红细胞的粘附。结果显示,转染293T细胞和恶性疟原虫3D7的效率在50%以上；过表达人miR-185可显着抑制含var (pfl1955w) dbl的荧光素酶基因的表达(p<0.001)；在293T细胞和恶性疟原虫3D7中,过表达人miR-185能够减少·var (pfl1955w)mRNA的含量(p<0.05),并使感染红细胞粘附作用下降了39%。综上表明,人miR-185对疟原虫var(pfl1955w)基因表达有下调作用,进而影响恶性疟原虫的粘附。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2016-05-01）
马萍萍[4]（2013）在《基质力学调控肿瘤细胞靶向捕获和粘附行为的血流动力学研究》一文中研究指出目前，医学界普遍认为具有靶器官特异性的恶性肿瘤转移病灶蔓延是造成癌症患者死亡的重要原因。在肿瘤转移过程中，微循环内肿瘤细胞的捕获和粘附不仅是血管途径肿瘤转移形成的首要条件，而且在肿瘤转移的靶器官特异性中起着决定性的作用。研究发现，血液循环中肿瘤细胞在微血管内被捕获和粘附，但这种捕获和粘附却并非随机的，而是存在显着的器官差异性(即靶器官特异性)。如，乳腺癌细胞优先在肺、肝、骨等器官的微血管内被捕获和粘附，而在其它器官却十分罕见。然而，有关肿瘤细胞这种微血管内优先被捕获和粘附的靶器官特异性机理至今仍不十分清楚，而这恰恰是研究肿瘤转移在特殊器官内形成的重要基础。为了深入了解和认识不同器官或组织自身特异的力学性质对血液微循环内肿瘤细胞捕获和粘附行为的影响和机制，以及为肿瘤转移疾病的治疗和药物开发打下理论基础，本文以平板流动腔为剪切力加载方式模拟体内血流环境，从血流动力学角度对基质力学是否参与肿瘤细胞捕获和粘附的靶器官特异性的问题进行了探索，同时从肿瘤细胞粘附分子上分析了整合素β1的表达与粘附行为的联系。本论文的具体研究工作和结论如下：目的通过比较分析有/无内皮细胞和趋化因子的情况下，不同力学特性的基底对剪切力作用下肿瘤细胞捕获和粘附行为的影响，探讨1）基质力学是否参与调控肿瘤细胞的捕获和粘附行为，其规律如何？2）特定基质力学条件下，内皮细胞和趋化因子是否参与调控肿瘤细胞的捕获和粘附，规律又如何？3)整合素β1在此过程中起何作用？以增加对微血管内肿瘤细胞捕获和粘附行为的认识。方法采用聚丙烯酰胺凝胶膜模拟体内不同器官或组织的基质力学特性和体外流动腔实验测试等方法，对不同实验条件下细胞粘附情况进行量化分析，并采用流式细胞仪等技术检测肿瘤细胞表面整合素β1的表达情况。结果1）基质力学调节了剪切力作用下乳腺癌细胞的捕获和粘附行为，使得肿瘤细胞更趋向于粘附在与乳腺癌组织基质硬度相近似的纤维蛋白表衬基底上（约5kPa左右）；2)内皮细胞显着促进了乳腺肿瘤细胞捕获和粘附的基质力学依赖性行为，肿瘤细胞的粘附数量以基质硬度约为5kPa组最多，约为10kPa组次之，最少的是约为2kPa组；3)整合素β1参与了基质力学对肿瘤细胞捕获和粘附行为的调控，采用整合素β1抗体封闭肿瘤细胞表面的整合素β1受体位点后，可显着降低肿瘤细胞的粘附数量。4) SDF-1可调节肿瘤细胞表面粘附分子整合素β1的表达和作用，增强了特定基质力学条件下乳腺肿瘤细胞对内皮细胞的粘附能力。本文的研究结果可初步揭示体外剪切力作用下肿瘤细胞的捕获和粘附呈基质力学性质依赖性的二相性（即力学特异性），并认为组织或器官特有的力学性质调控微血管内肿瘤细胞捕获和粘附的这一靶器官特异性现象可能确实存在。(本文来源于《重庆大学》期刊2013-04-01）
刘佳[5]（2012）在《淀粉基口服结肠靶向生物粘附给药系统粘附行为及药效学研究》一文中研究指出口服结肠靶向生物粘附给药系统，融合了口服结肠靶向给药和生物粘附给药两者的优势，既可避免人体上消化道各种酶和酸性环境对药物的不利影响，又能避免肝脏的首过效应，延长给药时间，从而获取高生物利用度。因此，无论从时间还是空间结构上口服结肠靶向生物粘附给药系统都有利于药物的释放和吸收，适合作为蛋白质类生物大分子药物口服给药的传输载体，已成为现代药剂领域的研究前沿和热点。前期的研究表明，醋酸酯淀粉具有很好的结肠靶向性能，与植物凝集素ConA结合可获得性能优良的结肠靶向生物粘附载体材料，由其构建的薄膜包衣微丸给药系统在体外实验中已证实具有很好的结肠靶向性能和释放性能。本论文在此研究基础上，对淀粉基口服结肠靶向生物粘附薄膜包衣微丸的制剂工艺进一步优化，利用挤出-滚圆方法及底喷型流化床包衣技术，在挤出温度6-12℃，挤出速度30-40r/min；滚圆速度500-600r/min，滚圆时间5-10min；包衣进风温度30-35℃，雾化压力范围0.125-0.2MPa，流化压力范围0.1-0.15MPa的条件下，得到体外释放效果更好的薄膜包衣微丸给药系统。在细胞水平上研究植物凝集素与细胞之间发生的粘附行为，利用多功能荧光酶标仪，研究了伴刀豆球蛋白A、扁豆凝集素、豌豆凝集素、花生凝集素、菜豆凝集素、荆豆凝集素、双花扁豆凝集素、雪花莲凝集素等多种植物凝聚素与人体上消化道胃上皮细胞MGC803、小肠上皮细胞Hic、结肠上皮细胞Caco-2的特异性粘附行为，并考察了影响粘附行为的外界因素。研究发现伴刀豆球蛋白A（ConA）与结肠上皮细胞Caco-2有较好的特异粘附性，可作为口服结肠靶向生物粘附给药系统的配体。植物凝集素的浓度、孵育时间、孵育温度、孵育环境pH值均会对粘附行为产生明显影响。利用激光共聚焦显微技术，观察不同温度下ConA与Caco-2细胞的结合形态，结果显示在低温下ConA均匀分布于细胞表面，37℃时ConA于细胞特定位置聚集，说明这种特异性粘附结合与细胞表面受体位置有关且还需要细胞代谢产生的能量支持。通过动物实验对所构建的淀粉基口服结肠靶向生物粘附给药系统进行药效学评价，构建2型糖尿病大鼠模型，将包载有胰岛素的淀粉基口服结肠靶向生物粘附薄膜包衣微丸给药系统应用于动物模型，结果显示淀粉基口服结肠靶向生物粘附薄膜包衣微丸给药系统具有良好的降血糖作用，可有效延长在动物体内的给药作用时间，达到60h。连续给药口服剂量50IU/kg与注射胰岛素35IU/kg对比，可获得相近的降糖效果。显示了所构建的淀粉基口服结肠靶向生物粘附给药系统可实现胰岛素的口服给药，并具有良好的治疗效果。此外，也建立了较完整的胰岛素口服给药系统药效学评价体系。以上研究结果对淀粉基口服结肠靶向生物粘附载体材料和相应给药系统的研究和开发提供了指导，为其进入临床应用提供了依据和基础数据。也对口服结肠靶向给药系统和生物粘附给药系统的发展起到了积极的促进作用。(本文来源于《华南理工大学》期刊2012-05-01）
吴凤林[6]（2011）在《细胞间粘附分子-1（ICAM-1）靶向超声分子成像评价大鼠移植肾急性排斥反应》一文中研究指出背景和目的：移植肾急性排斥反应(Acute rejection, AR)是肾移植术后常见并发症,最易导致移植肾早期功能丧失,是移植肾存活和维持功能的主要障碍之一。研究表明,当AR发生时,首先表现为移植肾微血管内皮损伤,血管内皮细胞高表达或分泌一些与排斥反应有关的炎性分子标记物如细胞间粘附分子-1 (Intercellular adhesion molecule, ICAM-1)、血管细胞间粘附分子-1 (Vascular cell adhesion molecule, VCAM-1)等,这些炎性分子标记物能够促进T细胞、血小板或其它炎性细胞沿血管内皮滚动、粘附、聚集和外渗,后者可介导血管内皮炎症反应并释放多种炎症介质或促炎细胞因子进入到肾间质组织,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1),血栓素A2(TXA2)等,进而导致移植肾脏组织及微血管损伤。因此,一定程度上讲,血管内皮损伤是移植肾AR的最早阶段,检测血管内皮所表达的特殊分子标记物如ICAM-1有可能早期评估移植肾AR的存在。事实上,长期以来,学者们对移植肾排斥反应的诊断,特别是急性排斥反应的诊断进行了多种多样的研究,以求在组织学发生不可逆转改变之前达到早期、准确地诊断并开始治疗。众多研究者从免疫学监测、移植肾影像学和病理学检测等多方面进行了大量有益的探索与研究。但不同的检测手段和方法均有各自的局限性,如肾闪烁扫描术可以评价缺血性损伤,但在肾移植术后早期并不能鉴别AR、急性肾小管坏死和环孢素中毒,仅对何时恢复及移植肾短期或长期存活有一定价值。而MRI、PET等其它非靶向性放射性成像方法虽对评估肾移植后形态学和代谢变化能够提供有价值的参考信息,但PET和MRI等方法存在着一些无法克服的缺点：例如,仪器要求高,不能床边检查,放射示踪剂缺乏稳定性及具有放射污染等,使其临床应用受到一定的限制。目前,移植肾穿刺取组织进行病理学检查仍是诊断AR的最准确方法。但由于肾穿刺损伤大,易发生出血及其它严重并发症,故不能作为常规监测手段。因此,寻找一种安全、无创、敏感的检测手段对AR做出早期诊断具有重要的应用价值。近年来,随着靶向超声微泡造影剂的出现,靶向超声分子显像(Targeted ultrasound molecular imaging)逐渐成为现实,极大拓展了传统超声微泡的应用范围,其作为血管内示踪剂能特异地粘附于血管内皮表面从而在行超声检查时被探测到,这使得应用超声技术从分子水平对各种疾病进行早期诊断成为可能。目前,靶向超声分子成像技术已经成功地对肾脏、下肢、肿瘤等部位的血管内皮炎症/血管新生进行了评价,对心脏移植排斥反应的监测也进行了初步探索。但移植肾AR由于小动物肾移植模型构建复杂、繁琐等原因,关于其靶向成像的研究尚属于空白阶段。我们实验室经过多年的探索和技术改进,靶向超声微泡构建研究也取得了相当大的成果,构建的靶向超声微泡大小和浓度、稳定性、抗体携带率等均已达到国际同等或更高水平,并且依靠血管内皮炎症相关因子(ICAM-1)靶向超声微泡成功实现了对肾脏、心脏等的血管内皮炎症反应评价。在前期工作基础之上,本研究尝试利用构建的靶向肾脏微血管内皮表面细胞间粘附分子-1(ICAM-1)靶向超声微泡和对比超声相结合,并采用先进的超声成像技术(将对微泡的破坏性降到最低)对移植肾AR进行早期评价和诊断,这无疑具有重要临床意义。因此,本研究在普通脂质微泡的基础上,通过“抗生物素蛋白/生物素复合体”的化学桥接作用将抗大鼠ICAM-1单克隆抗体连接于脂质微泡外壳构建了携带抗ICAM-1的靶向超声微泡(MBI),并在大鼠移植肾AR模型上,应用MBI和对比超声(CEU)检查相结合,目的在于探讨MBI结合CEU评价大鼠移植肾AR的可行性。材料和方法：1、超声微泡的制备与评价1.1、超声微泡的制备各种相关脂质材料按一定质量比例75℃水浴溶解于适量蒸馏水中,同时通全氟丙烷(C3F8)气体,超声振荡至形成乳白色液体制备生物素(biotin)化脂质微泡(MB)。MB经静置弃下清液并加入等量蒸馏水去除未结合脂质纯化1次后,按一定比例加入抗生蛋白链菌素(streptavidin)。继续静置弃下清液并加入等量蒸馏水去除未结合抗生蛋白链菌素纯化微泡1次后,按一定比例加入生物素化的抗大鼠细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)和同型对照抗体(isotype control antibody),分别得到携带抗ICAM-1单抗靶向超声微泡(MBI)和同型对照微泡(MB),最后静置弃下清液并加入等量蒸馏水去除未结合抗体纯化微泡1次,冰箱中4℃保存备用。1.2、超声微泡体外评价：1.2.1、库尔特计数仪测量超声微泡的平均粒径及浓度。采用绿色荧光标记的二抗与抗大鼠ICAM-1单克隆抗体结合荧光显微镜下观察ICAM-1单抗与微泡外壳的连接情况。1.2.2、平行板流动腔评价超声微泡粘附性能应用包被有大鼠ICAM-1抗原的聚苯乙烯培养皿作为平行板流动腔体外检测微泡粘附稳定性的平台。以普通脂质微泡非特异性粘附效果为对照,采用大鼠ICAM-1 (1000ng/μl抗原浓度)包被检测MBI粘附特异性及效能,所有分组均按平行板流动腔实验说明书要求检测3个样本(n=3)。MBI及MB(1×108/m1)经微量注射泵以0.5dyn/cm2剪切应力分别通过“大鼠ICAM-1抗原”包被的平行板流动腔,自显微镜下观察到有微泡出现后开始连续录像6min,观察每分钟微泡的靶向结合情况。1.2.3大鼠肾脏对比超声(Contrast enhanced ultrasound, CEU)评价超声微泡显影效果SD大鼠给予腹腔注射3%乌拉坦-水合氯醛麻醉后,背部备皮,尾静脉插管,使用sequoia512超声机,固定17L5探头在肾脏长轴,固定探头频率为7MHz,深度25mm,机械指数0.18,动态范围80分贝,经尾静脉注射1mlMB或MBI后以0.2ml生理盐水冲管,CPS实时成像,所有图像存储于MO盘备用。2、大鼠移植肾AR模型的构建2.1、移植前准备：供、受体均在移植前禁食12h,自由饮水,以3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉。2.2、供体移植：麻醉成功后备皮,常规消毒铺巾。取腹部正中切口,由剑突至耻骨联合。以自制拉钩将腹壁向左右拉开,将全部肠管、胃、脾脏翻置腹腔外,湿纱布覆盖,显露左肾、左输尿管和膀胱。游离出腹主动脉、下腔静脉,用5/0丝线结扎左精索静脉及左肾上腺静脉并剪断,去除肾脂肪囊,分离左输尿管至膀胱,该过程中注意尽量保留输尿管周围脂肪组织,以免影响输尿管血供。显微血管钳阻断下腔静脉和腹主动脉上、下端,由腹主动脉下端插入灌注管,在下腔静脉下端剪一开口,4℃有肝素林格氏液(25U/m1)经腹主动脉插管灌注,灌洗至左肾和所属血管完全苍白,下腔静脉流出液变清澈为止,灌注量5-10ml。拔出腹主动脉插管,切断肾动、静脉,分离出左肾后放入盛有0℃-4℃乳酸林格氏液的小盘里。2.3、受体移植：步骤同上,受体SD大鼠作腹部正中切口。由剑突至耻骨联合,同样将肠管推向右侧,以温盐水纱布包裹。近肾门处结扎左肾动、静脉及输尿管,并切除受体左肾。用10-0无损伤缝线将供体肾和受体肾的同名肾动、静脉做端端吻合。血流恢复后,移植肾颜色逐渐转为红润,明亮,肾静脉充盈,肾动脉搏动明显,5-10min左右可见输尿管蠕动,表明模型构建成功。2.4、移植后处理：予肌注抗生素,视情况予以补液,注意保温。3、靶向超声分子成像实验分为两组,分别为接受肾移植术72h后的SD大鼠移植肾脏(肾移植组,n=10)与未经过任何处理SD大鼠右侧肾脏(对照组,n=10)。对肾移植组及对照组SD大鼠行二维、彩色多普勒及对比超声检查。超声造影时两组分别注入靶向超声微泡(MBI)和对照超声微泡(MB)。SD大鼠俯卧位,用支架固定Sequoia512超声机(Siemens,美国)的高频超声探头(17L5)于大鼠移植肾脏上方,调整探头位置获得良好肾脏显像后保持在整个实验过程中不变,仪器的各项参数在整个实验过程中不变。CEU检查均采用相干脉冲序列成像技术(Coherent Pulse Sequence, CPS)实时观察,探头发射频率为7.0MHZ,机械指数为0.2。每只大鼠采用微量进样器经尾静脉随机(间隔30min)先后注射MB和MBI的数量约为1×109个。在注入微泡3min后行CEU检查,获取第一帧图像后继续存储图像2-3帧后给予高MI的连续超声发射2-3s以破坏微泡,继续存储本底图像2-3帧,全部声学造影视频存于CD盘,以备脱机分析。微泡破坏前存储图像的平均声强度(Video Intensity, VI)可代表靶向超声微泡在组织中的总浓度,包括粘附和循环微泡。微泡破坏后存储图像上的平均VI代表的是在血池中循环微泡的浓度。前者减去后者得到的是粘附微泡在组织中的浓度。取图结束后,应用CEU图像分析软件(Virginia大学,美国)对图像进行分析,测量大鼠移植肾组及对照组肾脏造影VI值,单位为灰阶强度(U)；并用彩色编码技术制作肾脏显影的彩色编码图像,采用红色、橙色和白色依次代表显影强度由弱到强。4、肾脏病理学检查：CEU图像采集后。取出大鼠肾脏,10%甲醛固定。常规脱水、石蜡包埋制片。切片作苏木素一伊红(HE)染色和免疫组化检查。5、统计学处理：采用SPSS13.0软件包进行数据分析,计数资料用X±S表示,各组不同时间点结合微泡个数比较用重复测量的方差分析,各时间点内两组间单独效应比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行分析；动物实验组间比较采用两样本t检验,组内比较采用二阶段交叉设计方差分析,P<0.05为差异有显着性意义。结果：1、MBI构建及制备效果的体外评价1.1、MBI制备及理化性质鉴定采用声振法制备MB及MBI在显微镜下观察均为透亮微气泡,库尔特计数仪检测MB平均直径为2.86μm,浓度为1.7×109个/ml, MBI平均直径为2.71μm,浓度为1.5×109个/ml。1.2、MBI制备效果体外评价：1.2.1、荧光标记法评价抗体连接情况采用绿色荧光标记的二抗与抗大鼠ICAM-1单抗结合,荧光显微镜下显示MBI外壳显明显绿色荧光,表明抗ICAM-1单抗与微泡外壳连接良好1.2.2、平行板流动腔体外评价MBI靶向粘附效能平行板流动腔体外评价结果显示,在模拟微血管生理血流条件的剪切应力(0.5dyn/cm2)下MBI可与包被于平行板流动腔的ICAM-1抗原有效结合,MBI结合数量随着时间延长而不断增加,显示了良好的主动性靶向黏附效能。普通对照微泡结合数量同样随着时间延长而增加但同靶向超声微泡相比其结合数量显着降低,两者差异显着(F=420.116,P=0.000)。1.2.3、经外周静脉注射超声微泡MBI或MB,在大鼠肾脏中均可获得满意的声学造影效果。2、靶向超声分子成像2.1、二维超声及CEU检查结果：二维超声提示移植肾稍增大,形态稍饱满,肾皮质彩色血流信号略减少,对照组肾脏形态、大小正常,血流信号正常；移植肾及对照组肾在注入靶向超声微泡后均可见肾脏区域明显灌注显影,在延迟3min显象后第一帧CEU图像显示移植肾-MBI组可见显着的超声显影增强。而移植肾-MB组仅见轻度的超声显影增强,其显影强度较前者明显减弱；而对照-MBI组及对照-MB组延迟3min显象后,右侧肾脏均未见明显显影增强。2.2、对比超声V1分析：移植肾-MBI组和移植肾-MB组VI值分别为(27.0±7.4)U、(10.2±2.4)U,前者同后者相比VI值增大,两者之间具有显着性差异(F=64.744,P=0.000)。对照-MBI组及对照-MB组VI值分别为(7.7±2.2)U、(6.5±1.0)U,两者之间差异无统计学意义(F＝2.868,P=0.129)。移植肾-MBI组VI值分别为对照-MBI组及对照-MB组VI值的(3.7±1.3)倍(t＝7.907,P=0.000)、(4.2±1.2)倍(t＝8.661,P=0.000),两者之间具有显着差异。而移植肾-MB组VI值同对照-MBI组及对照-MB组相比,两者之间具有显着差异(t=2.423,P=0.026；t=4.417,P=0.001),但仅分别为后两者(1.4±0.4)倍、(1.6±0.6)倍。3、肾脏病理检查结果：移植肾组织中可见肾小管上皮细胞肿胀、变性,内可见管型和坏死脱落细胞,伴肾间质水肿及中性粒细胞增多；对照组肾脏组织中肾小管排列整齐,形态正常,间质无充血、水肿。4、免疫组化检查：移植肾组织肾小球微血管内皮表面、肾小管上皮ICAM-1(棕黄色阳性反应物,箭头处)表达明显增加；而对照组肾组织血管内皮表面未见明显的ICAM-1表达。结论：1、平行板流动腔实验证实采用生物素-亲和素桥连方式制备出的携带ICAM-1靶向超声微泡随着时间的推移粘附数量不断地增加,提示其靶向粘附能力良好,可以用来评价病变组织的血管内皮炎症。2、采用供肾血管与受体同名血管作端端吻合,大大减少了对受体循环系统的影响,保证了良好的术后生存期,为实验的进一步进行建立坚实基础。3、应用携带抗ICAM-1单抗靶向超声微泡行对比超声检查可有效评价大鼠移植肾AR,提示将有望为临床提供一种早期、敏感、无创的检测移植肾AR的手段。(本文来源于《南方医科大学》期刊2011-04-15）
李美瑜[7]（2011）在《携Sialyl Lewis~x和P-选择素单抗双配体超声微泡在高剪切应力下靶向粘附性能的评价》一文中研究指出背景和目的血管内皮炎症已被证实与许多心血管疾病,如动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤、高血压等的发生、发展及预后密切相关。如能无创性地对“血管炎症”进行靶向分子成像,无疑可为临床早期诊断心血管疾病提供非常有价值的手段,进一步指导早期的干预、治疗。因此,现有的许多无创性影像技术,如：超声、MRI、CT、SPECT等均在对“血管炎症”的靶向分子成像进行积极探索。靶向超声分子成像作为近年兴起的一门无创性分子影像技术,是通过在超声微泡表面连接特异性配体构建靶向微泡,以靶向微泡作为示踪剂,经静脉注入后与血管内皮细胞表面特异性靶向分子有效结合,再通过对局部靶向粘附的微泡行超声对比成像,特异性评价血管内皮细胞上分子学变化,从而实现疾病分子水平上特异诊断的目的。与其他依靠解剖结构和组织生理学改变来发现和诊断疾病的传统影像学技术相比较,超声分子成像技术具有实时、高空间、时间分辨率,无放射污染,仪器便携、价廉等先进性。许多研究表明,血管内皮细胞功能异常作为血管炎症反应过程必要的参与因素,是以内皮细胞表面P-(platelet-selectin)、E-(endothelial-selectin)和L-(leukocytes-selectin)选择素,血管粘附分子VCAM-1 (vascular adhesionmolecule-1)和细胞间粘附因子ICAM-I (intracellular adhesion molecule-1)等的明显上调为特征的。这些粘附因子介导炎症细胞实现在血管内皮表面滚动、牢固结合及向内皮下迁移,其表达往往具有区域特异性和特异疾病关联性。若能实现对这些异常表达粘附因子的靶向检测,有望在早期评价血管炎症反应和相关疾病。而超声分子影像技术可通过在超声微泡表面连接与内皮特异因子靶向结合的配体,介导微泡与靶分子有效结合,再行对比超声成像,具有对“血管炎症”进行靶向分子成像的潜能。毫无疑问,靶向超声微泡与血管内皮表面靶分子的有效结合是实现超声分子成像的核心和关键,而靶向微泡表面配体的选择对其粘附效能具有重要的影响。目前常用的靶向超声微泡主要是通过主动性靶向机制,采用具有脂质外壳含惰性气体的微泡在其表面上装配特异性配体来实现。抗体、多肽和多糖等多种分子物质均可作为配体与超声微泡连接构建成特异的靶向性超声微泡。国内外已有许多研究通过在微泡表面携带与血管粘附因子特异性结合的单克隆抗体构建靶向超声微泡,成功实现了对血栓、心脏缺血再灌注等血管炎症相关性疾病的超声分子影像评价。但是,由于大部分抗体与靶分子的结合和解离速率低、作用过程相对缓慢,形成牢固结合需要一定的接触时间,而血流速度快、剪切应力大,微泡与靶分子的接触时间短暂,在尚未形成牢固结合前可被血流冲刷脱离而难以达到高效结合,这使得应用携带单一抗体的靶向超声微泡目前仅能对血流速度慢、剪切应力小的静脉系统疾病进行良好靶向超声分子影像评价,严重限制了靶向超声分子成像技术在动脉系统中的应用,而大多数与心血管疾病相关的病理过程都发生在动脉中。因此,要实现超声微泡在动脉系统有效的靶向结合需要微泡在高剪切应力下具有与靶分子快速粘附和牢固结合的特点。若能利用具有靶向诱导作用的“双配体”连接技术,设计在同一超声微泡上连接两种配体,一种是可与靶分子快速结合的配体,另一种是可与靶分子稳定结合的配体,有望实现高剪切应力下微泡的有效靶向结合。近期发现一种非抗体型的配基Sialyl Lewisx能与选择素快速但不十分牢固地结合,于炎症早期介导白细胞在血管内皮表面滚动,它可以为某些缓慢结合型配基形成牢固结合提供机会。因此,本实验通过构建同时携Sialyl Lewis"(?)和P-选择素单抗的双配体靶向超声微泡,利用平行板流动腔评价其在高剪切应力下的靶向黏附行为特征和粘附效能,并在小鼠腹主动脉炎症模型上,结合对比超声评价其分子成像效果,探讨具有靶向诱导作用特点的“双配体”能否介导靶向微泡实现从滚动到牢固黏附的高效结合,为发展在高剪切应力下具有更好黏附效能的靶向超声微泡构建技术,进而开拓超声分子影像技术在评价动脉炎症反应中的应用领域提供可行性指导。方法1、生物素化脂质超声微泡的制备：将各种脂质材料及辅助材料(DSPE-PEG2000-Biotin、DPPC、PEG4000等)按一定比例加入适量蒸馏水中水浴溶解后,通入全氟丙烷(C3F8)气体,剪切仪高速剪切至形成乳白色液体制备生物素化脂质微泡,静置、洗涤、纯化3次后,显微镜下观察并利用库尔特计数仪检测其大小及浓度。2、靶向超声微泡的制备：生物素化的脂质超声微泡制备后,加入一定量的抗生蛋白链菌素,静置后洗涤、纯化3次,分别按1×107个微泡1.5μg、7.5μg和7.5μg比例依次加入Sialyl Lewisx、P-选择素单抗、同型对照单抗制备分别携Sialyl lewis" (Selectin-targeted microbubbles, MBs)、P-选择素单抗(P-selectin-targeted microbubbles, MBp)和同型对照单抗(isotype control microbubbles, MBC)叁种靶向超声微泡,并按1×107个微泡加入0.75μg Sialyl Lewisx和3.75μg P-选择素单抗比例同时加入两种配体制备出携Sialyl Lewisx和P-选择素单抗的双配体靶向超声微泡(Dual-liglands microbubbles, MBD),每种微泡制备后静置、洗涤、纯化3次,经库尔特计数仪检测其大小及浓度。3、靶向超声微泡的体外鉴定：每种靶向微泡均取5×106个稀释至1ml,与Sialyl Lewisx抗体(CD15s)作用后,同时与FITC(绿色)标记的抗大鼠二抗和TRITC(红色)标记的抗小鼠二抗孵化,洗涤、纯化后连续于显微镜常光、红色和绿色光谱的光照作用下观察拍照；并以MBc作对照,用流式细胞仪检测MBs、MBP和MBD的配体结合率。4、平行板流动腔法体外评价超声微泡的靶向粘附性能：配备浓度为1μg/ml的小鼠P-选择素Fc段溶液,按200μl/个滴加在每个培养皿中央进行包被。4.1、结合实验：利用平行板流动腔分别设定0.5、2.0和4.0 dyn/cm2叁种剪切应力。同一剪切应力下,每种微泡(约5×106个/ml)分别经微量注射泵作用通过平行板流动腔,显微镜下录像观察6分钟。4.2、解离实验：每种微泡(约5×106个/ml)取1ml,分别注入平行板流动腔培养皿后静置5分钟,先以0.9%生理盐水以0.2 dyn/cm2剪切力冲洗掉静止但未结合的微泡,至镜下无游离的微泡后,每30秒增加一次剪切应力,至镜下微泡完全解离。4.3、利用image-pro-plus图像分析软件,分析每种剪切引力下瞬时滚动的微泡数目、6分钟时视野内牢固结合的微泡数目和解离实验中每次剪切应力增加后30秒视野内仍牢固结合的微泡数目。5、小鼠腹主动脉炎症模型的制备：12只小鼠随机平均分为炎症组和对照组,炎症组小鼠在肾动脉分支至髂动脉分叉之间的腹主动脉周围注入含0.5μgTNF-a和0.125μg IL-1β的0.3 ml PBS溶液,对照组小鼠只注入0.3 ml PBS溶液,回置肠腔,缝合切口关闭腹腔作用4小时。6、靶向超声分子成像：制备的小鼠采用经尾静脉随机注射MBC、MBS、MBP和MBD(5×107个)(两次注射间隔30分钟),6分钟后行对比超声检查观察腹主动脉的显影情况,并采用MCE软件对所得图像进行分析,测量小鼠腹主动脉造影声强度(video intensity,Ⅵ),编辑主动脉显影的彩色编码图像。7、病理组织和免疫组化染色检查：超声分子成像结束后,立即处死小鼠取腹主动脉分别行HE染色和免疫组化染色。结果1、靶向微泡的制备：显微镜下观察MBC、MBS、MBP和MBD均为分布均匀,大小均一的透亮气泡,应用库尔特计数仪测得四种微泡的平均粒径分布为(2.182-2.378)μm,平均浓度分布为(1.239-1.341)×108个/ml,四种微泡平均粒径比较(F=0.874,P=0.494)和平均浓度比较(F=0.047,P=0.985)均无显着差异。2、靶向微泡的体外鉴定：每种微泡均采用FITC标记的羊抗大鼠二抗和TRITC标记的羊抗小鼠二抗孵化并洗涤纯化后,在荧光显微镜下观察示,MBc未呈现荧光,MBs只有明显的红色荧光,MBP只呈明显的绿色荧光,而MBD在对应光照作用下分别呈现均匀明显的红色和绿色荧光；以MBc作为对照,经流式细胞仪测得,MBS、MBP和MBD的配体结合率均在80%以上,叁者比较无显着差异(F=1.773,P=0.248)。以上均表明利用“生物素-亲和素”桥接技术可使配体与脂质微泡有效连接,成功构建双配体靶向微泡和其他同型对照微泡。3、平行板流动腔法评价微泡的靶向粘附性能3.1、结合实验显示：将MBC、MBS、MBP和MBD分别在0.5、2.0和4.0 dyn/cm2剪切应力下通过表面包被相同浓度小鼠P-选择素Fc段溶液的平行板流动腔时,可观察到除MBc少量滚动和粘附外,MBS、MBP和MBD的滚动和结合数目均较多。在相同剪切应力下,MBS、MBP和MBD的瞬时滚动数目和全程(6分钟)结合数目均明显高于MBC (P<0.01)。MBC的瞬时滚动数目在不同剪切应力下无显着差异(F=4.287,P=0.070),全程结合数目在4.0 dyn/cm2时均较0.5和2.0dyn/cm2时减少(F=6.833,P=0.028)；而MBS、MBP和MBD的瞬时滚动数目和全程结合数目均随剪切应力的提高而减少(P<0.05)。其中,在剪切应力为0.5dyn/cm2时示：MBS、MBP和MBD的瞬时滚动数目比较和全程结合数目比较均无显着差异(P>0.05)；在2.0dyn/cm2时示：MBs和MBD的瞬时滚动数目均高于MBP (MBS较MBP：P=0.047；MBD较MBP:P=0.002),而前两者比较无显着差异(P=0.262)；全程结合数目由少至多依次为MBP、MBS和MBD (P<0.05)。在4.0 dyn/cm2时示：MBs和MBD的瞬时滚动数目均高于MBP (MBS较MBP:P=0.003；MBD较MBP：P-_0.015),而前两者比较无显着差异(P=1.000)；MBD的全程结合数均明显高于MBs和MBP (MBD较MBS:P=0.018; MBD较MBP：P=0.001),后两者比较无显着差异(P_0.455)。以上表明在平行板流动腔中,MBS、MBP和MBD均可抵抗一定剪切应力流体的冲刷,对P-选择素实现靶向结合,且MBD在较高剪切应力下显示出优于MBs和MBP的靶向结合效能。3.2、解离实验显示：在包被相同P-选择素浓度的平行板流动腔内注入1 ml的微泡后,静置5分钟待其与靶分子靶向结合后,每30秒增加一次剪切应力,常光显微镜下观察可见,MBC、MBS、MBP(?)和MBD仍结合于平行板流动腔表面的数目随着剪切应力的增加而减少；其中,MBC不能与P-选择素稳定结合,在较低剪切应力下即可见明显的解离,MBS、MBP和MBD的结合相对稳定,能抵挡一定剪切应力的冲刷作用。图像定量分析后显示：MBC、MBS、MBD和MBP的半数解离剪切应力依次增高,分别为(4.133±0.83)、(10.20±0.87)、(19.20±1.4)和(29.40±3.54) dyn/cm2 (F=91.374,P=0.000)。仅在(14.20±2.82)dyn/cm2时MBC就达到完全解离,而MBS、MBD和MBP的完全解离剪切应力依次为(29.40±4.26)(67.06±5.46)和(101.80±3.54)dyn/cm2,叁者比较依次增高(F-271.389,P=0.000)。表明靶向微泡与靶分子结合后能够抵挡一定剪切应力的冲刷,其中MBs为不稳定结合,MBD结合相对牢固,而MBP一旦结合就十分牢固,能够抵挡高剪切应力的冲刷。4、靶向超声分子成像：分别随机经尾静脉注射MBC、MBS、MBP和MBD 6分钟后,在对照组小鼠腹主动脉中均未见明显的超声显影,在炎症组小鼠腹主动脉中除MBC无明显超声显影外,MBS、MBP和MBD可呈现不同程度相对明显的超声显影,其中MBD的显影较MBs和MBP明显增强。5、超声图像定量分析：对采集的超声图像进行Ⅵ定量分析后显示,除MBC外(t=0.099,p=0.923),MBS、MBP和MBD在炎症组小鼠中腹主动脉中的Ⅵ值均高于对照组(MBS:t=9.363, p=0.000; MBP:t=6.841, p=0.000; MBD:t=8.246,p=0.000)。其中,在对照组中,MBc、MBS、MBP和MBD的Ⅵ值无显着差异(F=1.199,P=0.336)；而在炎症组中,MBS、MBP和MBD的Ⅵ值均明显高于MBC(F=36.349,P-_0.000),且MBD较MBS、MBP显着增加(P<0.05),后两者间无显着差异(P>0.05)。6、病理组织和免疫组化染色结果6.1、HE染色显示：对照组小鼠腹主动脉无明显病理改变,中外膜结构清晰,内皮扁平光滑；炎症组小鼠腹主动脉壁水肿增厚,内皮皱缩凸向管腔,管腔狭窄,中膜可见平滑肌细胞增生、排列紊乱,部分迁入内膜下,弹性蛋白收缩明显,增生断裂、散落在外膜内。6.2、免疫组化染色显示：对照组小鼠腹主动脉内皮P-选择素表达均为阴性,而炎症组小鼠腹主动脉内皮均可见P-选择素表达,表明小鼠腹主动脉炎症模型构建成功。结论1、采用“生物素-亲和素”桥接技术可实现Sialyl Lewisx和P-选择素单抗与脂质微泡外壳的有效连接,成功构建携Sialyl Lewisx和P-选择素单抗的双配体靶向超声微泡和同型对照单配体靶向超声微泡。2、MBS、MBP和MBD在体外均能与P-选择素靶向结合,且显现出不同的靶向黏附行为方式和粘附效能。其中,MBs呈高效滚动后的不稳定黏附,MBP表现为低效滚动后的牢固结合,而MBD能够实现高效滚动后相对牢固的结合。在较高剪切应力下MBD对P-选择素的靶向粘附效能明显优于MBP和MBs。3、结合对比超声行小鼠腹主动脉炎症反应分子成像评价,MBD的靶向成像效果优于MBs和MBP。(本文来源于《南方医科大学》期刊2011-03-29）
王丹,廖小福,龚士强,刘燕,毛靖[8]（2010）在《MinTBP-1-PRGDN双靶向融合肽对成骨细胞粘附影响的比较研究》一文中研究指出目的:以胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)涂层为标准对照,研究minTBP-1-PRGDN双靶向融合肽对成骨细胞粘附的影响。方法:对商用纯钛进行minTBP-1-PRGDN双靶向融合多肽涂层,以无涂层的钛表面及胎牛血清涂层的钛表面分别作为空白对照和阳性对照,比较不同涂层处理对成骨细胞附着及伸展的影响。结果:成骨细胞粘附1h后,minTBP-1-PRGDN融合肽涂层的钛片上的细胞附着数量最多,FBS涂层表面次之,无涂层的钛片表面细胞数量最少、且与minTBP-1-PRGDN组比较有统计学差异(P<0.05);经形态计量学分析:FBS组细胞伸展面积最大,minTBP-1-PRGDN组次之,无涂层组细胞伸展最小。结论:minTBP-1-PRGDN融合肽涂层能提高成骨细胞在钛表面的附着和伸展能力。(本文来源于《临床口腔医学杂志》期刊2010年10期）
王伟,吕明德,谢晓燕,徐作峰,陈立达[9]（2010）在《肿瘤血管生成靶向微泡的鉴定及粘附实验》一文中研究指出目的 "亲和素-生物素"法制备靶向人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表面整合素αvβ3的微泡(MBαvβ3)。方法 "亲和素-生物素"法桥连αvβ3抗体于磷脂微泡,体外荧光法鉴定其表面"生物素-亲和素-生物素"结构,通过平行平板流动腔(PPFC)验证微泡与HUVEC粘附性。(本文来源于《中国超声医学工程学会第八届全国腹部超声学术会议论文汇编》期刊2010-05-13）
陈茜[10]（2010）在《SonoVue微泡介导的体外基因转染和靶向粘附的研究》一文中研究指出背景近年来,随着基因重组技术的发展,一种从分子水平治疗缺血性心脏病的新方法即“分子搭桥术”逐渐受到了人们的重视。所谓“分子搭桥术”是指用促血管生长因子诱导心肌新生血管形成,刺激心肌缺血部位的自我搭桥,从而提高心肌侧支循环的代偿能力,实现内源性心肌再血管化,以消除或减轻心肌缺血,也称为“治疗性血管新生”。目前研究最多的治疗性血管新生方法为通过载体把目的基因导入心血管组织。但由于传统的病毒载体或非病毒载体的安全性差和转染效率低等的多种不足,严重的影响了基因治疗的临床疗效,因此建立和发展高效、安全、可控、实用的基因载体系统已成为基因治疗研究的重点。近年来研究表明,不仅超声照射本身有促进基因体外和体内转染的作用,而且超声介导微泡造影剂破裂可明显增加基因的转染效率,是一种安全的基因运载系统。目前临床所用超声造影剂均为内含气体的微气泡。其外壳的成膜材料多样,包括磷脂类化合物、白蛋白、糖类、非离子表面活性剂或可生物降解的高分子多聚物等,其内通常充入气体,包括二氧化碳、氧气、空气或大分子惰性气体(多为氟烷气体)等。由于造影剂的蛋白质或阳离子脂质体外壳通常带正电荷,而质粒通常带有大量负电荷,因此可以使目的基因粘附于微泡表面；此外,脂质外壳的微泡还可以在其表面装配不同的配体,如抗体、氨基酸、多糖等物质,这为制备具有组织特异性的靶向微泡创造了可能性。临床上常用的SonoVue微泡为含六氟化硫气体的微泡造影剂,外壳含有脂质成分。形成的微泡平均直径为2.5μm。大量资料显示,超声不仅可以使细胞膜通透性增加,而且微泡破裂后还可使微血管破裂,内皮细胞间隙增宽。Bao等[2]的研究认为：产生这些效应的主要的机制是超声的“空化效应”(cavication),所谓空化效应是指微气泡在声波作用下表现出“震荡”或“爆聚”活性,而随之形成的微流、射流和冲击波等激烈过程会使其周围的组织细胞壁被击穿,产生可逆或不可逆的小孔。由于微泡的存在又可以降低超声空化的域值。因此,通过对携带目的基因的微泡进行靶部位的超声照射,由空化效应导致的微泡破裂可以使微泡定向释放所携带的基因,同时空化效应产生的休克波会使局部毛细血管和邻近组织细胞膜的通透性增高,从而使目的基因更容易进入组织细胞内,实现并增强基因的转染和表达。利用微泡携带目的基因的方法主要有4种[3]：①将基因粘附于微泡外壳表面或包埋于外壳内；②把基因整合入微泡内部；③通过静电作用,将基因共价结合到微泡表面；④在微泡外壳中加入一层油酯物质包绕微泡,然后将疏水性药物整合入这层油酯中。目前多采用前两种方法来实现目的基因与微泡的连接。其一,将微泡与裸基因或基因载体混合后经外周血管同时注入体内,待其到达靶组织后用超声照射靶区。通过超声辐照引起的微泡破裂和局部微血管及细胞通透性的增加,促使血管内的基因进入周围组织。Shohet等[4]将腺病毒p半乳糖苷酶基因与微泡混合,再去除过量基因,获得粘附有基因的微泡,并将这种载基因微泡经静脉注入小鼠体内,进行超声辐照,4天后可检测到小鼠心肌组织中p半乳糖苷酶活性比对照组增加10倍；而若先后输入微泡和p半乳糖苷酶基因,则心肌组织中p半乳糖苷酶的活性仅比对照组增加2倍,说明基因与微泡粘附更能提高基因的转染率。其二,是将基因包裹在微气泡的内部,将微气泡制备为基因载体,当其经过外周血管注入到达靶组织时,进行超声辐照破裂微泡,使其内部的基因物质在局部释放出来。Frenkel等[5]通过超声振荡法将荧光素酶质粒整合入白蛋白微泡外壳中,并用超声辐照进行细胞的基因转染,结果显示,当DNA浓度为4000μg/ml时,微泡包载DNA组对细胞的转染率最高。靶向超声微泡的应用是进行超声分子显像的基础,而制备靶向微泡的关键技术在于微泡的表面修饰,即如何将特异性好、活性高的配体牢固结合到微泡表面。目前连接方法常用的有共价法或非共价法。其中非共价结合多通过生物素-亲和素连接技术；而共价结合多采用羧酸酯类衍生物介导配体与微泡外壳连接。ICAM-1是细胞粘附分子免疫球蛋白家族的一个成员,主要表达于活化内皮细胞和其他抗原递质细胞上,介导内皮细胞与白细胞的粘附反应。炎症细胞因子等诱发的ICAM-1表达上调及由后者介导的白细胞与内皮细胞的相互作用,是炎症反应的关键因素。缺血后多种炎性细胞因子诱导微血管内皮细胞表达ICAM-1,使其水平增高,而且内皮细胞受损后暴露了一些炎性细胞结合位点,如ICAM-1位点,微泡对这些暴露的炎性细胞结合位点可能具有某种亲和力。由于ICAM-1在正常组织中几乎不表达,所以抗ICAM-1抗体标记的靶向微泡可特异结合于受损内皮表面。Villanueva和Weller等[8,9]均发现损伤的冠脉内皮表面可粘附大量携抗ICAM-1抗体的微泡,并可据此来评价内皮细胞功能和急性心脏排斥反应。研究表明连接了特异性配体的微泡能够更好的在靶组织聚集,因此,若将靶向微泡作为目的基因的载体,则与微泡连接的特异性配体则能增强基因转染的靶向性,减少基因治疗的副作用,进一步增强基因的转染效率。ANG-1基因是血管生成素家族的一种,主要由血管周围细胞、血管平滑肌细胞和肿瘤细胞分泌表达。ANG-1在血管新生中发挥多种作用,可促进血管成熟,减少血管渗漏,维持血管的稳定性。Thurs-ton等[10]分别在ANG-1和VEGF的转基因小鼠皮肤血管内注入Evan蓝染料,对由芥子油诱发的血管炎症反应,ANG-1转基因小鼠的血管渗漏情况较VEGF转基因小鼠轻,炎症反应不明显；另外,ANG-1还能与内皮细胞上的特异性受体Tie-2氨酸激酶结合使细胞内Tie-2氨酸磷酸化形成二聚体,对内皮细胞具有强有力的特异性趋化及迁移作用。因此,ANG-1与VEGF作用于血管新生的不同环节,而且在很多方面ANG-1可以弥补VEGF的不足。实验一pEGFP-C3-hANG-1真核表达质粒的构建目的构建含增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-C3-h ANG-1,并探寻满足基因转染实验所需大量质粒的提取方法。方法从pAAV ANG-1质粒中利用PCR技术获得两端添加HindⅢ和BamHⅠ酶切位点的hANG-1基因片段。将酶切鉴定正确的pEGFP-C3载体经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后,利用定向克隆技术将hANG-1基因片段和pEGFP-C3载体进行连接,获得重组的pEGFP-C3-hANG-1,并电转入大肠杆菌DH5α感受态细胞内扩增,筛选阳性克隆,经过酶切电泳鉴定和DNA测序证明所构建质粒的正确性。最后利用氯化铯密度梯度离心法大量提取重组pEGFP-C3-hANG-1质粒。结果pEGFP-C3-hANG-1质粒的单酶切和双酶切鉴定均可得到与预期条带大小相同的目的条带,hAng-1序列测定分析亦证明真核表达质粒pEGFP-C3-hANG-1构建成功,开放阅读框架正确。氯化铯密度梯度离心法可一次提取大量高纯度质粒,保证基因转染时质粒性质的一致性。结论利用基因克隆重组技术能成功将hANG-1基因克隆入pEGFP-C3载体中,构建真核表达质粒pEGFP-C3-hANG-1。实验二超声联合SonoVue微泡辐照促进pEGFP-C3-hANG-1细胞转染的条件优化和基因表达完整性的研究目的探讨超声联合SonoVue微泡介导人血管生成素(hANG-1)基因体外转染细胞时多种影响因素对转染效率和细胞生存率的影响,并确定最佳转染条件；同时观察超声联合微泡辐照对基因完整性和表达的影响。方法构建pEGFP-C3-hANG-1质粒,根据不同实验组的设计,应用相应的微泡联合超声辐照条件进行人胚肾293T细胞的pEGFP-C3-hANG-1基因转染。转染后48h,以荧光显微镜观察到绿色荧光为转染成功标志；流式细胞术检测基因转染阳性细胞率,台盼蓝染色检测细胞生存率；琼脂糖凝胶电泳检测经超声辐照后质粒的完整性；RT-PCR和Western blot技术检测hANG-1基因的mRNA和蛋白表达。结果①超声声强1.5 w／cm2,辐照时间30s,微泡浓度20%,DNA浓度15μg/ml时进行基因转染可获较好转染效率和细胞生存率；②转染体系中血清的存在并不影响转染效率和细胞生存率；③细胞悬浮状态下转染可显着提高基因转染效率,降低细胞死亡率；④最适转染条件下的超声辐照剂量不会影响质粒的完整性,且转染后的基因可正常表达mRNA并翻译目的基因的蛋白。结论超声联合微泡辐照能够提高体外细胞目的基因的转染效率,血清的存在并不影响基因的转染,转染后的基因能顺利地表达并具有正常功能。实验叁携ICAM-1抗体的SonoVue微泡靶向识别受损内皮目的探讨静电吸附法制备的携ICAM-1抗体靶向微泡在体外和体内的寻靶能力。方法采用静电吸附法制备携ICAM-1抗体的靶向SonoVue微泡。体外培养经IL-1β刺激大量表达ICAM-1的人血管内皮细胞ECV304,采用免疫荧光法检测靶向微泡与其结合能力。构建兔急性心肌梗塞模型,静脉注射携ICAM-1抗体的靶向SonoVue微泡进行心肌造影,采用冷冻切片和免疫荧光法检测靶向微泡与受损血管内膜结合能力。结果体外实验中,可见大量携ICAM-1抗体靶向微泡与刺激后ECV304细胞紧密结合,仅有少量靶向微泡与正常ECV304细胞结合。体内实验中,可见大量携ICAM-1抗体靶向微泡在兔梗塞心肌受损血管内膜处粘附,仅可见少量靶向微泡在正常血管内膜处粘附。结论携ICAM-1抗体靶向微泡在体内、体外均能与受损血管内皮特异性结合,不仅有利于靶向超声造影显像,更为微泡携带药物或基因在局部定向释放开辟良好前景。(本文来源于《武汉大学》期刊2010-04-01）
靶向粘附论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的检测不同剂量的生物素标记GpIbα抗体与脂质微泡的结合效率,模拟生理血流条件,评价携重组体GPIba靶向脂质微泡与被激活的假性血友病因子(VWF)之间的粘附效能。方法应用声振法制备脂质微泡(裸微泡组),生物素-亲和素桥接法制备生物素化携重组体GPIba靶向脂质微泡(靶向组)和携非特异性IgG的脂质微泡(对照组),库尔特计数仪检测微泡的粒径分布;分别将30μl、60μl、120μ1GpIbα及IgG与微泡200μl混合,应用流式细胞仪检测不同剂量的生物素标记的GpIbα、IgG与脂质微泡的特异性结合率;以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为细胞模型,研究10ml 1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激内皮细胞5h后VWF的表达情况;在平行板血流灌注腔模拟的不同流场环境下(应切速率为300 S-和500 S-),观察叁种不同微泡对炎性HUVEC内皮细胞的黏附作用,应用免疫组织化学分析以确定vWF的表达量差异。结果 30μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为7.2%,60μ1GpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为30.7%,120μlGpIbα与200μl微泡混合组,抗体微泡结合率为37.9%;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显着上调;平行板流动腔实验中靶向组炎性内皮细胞平均结合微泡数最多,剪切应力300S-为17个,剪切应力500 S-为4个,免疫组织化学分析显示LPS刺激HUVEC后vWF表达量在叁组不同微泡中无明显差异。结论不同浓度生物素标记的GpIbα均能与脂质微泡特异性结合,结合率呈剂量依赖性;在LPS刺激下,内皮细胞vWF表达显着上调;在平板流动腔中,携重组体GPIba靶向微泡可特异性地与被激活的vWF结合,有助于判定下一步动物实验中超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
靶向粘附论文参考文献
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[9].王伟,吕明德,谢晓燕,徐作峰,陈立达.肿瘤血管生成靶向微泡的鉴定及粘附实验[C].中国超声医学工程学会第八届全国腹部超声学术会议论文汇编.2010
[10].陈茜.SonoVue微泡介导的体外基因转染和靶向粘附的研究[D].武汉大学.2010
标签：硫酸化二糖的酸酯铝盐复合物; 硫糖铝; Al3+残留量; 胃溃疡;