导读:本文包含了消化分离培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪组织,内皮祖细胞,脂肪干细胞,脂肪基质血管细胞(SVF)
消化分离培养论文文献综述
汤文燕[1]（2017）在《差速消化分离培养脂肪源性内皮祖细胞（EPCs）及其生物学特性的研究》一文中研究指出背景:内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)是成熟内皮细胞的前体细胞,可迁移到缺血组织,分化为成熟内皮细胞(Enthothelial cells,ECs),发挥血管新生作用。随着EPCs研究的深入,其在临床诊断、预后判断和各种缺血性疾病的治疗方面将会有广阔的应用前景。EPCs不仅存在于骨髓、外周血和脐血中,还存在于胚胎、心脏、骨骼肌和血管中。然而,这些来源的EPCs都存在一定的限制。因此,寻找合适来源的EPCs就变得尤为重要。近年来的研究发现,脂肪组织中含有多种细胞,包括EPCs。脂肪组织不仅具有来源丰富,获取容易且其对人体创伤较小的优势,而且其种子细胞丰富,适合细胞的自体移植,因此,脂肪组织是理想的EPCs种子细胞来源,但目前国内外缺乏有效的分离培养脂肪源性EPCs的方法。目的:探讨一种有效、经济、可行的从人脂肪组织中分离培养EPCs的方法,并对其生物学特性展开研究。方法:来用酶消化法从人脂肪组织中分离培养出脂肪基质血管细胞(Stromal vascular cells,SVF),流式细胞术检测SVF的免疫表型以分析其细胞成分。通过EPCs和脂肪干细胞(Adipose stem cells,ASCs)对胰蛋白酶的敏感性不同,差速消化分离EPCs和ASCs。观察细胞的形态特征,绘制细胞的生长曲线、计算细胞的细胞倍增数(PD)和倍增时间(DT)评估细胞的生长增殖能力,流式细胞分析术检测EPCs的表型特征,免疫荧光染色观察细胞摄取FITC-UEA-1和吞噬Dil-ac-LDL的能力。最后,通过体外成血管试验分析EPCs的血管形成能力。结果:通过差速消化分离法,我们成功从脂肪组织中分离出EPCs和ASCs。流式细胞术检测分析显示EPCs表达CD31、CD34和VEGFR2,而几乎不表达造血干细胞表面标志CD45;体外扩增培养后呈典型的铺路石样形态,并可吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和结合荆豆凝集素(FITC-UEA-1),在荧光显微镜下观察吞噬Dil-ac-LDL的EPCs呈红色荧光,而结合FITC-UEA-1呈绿色荧光。此外,将其接种于Matrigel人工基底膜,可形成血管腔样的结构。ASCs高度表达CD29、CD73、CD90、CD105等间充质细胞表面标志,体外扩增培养呈长梭形纤维细胞样生长。结论:我们通过差速消化分离法成功从人脂肪组织中分离培养出EPCs,为脂肪源性EPCs的分离培养提供了一种有效、经济、可行的研究方法,为各种缺血性疾病提供了丰富的种子细胞来源,给治疗性血管新生和再生医学提供了广阔的应用前景。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-03-01）
张立岩,孙新,田丹,徐睿,雷昊[2]（2016）在《改良分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞及诱导分化鉴定》一文中研究指出目的采用改良分次酶消化法体外分离培养家兔肌腱干细胞,观察其生物学特性,并进行诱导分化及鉴定。方法无菌条件下取出家兔髌腱组织,分别运用改良的分次酶消化法和酶消化后低密度稀释接种法进行分离、培养、传代,用倒置相差显微镜观察细胞形态特征并绘制两种方法的生长曲线,通过流式细胞鉴定仪检测肌腱干细胞表面抗原标志物的表达,取P3-P4代肌腱干细胞向成骨细胞、成软骨细胞诱导分化并鉴定。结果改良的分次酶消化法较酶消化后低密度稀释接种法细胞增殖速度加快,形态均一,杂质细胞少。分离出的肌腱干细胞表面抗原标志CD90、CD44呈阳性,而CD34、CD14呈阴性,证实之前分离的细胞为肌腱干细胞。鉴定出肌腱干细胞具有向成骨细胞和成软骨细胞分化能力。结论采用改良的分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞简单易行,肌腱干细胞生长及传代速度可观,活性良好,纯度较高。另外,肌腱干细胞的成功分离培养,也为肌腱相关疾病的研究开辟了一条新途径。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2016年18期）
徐丹丹,孙志鹏,张旭,刘东宇,许小楠[3]（2016）在《胶原酶Ⅰ消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞》一文中研究指出为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞,该研究采用胶原酶I消化法,在不添加外源激素及生长因子的条件下培养奶牛乳腺上皮细胞。采用差时消化与差速贴壁方法,对奶牛乳腺上皮细胞进行纯化。采用Western blot方法检测细胞中β-酪蛋白(β-casein,CNS2)的水平。通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果显示,纯化后的细胞呈现典型的"铺路石"或"鹅卵石"样。细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)反应呈阳性,波形蛋白反应呈阴性。细胞传至15代冻存并复苏后生长状态依然良好。这提示,胶原酶I消化法在不添加外源激素及生长因子的条件下可以获得奶牛乳腺上皮细胞,以用于后续实验。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2016年09期）
马瑞杰,李妍,孙晓梅,胡竹林[4]（2016）在《改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞》一文中研究指出目的分析改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞的可行性。方法揭取恒河猴角膜后弹力层和内皮层,反复剪碎,用1 mg·m L~(-1)胶原酶A消化15 min,离心后重悬接种。待原代细胞长满80%~90%时,以40×106个·L~(-1)的密度传代。观察记录原代及传代细胞生长情况、传代时间,进行细胞鉴定,并与组织贴壁法相比较。结果改良揭膜消化法获取的原代细胞生长较慢,21 d融合成单层铺路石样结构,无基质细胞污染;传代细胞生长较快,5~6 d可传一代;神经元特异烯醇化酶表达阳性。组织贴壁法分离组织24h后组织片体积变小,透亮度明显下降,疑似溶解,高倍镜下观察显示,后弹力层纤维排列紊乱,细胞观察不清;继续培养至第5天,细胞完全溶解,组织片碎裂,轮廓不清,未见角膜内皮细胞爬出。结论改良揭膜消化法能简易高效地获得大量恒河猴角膜内皮细胞。(本文来源于《眼科新进展》期刊2016年07期）
王爱平,李严兵,谢巍,曹宇辉,彭田红[5]（2015）在《酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定》一文中研究指出目的建立体外胶原酶消化法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)及免疫鉴定的方法。方法采用I型胶原酶对PASMCs进行体外培养。在无菌环境下,分离提取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠肺动脉主干,剥离外膜、剔除内皮细胞,经酶消化法,体外培养PASMCs。倒置相差显微镜观察PASMCs生长状态及特点;台盼兰测定细胞活力;免疫细胞染色法进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SM actin)鉴定。结果酶消化法分离培养的PASMCs 3 d后,可见细胞贴壁呈梭形生长,6 d后生长迅速呈典型的峰-谷状生长,9 d后达90%融合。通过形态学观察及免疫荧光染色法鉴定表明:培养的细胞为PASMCs;细胞存活率为98.5%;原代培养8~10 d后即可传代,3-10代细胞生长迅速、细胞形态不易发生改变,可用于进行细胞实验。结论采用I型胶原酶消化法简单易行、可靠、PASMCs生长迅速、传代周期短的特点;尤为重要的是,培养的原代PASMCs可用于肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2015年01期）
张惠娟,丛姗,梁美萍,刘俊平,黄利刚[6]（2014）在《人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择》一文中研究指出背景:文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致,得到的细胞数量各不相同。目的:探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一:分别采用3种方法:0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min;0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min;0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二:采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验叁:分别采用2种方法:0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min;0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四:采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态,研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。结果与结论:用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min,然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适,而且胶原酶的浓度合适,得到的细胞数量最多。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年06期）
刘明慧,晁贺,张亚兰,王鹏,李建梅[7]（2013）在《酶消化结合差时贴壁的方法体外分离培养人子宫内膜细胞》一文中研究指出目的探讨酶消化结合差时贴壁培养的方法对人子宫内膜细胞进行体外培养的培养效果,以寻找一种简单高效的人子宫内膜细胞体外分离培养的方法。方法采用胶原酶消化结合差时贴壁的方法,对人正常子宫内膜细胞进行体外分离培养,并传代、冻存及复苏。光镜下观察其培养效果,通过免疫荧光法对腺上皮细胞及间质细胞进行鉴定,并分析其纯度。结果共培养人子宫内膜38份,成功培养35份,培养成功率92%,冻存后成功复苏率达97%;子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫荧光显色为阳性,腺上皮细胞和间质细胞原代纯度均达90%以上。结论酶消化结合差时贴壁的培养方法,操作简单、培养成功率高、污染机会少、省时、维持细胞活性好,是子宫内膜细胞体外分离培养的简单高效方法。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2013年10期）
冯旭,禹宝庆,刘莉,李承,陈安民[8]（2013）在《胶原酶优化消化法对退变椎间盘纤维环细胞分离培养的作用》一文中研究指出目的通过观察不同浓度Ⅰ、Ⅱ型胶原酶对退变椎间盘纤维环组织消化效果,探讨适合于纤维环细胞分离培养的优化消化法。方法收集16例退变椎间盘纤维环组织,Ⅰ、Ⅱ型胶原酶单独消化并在0.1%,0.05%,0.01%浓度下联合消化。消化4、8、16、24 h时倒置显微镜下计算纤维环细胞数,台盼蓝染色检查其活力,并观察其生长情况。结果Ⅰ、Ⅱ型胶原酶联合消化细胞数多于单独消化细胞数。联合消化4、8 h时,细胞数随胶原酶消化浓度增加而增多,16、24 h时极低浓度组纤维环细胞数逐渐增多,细胞活力维持在较高水平。结论极低浓度Ⅰ、Ⅱ型胶原酶优化消化法能节省酶量,对细胞损伤小,更适合纤维环细胞分离培养。(本文来源于《颈腰痛杂志》期刊2013年05期）
李树文,武海军,银和平,白明,杜志才[9]（2013）在《Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法分离培养兔髓核细胞》一文中研究指出背景:椎间盘为负重却缺乏血运的组织,在体外培养过程中存在表型丢失问题,因而容易发生退行性改变,但椎间盘退变的机制尚不明确。目的:探讨兔髓核细胞分离、贴壁培养、扩增和鉴定的方法,并观察髓核细胞在不同代次的生长特性。方法:应用Ⅱ型胶原酶消化法和组织块贴壁法相结合的方法,分离、纯化髓核细胞并进行体外扩增,用倒置显微镜观察各代细胞的形态、生长状况,计数细胞数量,并绘制细胞生长曲线。苏木精-伊红染色后光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学方法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达情况,并进行细胞鉴定。结果与结论:成功的实现了兔髓核细胞体外分离、培养及扩增。生长特性观察发现,髓核细胞第1-3代细胞增殖能力强,活力旺盛,但随着传代次数的增加,细胞增殖能力程逐渐下降的趋势。分离培养的髓核细胞阳性表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。体外采用Ⅱ型胶原酶消化法和组织块贴壁法相结合,可获得高纯度的髓核细胞,培养的髓核细胞呈类圆形或多角形生长,第1-3代细胞生长活性较强。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2013年39期）
别利克孜·卡德尔,刘奕杉,王璇,李伯琦,马艳[10]（2013）在《改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞》一文中研究指出背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34和CD45的表达。细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能。结果与结论:两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显着性意义(P<0.05);牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达。然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显着性意义(P>0.05)。说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2013年10期）
消化分离培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的采用改良分次酶消化法体外分离培养家兔肌腱干细胞,观察其生物学特性,并进行诱导分化及鉴定。方法无菌条件下取出家兔髌腱组织,分别运用改良的分次酶消化法和酶消化后低密度稀释接种法进行分离、培养、传代,用倒置相差显微镜观察细胞形态特征并绘制两种方法的生长曲线,通过流式细胞鉴定仪检测肌腱干细胞表面抗原标志物的表达,取P3-P4代肌腱干细胞向成骨细胞、成软骨细胞诱导分化并鉴定。结果改良的分次酶消化法较酶消化后低密度稀释接种法细胞增殖速度加快,形态均一,杂质细胞少。分离出的肌腱干细胞表面抗原标志CD90、CD44呈阳性,而CD34、CD14呈阴性,证实之前分离的细胞为肌腱干细胞。鉴定出肌腱干细胞具有向成骨细胞和成软骨细胞分化能力。结论采用改良的分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞简单易行,肌腱干细胞生长及传代速度可观,活性良好,纯度较高。另外,肌腱干细胞的成功分离培养,也为肌腱相关疾病的研究开辟了一条新途径。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
消化分离培养论文参考文献
[1].汤文燕.差速消化分离培养脂肪源性内皮祖细胞（EPCs）及其生物学特性的研究[D].南方医科大学.2017
[2].张立岩,孙新,田丹,徐睿,雷昊.改良分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞及诱导分化鉴定[J].中国现代医学杂志.2016
[3].徐丹丹,孙志鹏,张旭,刘东宇,许小楠.胶原酶Ⅰ消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞[J].中国细胞生物学学报.2016
[4].马瑞杰,李妍,孙晓梅,胡竹林.改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞[J].眼科新进展.2016
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[9].李树文,武海军,银和平,白明,杜志才.Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法分离培养兔髓核细胞[J].中国组织工程研究.2013
[10].别利克孜·卡德尔,刘奕杉,王璇,李伯琦,马艳.改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞[J].中国组织工程研究.2013
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