导读:本文包含了环媒恒温扩增技术论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:柑橘溃疡病菌,LAMP,扩增条件,致病性测定
环媒恒温扩增技术论文文献综述
董欢[1]（2010）在《柑橘溃疡病菌环媒恒温基因扩增技术的建立》一文中研究指出柑橘溃疡病是全球流行的检疫性植物病害,病原为地毯草黄单胞菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.citri)。该病危害性大、分布范围广、传播速度快、防治难度大,是国内外柑橘种植区防疫的重点。本论文对柑橘溃疡病菌进行了分离培养、致病性测定、PCR检测、ELISA检测并研究建立了柑橘溃疡病菌的环媒恒温基因检测方法。环媒恒温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是日本学者Notomi于2000年首先提出并建立的一种基因扩增新技术。它的主要原理是依赖以特异性目的基因设计出来的4条特异性明显的引物和一种具有链置换反应的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase large fragment),在等温条件下进行靶序列扩增的一种反应。将采自湖南衡山橘园的感病标本进行分离培养纯化,革兰氏染色鉴定,并对其进行致病性测定,确认为柑橘溃疡病菌。实验以柑橘溃疡病菌为抗原,经过抗原制备、抗体制造、纯化和间接ELISA反应条件优化,建立起对柑橘溃疡病菌的ELISA检测法,在抗原包被浓度为1：400(1.5×105cfu/mL)、抗体稀释浓度为1：800(3.9μg/mL)、5%脱脂牛奶封闭2h后用1：1500的酶标抗体浓度(2.6μg/mL)作用60min,最后在加入底物显色30min可得到最佳实验效果。PCR检测基于王中康早期设计的一对引物对柑橘溃疡病菌进行优化实验,得到优化结果为：95℃预变性4min；然后94℃变性30s,59℃30s,72℃延伸30s,共35个循环。扩增柑橘溃疡病菌产生的特异性片段为413bp。该方法对柑橘样品病斑研磨液的检测结果为阳性,而对照检测稻白叶枯病菌、烟草青枯病菌、马铃薯环腐病菌、大白菜软腐病菌时扩增结果为阴性,表明该方法具有较高的准确性。LAMP检测基于柑橘溃疡病菌独有的保守蛋白基因设计筛选出F3、B3、FIP、BIP特异性引物,确立了最佳体系和扩增条件：95℃预变性7min；冰浴8min；64℃孵育90min；80℃下灭活Bst酶3min。建立了一种全新的柑橘溃疡病菌检测技术-环媒恒温基因扩增技术(LAMP)。并以水稻白叶枯病菌、烟草青枯病菌、马铃薯环腐病菌、大白菜软腐病菌4种病菌为阴性对照,对该方法特异性和敏感性进行评估,结果表明,环媒恒温基因扩增技术在柑橘溃疡病菌的检测中具有快速、灵敏度高、特异性好等优势,其最低检测下限为60cfu/mL。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2010-06-01）
周海莲,刘岑岑[2]（2009）在《环媒恒温核酸扩增技术及其应用》一文中研究指出介绍了环媒恒温核酸扩增法的原理及特点,综述了近年来LAMP法在食品微生物检测的应用,对LAMP方法在食品微生物检测及其它领域中的应用前景做了展望。(本文来源于《安徽农学通报(下半月刊)》期刊2009年20期）
王彩霞,林祥梅,吴绍强[3]（2009）在《环媒恒温扩增技术及其在疫病检测中的应用》一文中研究指出介绍环媒恒温扩增技术的基本原理、特点及其在疫病检测和诊断中的应用情况。环媒恒温扩增技术具有简便、快速、特异性和灵敏性强、扩增效率高等特点,被广泛应用于各种细菌性疾病、病毒性疾病、寄生虫病等很多方面的研究与检测。(本文来源于《检验检疫学刊》期刊2009年04期）
董欢,邓欣,程天印[4]（2009）在《环媒恒温基因扩增技术文献计量分析》一文中研究指出通过环媒恒温的文献量、文献内容、文献作者分布等方面分析国内外环媒恒温基因扩增技术的研究现状及存在问题,揭示并预测环媒恒温基因扩增技术在基因检测中的特点和研究趋势、发展方向,为环媒恒温科学研究及信息交流提供参考依据。(本文来源于《中国农学通报》期刊2009年15期）
李逢慧[5]（2009）在《复合环媒恒温基因扩增技术的研究》一文中研究指出副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌是猪场常见病原菌。副猪嗜血杆菌能够引发以关节炎、多发性浆膜炎、胸膜炎等为临床症状的革拉泽氏病,通常感染断奶仔猪,发病率一般为10%-15%,严重时死亡率可达到50%;多杀性巴氏杆菌能引发家畜、家禽及野生畜禽的巴氏杆菌病,其中禽霍乱的死亡率可达60%-100%;猪肺疫急性病例可在数小时内死亡,产毒多杀性巴氏杆菌可引发猪进行性萎缩性鼻炎,造成病猪生长速度降低10%-30%。副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌给规模化养猪业的发展造成严重经济损失。目前副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的检测方法一般包括临床症状观察、细菌的分离鉴定、血清学检测、酶联免疫吸附试验以及分子生物学检测方法(PCR)等。这些方法存在操作麻烦、耗时长、准确性不高、对仪器以及反应条件比较高,难以推广。为此,本试验分别建立副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的环媒恒温基因扩增检测方法(LAMP法)。LAMP法能够在恒定的温度(60-65℃)在1.5h内完成整个反应。并且在此基础上,通过条件的优化,尝试建立副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的复合LAMP检测方法。本试验研究内容主要包括:筛选副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的特异性基因;分别设计副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的LAMP特异性引物;分别建立副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌的LAMP检测方法;根据LAMP条带的组成特点,进行复合LAMP的可行性研究:应用复合LAMP法检测副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌。本试验研究结果主要如下:1.基于副猪嗜血杆菌16SrRNA部分基因序列设计LAMP引物,参照LAMP原理以及相关技术要求,建立副猪嗜血杆菌LAMP检测法。通过优化扩增条件,最低可检测到13cfu的细菌,且没有非特异性扩增,表明该方法快速,灵敏,准确。2.基于巴氏杆菌Kmt1基因设计LAMP引物,参照LAMP原理以及相关技术要求,建立巴氏杆菌的LAMP检测法,最低检测限度为24cfu。重复试验表明该方法快速,灵敏,准确。3.结合LAMP条带组成的特点,进行复合LAMP的可行性研究并且建立复合LAMP的检测方法。4.应用所建立的复合LAMP检测方法检测临床样本。实验结果表明,LAMP法及复合LAMP法检测副猪嗜血杆菌和巴氏杆菌特异性强、敏感性高,检测快速,成本低,适合基层动物疫病卫生检测,值得广泛推广。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2009-06-10）
黄微,罗超,肖紫兰,冯帅媚,廖艳[6]（2008）在《环媒恒温基因扩增技术在动物医学上的应用概况》一文中研究指出环媒恒温基因扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification简称LAMP)是于2000年由日本科学家Notomi[1]等发明的一种新的核酸扩增技术。大量研究证明,LAMP法不仅实现了恒温条件下基因快速扩增,而且具有操作简单、快速高效、特异性强、灵敏度高、鉴定简便等特点。通过众多科研工作者的努力,目前该方法已经逐步应用于动物医学领域,如奶牛胚胎性别检测以及上多种动物病源微生物的检测,发展前景可观。(本文来源于《中国畜禽种业》期刊2008年22期）
刘洵,程天印,王晓君[7]（2008）在《内引物在环媒恒温基因扩增技术中的作用研究》一文中研究指出目的研究内引物在环媒恒温基因扩增(LAMP)中的作用,确定利用LAMP的同一套特异性引物区别具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌基因的可行性。方法采用PCR介导定点突变法对沙门氏菌invA基因定点突变,使其T669→A669、T725→A725,用原LAMP特异性引物扩增含单核苷酸差异序列,观察扩增结果。结果制备的点突变模板C大小与预期值(1 371 bp)一致。LAMP扩增的伤寒沙门氏菌CMCC50098标准株DNA产物的电泳条带呈梯状,而扩增模板C未扩出反应产物。结论LAMP不能利用同一套引物扩增具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌,即可利用同一套引物区分这些病原菌。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2008年04期）
刘宗晓,刘荭,李惠芳,吕建强,田飞焱[8]（2007）在《一步法环媒恒温扩增(RT-LAMP)技术检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立和应用》一文中研究指出本文建立了一步法环媒恒温扩增技术(RT-LAMP)检测鲤春血症病毒(SVCV)的方法。根据SVCV糖蛋白基因的保守序列,设计两个内引物和两个外引物,通过简单易行的LAMP扩增技术,对SVCV进行检测。其扩增条件优化结果为63℃恒温作用60min。使用狗鱼弹状病毒(PFR)、传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)等弹状病毒检测其特异性,只有SVCV有扩增。灵敏度检测结果表明,LAMP检测与半巢式PCR(semi-nestedRT-PCR)扩增的灵敏度相同,比实时荧光PCR(real-timeRT-PCR)扩增的灵敏度低一个数量级。通过对不同检测方法的检测速度、灵敏度、特异性、成本、对仪器的要求等方面的比较,表明RT-LAMP检测技术快速、简单、易于操作,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合SVCV的现场检测和大规模监控。(本文来源于《2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编》期刊2007-11-01）
环媒恒温扩增技术论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
介绍了环媒恒温核酸扩增法的原理及特点,综述了近年来LAMP法在食品微生物检测的应用,对LAMP方法在食品微生物检测及其它领域中的应用前景做了展望。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
环媒恒温扩增技术论文参考文献
[1].董欢.柑橘溃疡病菌环媒恒温基因扩增技术的建立[D].湖南农业大学.2010
[2].周海莲,刘岑岑.环媒恒温核酸扩增技术及其应用[J].安徽农学通报(下半月刊).2009
[3].王彩霞,林祥梅,吴绍强.环媒恒温扩增技术及其在疫病检测中的应用[J].检验检疫学刊.2009
[4].董欢,邓欣,程天印.环媒恒温基因扩增技术文献计量分析[J].中国农学通报.2009
[5].李逢慧.复合环媒恒温基因扩增技术的研究[D].湖南农业大学.2009
[6].黄微,罗超,肖紫兰,冯帅媚,廖艳.环媒恒温基因扩增技术在动物医学上的应用概况[J].中国畜禽种业.2008
[7].刘洵,程天印,王晓君.内引物在环媒恒温基因扩增技术中的作用研究[J].中国病原生物学杂志.2008
[8].刘宗晓,刘荭,李惠芳,吕建强,田飞焱.一步法环媒恒温扩增(RT-LAMP)技术检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立和应用[C].2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编.2007