导读:本文包含了人肺非小细胞癌细胞株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:电离辐射,人肺非小细胞癌细胞,nm23-H1基因,表达
人肺非小细胞癌细胞株论文文献综述
赵阳辉,吕玉民,王平,韩林[1]（2008）在《电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446 nm23-H1基因表达的影响》一文中研究指出目的:探讨电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446nm23-H1基因表达的影响。方法:取对数生长期的H446细胞置60Co放射治疗机上单次照射,照射剂量分别为0、1、2、3、4和5Gy,继续培养至0、6、24和48 h后收集细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。分别用RT-PCR和Western blot检测nm23-H1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:照射后各剂量组nm23-H1mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.01),与剂量之间呈负相关(P<0.05),相关系数r分别≥0.785和≥0.66;mRNA的表达水平在0~24 h内随培养时间延长逐渐增加,48 h时有所降低。蛋白表达在0~6 h内没有明显变化,24 h达到高点,48 h有所降低。结论:电离辐射对H446细胞nm23-H1基因表达有一定的影响,随着辐射剂量的增大该基因mRNA和蛋白表达水平逐渐降低,并且在所有观察时间点均显示出一定的剂量效应关系。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2008年07期）
赵阳辉[2]（2008）在《电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446 nm23-H1基因表达的影响》一文中研究指出1背景与目的电离辐射在人们生产、生活的各个领域得到越来越广泛的应用,但放射线在造福人类的同时,过量照射能对人体造成有害的影响。快速的进行剂量估算显得尤为重要。目前应用的剂量估算方法有物理方法和生物方法,生物方法主要采用一些生物剂量指标估算受照剂量,最常用的生物剂量估算方法是外周血淋巴细胞染色体畸变分析。然而,这种方法也存在不能早期、快速和高通量估算剂量的缺陷。为此,诸多学者致力于寻求能够早期、快速和高通量的生物剂量估算方法。nm23基因(non-metastasis gene)是Steeg PS等于1988年通过消减杂交法从转移潜力不同的K-1735鼠黑色素瘤细胞中分离出来的第一个肿瘤转移抑制基因(metastasis suppressor gene)。该基因广泛存在于包括细菌、酵母、植物、果蝇、鼠和人类在内的多种生物物种中,是一个具有高度同源性的保守基因家族。目前,已发现的人类nm23家族成员达到了9个,分别是nm23-H1、nm23-H2、DR-nm23、nm23-H4、nm23-H5、nm23-H6、nm23-H7、nm23-H8、nm23-H9。其中编码核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)的nm23-H1基因研究最多,其在肿瘤的发生、发展及其转移中有重要作用。据报道nm23-H1基因的高表达与许多实体肿瘤的转移呈负相关,与肿瘤病人的预后呈正相关。有关电离辐射对nm23-H1基因表达影响的研究报道较少,主要集中在肿瘤放疗后该基因的表达变化,且其表达增高者预后较好,表明电离辐射对nm23基因表达变化有一定影响。但有关电离辐射离体照射对nm23-H1基因表达的影响尚缺系统研究。为此,本课题利用~(60)Coγ射线离体照射培养的人肺非小细胞癌细胞株H446,分别从mRNA和蛋白水平研究不同剂量γ射线对该细胞株nm23-H1基因表达变化的影响,探讨nm23-H1基因的表达变化作为电离辐射生物标志物的可行性,为建立新型电离辐射分子生物剂量计研究奠定实验基础。2方法2.1细胞的培养及处理人肺非小细胞癌细胞株H446置RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞置~(60)Co(钴60)放射治疗机上单次照射,分别接受0、1、2、3、4和5Gy剂量的γ射线照射,继续培养细胞0h、6h、24h和48h后收集细胞,备用。并以0Gy照射组做为对照组。2.2细胞总RNA的提取及反转录采用Trizol-氯仿-异丙醇方法提取细胞中的总RNA。测提取总RNA纯度及含量。使用反转录试剂盒进行逆转录反应。反转录得到的cDNA在-20℃保存,备用。2.3细胞总蛋白的提取及处理将收集的细胞于冰上加入PMSF,然后再加入细胞裂解液,裂解30min。于4℃,12000g离心5min。取上清分装于0.5ml离心管中。在λ为595nm处,用BSA做标准曲线,测定总蛋白含量。然后将蛋白与2×上样缓冲液混匀后100℃煮沸10min,离心,冻存备用。2.4 RT-PCR检测nm23-H1 mRNA的表达以β-actin基因作为内参照基因,以逆转录得到的cDNA用作模板进行PCR反应。取10μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像系统观察结果和拍照,并进行图像处理,计算电泳条带吸光度值作为PCR产物的相对含量。用nm23-H1吸光度与β-actin吸光度的比值表示nm23-H1 mRNA的相对表达量。2.5 Western blot测定nm23-H1蛋白的表达水平每个泳道上样量相同进行SDS-PAGE电泳。电泳结束后,将凝胶上的蛋白转移到硝酸纤维素膜上,转移上蛋白的硝酸纤维素膜经封闭液封闭后,分别顺序与一抗、二抗杂交,最后用DAB进行显色。用凝胶成像系统进行图像处理,分析目标的分子量和净光密度值。2.6统计学处理用SPSS 12.0对资料进行重复测量资料的方差分析,剂量变化趋势采用等级资料相关性分析。检验水准取α=0.05。3结果3.1辐射处理各组nm23-H1基因mRNA的表达量均明显低于对照组(P＜0.05);辐射处理后在0～5Gy剂量范围内nm23-H1随剂量的增高有降低趋势(P＜0.05),且与剂量之间呈负相关(r≥0.785,P＜0.05);测定时间和剂量之间有交互作用(P＜0.05);照射后,mRNA的量在0～24h内逐渐增高,48h时有所降低,而对照组未见其随时间变化趋势。3.2辐射处理后在0～5Gy剂量范围内nm23-H1蛋白表达水平随剂量增加有降低的趋势(P＜0.05),且与剂量之间呈负相关(r≥0.66,P＜0.05);对照组表达水平明显高于处理各组(P＜0.05);测定时间和剂量之间存在交互作用(P＜0.05);蛋白表达在0和6h之间没有显着差别(P＜0.05),24h达高峰,48h时有所降低,对照组不随时间变化。4结论4.1电离辐射能够降低H446细胞nm23-H1基因表达水平,随电离辐射剂量的增加而逐渐降低,且有一定的剂量效应关系。4.2 Nm23-H1蛋白可能不是分泌型蛋白。4.3 Nm23-H1基因表达变化作为电离辐射生物标志有一定的可行性。(本文来源于《郑州大学》期刊2008-06-13）
人肺非小细胞癌细胞株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
1背景与目的电离辐射在人们生产、生活的各个领域得到越来越广泛的应用,但放射线在造福人类的同时,过量照射能对人体造成有害的影响。快速的进行剂量估算显得尤为重要。目前应用的剂量估算方法有物理方法和生物方法,生物方法主要采用一些生物剂量指标估算受照剂量,最常用的生物剂量估算方法是外周血淋巴细胞染色体畸变分析。然而,这种方法也存在不能早期、快速和高通量估算剂量的缺陷。为此,诸多学者致力于寻求能够早期、快速和高通量的生物剂量估算方法。nm23基因(non-metastasis gene)是Steeg PS等于1988年通过消减杂交法从转移潜力不同的K-1735鼠黑色素瘤细胞中分离出来的第一个肿瘤转移抑制基因(metastasis suppressor gene)。该基因广泛存在于包括细菌、酵母、植物、果蝇、鼠和人类在内的多种生物物种中,是一个具有高度同源性的保守基因家族。目前,已发现的人类nm23家族成员达到了9个,分别是nm23-H1、nm23-H2、DR-nm23、nm23-H4、nm23-H5、nm23-H6、nm23-H7、nm23-H8、nm23-H9。其中编码核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)的nm23-H1基因研究最多,其在肿瘤的发生、发展及其转移中有重要作用。据报道nm23-H1基因的高表达与许多实体肿瘤的转移呈负相关,与肿瘤病人的预后呈正相关。有关电离辐射对nm23-H1基因表达影响的研究报道较少,主要集中在肿瘤放疗后该基因的表达变化,且其表达增高者预后较好,表明电离辐射对nm23基因表达变化有一定影响。但有关电离辐射离体照射对nm23-H1基因表达的影响尚缺系统研究。为此,本课题利用~(60)Coγ射线离体照射培养的人肺非小细胞癌细胞株H446,分别从mRNA和蛋白水平研究不同剂量γ射线对该细胞株nm23-H1基因表达变化的影响,探讨nm23-H1基因的表达变化作为电离辐射生物标志物的可行性,为建立新型电离辐射分子生物剂量计研究奠定实验基础。2方法2.1细胞的培养及处理人肺非小细胞癌细胞株H446置RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞置~(60)Co(钴60)放射治疗机上单次照射,分别接受0、1、2、3、4和5Gy剂量的γ射线照射,继续培养细胞0h、6h、24h和48h后收集细胞,备用。并以0Gy照射组做为对照组。2.2细胞总RNA的提取及反转录采用Trizol-氯仿-异丙醇方法提取细胞中的总RNA。测提取总RNA纯度及含量。使用反转录试剂盒进行逆转录反应。反转录得到的cDNA在-20℃保存,备用。2.3细胞总蛋白的提取及处理将收集的细胞于冰上加入PMSF,然后再加入细胞裂解液,裂解30min。于4℃,12000g离心5min。取上清分装于0.5ml离心管中。在λ为595nm处,用BSA做标准曲线,测定总蛋白含量。然后将蛋白与2×上样缓冲液混匀后100℃煮沸10min,离心,冻存备用。2.4 RT-PCR检测nm23-H1 mRNA的表达以β-actin基因作为内参照基因,以逆转录得到的cDNA用作模板进行PCR反应。取10μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像系统观察结果和拍照,并进行图像处理,计算电泳条带吸光度值作为PCR产物的相对含量。用nm23-H1吸光度与β-actin吸光度的比值表示nm23-H1 mRNA的相对表达量。2.5 Western blot测定nm23-H1蛋白的表达水平每个泳道上样量相同进行SDS-PAGE电泳。电泳结束后,将凝胶上的蛋白转移到硝酸纤维素膜上,转移上蛋白的硝酸纤维素膜经封闭液封闭后,分别顺序与一抗、二抗杂交,最后用DAB进行显色。用凝胶成像系统进行图像处理,分析目标的分子量和净光密度值。2.6统计学处理用SPSS 12.0对资料进行重复测量资料的方差分析,剂量变化趋势采用等级资料相关性分析。检验水准取α=0.05。3结果3.1辐射处理各组nm23-H1基因mRNA的表达量均明显低于对照组(P＜0.05);辐射处理后在0～5Gy剂量范围内nm23-H1随剂量的增高有降低趋势(P＜0.05),且与剂量之间呈负相关(r≥0.785,P＜0.05);测定时间和剂量之间有交互作用(P＜0.05);照射后,mRNA的量在0～24h内逐渐增高,48h时有所降低,而对照组未见其随时间变化趋势。3.2辐射处理后在0～5Gy剂量范围内nm23-H1蛋白表达水平随剂量增加有降低的趋势(P＜0.05),且与剂量之间呈负相关(r≥0.66,P＜0.05);对照组表达水平明显高于处理各组(P＜0.05);测定时间和剂量之间存在交互作用(P＜0.05);蛋白表达在0和6h之间没有显着差别(P＜0.05),24h达高峰,48h时有所降低,对照组不随时间变化。4结论4.1电离辐射能够降低H446细胞nm23-H1基因表达水平,随电离辐射剂量的增加而逐渐降低,且有一定的剂量效应关系。4.2 Nm23-H1蛋白可能不是分泌型蛋白。4.3 Nm23-H1基因表达变化作为电离辐射生物标志有一定的可行性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人肺非小细胞癌细胞株论文参考文献
[1].赵阳辉,吕玉民,王平,韩林.电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446nm23-H1基因表达的影响[J].中国卫生检验杂志.2008
[2].赵阳辉.电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446nm23-H1基因表达的影响[D].郑州大学.2008