导读:本文包含了热激删除论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:矮牵牛,重组酶基因,异戊烯基转移酶基因,基因删除
热激删除论文文献综述
李岩,赵德刚[1]（2011）在《ipt基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基因删除》一文中研究指出本研究主要探讨ipt基因对矮牵牛遗传转化不定芽诱导影响及拟南芥热激启动子hsp18.2驱动重组酶基因flp的热诱导外源基因删除表达载体在矮牵牛中的基因删除效果。本研究中将植物表达载体pBin-hsp18.2:flp-35S:ipt及对照载体pBin-hsp18.2:flp遗传转化矮牵牛,以获得转基因植株,分析比较不定芽的诱导和转基因植株进行的热激基因删除。研究结果表明,ipt基因可促进矮牵牛遗传转化过程中不定芽的诱导,其不定芽诱导率为21.5%,显着高于对照的8.7%。在44℃,6h,热激6次的条件下,转基因矮牵牛植株表型恢复正常,经GUS蛋白表达分析及PCR、RT-PCR检测,证明外源基因已经被删除。转基因矮牵牛基因删除效率最高可达43.8%。本研究为ipt基因在一些遗传转化困难植物转基因中的应用奠定了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2011年02期）
秦淑丽[2]（2009）在《选择标记基因热激删除型双元表达载体构建与功能验证》一文中研究指出自1983年首次获得转基因植株以来,转基因技术被广泛用于改良植物的遗传性状。为了把转基因细胞和非转基因细胞分离开来,在转基因过程中往往引入了选择标记基因。选择标记基因的引入,使得转基因材料具有抗某种抗生素或化学物质的能力,如含有nptⅡ基因的植株具有抗卡那霉素的特性。然而,利用选择标记基因至少存在4个方面的问题:1.对植物细胞的增殖和分化有不利的影响,2.对环境存在潜在危害,3.在食用上有一定的安全风险和消费心理障碍,4.不便于采用已成熟的条件进行重复转化。事实上,在获得转基因细胞或植株后,选择标记基因已不再需要,可以予以删除。目前删除选择标记基因的方法主要有共转化、转座子系统、同源重组和特异位点重组酶系统(R/RS、Cre/LoxP、FLP/FRT)等。其中,尤以特异位点重组酶系统研究的最为深入,但仍存在系统不稳定、删除困难或删除不完全等问题,有待进一步完善。本研究利用严谨性热激启动子HSP70m控制Cre/LoxP删除系统、利用ipt基因促进转基因材料在不加细胞分裂素的培养基上进行不定芽分化、利用Kan抗性基因和ipt基因对转基因细胞进行双重选择以期减少假阳性,而在获得转基因试管苗后热激删除Kan和ipt选择标记等基因,使因ipt基因表达所导致的畸形苗恢复正常生长,从而获得无选择标记基因的转基因植株。主要实验结果如下:1、克隆了ipt和cre基因采用高保真的pfu DNA聚合酶和特异引物,分别从农杆菌菌株C58和大肠杆菌菌株BM25.8的基因组中扩增出ipt基因和cre基因,TA克隆后测序,结果与GenBank中公布的序列一致。2、构建了具有Kan和ipt选择标记基因与Cre/LoxP热激删除系统的植物基因表达载体成功构建了pQSL05、pQSL15和pQSL16叁个植物基因双元表达载体。其中,pQSL05中仅含有35S-ipt而无Kan抗性基因,用以分析单独的ipt基因作为选择标记基因时的筛选效果。pQSL15中含有Kan抗性基因和Cre/LoxP系统,用以建立Kan抗性基因的删除技术并分析删除效果。pQSL16中含有Kan抗性基因、野生型ipt基因和热激启动子控制Cre/LoxP删除系统,用以获得ipt促进转化子分化、进行Kan与ipt双重筛选、热激诱导删除等在烟草材料上使用的具体技术参数。3、在烟草上成功验证了所构建的选择标记基因热激删除系统通过叶盘转化法转化烟草,分别得到叁种不同表型的转基因植物。(1)用pQSL05转化烟草,得到了经PCR扩增鉴定的转基因植株,而且在不加BA的培养基上,ipt基因即能促进大量不定芽产生,但由于ipt基因组成性过量表达,生成的不定芽均为畸形,并且很难生根;因此,组成性表达的ipt难以单独作为选择标记基因使用。(2)用pQSL15转化烟草,得到的转基因植株根部在常温下可以在荧光显微镜下观察到有GFP绿色荧光,说明该载体的T-DNA已经成功整合到烟草的基因组中。经过热激处理后,烟草转基因植株在含有Kan的培养基上逐渐白化而死亡,而在不含Kan的培养基上生长正常且观察不到GFP绿色荧光。提取常温下的试管苗和热激后产生无绿色荧光的试管苗的总DNA,用特异引物扩增,在常温下的转基因试管苗的总DNA中可以得到gfp和nptⅡ基因的片段,而在热激后的试管苗的总DNA得不到以上的片段,表明由HSP70m控制的Cre/LoxP系统能通过热激有效删除了选择标记基因。(3)用pQSL16转化烟草,得到了与转pQSL05相似畸形性状的转基因试管苗。通过热激处理,畸形转基因试管苗在含有Kan的培养基上慢慢地白化死去,而在不含Kan的培养基中渐渐恢复正常生长,且恢复了生根能力,在荧光显微镜下没有观察到GFP绿色荧光,而且经PCR分子鉴定结果表明,通过热激删除得到了无选择标记基因的转基因植株。(本文来源于《西南大学》期刊2009-05-30）
李岩[3]（2006）在《热激启动子驱动基因删除及ipt基因遗传转化杜仲的研究》一文中研究指出杜仲(Eucommia ulmoides Oliv．)系杜仲科Eucommiaceae杜仲属Eucommia植物，是我国特有的珍稀保护树种，既是传统名贵中药材之一，也是温带最具开发前景的胶源植物。为了通过转基因技术进一步发掘杜仲胶用及药用价值，探索基因构建Hsp_(18.2)：flp-35S：ipt在遗传转化困难植物转基因及快速繁殖中的运用，本研究完善了杜仲再生体系，建立了农杆菌介导的杜仲遗传转化体系，通过农杆菌介导法将该基因构建转化矮牵牛、烟草和杜仲，研究了ipt基因对植株转化及生长发育的影响，探索了热激启动子Hsp_(18.2)驱动的基因删除系统在烟草、矮牵牛中的删除条件及效率，取得如下主要结果： 1、农杆菌介导含基因删除系统表达载体对矮牵牛、烟草的遗传转化及基因热激删除的研究 利用农杆菌介导法将Hsp_(18.2)：flp及Hsp_(18.2)：flp-35S：ipt分别转化矮牵牛(Petunia axilaris)及烟草(Nicotiana tabacum cv．Xanthin)，在100mg／L kan的筛选压下进行筛选获得转基因植株。 ipt基因表达有效促进了进烟草、矮牵牛遗传转化过程中不定芽的诱导，转ipt基因矮牵牛能够产生大量分枝，易于增殖培养。但转ipt基因的植株生根受到明显抑制。 由于表达载体含有基因删除系统，采用44℃、6 h热激6次，先后对309株转基因矮牵牛及191株转基因烟草进行热激，通过GUS检测。有61株矮牵牛，42株烟草没有检测到GUS活性。其中有2株转基因矮牵牛ipt06-01及ipt11-03在热激后表型发生明显变化，其新生叶片叶柄变长，叶型恢复，同时根部开始发育，植株恢复顶端优势并开始长高，形态学特征逐步呈现出野生型特征。通过PCR及RT-PCR检测，结果表明外源基因己被删除。(本文来源于《贵州大学》期刊2006-05-01）
热激删除论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
自1983年首次获得转基因植株以来,转基因技术被广泛用于改良植物的遗传性状。为了把转基因细胞和非转基因细胞分离开来,在转基因过程中往往引入了选择标记基因。选择标记基因的引入,使得转基因材料具有抗某种抗生素或化学物质的能力,如含有nptⅡ基因的植株具有抗卡那霉素的特性。然而,利用选择标记基因至少存在4个方面的问题:1.对植物细胞的增殖和分化有不利的影响,2.对环境存在潜在危害,3.在食用上有一定的安全风险和消费心理障碍,4.不便于采用已成熟的条件进行重复转化。事实上,在获得转基因细胞或植株后,选择标记基因已不再需要,可以予以删除。目前删除选择标记基因的方法主要有共转化、转座子系统、同源重组和特异位点重组酶系统(R/RS、Cre/LoxP、FLP/FRT)等。其中,尤以特异位点重组酶系统研究的最为深入,但仍存在系统不稳定、删除困难或删除不完全等问题,有待进一步完善。本研究利用严谨性热激启动子HSP70m控制Cre/LoxP删除系统、利用ipt基因促进转基因材料在不加细胞分裂素的培养基上进行不定芽分化、利用Kan抗性基因和ipt基因对转基因细胞进行双重选择以期减少假阳性,而在获得转基因试管苗后热激删除Kan和ipt选择标记等基因,使因ipt基因表达所导致的畸形苗恢复正常生长,从而获得无选择标记基因的转基因植株。主要实验结果如下:1、克隆了ipt和cre基因采用高保真的pfu DNA聚合酶和特异引物,分别从农杆菌菌株C58和大肠杆菌菌株BM25.8的基因组中扩增出ipt基因和cre基因,TA克隆后测序,结果与GenBank中公布的序列一致。2、构建了具有Kan和ipt选择标记基因与Cre/LoxP热激删除系统的植物基因表达载体成功构建了pQSL05、pQSL15和pQSL16叁个植物基因双元表达载体。其中,pQSL05中仅含有35S-ipt而无Kan抗性基因,用以分析单独的ipt基因作为选择标记基因时的筛选效果。pQSL15中含有Kan抗性基因和Cre/LoxP系统,用以建立Kan抗性基因的删除技术并分析删除效果。pQSL16中含有Kan抗性基因、野生型ipt基因和热激启动子控制Cre/LoxP删除系统,用以获得ipt促进转化子分化、进行Kan与ipt双重筛选、热激诱导删除等在烟草材料上使用的具体技术参数。3、在烟草上成功验证了所构建的选择标记基因热激删除系统通过叶盘转化法转化烟草,分别得到叁种不同表型的转基因植物。(1)用pQSL05转化烟草,得到了经PCR扩增鉴定的转基因植株,而且在不加BA的培养基上,ipt基因即能促进大量不定芽产生,但由于ipt基因组成性过量表达,生成的不定芽均为畸形,并且很难生根;因此,组成性表达的ipt难以单独作为选择标记基因使用。(2)用pQSL15转化烟草,得到的转基因植株根部在常温下可以在荧光显微镜下观察到有GFP绿色荧光,说明该载体的T-DNA已经成功整合到烟草的基因组中。经过热激处理后,烟草转基因植株在含有Kan的培养基上逐渐白化而死亡,而在不含Kan的培养基上生长正常且观察不到GFP绿色荧光。提取常温下的试管苗和热激后产生无绿色荧光的试管苗的总DNA,用特异引物扩增,在常温下的转基因试管苗的总DNA中可以得到gfp和nptⅡ基因的片段,而在热激后的试管苗的总DNA得不到以上的片段,表明由HSP70m控制的Cre/LoxP系统能通过热激有效删除了选择标记基因。(3)用pQSL16转化烟草,得到了与转pQSL05相似畸形性状的转基因试管苗。通过热激处理,畸形转基因试管苗在含有Kan的培养基上慢慢地白化死去,而在不含Kan的培养基中渐渐恢复正常生长,且恢复了生根能力,在荧光显微镜下没有观察到GFP绿色荧光,而且经PCR分子鉴定结果表明,通过热激删除得到了无选择标记基因的转基因植株。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
热激删除论文参考文献
[1].李岩,赵德刚.ipt基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基因删除[J].基因组学与应用生物学.2011
[2].秦淑丽.选择标记基因热激删除型双元表达载体构建与功能验证[D].西南大学.2009
[3].李岩.热激启动子驱动基因删除及ipt基因遗传转化杜仲的研究[D].贵州大学.2006