导读:本文包含了胶毒霉素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胶毒霉素,肿瘤相关成纤维细胞,凋亡,TGF-β通路
胶毒霉素论文文献综述
高峰[1]（2015）在《胶毒霉素对肿瘤相关成纤维细胞生物学效应的影响及其机制初探》一文中研究指出研究背景及目的：肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是最常见的原发性肝肿瘤。许多国家HCC的发病率逐年上升,死亡率居高不下。研究认为,肝脏微环境的改变已经成为HCC的病理标志之一,80%以上的HCC是由慢性肝炎-肝纤维化-肝硬化“叁部曲”演变而来,同时炎症反应和细胞外基质沉积很大程度上改变了肝脏微环境。近些年,高通量的基因组分析已经逐渐阐明了与HCC发生发展密切相关的基因网络以及信号转导通路,某些重要基因成为肿瘤治疗药物的靶点。但是,HCC的复发和转移仍然困扰着我们,其原因可能与肝癌微环境相关。因此,寻找靶向微环境的药物是我们面临的挑战。肿瘤相关成纤维细胞(tumor associated fibroblasts, TAFs)是肿瘤微环境的主要细胞组分之一,它是由肝星状细胞和肝成纤维细胞等基质细胞演变而来,参与维持肿瘤的标志性特征。同时,TAFs可以增强肿瘤细胞的耐药能力。既往研究发现,胶毒霉素(Gliotoxin)可通过诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)凋亡而显着减轻肝纤维化。低浓度的Gliotoxin (0.1 μM)即可诱导HSC凋亡,而对正常肝细胞无明显损伤,只有当浓度达到30-50 μM时方可引起正常肝细胞坏死。我们近期的实验结果证实低浓度Gliotoxin(IC50=143.1 nM)即可显着抑制TAFs增殖。既然Gliotoxin对肝星状细胞(TAFs的主要来源之一)有很强的杀伤效果,我们推测Gliotoxin可能通过作用于微环境从而对HCC有治疗作用。为了验证这一推论,本研究将从以下两方面展开：首先,分离培养并鉴定人HCC来源的TAFS,观察Gliotoxin对TAFs生物学特性的影响以及凋亡诱导作用；进一步检测Gliotoxin对TGF-β通路及其下游基因的作用；建立TAFs与肝癌细胞株的共培养体系,观察Gliotoxin对共培养细胞的作用其次,建立DEN诱导原发性肝癌模型,研究Gliotoxin对HCC的治疗作用。该研究将肿瘤微环境作为治疗HCC的靶点之一,可能为临床上HCC的治疗提供新的理论依据。实验方法：1.Gliotoxin对TAFs的作用：①分离并鉴定TAFs,将人HCC组织切成2 mm3大小,胶原酶Ⅳ消化、梯度离心后得到TAFs,进一步纯化成纤维细胞。细胞免疫荧光检测α-SMA、Vimentin、Desmin的表达。②Gliotoxin对TAFs生物学效应的影响,体外研究不同浓度Gliotoxin对TAF增殖及迁移的作用：将TAFs以3×103/孔的数量置于96孔板中,加入不同浓度的Gliotoxin培养6天,第6天单荧光素报告基因检测TAFs的增殖情况,计算IC50；选定Gliotoxin合适浓度(100nM)溶于含3%胎牛血清(FBS)的培养基中并加入24孔板,计数5×104的TAFs接种于Transwell小室,24小时后结晶紫固定、拍照,利用ImagePro软件计算TAFs的迁移情况。2.Gliotoxin对TAFs凋亡的诱导作用：①100nM的Gliotoxin处理TAFs后,利用Caspase3荧光试剂盒检测不同时间点TAFs由Caspase3的表达,通过计算Caspase3活性增高倍数评价Gliotoxin对TAFs凋亡的作用。②100nM的Gliotoxin处理TAFs,4小时后收集细胞。Annexin V与碘化吡啶(PI)标记TAFs,流式细胞仪检测凋亡情况,重点分析Gliotoxin对早期凋亡的影响。③不同浓度(0、30 nM、100n M、300 nM)的Gliotoxin处理TAFs,在不同时间点(15 min、30min、 60min、120min、180 min)检测ATP的表达量,分析Gliotoxin对ATP的消耗能力。3.Gliotoxin对TAFs作用机制的初步探讨：①TAFs培养基中加入100nM的Gliotoxin,48小时后提取细胞RNA,使用逆转录试剂盒将RNA逆转为cDNA, Real-time PCR检测TAFs相关标记物-SMA、Vimentin、Desmin、纤维细胞相关蛋白(FAP)以及TGF-β通路下游基因(C-myc、Smad5、AP-1、SP-1、Bcl-2)的表达。②TAFs培养基中分别加入0 nM、30nM、100 nM、300 nM的Gliotoxin,4小时后收集蛋白,定量后western-blot检测TGF-β通路Smad蛋白家族的活化情况；另一组TAFs于24小时后检测TGF-β通路报告基因3TP的荧光表达。4.Gliotoxin对TAFs-肝肿瘤细胞共培养系统的作用：①Gliotoxin处理TAFs后,收集细胞培养上清,同时获取正常培养基、成纤维细胞株(normal fibroblasts, NFs)、TAFs培养上清作为条件培养基。将Hep3B细胞(3x103/孔)分到96孔板,加入条件培养基,CCK-8法检测细胞增殖情况。②24孔板下层加入正常、NFs、TAFs、TAFs-Gliotoxin的条件培养基,transwell小室中加入SMMC-7721细胞(5×104),24小时后结晶紫染色,拍照、计数迁移细胞。5. Gliotoxin对DEN肝癌模型的治疗作用：①Gliotoxin治疗肝癌的效果评估,22周处死所有大鼠,大鼠肝脏给予门静脉生理盐水灌注,取出肝脏。观察肝脏外观的变化。取组织制作石蜡切片,切片后进行HE染色,评估Gliotoxin对肝癌的治疗效果。②Gliotoxin对肝脏纤维化的影响,利用Masson和天狼星红对肝脏组织进行染色,观察胶原的分布情况。图像扫描并计算胶原分布面积；免疫组织化学检测组织中a-SMA的表达。6.统计学处理：数据采用SPSS 16.0统计软件包进行分析,结果以X±SD表示。多组间采用One-Way ANOVA方差分析,P<0.05为统计结果具有显着性差异。实验结果：Gliotoxin具有抑制TAFs的作用：①细胞免疫荧光检测发现TAFs表达α-SMA、Desmin与Vimentin,其中a-SMA与vimentin在所有TAFs中均表达。而Desmin只在部分TAFs中表达。②Gliotoxin浓度低于50 nM时对细胞无明显的杀伤效应。当Gliotoxin浓度在50-400 nM之间时,TAFs的存活率随着药物浓度的升高而迅速降低。根据药敏试验的曲线得到Gliotoxin对TAFs的IC50为147.1 nM.③ Gliotoxin可以抑制TAFs的迁移。30 nM的Gliotoxin即对TAFs的迁移具有一定的抑制作用。100 nM的Gliotoxin处理TAFs可以使TAFs的迁移数量降低至对照组的一半。当Gliotoxin浓度提升至300 nM后,迁移抑制率约为90%。④Gliotoxin促进TAFs凋亡。1)100nM的Gliotoxin处理TAFs后,Caspase3活性检测结果发现,15min开始Caspase3的活性已经开始增加,并且具有一定时间依赖性。180分钟是Caspase3活性最高,为对照组的25倍以上。2)100nM的Gliotoxin处理TAFs,4小时后利用流式细胞仪检测TAFs凋亡情况,结果显示早期凋亡由10.83%增加至16.23%,说明Gliotoxin可以促进TAFs的凋亡。3)ATP含量测试实验表明60分钟时,300nM Gliotoxin处理的TAFs开始消耗ATP,此时中低浓度组的ATP含量无明显变化。120分钟后,100nM Gliotoxin处理TAFs的ATP含量开始下降,而300nM浓度Gliotoxin处理组ATP含量降低幅度已经超过50%。4小时后中、高浓度组的ATP持续维持在低水平。⑤Gliotoxin抑制TAFs中TGF-P通路的活化不同浓度Gliotoxin处理TAFs,4小时后收集蛋白检测TGF-β通路活化情况,我们发现Smad2与Smad3表达无明显差别,但是Smad2/3磷酸化水平显着下降。另外,我们利用TGF-β通路报告基因检测该通路的活化情况,发现Gliotoxin可以抑制TGF-β通路报告基因荧光素酶的含量。利用Real-time PCR检测TGF-β通路下游基因表达,发现Gliotoxin处理后通路下游基因C-myc、Bcl-2以及AP-1表达下调。同时TAFs标记物α-SMA、Desmin、 Vimentin与FAP表达下调。⑥Gliotoxin对TAFs-肝肿瘤细胞共培养系统的作用。1)我们利用NFs、TAFs、TAFs-Gliotoxin的细胞培养上清处理Hep3B细胞,在不同时间点检测肿瘤细胞的数量,结果发现NFs、TAFs均可促进肿瘤细胞株的增殖,但是TAFs的促增殖能力更强,如果TAFs经Gliotoxin处理,它的促增殖能力有所下降,与NFs水平相近。2)NFs促进肿瘤细胞株SMMC-7721迁移的能力较弱,TAFs则显着增强7721细胞的迁移。Gliotoxin可以部分抑制TAFs的促迁移作用。Gliotoxin对DEN肝癌模型的治疗作用：①Gliotoxin治疗肝癌的效果评估。22周处死所有大鼠,取出肝脏。大体观察各处理组肝脏的变化。发现模型组和溶剂对照组肝脏已经出现多发的肝癌结节,或表面出现肿瘤肿块,同时肝硬化程度较重。Gliotoxin治疗组大鼠未见肿瘤肿块。HE染色后评估Gliotoxin对肝癌的治疗效果。结果显示：模型组有6只大鼠被诊断为肝细胞癌,两只大鼠为重度不典型增生；DMSO组5只大鼠被诊断为肝细胞癌,其余为不典型增生。肝细胞癌多数为中高分化,两组中各有一只为低分化肿瘤；Gliotoxin治疗组(0.5mg/kg与1.5mg/kg)各有1只大鼠被诊断为高分化癌,其余均为不典型增生和肝硬化。②Gliotoxin对肝脏纤维化的影响。利用Masson和天狼星红对肝脏组织进行染色,观察胶原的分布情况。结果显示模型组及DMSO组胶原的表达未见明显差异,Gliotoxin治疗组特殊染色面积显着下降。免疫组织化学检测检测α-SMA的表达,发现α-SMA在模型组与治疗组的表达出现显着差异,Gliotoxin治疗组α-SMA表达范围局限于汇管区,而模型组α-SMA表达范围较大,已经延伸至肝细胞所在区域。结论：1. Gliotoxin抑制TAFs的增殖、迁移,促进TAFs的凋亡。2. Gliotoxin对TAFs的抑制作用与TGF-β通路有关。3. Gliotoxin抑制实验性肝癌的进展。(本文来源于《兰州大学》期刊2015-03-01）
孙红斌[2]（2006）在《高氧对人中性粒细胞NADPH氧化酶的影响及胶毒霉素的抑制作用》一文中研究指出中性粒细胞是人体防御病原体入侵的第一道防线，它在吞噬异物或受刺激活化时，释放超氧阴离子等活性氧的现象称呼吸爆发。中性粒细胞通过呼吸爆发产生的活性氧能杀死入侵的细菌和肿瘤细胞，但也能造成正常组织的损伤，如心肌、脑等器官缺血(缺氧)再灌注时，活性氧所致损伤。NADPH氧化酶是中性粒细胞呼吸爆发过程中的关键酶之一，近年来随着分子生物学与免疫学的进展，NADPH氧化酶的结构、生物学功能及其活化机理与调控因素倍受关注。临床实验发现，高浓度氧能使肺功能损害，氧自由基是产生上述伤害的主要原因。胶毒霉素(Gliotoxin)是白色念珠菌等真菌产生的毒素，研究证明它是强有力的抗革兰氏阳性菌的抗生素，对抑制机体免疫、促进细胞凋亡有重要的作用，对中性粒细胞内NADPH氧化酶活性有明显的抑制作用，对氧自由基过多所致伤害性疾病有潜在的重要意义。在PMA的刺激下，NADPH氧化酶的细胞化学定位、生物化学检测等，已有不少文献报道，但在高浓度氧作用下，其活性变化尚未见报道。本实验用健康男性青年志愿者肘前静脉血，采用kobayashi法分离出中性粒细胞，将其悬液分为实验组和对照组。实验组：将所得的中性粒细胞悬液用高浓度氧充气30 min，然后分为PMA组和Gliotoxin+PMA组，前者把中性粒细胞只用PMA刺激，后者把中性粒细胞先用Glioyoxin浸渍后再用PMA刺激，所得中性粒细胞分别作电镜细胞化学、荧光显微镜和荧光生物化学检测。对照组不对细胞悬液充氧，其它同实验组。以SPSS11.5统计软件进行统计分析，所有数据均以(?)±S表示，各组数据用随机区组设计中的方差分析和均数间的相互比较处理。荧光显微镜和电镜观察结果显示，充氧+PMA组中性粒细胞分泌颗粒腔面有大量电子致密颗粒沉淀；对照PMA组电子致密颗粒次之；充氧+Gliotoxin+PMA组只偶见有致密颗粒存在；而对照Gliotoxin+PMA组中性粒细胞则基本看不到电子致密颗粒沉淀。荧光酶标仪检测结果分别为4624.2045±324.5822；2484.8409±41.1539；1256.2045±76.5873；808.1136±34.0449。和细胞化学检测结果基本相吻合，经检验，P＜0.01，有显着统计学意义。本实验提示高浓度氧对人体中性粒细胞NADPH氧化酶的活性有刺激作用，而Gliotoxin对NADPH氧化酶的活性则有明显抑制，这对有关疾病的治疗和抗氧化药物的筛选提供了实验数据，有着潜在的应用价值。(本文来源于《同济大学》期刊2006-02-01）
汪文[3]（2005）在《肝脏缺血再灌注损伤中氧自由基的产生及胶毒霉素的抑制作用》一文中研究指出在进行较大范围的肝叶切除或处理严重的肝外伤时，通常需要肝脏血流的暂时阻断。肝脏缺血缺氧达到一定程度和时间将导致肝细胞损伤，但是在恢复肝脏血流以后，肝细胞反而遭到比缺血缺氧时更严重的损伤。这种肝脏血供的恢复却不能使缺血损伤的组织细胞恢复功能，反而加重损伤的现象，称为肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury，HIRI)。近年来肝脏缺血再灌注损伤发生的机制以及防治已经成为研究的热点。研究认为，在缺血再灌注损伤中，氧自由基所致损伤最为重要。在此基础上肝脏缺血再灌注损伤防治药物的研究也逐步深入，很多研究已经证明如维生素E、维生素C，辅酶Q、生物制剂SOD等药物，具有强烈的抗组织器官缺血再灌注损伤作用。胶毒霉素(Gliotoxin)作为真菌代谢产物ETP(epipolythiodioxopiperazine)家族中的一员由包括烟曲霉和白色念珠菌在内的一大类真菌产生，并起抑制抗原呈递、介导巨噬细胞凋亡和抑制转录因子核因子—κB(NF—κB)的活性等作用。在体内与ROS(Reactive Oxygen Species)一样也有介导细胞调亡，免疫调节作用。本实验采用健康SD大鼠，由复旦大学上海医学院动物中心提供，体重200—250克。实验动物随机分为叁组，每组10只。建立大鼠缺血再灌注损伤模型。对照组仅游离肝脏暴露肝门，但不阻断血流。缺血再灌注组，行左、中肝阻断30分钟，再灌注45分钟。缺血再灌注+Gliotoxin组，行左、中肝阻断30分钟，再灌注45分钟。并在制作电镜标本时加入Gliotoxin。取叁组左、中肝组织制作电镜标本，采用细胞化学方法作NADPH Oxidase检测，并用X-射线能谱分析的方法对沉淀颗粒进行元素分析。用生物化学方法检测肝脏组织中的丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、抗超氧阴离子活力。以SPSS11.5统计软件进行统计分析，所有数据均以(?)±S表示，组内样本均数比较采用t检验，P＜0.05为有统计学意义，P＜0.01为有显着统计学意义。电镜观察结果显示，对照组肝细胞分泌颗粒内偶见有电子致密颗粒；缺血再灌注组肝细胞分泌颗粒腔面有大量电子致密颗粒沉淀；而缺血再灌注+Gliotoxin组肝细胞则罕有电子致密颗粒沉淀。缺血再灌注组肝组织内的丙二醛、黄嘌呤氧化酶、抗超氧阴离子活力均较对照组明显提高。大鼠左、中肝阻断血流30分钟后再灌注是研究大鼠肝脏缺血再灌注损伤简单、实用的动物模型；Gliotoxin对大鼠肝脏缺血再灌注中的NADPH Oxidase活性有明显的抑制作用；大鼠肝脏缺血再灌注损伤后，丙二醛、黄嘌呤氧化酶的水平和机体总抗超氧阴离子的能力较缺血再灌注前有显着增长。(本文来源于《同济大学》期刊2005-05-01）
胶毒霉素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
中性粒细胞是人体防御病原体入侵的第一道防线，它在吞噬异物或受刺激活化时，释放超氧阴离子等活性氧的现象称呼吸爆发。中性粒细胞通过呼吸爆发产生的活性氧能杀死入侵的细菌和肿瘤细胞，但也能造成正常组织的损伤，如心肌、脑等器官缺血(缺氧)再灌注时，活性氧所致损伤。NADPH氧化酶是中性粒细胞呼吸爆发过程中的关键酶之一，近年来随着分子生物学与免疫学的进展，NADPH氧化酶的结构、生物学功能及其活化机理与调控因素倍受关注。临床实验发现，高浓度氧能使肺功能损害，氧自由基是产生上述伤害的主要原因。胶毒霉素(Gliotoxin)是白色念珠菌等真菌产生的毒素，研究证明它是强有力的抗革兰氏阳性菌的抗生素，对抑制机体免疫、促进细胞凋亡有重要的作用，对中性粒细胞内NADPH氧化酶活性有明显的抑制作用，对氧自由基过多所致伤害性疾病有潜在的重要意义。在PMA的刺激下，NADPH氧化酶的细胞化学定位、生物化学检测等，已有不少文献报道，但在高浓度氧作用下，其活性变化尚未见报道。本实验用健康男性青年志愿者肘前静脉血，采用kobayashi法分离出中性粒细胞，将其悬液分为实验组和对照组。实验组：将所得的中性粒细胞悬液用高浓度氧充气30 min，然后分为PMA组和Gliotoxin+PMA组，前者把中性粒细胞只用PMA刺激，后者把中性粒细胞先用Glioyoxin浸渍后再用PMA刺激，所得中性粒细胞分别作电镜细胞化学、荧光显微镜和荧光生物化学检测。对照组不对细胞悬液充氧，其它同实验组。以SPSS11.5统计软件进行统计分析，所有数据均以(?)±S表示，各组数据用随机区组设计中的方差分析和均数间的相互比较处理。荧光显微镜和电镜观察结果显示，充氧+PMA组中性粒细胞分泌颗粒腔面有大量电子致密颗粒沉淀；对照PMA组电子致密颗粒次之；充氧+Gliotoxin+PMA组只偶见有致密颗粒存在；而对照Gliotoxin+PMA组中性粒细胞则基本看不到电子致密颗粒沉淀。荧光酶标仪检测结果分别为4624.2045±324.5822；2484.8409±41.1539；1256.2045±76.5873；808.1136±34.0449。和细胞化学检测结果基本相吻合，经检验，P＜0.01，有显着统计学意义。本实验提示高浓度氧对人体中性粒细胞NADPH氧化酶的活性有刺激作用，而Gliotoxin对NADPH氧化酶的活性则有明显抑制，这对有关疾病的治疗和抗氧化药物的筛选提供了实验数据，有着潜在的应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胶毒霉素论文参考文献
[1].高峰.胶毒霉素对肿瘤相关成纤维细胞生物学效应的影响及其机制初探[D].兰州大学.2015
[2].孙红斌.高氧对人中性粒细胞NADPH氧化酶的影响及胶毒霉素的抑制作用[D].同济大学.2006
[3].汪文.肝脏缺血再灌注损伤中氧自由基的产生及胶毒霉素的抑制作用[D].同济大学.2005