导读:本文包含了外壳蛋白克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:灰飞虱,HiPV病毒,VP1基因,原核表达
外壳蛋白克隆论文文献综述
朴君,许春玲,朴敬爱,周益军,李硕[1]（2019）在《灰飞虱内生病毒HiPV外壳蛋白VP1多克隆抗体的制备及在病毒检测中的应用》一文中研究指出【目的】前期发现水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)可与介体灰飞虱Laodelphax striatellus体内的Hi PV病毒(Himetobi P virus,Hi PV)互作。本研究旨在制备Hi PV外壳蛋白VP1的多克隆抗体,并评估其在Hi PV病毒检测中的可用性,以为深入研究Hi PV-RSV和Hi PV-灰飞虱的互作机制提供技术支持。【方法】以RT-PCR方法从灰飞虱成虫体内扩增Hi PV主要外壳蛋白基因VP1,然后将VP1基因亚克隆至原核表达载体p ET-32a中,构建表达载体p ET-VP1。将重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3),经IPTG诱导、Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得重组蛋白,免疫新西兰大白兔,制备抗体。【结果】从灰飞虱体内克隆到774 bp的Hi PV外壳蛋白基因VP1,经原核表达、纯化,获得分子量约47. 5 kD的融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得VP1多克隆抗体。该抗体间接ELISA效价达1∶819 200,与Hi PV外壳蛋白VP1有特异性反应,而与灰飞虱蛋白无交叉反应。利用该多克隆抗体建立了检测单头灰飞虱成虫体内Hi PV的Western blot和免疫捕获RT-PCR方法,检测结果显示Hi PV在携带和不携带RSV的灰飞虱高亲和性群体内均广泛存在。【结论】利用制备的Hi PV的VP1多克隆抗体可特异性检测灰飞虱体内Hi PV。本研究为Hi PV病毒的快速检测以及Hi PV-RSV互作、Hi PV-灰飞虱互作研究提供了技术支持。(本文来源于《昆虫学报》期刊2019年07期）
默宁,石岩,秦蕾,李云洲,梁燕[2]（2019）在《陕西杨凌地区番茄斑萎病毒外壳蛋白基因的克隆与分析》一文中研究指出番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是世界上危害最大的十大病毒之一,为了确定陕西杨凌地区的番茄感染TSWV情况,采集该地区4份疑似感染TSWV的番茄样品,通过表型观察以及PCR分子鉴定进行分析。结果显示,2份材料扩增出234bp的特异性条带,表明样品感染了TSWV。采用同源克隆方法获得了杨凌地区757bpTSWV的外壳蛋白基因(CP),其与西班牙TSWV分离物同源性最高,为99%,而与昆明的TSWV分离物亲缘关系较远。(本文来源于《中国蔬菜》期刊2019年03期）
杨菊梅,马建忠,潘博,李印武[3]（2018）在《草莓镶脉病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及鉴定》一文中研究指出为实现草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的简单和快速检测,应用生物信息学方法分析了SVBV外壳蛋白的线性抗原表位及其理化性质,以大肠杆菌的优势密码子对所预测的优势抗表原位进行设计并合成,同时进行了最佳异源表达条件优化。结果表明,第218~238位的氨基酸残基序列为SVBV外壳蛋白的优势抗原表位,其编码片段为5-AE。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测结果表明,重组融合蛋白的分子量约为24.8 kD,与其理论分子量20.5 kD基本一致。异源表达优化的结果表明,当IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度为40℃、诱导时间为4 h时,重组融合蛋白的表达量最高,为23.6 mg/L。Western blot结果表明重组融合蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。串联质谱结果表明,5-AE肽段氨基酸残基序列正确。(本文来源于《植物保护学报》期刊2018年03期）
万晴姣,李欲轲,姚东校,乙引,洪鲲[4]（2017）在《马铃薯X病毒外壳蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出采用RT-PCR技术从感染马铃薯X病毒贵州分离物PVX-GZ的普通烟叶片中扩增出该病毒的外壳蛋白基因CP。测序结果表明,该CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基。构建原核表达载体p ET32a(+)-CP,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25℃条件下以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthivgalactopyranoside,简称IPTG)诱导表达重组蛋白基因;SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为45 ku;以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1∶12 800;间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunsorbent assay,简称ELISA)检测显示,该多抗能与PVX病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他5种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。结果为病毒血清学检测试剂盒的研发奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2017年23期）
张婧[5]（2017）在《叁种植物病毒外壳蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及检测应用》一文中研究指出现代植物病毒学的发展历经了几百年,新时代的农业生产要求越来越高,但是形势却趋于复杂。这要求植物病毒检测手段以及操作方法要快速、灵敏、准确与简便。其中血清学检测方法就是众多检测方法中的一种行之有效的检测技术。本研究针对目前国内发生较为频繁的叁种植物病毒病,利用病毒外壳蛋白原核表达的方法制备多克隆抗体,并建立了相应的病毒检测体系,以用于后续叁种病毒的检测鉴定工作。番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus)的成员。其基因组是二分体线形正单链RNA,外壳蛋白基因位于RNA2上。ToCV寄主种类多种多样且覆盖范围广泛,全世界范围内都曾暴发流行,造成严重的经济损失。由于其传毒媒介的广泛性,以及感病植株初始症状的不明显,导致了其难以防治。鉴别ToCV的方法有多种,大致有目测法、RT-PCR检测方法、组织印迹杂交法及血清学检测方法。本研究利用山东寿光田间采集的病样,利用RT-PCR的方法将扩增的病毒外壳序列与载体连接来构建番茄褪绿病毒外壳蛋白基因表达载体,用原核表达纯化过的重组蛋白作为抗原,多次免疫兔子的方法制备获得其多抗血清,收集的血清进一步进行效价的检测。确定血清效价后,可以运用Western blot的方法去检测病样,以确定血清的特异性。最终结果显示,该多抗血清的效价为1:50,并具有一定的特异性。对ToCV的田间检测鉴定具有实际应用价值。菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virius,BCMV)是属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的,它在全球都有分布。其基因组结构也是具有Potyvirus基因组结构特征,病毒的基因组只有一条链的RNA。BCMV的传播途径有很多种,蚜虫、种子、花粉、机械等等都是病毒的传播方式。本研究的毒源来自于山东济宁的田间病样,构建外壳基因的表达的载体,同样的方法表达纯化蛋白免疫兔子获得血清测定效价。该血清的效价测定结果为1:1000。同时,Western blot检测BCMV的的结果也能够证明该血清具有特异性,可实际运用于BCMV的检测鉴定。辣椒褪绿病毒(Capsicum chlorosis virius,CaCV)是番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的一个暂定种,属于西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)血清组。首先是澳大利亚报道出发现该病毒,随后泰国、印度接连报道发现其侵染情况发生,直至大范围内发现病害传播暴发。本研究中运用的生物材料是从广东省采集的蜘蛛兰病样,RT-PCR检测确定为辣椒褪绿病毒后构建其病毒外壳原核表达的载体,并通过免疫新西兰雄兔制备了多克隆抗体。最终获得的多抗血清效价为1:20000,Western blot检测CaCV的结果也表明该血清具有较好的特异性,可运用于该病毒的检测鉴定。(本文来源于《南京农业大学》期刊2017-06-01）
曾蓉,徐丽慧,高士刚,戴富明[6]（2017）在《甜瓜黄斑病毒外壳蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其应用》一文中研究指出本研究将甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)外壳蛋白基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达该蛋白,免疫家兔制备其多克隆抗体。本文通过多克隆抗体,建立了间接ELISA(ID-ELISA)、免疫捕获PCR(IC-RT-PCR)、Western blot及dot-ELISA的MYSV检测方法,以上各种方法均能特异的检测MYSV。检测结果表明:ID-ELISA方法检测效价大于1∶6 400;Western blot检测灵敏度达到1∶320(W/V,g·mL-1);Dot-ELISA检测灵敏度达到1∶80(W/V,g·mL-1),且用牙签等非实验室工具便能检测该病毒,能高效地应用于田间样品的检测。(本文来源于《植物病理学报》期刊2017年05期）
杨菊梅,马建忠,王永刚,邓子兵,魏艳[7]（2017）在《草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及其免疫原性分析》一文中研究指出应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和Snap Gene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27~38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列(AE)。AE片段克隆至E.coli表达载体pET32a(+)的Eco RⅠ和XhoⅠ位点,获得重组质粒pET32a(+)-AE。含AE片段的开放阅读框长561 bp,编码了一个187氨基酸残基的重组融合蛋白,理论分子质量为20.29kD。重组质粒pET32a(+)-AE分别在E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta中进行了诱导表达和条件优化。重组融合蛋白在E.coli Rosetta中的最佳表达条件为1.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)、35℃诱导表达2 h,产率为13.22 mg/L;在E.coli BL21(DE3)中的最佳表达条件是为0.5 mmol/L IPTG、30℃诱导表达2 h,产率为9.55 mg/L。重组融合蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明,其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位肽段AE。AE重组融合蛋白经Ni~(2+)亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后,免疫产蛋鸡。从免疫鸡所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,Ig Y),Dot-Blot检测抗体结合活性。结果表明,所提取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白。这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性。(本文来源于《食品科学》期刊2017年16期）
胡京昂,万秀娟,李自娟,应芳卿,黄文[8]（2016）在《番茄褪绿病毒郑州分离物外壳蛋白基因的克隆与序列分析》一文中研究指出近年来郑州番茄产区发现疑似番茄褪绿病毒(To CV)侵染引起的叶脉间褪绿症状,为了确定病原种类,采集典型症状的叶片,提取RNA,根据已知的To CV基因组序列设计特异性引物To CVCPF/To CVCPR,采用RT-PCR方法对样品进行检测,扩增得到约750 bp大小的目的条带,对获得的特异性片段回收、克隆、测序后进行序列同源性及系统进化分析。结果显示,郑州病样的病毒分离物外壳蛋白基因由774 bp组成,其核苷酸和氨基酸序列与To CV其他分离物同源性均在96%以上;进化分析表明,郑州分离物与河北、天津分离物亲缘关系最近。造成郑州番茄产区褪绿症状的病原为To CV。(本文来源于《河南农业科学》期刊2016年09期）
宛柏杰,林文武,吴锦鸿,陈晓敏,吴祖建[9]（2016）在《水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6和外壳蛋白P8多克隆抗体的制备及其应用》一文中研究指出利用RT-PCR的方法从感染水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因S6和外壳蛋白基因S8,通过Gateway系统进行原核表达,获得表达载体p DEST17-Pns6和p DEST17-P8,将表达载体转化E.coli Rosetta,经IPTG诱导表达后获得分子质量约为59和46 ku含HIS标签的融合蛋白.以诱导表达的目的蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体.结果表明,Western blot检测制备的Pns6和P8抗体可特异性检测RDV,间接ELISA测定Pns6和P8抗体的效价均约为6 400倍,并建立了可靠、灵敏、特异的Dot-blot ELISA方法检测RDV.以上研究表明,RDV运动蛋白和外壳蛋白抗体均可应用于该病毒在田间的大规模调查和检测.(本文来源于《福建农林大学学报(自然科学版)》期刊2016年01期）
何丹,海利力·库尔班,玉山江·麦麦提,李继阳,杨渡[10]（2015）在《西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因克隆及序列分析》一文中研究指出【目的】研究新疆甜瓜主栽区西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白的分类地位,以及与国内外分离株亲缘关系。【方法】田间采集具有西瓜花叶病毒症状的幼嫩叶片,利用改良的TRIZOL总RNA提取法获取RNA,进一步分离纯化、克隆及测序,将测序结果利用BLAST、DNAMAN 5.0、CLUSTALX、MEGA 5.0 EXPASY、TMHMM等软件进行碱基和氨基酸序列比对,以及疏水性平均值、脂肪系数、亲缘关系等分析。【结果】序列比对发现8个地区WMV病毒外壳蛋白核酸序列的5'端保守性较高,碱基和氨基酸序列相似性分别达到86.25%和93.01%,存在部分碱基和氨基酸突变,相似性较高。【结论】通过分子进化树可得出新疆8个分离物之间亲缘性关系较近,同源性较高,与国内外其它地区的亲缘性关系较远、同源性较低。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2015年10期）
外壳蛋白克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是世界上危害最大的十大病毒之一,为了确定陕西杨凌地区的番茄感染TSWV情况,采集该地区4份疑似感染TSWV的番茄样品,通过表型观察以及PCR分子鉴定进行分析。结果显示,2份材料扩增出234bp的特异性条带,表明样品感染了TSWV。采用同源克隆方法获得了杨凌地区757bpTSWV的外壳蛋白基因(CP),其与西班牙TSWV分离物同源性最高,为99%,而与昆明的TSWV分离物亲缘关系较远。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外壳蛋白克隆论文参考文献
[1].朴君,许春玲,朴敬爱,周益军,李硕.灰飞虱内生病毒HiPV外壳蛋白VP1多克隆抗体的制备及在病毒检测中的应用[J].昆虫学报.2019
[2].默宁,石岩,秦蕾,李云洲,梁燕.陕西杨凌地区番茄斑萎病毒外壳蛋白基因的克隆与分析[J].中国蔬菜.2019
[3].杨菊梅,马建忠,潘博,李印武.草莓镶脉病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及鉴定[J].植物保护学报.2018
[4].万晴姣,李欲轲,姚东校,乙引,洪鲲.马铃薯X病毒外壳蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J].江苏农业科学.2017
[5].张婧.叁种植物病毒外壳蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及检测应用[D].南京农业大学.2017
[6].曾蓉,徐丽慧,高士刚,戴富明.甜瓜黄斑病毒外壳蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其应用[J].植物病理学报.2017
[7].杨菊梅,马建忠,王永刚,邓子兵,魏艳.草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及其免疫原性分析[J].食品科学.2017
[8].胡京昂,万秀娟,李自娟,应芳卿,黄文.番茄褪绿病毒郑州分离物外壳蛋白基因的克隆与序列分析[J].河南农业科学.2016
[9].宛柏杰,林文武,吴锦鸿,陈晓敏,吴祖建.水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6和外壳蛋白P8多克隆抗体的制备及其应用[J].福建农林大学学报(自然科学版).2016
[10].何丹,海利力·库尔班,玉山江·麦麦提,李继阳,杨渡.西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因克隆及序列分析[J].新疆农业科学.2015