导读:本文包含了抗体文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪圆环病毒2型,羊驼,纳米抗体文库,抗体库容量
抗体文库论文文献综述
王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤[1]（2019）在《猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出为构建猪圆环病毒2型(PCV2)特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB-vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×1010CFU/m L;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2019年11期）
姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文[2]（2019）在《黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出黑色素瘤作为一种多发于皮肤部位的恶性肿瘤,严重危害着动物和人们的健康。与传统抗体比较,单域抗体具有结构简单、分子量小、免疫原性弱等特点,使其在疾病的诊断及治疗方面具有广阔的应用空间。本研究以B16-F10细胞蛋白质为研究对象,通过反复冻融与超声破碎相结合的方式获得B16-F10蛋白质作为抗原,免疫成年雄性羊驼。采用噬菌体单域抗体展示技术,构建了质量优良的B16-F10细胞蛋白质单域抗体免疫文库,其库容为5.76×10~(10),VHH重组率为96%,文库丰度为3.00×10~(10)个/mL。该结果为研究黑色素瘤的生物学特性提供了新思路,同时也为后续筛选B16-F10单域抗体奠定了基础。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2019年11期）
杜鲁涛,赵巧辉,田晓平,吴学炜,付光宇[3]（2018）在《CA50靶向抗体文库的构建筛选及应用评价》一文中研究指出目的获得针对CA50靶点的高亲和力、高特异性抗体,建立体外诊断CA50检测试剂盒,提高肿瘤诊断的特异性和灵敏度。方法 PCR技术获得单链抗体(ScFv)基因并克隆入pcomb3XSS噬粒载体,通过电转化获得ScFv噬菌体抗体库。用CA50特性识别表位LST a(唾液酸化-乳糖-N-四糖a)的抗原淘洗筛选,获得针对CA50靶点的特异性抗体基因序列。随机挑选克隆测序,验证ScFv抗体库的多样性。利用重迭PCR技术获得人鼠嵌合抗体基因,经过抗体表达纯化及配对筛选建立双抗体夹心法CA50检测试剂盒。同时收集临床诊断阳性样本54例和临床阴性对照样本146例,利用该研究建立的CA50检测试剂盒与罗氏CA50试剂盒进行平行对照,评价其检测相关性。结果建立噬菌体抗体库的容量为2. 5×108,具有较好的多样性。24个PCR鉴定阳性克隆测序,结果为20个正确插入且插入序列均不相同。经过3轮淘洗筛选出5个阳性克隆,经过抗体配对筛选建立的CA50试剂盒临床样本检测结果与罗氏的临床相关性(r=0. 98)。结论通过噬菌体展示抗体库技术成功筛选出了针对CA50的高特异性、高亲和力抗体,为CA50检测在相关肿瘤辅助诊断中的应用提供可能性。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2018年10期）
范明惠[4]（2018）在《IBDV强、弱毒株病毒样颗粒免疫原性的比较及噬菌体抗IBDV抗体文库的构建》一文中研究指出传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的急性、致死性疾病,主要攻击禽类重要的中枢免疫器官法氏囊,能够引起免疫抑制进而导致严重的继发感染,最终造成鸡的死亡,危害家禽养殖业的发展。疫苗是防控该病的有效方法,传统的疫苗存在一些难以避免的缺点,弱毒苗的广泛使用易导致毒株突变,而强毒灭活苗存在灭活不彻底等生物安全隐患。近年兴起的病毒样颗粒(VLP)等亚单位疫苗能克服上述缺点,诱导机体产生良好的免疫反应。目前很多鸡场也采用卵黄抗体紧急治疗IBD发病鸡群,在一定程度上降低了经济损失。卵黄抗体虽然制备方式简单,但是具有纯度差和抗体滴度低等缺点,采用基因工程方法制备高纯度的治疗性抗体是病毒性疾病治疗的发展趋势。VP2是IBDV唯一的衣壳蛋白,位于病毒衣壳的外部,能够刺激机体产生中和抗体,决定IBDV的抗原性,是制备VLP疫苗的重要靶标。然而IBDV强、弱毒VP2诱导免疫反应存在差异,为筛选更有效的IBDV VLP候选疫苗,本研究在IBDV超强毒株Gx株VLP制备的基础上,扩增IBDV人工致弱毒株Gt株的VP2基因序列,将其克隆在酵母表达载体pAO815上构建成pAO815-NHisGtVP2质粒,将其电转至酵母菌株SMD1168后,经过5天的诱导表达,成功表达了Gt VP2蛋白。通过疏水层析纯化的方法制备了纯度高的弱毒VLP,建立了更高效的VLP制备方法。琼脂扩散试验结果表明制备的Gt VLP具有良好的抗原性。将Gx和Gt VLP免疫SPF鸡,比较评价了二者对IBDV超强毒的免疫保护效果。强、弱毒VLP免疫组血清中和抗体滴度在免疫5周内始终维持在较高的水平,表明二者均能诱导产生持续的免疫反应。强毒VLP免疫组能够产生100%的攻毒保护率,攻毒后法氏囊状态良好。而弱毒VLP免疫组能够产生80%的攻毒保护率,攻毒后鸡的法氏囊萎缩明显。这些结果表明,免疫强毒VLP比免疫弱毒VLP对鸡群抵抗IBDV超强毒株具有更好的保护效果。噬菌体展示技术是筛选抗体的有效技术手段,为了筛选有效的IBD治疗性抗体,本研究从免疫过Gx VLP的鸡全血中分离外周血淋巴细胞,从中扩增出抗体的轻链可变区(VL区)与重链可变区(VH区),通过柔性Linker将二者连接。将其克隆进噬菌粒构建了pCANTAB5E-scFv质粒,转化之后建立了鸡源噬菌体抗IBDV抗体文库。通过叁轮的淘选富集以及ELISA鉴定,最终测序得到了5株阳性抗体序列。表达纯化后的单链抗体的中和活性有待进一步验证。本研究比较了强、弱毒病毒样颗粒的免疫保护效果,为临床上亚单位疫苗的研究和应用提供了一定的参考依据,建立了噬菌体抗IBDV抗体文库并筛选到了5株抗体序列,为IBDV高效抗体的筛选与表达奠定了基础,这些研究对IBDV的防控具有重要意义。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-06-01）
丁金花,李启峰,马旭升,肖红冉,肖盛中[5]（2018）在《牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库构建与筛选》一文中研究指出旨在获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)特异性纳米抗体。通过用BVDV-E0重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞。利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与BVDV-E0蛋白结合的噬菌体,对所得VHH序列进行测序和基因比对。用ELISA筛选出抗BVDV-E0的高亲和力纳米抗体,并验证纳米抗体的亲和力和活性。结果成功构建了插入率为86%、库容量为1.3×1011 cfu的噬菌体表达文库,经过筛选获得5个BVDV-E0阳性单克隆,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的BVDV-E0纳米抗体,经亲和力的鉴定获得2个不同的高亲和力的VHH基因,并且能结合人工抗原E0,还能够被竞争抗体所阻断。研究结果为用于组装检测BVDV试剂盒和研制BVDV疫苗奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2018年05期）
张文帅,曾晓燕,迟莹,刘静娴,焦永军[6]（2018）在《严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)人源性单链抗体文库的构建》一文中研究指出目的构建人源性严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)单链抗体(scFv)文库,并用SFTSV颗粒对文库进行初步筛选。方法提取8例SFTS恢复期患者外周血淋巴细胞的总RNA,逆转录为cDNA;并以此为模板PCR扩增人源抗体轻链库(Vκ和Vλ)和重链库(VH),再经过重迭PCR随机拼接成scFv基因文库,最后克隆入噬菌粒载体pComb3XSS中,将重组噬菌粒电转化感受态XL1-Blue细胞,得到SFTSV抗体文库,检测文库库容及多样性,并用SFTSV颗粒作抗原对抗体文库进行初步筛选。结果构建的人源SFTSV抗体文库的库容为2.8×10~7,测序结果表明文库多样性好,经过初步筛选获得21个克隆的人源化scFv,具有与SFTSV颗粒结合的活性。结论成功构建了人源抗SFTSV的scFv文库。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2018年05期）
郭雁,吉日木图[7]（2017）在《双峰驼纳米抗体文库构建技术的概述》一文中研究指出骆驼科动物体内存在一种只含重链不含轻链的天然重链抗体,重链抗体和普通的抗体相比虽然缺失了轻链,但是依然保留结合抗原的能力。克隆骆驼体内重链抗体的可变区后,得到的仅由一个重链可变区组成的单域抗体,称为驼源纳米抗体。由于纳米抗体具有分子质量小,易表达、免疫原性弱、穿透性强、靶向性强、人源化简单、高水溶性和稳定性等特点,使其在基础研究、药物开发、疾病的诊断与治疗等领域拥有广阔的前景。抗体库是指通过DNA重组技术将全套抗体可变区基因,在适当的展示平台实现功能表达的抗体分子片段的集合。利用抗体文库可作为通用的技术平台的特点,以进一步获得特定抗原的抗体。本文将对国内外的双峰驼纳米抗体文库构建技术进行归纳比较,为今后建库技术的选择奠定基础。(本文来源于《“一带一路”骆驼科技、产业与文化国际研讨会暨第五届中国骆驼产业发展大会论文集》期刊2017-09-24）
刘竞帆[8]（2017）在《羊驼来源的天然未免疫及免疫后纳米抗体文库的构建》一文中研究指出抗体是在抗原的刺激下,由机体免疫系统中的浆细胞产生的,可以与相应抗原发生特异性结合的一种免疫球蛋白。纳米抗体是一种由骆驼科动物体内重链抗体的可变区基因克隆得到的重组单域抗体,是目前已知的能与抗原结合的最小片段。其分子量小,结构简单,仅由重链可变区一个结构域组成,即可正常发挥抗体的功能。此外,经过人工改造的纳米抗体亲和力高于普通抗体,组织穿透力强,对人体的免疫原性弱,并且可以比较容易地进行改造和扩增,因此可以代替普通抗体,发挥更佳的作用。纳米抗体可以使用多种纯化方式获得,其中最为常用的就是噬菌体展示技术。噬菌体展示技术是一种传统的生物学技术,利用该技术进行抗体筛选的研究已有不少进展。使用分子克隆技术,构建噬菌体展示纳米抗体文库,即可从中筛选得到特异性的纳米抗体。得到的噬菌体克隆可以通过感染大肠杆菌来表达纳米抗体,大大降低了抗体生产的成本。目前人们常用的抗体来源大多为小鼠和人类,纳米抗体的来源则大多为骆驼或美洲驼。羊驼的体内也存在着天然的重链抗体,并且该动物的体积小,性格温顺,易饲养,被认为是纳米抗体的最佳来源之一。羊驼来源的纳米抗体研究在国外已有一些进展,但在国内研究较少。在本文中,我们使用未免疫的天然羊驼外周血淋巴细胞为来源,构建了库容量达1.4*109 c.f.u.的天然非免疫的纳米抗体文库(Na?ve library)。此外,我们还用融合了Flag标签和His标签的GFP蛋白对羊驼进行免疫,并使用免疫后的羊驼外周血淋巴细胞为来源,构建了库容量达1.7*1010 c.f.u.的免疫后纳米抗体文库(GFP-Flag-His immune library),且达到了较高的序列多样性水平,可以用于筛选任何一种动物的任何蛋白的特异性纳米抗体。同时,我们使用GFP-Flag-His免疫后文库进行了初步的筛选工作,成功富集到两条蛋白序列,证实了该文库确实可以用于纳米抗体的富集,并成功在课题组内建立起噬菌体展示的实验技术平台。一些人类端粒的相关蛋白虽有商品化抗体在售,但抗体亲和力和特异性均有限。目前,我们已经成功纯化得到足够进行纳米抗体筛选工作的端粒结合蛋白TRF1、TRF2和RAP1,使用这些蛋白作为抗原,在本文构建的羊驼来源纳米抗体文库中,可以筛选得到针对端粒结合蛋白的特异性纳米抗体,并可以根据研究需要对其进行改造,最终得到的具有更高效价和更低成本的纳米抗体对端粒领域而言将会是绝佳的研究工具。(本文来源于《中山大学》期刊2017-05-11）
秦秀峰[9]（2017）在《全合成纳米抗体文库的设计、构建及鉴定》一文中研究指出合成抗体文库是选用经过优化的抗体序列作为骨架区,与天然的或人工合成的互补决定区(Complementarity determining regions,CDRs)拼接构建而成,具有设计灵活,可控性强,库容量大以及多样性好的优点。合成抗体文库已成为天然文库和免疫文库的补充,是筛选高亲和力抗体的重要来源,对于抗体药物的研发有显着意义。本课题设计、构建了全合成纳米抗体文库并进行了初步评价,以HIF-1α-PAS-B为抗原,从抗体文库中筛选特异性纳米抗体,验证抗体文库的生物学活性。首先,通过对天然纳米抗体文库大规模测序以及测序结果的比对,确定要构建的全合成纳米抗体文库骨架区序列和CDRs区氨基酸数目,随后合成VHH模板序列并组装至pCantab 5E噬菌粒载体上。其次,用NNK随机化的方法在叁个CDRs区随机引入突变,通过重迭延伸PCR获得VHH全长片段并克隆至pCantab5E噬菌粒载体上,电转大肠杆菌TG1获得全合成纳米抗体文库,从库容、抗体基因插入率以及多样性等方面评价抗体文库。经鉴定,构建的全合成纳米抗体文库多样性良好,库容为4.2×10~(10) CFU,VHH基因插入正确率为82%。最后,为了验证抗体文库的生物学活性,制备了HIF-1α-PAS-B蛋白作为抗原,应用噬菌体展示技术从全合成纳米抗体文库中筛选得到特异性纳米抗体。(本文来源于《天津大学》期刊2017-05-01）
张秋丽,祁艳华,宋瑞雪,张阳,周景明[10]（2016）在《抗猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)噬菌体抗体文库的构建及筛选》一文中研究指出背景:猪圆环病毒是迄今发现的最小的病毒之一,现已知它包括PCV1和PCV2两个血型,其中PCV2是致病性病毒,它与很多疾病的发生有关。猪圆环病毒现已成为世界范围内危害养猪业最大的病原体之一,因此PCV2的早期诊断对于PCV2的防控至关重要。目的:本研究利用噬菌体展示技术构建猪圆环病毒Ⅱ型噬菌体抗体文库并做了初步筛选研究。方法:将PCV2的ORF2区的基因表达的蛋白作为免疫原免疫小鼠,取血清效价较好的小鼠脾脏,提取总RNA,并反转录成cDNA,以cDNA为模板扩增抗体的VH和VL片段。利用重迭延伸PCR将VH与VL用(Gly4ser)3多肽连接起来构建成sc Fv片段,将噬菌粒载体PCANTAB-5e用sfiⅠ和NotⅠ酶切后与sc Fv构成重组载体,转入到大肠杆菌TG1中,菌液PCR、质粒PCR、酶切鉴定以及序列测序鉴定。随后用辅助噬菌体M13K07辅助感染构成噬菌体文库,利用不同浓度包被原的亲和力筛选方法,筛选出针对猪圆环病毒的噬菌体抗体。结果:SDS-PAGE、ELISA等鉴定结果显示:PCV2的ORF2融合蛋白26KD,叁只小鼠效价均达到106,总RNA提取完整,目的条带VH和VL片段大约300bp到400bp之间显示正确,菌液PCR、重组质粒PCR以及酶切鉴定结果显示转化成功,每轮筛选都有富集现象,18号克隆鉴定为阳性。结论:抗猪圆环病毒Ⅱ型噬菌体文库构建成功,成功筛选出特异性的猪圆环病毒单链抗体克隆,为抗PCV2单链抗体的制备以及病毒的检测奠定了基础。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2016-11-04）
抗体文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
黑色素瘤作为一种多发于皮肤部位的恶性肿瘤,严重危害着动物和人们的健康。与传统抗体比较,单域抗体具有结构简单、分子量小、免疫原性弱等特点,使其在疾病的诊断及治疗方面具有广阔的应用空间。本研究以B16-F10细胞蛋白质为研究对象,通过反复冻融与超声破碎相结合的方式获得B16-F10蛋白质作为抗原,免疫成年雄性羊驼。采用噬菌体单域抗体展示技术,构建了质量优良的B16-F10细胞蛋白质单域抗体免疫文库,其库容为5.76×10~(10),VHH重组率为96%,文库丰度为3.00×10~(10)个/mL。该结果为研究黑色素瘤的生物学特性提供了新思路,同时也为后续筛选B16-F10单域抗体奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗体文库论文参考文献
[1].王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤.猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定[J].中国兽药杂志.2019
[2].姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文.黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报.2019
[3].杜鲁涛,赵巧辉,田晓平,吴学炜,付光宇.CA50靶向抗体文库的构建筛选及应用评价[J].山东大学学报(医学版).2018
[4].范明惠.IBDV强、弱毒株病毒样颗粒免疫原性的比较及噬菌体抗IBDV抗体文库的构建[D].中国农业科学院.2018
[5].丁金花,李启峰,马旭升,肖红冉,肖盛中.牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库构建与筛选[J].动物医学进展.2018
[6].张文帅,曾晓燕,迟莹,刘静娴,焦永军.严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)人源性单链抗体文库的构建[J].细胞与分子免疫学杂志.2018
[7].郭雁,吉日木图.双峰驼纳米抗体文库构建技术的概述[C].“一带一路”骆驼科技、产业与文化国际研讨会暨第五届中国骆驼产业发展大会论文集.2017
[8].刘竞帆.羊驼来源的天然未免疫及免疫后纳米抗体文库的构建[D].中山大学.2017
[9].秦秀峰.全合成纳米抗体文库的设计、构建及鉴定[D].天津大学.2017
[10].张秋丽,祁艳华,宋瑞雪,张阳,周景明.抗猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)噬菌体抗体文库的构建及筛选[C].第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编.2016