导读:本文包含了抗旱蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小麦,核氧还蛋白(NRX),互作蛋白,Y2H
抗旱蛋白论文文献综述
田淑媛,程洁,杨杰,李瑞博,张云瑞[1]（2019）在《小麦核氧还蛋白TaNRX1与TaPDI、TaTRX-h、TaPP2Ac的互作分析及抗旱功能研究》一文中研究指出硫氧还蛋白(thioredoxin, TRX)是一类具有二硫化物活性中心的功能多样化蛋白质,在植物抗逆等方面具有重要作用。核氧还蛋白(nucleoredoxin, NRX)是TRX超家族的新成员,在小麦(Triticum aestivum)中的研究发现其与抗旱性相关,但是抗旱性机制尚不明确。因此,探究小麦核氧还蛋白TaNRX1的互作蛋白,有助于深入揭示TaNRX1的作用机制。根据前人研究和生物信息学分析,本研究预测得到3个TaNRX1-D的候选互作蛋白:蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase, PDI)、h型硫氧还蛋白(TRX-h)和蛋白磷酸酶2A催化亚基(protein phosphatase 2A catalytic subunit, PP2Ac),并从干旱耐受型小麦品种'晋麦47'中分别克隆得到TaPDI-A、TaPDI-B、TaPDI-D、TaTRX-h-A、TaPP2Ac-B和TaPP2Ac-D的ORF序列。进一步利用酵母双杂交(yeast two-hybrid, Y2H)和双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)对互作蛋白进行验证,结果表明,3个蛋白质与TaNRX1-D均存在互作关系,互作部位主要为细胞核和细胞膜。构建酵母(Saccharomyces cerevisiae) pYES2过表达载体进行甘露醇模拟干旱胁迫实验,结果表明,TaPDI、Ta TRX-h和TaPP2Ac对甘露醇胁迫均具有正向调控作用。本研究结果可为深入揭示Ta NRX1-D抗旱机制提供参考依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
闫明佳[2]（2019）在《苹果锌指蛋白MdZFP2在苹果抗旱、耐寒中的功能研究》一文中研究指出我国是世界上最大的苹果生产国和消费国,但干旱和低温制约着黄土高原产区苹果产业的健康发展。利用苹果自身的基因资源,提高苹果的抗旱、耐寒能力具有重要意义。本研究从苹果品种‘金冠’中克隆到一个锌指蛋白基因,将其命名为MdZFP2。通过序列分析、亚细胞定位和qRT-PCR等方法,对MdZFP2的序列特征、细胞定位和表达特性等进行了探究,通过酵母双杂交技术筛选出2个与MdZFP2互作的蛋白,并利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证了该互作。此外,通过获得MdZFP2的干扰(RNAi)及过表达苹果转基因植物,对MdZFP2在响应苹果干旱和低温胁迫时的功能进行了初步探究。研究结果如下:1.本研究克隆到一个MdZFP2基因,位于5号染色体,开放编码阅读框为912 bp,编码303个氨基酸,蛋白分子量大小为33.93 kD。序列分析表明MdZFP2具有保守的锌指蛋白DNA结合结构域DOF。亚细胞定位结果表明MdZFP2定位于细胞核,属于典型的转录因子。MdZFP2基因启动子上含有两个响应MeJA的顺式作用元件和一个响应ABA信号途径的ABRE。2.组织特异性表达结果表明,MdZFP2在苹果的根、茎、叶中均有不同程度的表达,根系中MdZFP2表达量远高于茎和叶。MdZFP2响应干旱和低温胁迫,PEG处理6小时MdZFP2基因的表达量为处理前的6倍,自然干旱处理‘金冠’中的MdZFP2基因表达量随着处理时间延长而上升;而低温抑制MdZFP2的表达,4oC处理第12小时MdZFP2表达量降至最低,仅为处理0小时的0.17倍。除此之外MdZFP2也响应茉莉酸JA、水杨酸SA激素处理,表达量随两种处理时间延长而下降。3.构建了MdZFP2-pGBKT7载体,发现MdZFP2蛋白具有自激活活性,经过对其蛋白截断后获得无自激活的片段MdZFP2-510aa-BD。用MdZFP2-510aa-BD片段作为诱饵筛选MdZFP2的互作蛋白,获得了两个候选蛋白MdMIEL1和MdSNF1β2,前者编码一个RING型E3连接酶,后者则是构成SnRK1磷酸化复合体的亚基之一。酵母双杂交和双分子荧光互补技术证实了该蛋白互作。另外,通过染色质免疫共沉淀实验对MdZFP2下游靶基因进行了预测。4.构建MdZFP2干扰和过表达载体并转入苹果组培苗GL-3,获得了MdZFP2的RNAi和过表达植物。对RNAi转基因苹果植物进行长期干旱处理,发现长期干旱后MdZFP2 RNAi植物株高、茎粗、光合作用参数、地上部与地下部的导水率和生物量等显着低于GL-3,表明MdZFP2 RNAi植物对长期干旱处理更为敏感。随后用叶片自然失水实验进行验证,发现RNAi植物的叶片失水率显着高于GL-3,而过表达植株表现出相反的趋势。由此得出结论,MdZFP2参与苹果对干旱胁迫的响应,正调控苹果的抗旱性。另外,通过离子渗透率实验探究低温下RNAi转基因苹果植物叶片的耐寒性,发现在-4oC及-6oC时,RNAi植物叶片的相对离子渗透率均显着低于GL-3,表明MdZFP2 RNAi植物的耐寒性更强。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
杨佳[3]（2018）在《沙地柏种质生长和抗旱性状评价及特有Zn~(2+)结合蛋白SvCML1功能研究》一文中研究指出获得有明确生理功能的基因是作物分子育种的重要基础。丰富的野生植物资源是天然基因文库。现代高通量测序技术使开发野生植物基因资源成为可能。沙地柏是分布于我国干旱半干旱地区的柏科匍匐灌木,具有耐旱生、耐土壤贫瘠的生理特性,在我国北方生态绿化工程中广泛应用。本论文在收集我国北方沙地柏种质资源的基础上,对沙地柏种质进行了生长和抗旱性评价;进一步通过转录组测序技术,以期鉴定到沙地柏特有Ca~(2+)结合蛋白编码基因,但是意料之外的是,我们发现了一个预测为含有Ca~(2+)结合结构域的钙调素类蛋白SvCML1是Zn~(2+)特异结合蛋白,对Sv CML1在植物Zn~(2+)依赖生长方面的生理功能进行了探索。本研究工作主要内容和结论如下:(1)从内蒙古四个地区,以及甘肃、青海、陕西叁个沙地柏原生态分布区,收集到总共221份种质资源,在扩繁基地生长3年半以后,对49个株系匍匐茎长度进行测量,每个株系至少取10株进行测量,并计算其平均值及标准差,结果表明来自陕西衡山、内蒙古陶利的沙地柏,生长最快,枝条长度1.5到2米;来自内蒙古贺兰山、甘肃天祝祁连山的沙地柏生长速度较慢,枝条长度0.5-1米。(2)2015年开始,分别对其中49个株系进行干旱处理6和11个月,同时以复水1个月以后材料为对照,收集扦插苗的地上部分进行抗旱指标的测定。每个株系,至少选择3株长势一致的枝条采样测量。对其枝条进行了脯氨酸(Pro)和丙二醛(MTA)含量测定,以及过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活测定。基本抗旱能力判断依据为:在干旱处理条件下,Pro含量,SOD和POD活性,升高幅度越高,MDA含量升高幅度越低,植物越抗旱;反之,Pro含量,SOD和POD活性,升高幅度越小,MDA含量升高幅度越高,植物越干旱敏感。按照这个标准,大多数株系的四个指标之间没有明显规律,无法判断抗旱性。(3)具有明显抗干旱特征的株系包括来自内蒙古图克的#7,干旱处理以后,MDA没有显着升高,但是Pro含量和SOD酶活显着升高;来自内蒙古同德格尔的#30株系、内蒙古陶利的#8株系、陕西衡山的#5株系,干旱处理以后,MDA含量没有显着变化,但是Pro含量升高幅度在群体中位于前5位。(4)具有明显干旱敏感特征的株系包括来自内蒙贺兰山的#30株系和来自甘肃祁连山的#7株系:干旱处理以后,这两个株系的Pro含量、POD和SOD酶活都没有显着升高;但是,MDA含量升高幅度位于群体前2位。(5)以内蒙古陶利#8株系和内蒙古锡林浩特阿巴嘎旗的#2株系根为材料,进行了转录组测序。我们最初重点分析了沙地柏特有的编码Ca~(2+)结合蛋白的基因,鉴定到Sv CML1,预测编码Ca~(2+)结合钙调素类蛋白。但是,利用体外表达纯化的SvCML1蛋白和等温滴定分析技术,SvCML1被证实不是Ca~(2+)结合蛋白,而是Zn~(2+)特异结合蛋白。(6)SvCML1蛋白被发现定位于植物细胞内的内质网。在相对高【Zn~(2+)】培养条件下,SvCML1提高了转基因拟南芥根组织和根细胞内质网内的Zn含量。(7)在拟南芥体内过量表达SvCML1使转基因植物在相对高【Zn~(2+)】和低【Fe~(2+)】培养条件下,表现生长被抑制的表型。低【Fe~(2+)】显着诱导拟南芥根积累Zn~(2+);在低Fe~(2+)条件下,SvCML1转基因植物根Zn~(2+)含量显着高于野生型。降低培养基的【Zn~(2+)】,可以完全恢复SvCML1转基因拟南芥的低【Fe~(2+)】敏感表型。(8)SvCML1抑制编码Zn~(2+)转运蛋白AtZIF2(Zinc-Induced Facilitator2,At2g48020)和AtMTP1(Metal Tolerance Protein1,At2g46800)基因的表达。以前的研究发现,缺失AtZIF2和AtMTP1基因的拟南芥突变体,在相对高【Zn~(2+)】培养条件下，有生长受抑制的表型。(9)以SvCML1为诱饵蛋白,利用拟南芥酵母cDNA文库,进行了酵母双杂交实验,筛选得到SvCML1互作蛋白At CLC2(Clathrin Light Chain2,At2g40060)。缺失AtCLC2或其同家族基因AtCLC3(AT3G51890)的拟南芥,同SvCML1转基因拟南芥类似,在低【Fe~(2+)】培养条件下,表现生长受抑制的表型。综上所述,在种质资源收集和生长、干旱性状评价的基础上,我们在沙地柏转录本中鉴定到一个编码钙调素类蛋白的基因,该蛋白体外实验和体内实验证明为Zn~(2+)结合蛋白,具有提高植物Zn含量的功能,从多个途径调节植物Zn依赖的生长。本研究成果一方面对在生态绿化中沙地柏的应用提供了种质选择的力量依据,另一方面为通过分子育种改善作物Zn营养提供了具体的功能基因。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-06-05）
武博洋[4]（2018）在《玉米苗期耐盐性的QTL定位与抗旱性的蛋白谱差异表达分析》一文中研究指出近年来随着耕地面积的减少,人口的增加,粮食将成为人类面临的问题,提高作物产量也就成为解决粮食问题重要方法。而在如今,想通过增加作物的亩产已经不是那么轻易的事情,具有相当大的难度,开发和利用土地资源是人们提高粮食作物产量的重要方法之一。未开发的土地一般具有盐含量高或是不能得到水份充分灌溉的缺点,通过盐碱地和干旱地的利用,继续扩大玉米的耕作面积是提高总产的一个很好的解决方法,玉米对于盐胁迫和干旱胁迫非常敏感,尤其在幼苗期,培育耐盐、耐旱的玉米品种可以提高土地的利用率和提高玉米产量,因此选育耐盐、耐旱玉米新品种,对提高盐地和干旱地的使用率有着重要的意义。本文主要研究结论如下:(1)选用耐盐自交系8723和P138构建得到198个单株的F2群体,构建了一个含有174个SSR标记位点的分子遗传连锁图谱。通过对表型数据的分析,对4个性状进行了QTL定位,检测到9个与玉米苗期耐盐性状相关的QTLs。3个与相对电导率有关,分别位于第6和第9条染色体。1个与株高有关,位于第2条上。3个与根数有关,分别位于染色体的第2和第4条。2个与地上鲜重有关,位于第2、5染色体上。(2)通过PEG模拟干旱胁迫实验对玉米自交系昌7-2、廊黄和TS141萌发期和玉米苗期进行了处理。验证了昌7-2和廊黄具有较高的耐旱能力,且昌7-2耐旱性最好,TS141耐旱能力差。(3)蛋白质组分析表明,在干旱胁迫处理后昌7-2中314个蛋白表达量上调、378个蛋白下调,TS141中209个蛋白上调、215个蛋白下调。差异蛋白功能分析得知表达蛋白主要功能体现在结合和催化活性,主要参与代谢过程和细胞过程。苯丙烷类代谢途径、糖酵解和糖异生代谢和聚合酶代谢途径对玉米的耐旱性具有重要的影响。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2018-06-01）
赵婉莹[5]（2018）在《普通小麦钙依赖蛋白激酶基因TaCDPK1的抗旱功能研究》一文中研究指出自然条件下,小麦的生长发育会受到多种环境胁迫因素的影响,从而导致产量和质量严重下降。因此,探索如何通过现代生物技术提高小麦的抗性及品质对于小麦遗传育种具有重要的指导意义。研究表明钙依赖蛋白激酶在植物受到干旱、高盐、低温等非生物胁迫时均有响应。植物钙依赖蛋白激酶的克隆以及功能的深入研究对于改善植物抗逆性具有重要作用。本实验室前期从普通小麦中克隆得到一个钙依赖蛋白激酶基因,并命名为TaCDPK1。为了研究TaCDPK1的功能,本论文主要从两方面对TaCDPK1开展研究。一方面通过对TaCDPK1进行生物信息学分析、亚细胞定位、启动子GUS染色分析以及非生物胁迫处理下的表达模式,对TaCDPK1结构和功能进行初步分析。另一方面主要是开展转TaCDPK1基因拟南芥的抗旱表型鉴定。此外,本文初步探索了TaCDPK1参与的ABA信号通路以及GA信号通路。主要研究结果如下:1、通过生物信息学分析网站获知TaCDPK1具有激酶区和4个EF-Hand结构域,其蛋白大小为59.3 kDa。通过亚细胞定位发现TaCDPK1主要定位在细胞膜和细胞核上。通过组织特异性分析发现TaCDPK1主要在茎和叶中表达。启动子GUS染色分析也表明TaCDPK1主要在茎、叶片、雄蕊中特异表达。不同胁迫处理下的表达模式分析发现TaCDPK1受干旱、ABA、GA诱导表达。此外,通过Pull-down和BiFC验证了TaCDPK1和候选蛋白TaRan1存在互作,互作部位发生在细胞膜和细胞核上。2、通过农杆菌介导的方法将TaCDPK1转化到拟南芥中发现:在干旱胁迫诱导下TaCDPK1促进了转基因拟南芥的萌发,转基因株系的根表面积也较野生型增多。同时还促进了转基因株系体内干旱胁迫相关基因(RD29A、COR47、DREB2A、RAB18、KIN1、KIN2)的表达。可推测TaCDPK1通过促进胁迫相关基因的表达来提高转基因拟南芥的抗旱性。3、在不同浓度ABA处理下发现转基因拟南芥的气孔开度较野生型小;在低浓度ABA处理下,过表达株系的萌发速率较WT缓慢。说明过表达株系对ABA敏感性增强。在干旱处理下转基因拟南芥中ABA合成关键酶NCED3表达量高于野生型。推测TaCDPK1可能参与了ABA信号传导通路。4、在PAC处理下,过表达株系的发芽率显着大于WT。在下胚轴实验中,过表达株系比WT在GA和PAC同时处理下的下胚轴要长,说明TaCDPK1过表达株系对PAC不敏感。实验中还发现在GA处理下,过表达株系中与GA合成相关的一些基因表达量降低了。例如KS、KAO1、KAO2等。表明TaCDPK1参与GA途径,且负向调控GA的合成。上述研究结果对进一步研究TaCDPK1基因提高植物抗逆性的作用机制提供理论依据。同时为开展小麦抗逆基因工程品种改良提供理论参考和实际指导作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
张瑞杰,王喆,连卜颖,郭展,魏东[6]（2018）在《谷子ABC转运蛋白基因与抗旱关系的研究》一文中研究指出[目的]ABC转运蛋白是一类广泛存在于生物体中最古老的蛋白家族,在植物的生长发育及抗逆胁迫中发挥着重要作用。本文旨在探究ABC转运蛋白基因与谷子抗旱性的关系,挖掘谷子抗旱基因,并为谷子抗旱分子机制的研究提供理论依据。[方法]以谷子抗旱品种勾勾母鸡咀(GG)和干旱敏感品种晋汾16(JF16)为研究材料,在苗期对二者用20%PEG胁迫处理,并取其叶片进行转录组测序,筛选出4个与ABC转运蛋白相关的差异表达基因。用生物信息学方法分析基因的基本信息、启动子顺式元件,并构建ABC抗逆相关基因的系统进化树以及对ABC转运蛋白基因进行表达模式分析。[结果]发现谷子ABC转运蛋白基因等电点范围在6.81~8.97之间,分子量范围在51 195.75~161 579.13Da;启动子中包含有许多响应胁迫的功能元件(ABA、Ethylene、GA、MeJA、Light、MYB、SA、热和低温响应元件等);在进化树分析中发现,Seita.1G039400.1和Seita.7G176000.1亲缘关系最近,其次与AtABCC5亲缘关系较近;经过干旱处理,只有Seita.7G176000.1基因在抗旱品种中表达增加,其余3个基因在抗旱品种中表达均降低。[结论]Seita.7G176000.1基因可能通过调节气孔开闭参与植物抗逆,进而调控谷子响应干旱胁迫,初步推测其为谷子ABC基因家族抗旱候选基因,为进一步研究ABC转运蛋白基因与植物抗逆性关系提供理论依据。(本文来源于《山西农业大学学报(自然科学版)》期刊2018年01期）
郭玉双,余婧,邹颉,付强,余世洲[7]（2017）在《烟草谷氧还蛋白NbGRX1的亚细胞定位及抗旱功能研究》一文中研究指出[目的]分析烟草Nb GRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因Nb GRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对Nb GRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因沉默,在烟草中沉默了该基因,并调查Nb GRX1基因沉默后烟草对干旱的响应。同时采用农杆菌介导法,将Nb GRX1基因转化至拟南芥中,筛选单拷贝插入的纯合转基因拟南芥进行后续研究,对转基因拟南芥及对照进行干旱处理,并分析其表型。[结果]亚细胞定位研究表明,空载体中的GFP蛋白定位在细胞质和细胞核中,GFP:Nb GRX1的融合蛋白均匀分布在细胞质和细胞核中,因此可以推测Nb GRX1蛋白能定位在植物的细胞核和细胞质中。病毒介导的基因沉默研究表明,Nb GRX1基因沉默烟草与对照相比对干旱胁迫更为敏感,更容易出现黄化和萎蔫的症状,叶片相对含水量下降;Nb GRX1基因超量表达的株系干旱能力明显高于对照。[结论]烟草Nb GRX1基因能够提高植物的抗旱性。(本文来源于《中国烟草学会学术年会优秀论文集》期刊2017-11-01）
陈利青,王雄,郭展,魏东,禾璐[8]（2017）在《硝酸盐诱导蛋白与谷子抗旱性的关系研究》一文中研究指出[目的]硝酸盐诱导蛋白(NOI)是一类重要的抗逆蛋白,在多种植物中发挥作用。谷子作为重要的旱作植物,在农作物生产中占有重要地位,探究谷子中NOI与抗旱性的关系,对发掘谷子抗旱相关基因具有重要意义。[方法]运用生物信息学方法,对谷子中编码NOI的基因进行分析,并在PEG干旱胁迫下,探究抗旱品种勾勾母鸡咀(GG)和干旱敏感品种晋汾16(JF16)中编码硝酸盐诱导蛋白(NOI)的基因的相对表达情况。[结果]编码NOI的基因的启动子中存在与干旱相关的响应元件。在PEG干旱胁迫处理与非胁迫处理条件下,勾勾母鸡咀(GG)和晋汾16(JF16)中编码NOI的基因的表达模式差异显着。[结论]基于上述分析,推测硝酸盐诱导蛋白(NOI)可能参与谷子的抗旱调节,为深入研究谷子抗旱机理提供了理论基础和依据。(本文来源于《山西农业大学学报(自然科学版)》期刊2017年10期）
武彩娟,苏彦冰,程璐,王钇杰,元旭朝[9]（2016）在《谷子硒结合蛋白基因及其与抗旱性的关系》一文中研究指出[目的]土壤与肥料中的硒元素进入植物体后,与植物中的蛋白质和活性有机成分结合成为植物有机硒,即植物硒结合蛋白。本研究以硒结合蛋白结构和功能为基础,探索其与谷子抗旱的关系。[方法]以谷子耐旱品种勾勾母鸡咀(GG)和干旱敏感品种晋汾16(JF16)为试材,以转录组中硒结合蛋白基因家族中10个基因为对象,利用生物信息学分析其基因组基本信息、基因间亲缘关系及启动子顺式元件,并对Seita.4G100300基因进行表达水平分析。[结果]发现谷子硒结合蛋白基因家族中基因启动子上游1 500bp的调控元件具有响应胁迫的多种功能(ABA、Ethylene、GA、MeJA、Light、MYB、SA、热和低温等);经过干旱处理,Seita.4G100300基因在GG和JF16中表达水平均增加,且其在耐干旱品种GG中表达水平的增幅显着大于干旱敏感品种JF16。[结论]谷子硒结合蛋白基因家族在氨基酸序列和表达模式方面具有较为丰富的多样性。本研究有助于我们理解硒结合蛋白的结构和功能,为进一步研究硒结合蛋白与植物抗逆性关系提供理论依据。(本文来源于《山西农业大学学报(自然科学版)》期刊2016年12期）
宋来庆,安建平,苏玲,赵玲玲,王小非[10]（2016）在《异位表达苹果G蛋白偶联受体基因MdGCR1降低烟草的抗旱性》一文中研究指出以‘嘎拉’苹果(Malus×domestica‘Royal Gala’)为材料,采用同源克隆和PCR技术分离了G蛋白偶联受体基因MdGCR1。其开放阅读框(ORF)为960 bp,编码含有319个氨基酸的蛋白。系统进化树分析显示,MdGCR1与梨GCR1亲缘关系最近,同源性最高。基因表达分析显示MdGCR1主要在苹果根、茎和叶中表达,在花和果实中的表达量较低;MdGCR1受多种逆境胁迫诱导,参与多种激素响应。构建了MdGCR1植物过表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得了转MdGCR1烟草。转基因材料抗性试验结果显示:超量表达MdGCR1显着降低烟草对干旱胁迫的抗性,表明苹果G蛋白偶联受体基因MdGCR1在响应植物抗旱胁迫中发挥重要作用。(本文来源于《园艺学报》期刊2016年11期）
抗旱蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
我国是世界上最大的苹果生产国和消费国,但干旱和低温制约着黄土高原产区苹果产业的健康发展。利用苹果自身的基因资源,提高苹果的抗旱、耐寒能力具有重要意义。本研究从苹果品种‘金冠’中克隆到一个锌指蛋白基因,将其命名为MdZFP2。通过序列分析、亚细胞定位和qRT-PCR等方法,对MdZFP2的序列特征、细胞定位和表达特性等进行了探究,通过酵母双杂交技术筛选出2个与MdZFP2互作的蛋白,并利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证了该互作。此外,通过获得MdZFP2的干扰(RNAi)及过表达苹果转基因植物,对MdZFP2在响应苹果干旱和低温胁迫时的功能进行了初步探究。研究结果如下:1.本研究克隆到一个MdZFP2基因,位于5号染色体,开放编码阅读框为912 bp,编码303个氨基酸,蛋白分子量大小为33.93 kD。序列分析表明MdZFP2具有保守的锌指蛋白DNA结合结构域DOF。亚细胞定位结果表明MdZFP2定位于细胞核,属于典型的转录因子。MdZFP2基因启动子上含有两个响应MeJA的顺式作用元件和一个响应ABA信号途径的ABRE。2.组织特异性表达结果表明,MdZFP2在苹果的根、茎、叶中均有不同程度的表达,根系中MdZFP2表达量远高于茎和叶。MdZFP2响应干旱和低温胁迫,PEG处理6小时MdZFP2基因的表达量为处理前的6倍,自然干旱处理‘金冠’中的MdZFP2基因表达量随着处理时间延长而上升;而低温抑制MdZFP2的表达,4oC处理第12小时MdZFP2表达量降至最低,仅为处理0小时的0.17倍。除此之外MdZFP2也响应茉莉酸JA、水杨酸SA激素处理,表达量随两种处理时间延长而下降。3.构建了MdZFP2-pGBKT7载体,发现MdZFP2蛋白具有自激活活性,经过对其蛋白截断后获得无自激活的片段MdZFP2-510aa-BD。用MdZFP2-510aa-BD片段作为诱饵筛选MdZFP2的互作蛋白,获得了两个候选蛋白MdMIEL1和MdSNF1β2,前者编码一个RING型E3连接酶,后者则是构成SnRK1磷酸化复合体的亚基之一。酵母双杂交和双分子荧光互补技术证实了该蛋白互作。另外,通过染色质免疫共沉淀实验对MdZFP2下游靶基因进行了预测。4.构建MdZFP2干扰和过表达载体并转入苹果组培苗GL-3,获得了MdZFP2的RNAi和过表达植物。对RNAi转基因苹果植物进行长期干旱处理,发现长期干旱后MdZFP2 RNAi植物株高、茎粗、光合作用参数、地上部与地下部的导水率和生物量等显着低于GL-3,表明MdZFP2 RNAi植物对长期干旱处理更为敏感。随后用叶片自然失水实验进行验证,发现RNAi植物的叶片失水率显着高于GL-3,而过表达植株表现出相反的趋势。由此得出结论,MdZFP2参与苹果对干旱胁迫的响应,正调控苹果的抗旱性。另外,通过离子渗透率实验探究低温下RNAi转基因苹果植物叶片的耐寒性,发现在-4oC及-6oC时,RNAi植物叶片的相对离子渗透率均显着低于GL-3,表明MdZFP2 RNAi植物的耐寒性更强。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗旱蛋白论文参考文献
[1].田淑媛,程洁,杨杰,李瑞博,张云瑞.小麦核氧还蛋白TaNRX1与TaPDI、TaTRX-h、TaPP2Ac的互作分析及抗旱功能研究[J].农业生物技术学报.2019
[2].闫明佳.苹果锌指蛋白MdZFP2在苹果抗旱、耐寒中的功能研究[D].西北农林科技大学.2019
[3].杨佳.沙地柏种质生长和抗旱性状评价及特有Zn~(2+)结合蛋白SvCML1功能研究[D].内蒙古大学.2018
[4].武博洋.玉米苗期耐盐性的QTL定位与抗旱性的蛋白谱差异表达分析[D].甘肃农业大学.2018
[5].赵婉莹.普通小麦钙依赖蛋白激酶基因TaCDPK1的抗旱功能研究[D].西北农林科技大学.2018
[6].张瑞杰,王喆,连卜颖,郭展,魏东.谷子ABC转运蛋白基因与抗旱关系的研究[J].山西农业大学学报(自然科学版).2018
[7].郭玉双,余婧,邹颉,付强,余世洲.烟草谷氧还蛋白NbGRX1的亚细胞定位及抗旱功能研究[C].中国烟草学会学术年会优秀论文集.2017
[8].陈利青,王雄,郭展,魏东,禾璐.硝酸盐诱导蛋白与谷子抗旱性的关系研究[J].山西农业大学学报(自然科学版).2017
[9].武彩娟,苏彦冰,程璐,王钇杰,元旭朝.谷子硒结合蛋白基因及其与抗旱性的关系[J].山西农业大学学报(自然科学版).2016
[10].宋来庆,安建平,苏玲,赵玲玲,王小非.异位表达苹果G蛋白偶联受体基因MdGCR1降低烟草的抗旱性[J].园艺学报.2016
标签：小麦; 核氧还蛋白(NRX); 互作蛋白; Y2H;