导读:本文包含了菜蛾盘绒茧蜂病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小菜蛾,菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒,基因克隆,转录动态
菜蛾盘绒茧蜂病毒论文文献综述
尹懿[1]（2014）在《菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因在寄主小菜蛾幼虫体内转录模式的研究》一文中研究指出多分DNA病毒(PDV)是与膜翅目姬蜂科和茧蜂科寄生蜂共存的一类独特病毒。它在寄生蜂成功寄生过程中起着不可替代的作用,是寄生蜂克服寄主免疫、适应寄主内部营养条件并使之满足其自生发育需要的重要因子。本文首先用PCR方法验证了75个菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)待选基因中的64个基因,然后以此为基础,用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得17个基因的cDNA全长,并且用qRT-PCR的方法对其中38个基因在寄主不同组织中的转录模式进行了初步研究。现将研究结果总结如下：1.将CvBV基因组序列与寄生后小菜蛾幼虫转录组EST序列进行交叉比对后,得到75个待选基因片段,它们大小在300bp到1940bp之间。经分析发现这些基因来自于CvBV的7个基因家族,它们分别是：蛋白酪氨酸去磷酸化酶基因(Protein tyrosine phosphatase, PTP)(30个)、BEN(7个)、锚蛋白(Ankyrin,6个)、凝集素(Lectin,2个)、P94-like(2个)、CrV1-like(1个)和组蛋白(Histone,1个)。其余基因除小部分在其他茧蜂多分DNA病毒中有同源序列,在此命名为Conserved hypothetical protein(Con,9个)外,大部分为无同源序列的新基因,在此命名为Hypothetical protein (Hyp,17个)。2.通过反转录PCR (RT-PCR)的方法对75个待选基因片段进行验证,其中64个EST片段为阳性片段,他们分别是：PTP(27个)、BEN(6个)、Lectin(2个)、P94-like(2个)、Ankyrin(1个)、CrV1-like(1个)、Con(9个)和Hyp(16个)。3.采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了17个CvBV基因的全长cDNA,依据它们在CvBV基因组不同片段上的位置,依次命名为c3-3、c4-6、c6-2、c6-5、c6-6、c7-7、 c9-1、c12-4、c12-6、c12-9、c14-1、c15-2、c24-8、c28-1、c28-5、c29-7和c30-1,它们分别编码107、252、304、320、304、238、259、300、297、287、323、340、252、277、312、526和82个氨基酸的蛋白,其中仅c3-3、c7-7和c15-2含有信号肽序列。通过对9个获得cDNA全长的PTP进行了基于氨基酸序列的生物信息学分析,发现其中7个为具有催化活性的PTP。4.明确了CvBV侵染寄主后,本研究所涉及的38个CvBV基因均主要在寄生后小菜蛾幼虫的血细胞中转录,它们的转录模式可以分为叁种情况：转录水平随寄生后时间的增加而(1)先升后降；(2)持续升高和(3)持续下降,其中c3-3、c6-6、c6-7、c12-9、c13-1、c14-1、c16-1、c18-1、c22-1、c24-8、c27-2和c28-6的转录模式为先升后降,c4-1、c4-3、c4-6、c6-2、c9-1、c12-6、c17-1、c27-1和c28-1的转录模式为持续升高,而c5-3、c7-7、c10-1、c12-3、c15-2、c21-3、c23-1、c23-3、c23-4、c26-2、c26-4、c29-6和c34-1的转录模式为持续下降。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-06-01）
陈征[2]（2014）在《菜蛾盘绒茧蜂病毒Ankyrin和PTP家族基因克隆、序列分析和一个Ankyrin基因启动子序列初步鉴定》一文中研究指出在菜蛾盘绒茧蜂成功寄生小菜蛾的过程中,菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)是起关键作用的主要寄生因子。在CvBV编码众多蛋白的基因家族中,蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases, PTPs)家族基因(PTP)和锚蛋白家族基因(Ankyrin)是成员数量最多的两个基因家族,并且寄生后基因的表达也非常快。Ankyrin被认为是主要的免疫抑制相关基因,在寄生蜂寄生寄主中参与了抑制寄主免疫反应中的信号传导,尤其是对寄主Toll信号途径的关键步骤中的NF-kB直接进行抑制。PTP由于其参与细胞内磷酸化水平的调控,能在信号途径的多个步骤中与寄主的PTP进行竞争性抑制。所以研究其基因结构,尤其是启动子,对于揭示PDV抑制寄主免疫的机理机制则显得尤为重要。本文克隆了6个PTP基因和1个Ankyrin基因,并对其序列功能进行了初步研究；同时利用重构建含有萤火虫荧光素酶基因的载体转染HEK293细胞的方法,得到1条具有启动活性的启动子序列。现将结果总结如下：1)采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了7条cDNA的全长序列,所克隆的7条cDNA的全长序列命名为CvBV-C2-2、CvBV-C12-2、CvBV-C12-5、CvBV-C12-11、 CvBV-C14-5、CvBV-C14-6和CvBV-C28-1,长度分别为966bp、113bp、1301bp、1245bp、1383bp、1177bp和1057bp,开放阅读框长度分别为492bp、900bp、894bp、948bp、972bp、1005bp和831bp,分别编码163、299、297、315、323、334和276个氨基酸,预测分子量分别为18867.54、34607.06、34514.32、36583.69、36583.69、39166.89和32001.44Daltons。序列翻译蛋白序列分析结果表明,CvBV-C2-2基因翻译Annkyrin蛋白,其它6个基因序列均翻译PTP蛋白。2)利用重构建的含有萤火虫荧光素酶报告基因载体转染HEK293细胞的方法,得到Ankyrin基因家族的1条具有启动活性的启动子序列。结果显示,在验证的多个基因中,发现了一个基因的上游启动子序列启动报告基因,检测到了荧光值,为C17-4基因,且该基因C17-4P2和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品与C17-4P3和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品中都有荧光值,且后者相对荧光强度明显弱于前者,而C17-4P1和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品中则没有检测到数值。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-01-01）
刘鹏程[3]（2008）在《菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒（CvBV）EP-1 like基因家族序列分析及EP-1 like 1基因表达研究》一文中研究指出多分DNA病毒(polydnavirus,PDV)是一类与寄生蜂有专性互惠共生关系的特殊昆虫病毒,其基因的表达对抑制寄主免疫反应、保证寄生蜂卵发育有重要作用。EP基因家族是茧蜂科昆虫所拥有的PDV(茧蜂病毒Bracovirus,BV)的一个重要基因家族,具有重要的生理作用。本研究测定了菜蛾盘绒苴蜂病毒Cotesiavestalis bracovirus(CvBV)EP-1 like基因家族7个基因的cDNA全序列,并进行了序列分析。在此基础上,将EP-1 like 1(EPL-1)基因与原核表达载体pET-28a和pET-30a连接,从而构建、筛选了高效表达重组载体pET28-EPL-1,并在大肠杆菌中表达了EPL-1融合蛋白。采用传统割胶回收的方法回收纯化表达蛋白,并将纯化后的蛋白免疫新西兰大耳兔,制备了抗EPL-1多克隆抗体;以此多克隆抗体为基础研究了EPL-1基因在被寄生后寄主小菜蛾Plutella xylostella幼虫体内的蛋白含量变化;最后利用荧光定量PCR分析了EPL-1基因在寄主小菜蛾体内的转录动态。本研究的主要结果如下:(1)应用cDNA末端快速扩增技术(RACE)的方法获得了EP-1 like基因家族7个基因的cDNA序列全长,相关推导蛋白氨基酸序列的翻译后加工和信号肽的预测分别采用网上搜索工具EXPASY和SignalP软件,发现CvBV编码的EP-1like蛋白中虽然不存在保守功能域但N端都具有一个信号肽编码序列和众多的理论蛋白质修饰和功能位点。在利用BLASTP搜索获得同源蛋白后构建了以氨基酸序列为基础的进化树,由此发现CvBV编码的该基因家族成员之间关系并不密切,同时整个PDV编码的该基因家族成员之间可以划分成4个类群,其中EPL-1和EPL-2,EPL-3和EPL-4分别处于同一类群,但它们位于不同分支上。另外,EPL-5和CcBV early-expressed蛋白处于同一类群;EPL-7与部分GiBV和CcBV蛋白处于同一类群。(2)将PCR扩增得到EPL-1基因ORF(921bp)克隆到表达载体pET-28a和pET-30a中,构建并筛选了高效表达重组载体pET28-EPL-1,在IPTG进行诱导的情况下,正确表达了分子量为34.8kDa的重组融合蛋白。在大量表达EPL-1蛋白的基础上,通过传统割胶回收、电透析的方法纯化表达蛋白并免疫新西兰大耳兔,制备了抗EPL-1蛋白的多克隆抗体(效价1∶128,000),同时用Western Blot检测了抗体的特异性。(3)以制备的抗EPL-1多克隆抗体为一抗,间接ELISA法检测小菜蛾幼虫体内EPL-1蛋白含量变化。结果表明在被寄生的小菜蛾幼虫血浆和血细胞内EPL-1蛋白的含量都随时间的延长而增加,在寄生后第6天达到峰值。(4)利用荧光定量PCR分析了CvBV EPL-1基因在寄主小菜蛾体内的转录动态,发现在被寄生6天内的小菜蛾幼虫体内都可以检测到EPL-1基因的转录,但是在寄生后寄主体内EPL-1基因的转录出现了2次转录高峰(2d p.p.和5d p.p.);具体至寄生后寄主的脑、血淋巴和中肠时又发现其转录模式各不相同:在寄生后2h就能检测到该基因在寄主脑组织内的转录,转录高峰出现在12h p.p.,此后转录水平迅速降低;在寄生后6h就能检测到该基因在寄主中肠中的转录,转录高峰出现在12h p.p.,此后转录水平逐渐减低;在寄生后12h就能检测到该基因在寄主血淋巴中的转录,同时转录水平在寄生后的6d内持续上升。所以EPL-1基因在小菜蛾幼虫血淋巴内的转录水平是随着寄生后时间的延长而提高,这与EPL-1蛋白的含量变化动态相一致。(本文来源于《浙江大学》期刊2008-05-01）
刘鹏程,时敏,陈亚锋,黄芳,孟祥锋[4]（2008）在《菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒EP-1-like基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备方法》一文中研究指出本实验提取被菜蛾盘绒茧蜂寄生后24h的小菜蛾幼虫体内总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(Cotesia vestalis polydnavirus,CvBV)EP-1-like基因,将其分别克隆到表达载体pET30a、pET28a中,转化宿主菌BL21(DE3),获得单克隆重组质粒pET-30a-EP1L和pET-28a-EP1L。经IPTG诱导,pET-28a-EP1L成功表达了约34.8kDa的包涵体蛋白。将诱导条件优化以后,采用割胶回收的方法纯化包涵体,将纯化后的表达蛋白免疫新西兰大耳兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1:128000,Western blot检测证明抗体具有良好的免疫反应特异性。(本文来源于《环境昆虫学报》期刊2008年01期）
狄蕊,陈亚锋,白素芬,陈学新[5]（2006）在《菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒对寄主小菜蛾幼虫体内部分组织的影响》一文中研究指出利用显微注射方法,观察了菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CpBV)对其寄主小菜蛾幼虫部分组织的影响。结果表明,CpBV进入寄主体内后能够影响其精巢、前胸腺和中肠等的变化。当被注射CpBV后,寄主精巢体积的增长受到抑制,并且有被分解的现象;颜色也随之逐渐变淡,直至呈现透明。前胸腺大小在感染CpBV12h时就已经变小。中肠发育受阻,被分解,分布的气管出现萎缩现象,颜色由正常发育时的绿色变为黄色,个别会呈现红色,约20%中肠出现红色斑点。凝胶电泳分析表明,小菜蛾幼虫注射过CpBV后,其精巢、中肠和前胸腺中蛋白种类均减少,特别是精巢,仅有一条蛋白条带(78·8kD)较为清晰,蛋白条带明显变淡,说明蛋白含量明显下降;但前胸腺81·2kD的蛋白条带在感染CpBV后要比对照更为清晰。中肠酯酶活性测定表明,感染CpBV后中肠酯酶的活力受到抑制,酯酶活性减弱。(本文来源于《中国生物防治》期刊2006年04期）
白素芬,陈学新,程家安,符文俊,何俊华[6]（2003）在《菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的特性及其对小菜蛾幼虫的生理效应》一文中研究指出对菜蛾盘绒茧蜂Cotesiaplutellae多分DNA病毒的特性及其对寄主小菜蛾Plutellaxylostella幼虫的生理效应进行了研究。结果表明 :菜蛾盘绒茧蜂雌蜂输卵管萼中含有大量的多分DNA病毒 (polydnavirus ,PDV) ;一个PDV内含多个核衣壳 ,最多可达 16个 ;核衣壳长 4 0～ 16 8nm ,直径 39～ 4 0nm ;PDV仅在输卵管萼细胞内复制 ;雌蜂产卵时 ,随蜂卵将PDV注入寄主血腔 ,并扩散到寄主的许多组织中 ;PDV可能先通过脱膜再侵染寄主组织。雌蜂经Co6 0 辐射处理后再寄生 (即假寄生 )小菜蛾 2龄、 3龄和 4龄初期的幼虫 ,被寄生后的寄主幼虫几乎全部不能化蛹 ,但末龄 (即 4龄 )幼虫期显着延长 ,并在寄生后期 ,幼虫胸部有褐色的短翅芽出现 ;即将化蛹的 4龄末小菜蛾幼虫被假寄生后 ,即使每头寄主被过寄生 9次 ,依然能正常化蛹 ,但不能羽化。假寄生与正常寄生后寄主的脂肪体数量和形态结构有明显的不同 ,推测在正常寄生的情况下蜂卵孵化时释放的畸形细胞及随后的幼蜂可能对脂肪体的结构产生了作用。(本文来源于《昆虫学报》期刊2003年04期）
刘彩玲,朱湘雄,符文俊[7]（2000）在《菜蛾绒茧蜂多DNA病毒的分离纯化及其主要特征研究》一文中研究指出多DNA病毒(polydnavirus,简称为PDV)是近二十年发现的仅存于膜翅目姬蜂科(Ich-neumonidae)和茧蜂科(Braconidae)部分寄生蜂中的病毒。多DNA病毒在寄生蜂-寄主体系中对寄主的免疫和生长发育起着重要的调节功能。多种PDV的表达产物能够干扰正常血细胞扩展和粘着能力,导致寄主血细胞包囊作用的丧失。PDV还能干扰寄主的神经分泌系统,抑(本文来源于《走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集》期刊2000-10-01）
菜蛾盘绒茧蜂病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在菜蛾盘绒茧蜂成功寄生小菜蛾的过程中,菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)是起关键作用的主要寄生因子。在CvBV编码众多蛋白的基因家族中,蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases, PTPs)家族基因(PTP)和锚蛋白家族基因(Ankyrin)是成员数量最多的两个基因家族,并且寄生后基因的表达也非常快。Ankyrin被认为是主要的免疫抑制相关基因,在寄生蜂寄生寄主中参与了抑制寄主免疫反应中的信号传导,尤其是对寄主Toll信号途径的关键步骤中的NF-kB直接进行抑制。PTP由于其参与细胞内磷酸化水平的调控,能在信号途径的多个步骤中与寄主的PTP进行竞争性抑制。所以研究其基因结构,尤其是启动子,对于揭示PDV抑制寄主免疫的机理机制则显得尤为重要。本文克隆了6个PTP基因和1个Ankyrin基因,并对其序列功能进行了初步研究；同时利用重构建含有萤火虫荧光素酶基因的载体转染HEK293细胞的方法,得到1条具有启动活性的启动子序列。现将结果总结如下：1)采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了7条cDNA的全长序列,所克隆的7条cDNA的全长序列命名为CvBV-C2-2、CvBV-C12-2、CvBV-C12-5、CvBV-C12-11、 CvBV-C14-5、CvBV-C14-6和CvBV-C28-1,长度分别为966bp、113bp、1301bp、1245bp、1383bp、1177bp和1057bp,开放阅读框长度分别为492bp、900bp、894bp、948bp、972bp、1005bp和831bp,分别编码163、299、297、315、323、334和276个氨基酸,预测分子量分别为18867.54、34607.06、34514.32、36583.69、36583.69、39166.89和32001.44Daltons。序列翻译蛋白序列分析结果表明,CvBV-C2-2基因翻译Annkyrin蛋白,其它6个基因序列均翻译PTP蛋白。2)利用重构建的含有萤火虫荧光素酶报告基因载体转染HEK293细胞的方法,得到Ankyrin基因家族的1条具有启动活性的启动子序列。结果显示,在验证的多个基因中,发现了一个基因的上游启动子序列启动报告基因,检测到了荧光值,为C17-4基因,且该基因C17-4P2和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品与C17-4P3和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品中都有荧光值,且后者相对荧光强度明显弱于前者,而C17-4P1和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品中则没有检测到数值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
菜蛾盘绒茧蜂病毒论文参考文献
[1].尹懿.菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因在寄主小菜蛾幼虫体内转录模式的研究[D].浙江大学.2014
[2].陈征.菜蛾盘绒茧蜂病毒Ankyrin和PTP家族基因克隆、序列分析和一个Ankyrin基因启动子序列初步鉴定[D].浙江大学.2014
[3].刘鹏程.菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒（CvBV）EP-1like基因家族序列分析及EP-1like1基因表达研究[D].浙江大学.2008
[4].刘鹏程,时敏,陈亚锋,黄芳,孟祥锋.菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒EP-1-like基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备方法[J].环境昆虫学报.2008
[5].狄蕊,陈亚锋,白素芬,陈学新.菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒对寄主小菜蛾幼虫体内部分组织的影响[J].中国生物防治.2006
[6].白素芬,陈学新,程家安,符文俊,何俊华.菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的特性及其对小菜蛾幼虫的生理效应[J].昆虫学报.2003
[7].刘彩玲,朱湘雄,符文俊.菜蛾绒茧蜂多DNA病毒的分离纯化及其主要特征研究[C].走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集.2000
标签：小菜蛾; 菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒; 基因克隆; 转录动态;