导读:本文包含了免疫双标记论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:原位杂交,免疫组化,双标记技术,移植后淋巴组织增生性疾病
免疫双标记论文文献综述
童丹[1]（2019）在《原位杂交与免疫组化双标记在PTLD诊断中的应用》一文中研究指出目的探讨原位杂交与免疫组化双标记技术在移植后淋巴组织增生性疾病(PTLD)诊断中的可行性与最优实验操作方案。方法选择天津市第一中心医院病理科2018年1月-2019年4月诊断为PTLD患者10例作为研究对象,采用四种实验顺序先后进行原位杂交与免疫组化双标记技术染色,观察染色效果。结果在四个实验组中,先行免疫组化,后行原位杂交并且采用微波修复的实验组双染色成功:组织结构完整,胞核染色为紫黑色,胞膜染色为红色,两种显色对比差异明显,背景干净。结论原位杂交与免疫组化双标记技术,可在一张切片上直接地判断是否有EB病毒感染,以及阳性细胞是T细胞还是B细胞,对PTLD组织学诊断有一定的帮助。(本文来源于《中国城乡企业卫生》期刊2019年11期）
古建雄,刘彬[2]（2019）在《免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察》一文中研究指出目的探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果。方法 47例鼻咽癌患者作为研究对象,进行免疫组化和原位杂交双标记技术检测鼻咽癌细胞中EB病毒的表达情况,观察检测效果。结果免疫组化检测结果显示,广谱细胞角蛋白(CK)定位于细胞浆内。原位杂交双标记技术检测结果显示, EB病毒编码的小RNA(EBER)阳性反应定位于鼻咽癌细胞的细胞核上。免疫组化检测后的阳性细胞的胞膜表现为红色,原位杂交双标记技术检测后的阳性细胞核表现为蓝黑色,而双阳性细胞的核与膜呈现蓝红色,不仅对比鲜明同时背景十分清楚,双染成功后细胞及组织结构表现完整。结论免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌均有一定作用,但原位杂交双标记技术检测比免疫组化方法更灵敏,值得临床推广应用。(本文来源于《中国实用医药》期刊2019年11期）
亢君君,梁卫华,黄晓峰,刘莹莹[3]（2017）在《组织化学染色与免疫电镜双标记方法在检测大鼠脑干前包钦格复合体细胞色素氧化酶活性中的应用》一文中研究指出目的研究脑干前包钦格复合体(pre-B9t C)细胞色素氧化酶(COX)的活性变化。方法采用COX的组织化学染色与pre-B9t C的标记物神经激肽1受体(NK1R)纳米金-银加强免疫组织化学染色双标法,进行pre-B9t C特定神经核团尤其是不同亚细胞结构的COX活性检测,并进行COX活性的半定量分析。结果光镜下NK1R免疫反应性(NK1R-ir)产物主要分布于pre-B9t C神经细胞膜,清晰勾勒神经元轮廓,COX组织化学染色呈棕色,弥漫表达于NK1R-ir神经元胞质及突起内。电镜下NK1R-ir金颗粒主要分布于pre-B9t C神经元胞体和树突膜内表面,胞质内也可见金颗粒标记。pre-B9t C神经元不同亚细胞结构(胞体、轴突终末、树突)线粒体的形状和分布均有不同,在胞体和轴突终末线粒体多为圆形和椭圆形,在树突则以长杆状线粒体多见,胞体线粒体多为管泡状嵴,而板层嵴线粒体以轴突终末和树突多见。轴突终末内线粒体多聚集分布,树突内线粒体多近胞膜散在分布,但在突触部位,线粒体分布密集,且局部膨大接近突触后膜,这与突触的信息传递功能需要大量ATP产生密切相关。COX活性反应产物分布于线粒体嵴上,线粒体嵴电子密度不同表明COX活性不同。轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体。结论 pre-B9t C神经元不同亚细胞结构能量代谢不同,其中轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体,尤其突触部位线粒体分布密集,且表达高COX活性。将COX组织化学技术和免疫电镜技术相结合,为检测区域性COX活性,尤其是区域内不同亚细胞结构的COX活性提供了新方法。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2017年09期）
罗俭权,曾秀英,吕镜雄,陈春梅,程思锐[4]（2017）在《免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌》一文中研究指出目的探析鼻咽癌诊断中检测EB病毒更为快速及更灵敏的方法。方法选择2014年4月至2016年8月广东省四会市人民医院收治的36例鼻咽癌患者,分别采用EB病毒一抗、地高辛标记的寡核苷酸EBER探针进行免疫组化和原位杂交双重标记染色,检测鼻咽癌细胞中EB病毒的表达情况。结果免疫组化后的阳性细胞的胞膜表现为红色,原位杂交后的阳性细胞胞核表现为蓝黑色,而双阳性细胞的核与膜呈蓝红色,不仅对比鲜明而且背景非常清晰,双染成功后细胞及组织结构表现完整。结论 EBER原位杂交双标记技术检测EB病毒主要是检测病毒基因,具有极高的特异性和灵敏度,比免疫组化方法更灵敏、快速,可以帮助临床进行鼻咽癌的分期诊断及判断治疗效果。(本文来源于《实用检验医师杂志》期刊2017年02期）
孟庆东,王燕,梁焕坤,王珊霞,孙文俏[5]（2017）在《恶性疟与间日疟双标记时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制》一文中研究指出目的采用双标记时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术研制一种同时检测恶性疟原虫、间日疟原虫及混合感染试剂盒,并评价试剂盒各项性能指标。方法用抗恶性疟原虫/间日疟原虫乳酸脱氢酶(PLDH)抗体1H12作为捕获抗体包被96孔板,以Sm3+标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶(PfLDH)抗体2A5和Eu3+标记抗间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)抗体4F6作为检测抗体,建立恶性疟与间日疟双标记时间分辨荧光分析法。结果试剂盒检测恶性疟原虫的灵敏度为0.15ng/ml,线性范围为0.5500ng/ml,平均稀释回收率为102.2%,批内与批间变异系数分别为6.48%和6.63%;检测间日疟原虫的灵敏度为0.25ng/ml,线性范围为0.5500ng/ml,平均稀释回收率为100.78%,批内与批间变异系数分别为5.39%和6.16%,恶性疟与间日疟检测不相互干扰。用自制试剂盒检测212份疟疾患者血标本,阳性率为95.28%,高于镜检法的92.45%和Optimal法的51.89%。结论 PfLDH/PvLDH-TRFIA试剂盒能同时检测恶性疟、间日疟及二者混合感染,且灵敏度高,可测范围宽,稳定性好,具有良好应用前景。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2017年03期）
林颜玉,任志奇,刘天才,吴英松[6]（2016）在《基于磁珠的胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的研制》一文中研究指出针对胃癌及胃病患者血清中胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogenⅠ,PGⅠ)和胃蛋白酶原Ⅱ(pepsinogenⅡ,PGⅡ),研制以磁珠为载体的基于镧系元素铕和钐双标记时间分辨荧光免疫分析技术的检测试剂,能够同时检测患者血清中的PGⅠ和PGⅡ.实验采用双抗体夹心一步法反应模式,铕和钐作为高灵敏的荧光示踪物分别标记抗PGⅠ及PGⅡ抗体,并利用磁珠作为抗原抗体反应的载体,建立双标记磁珠时间分辨荧光免疫分析试剂,并对试剂的各项指标进行评价.实验结果表明,该试剂检测PGⅠ和PGⅡ的分析灵敏度分别达到0.15 ng/m L和0.16 ng/m L,检测范围分别为0.15 500.00 ng/m L和0.16 50.00 ng/m L,准确度和精密性指标均达到临床检测要求,61份临床考核样本经本试剂和雅培化学发光试剂测定,结果一致性较高,无显着差异.实验阐明了磁珠作为固相载体结合经典的时间分辨荧光免疫分析技术在检测PGⅠ和PGⅡ方面的应用潜能,该研究将在多种胃病的诊断、监测及高通量血液筛查等领域发挥巨大的临床应用价值.(本文来源于《湖北大学学报(自然科学版)》期刊2016年06期）
林鹏,顾宏杰,郭松林,王艺磊,冯建军[7]（2016）在《双标记时间分辨荧光免疫同时检测嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌》一文中研究指出采用双标记时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)同时检测嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)B18和产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)B12,将抗B18抗体和抗B12抗体包被微孔板,然后加入B18和B12菌株,以Sm~(3+)标记的抗B18抗体和Eu~(3+)标记的抗B12抗体进行示踪,建立了双抗夹心的TRFIA法同时检测嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌。该方法检测B18的检测限为6.0×10~4 cfu/mL,标准曲线在1.0×10~4-1.0×10~7cfu/mL范围内线性良好,板内和板间变异系数分别为5.72%和3.78%,检测B12的检测限为1.0×10~4 cfu/mL,标准曲线范围1.0×10~4-1.0×10~7cfu/mL,板内和板间变异系数分别为6.12%和4.13%。交叉反应表明其具有较高的特异性。将该方法检测了人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,阳性检测率为100%。双标记TRFIA法同时检测嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌,与常用的荧光抗体法及ELISA法相比,灵敏度高、稳定性好并且操作简单,尤其是通过不同的稀土螯合物进行标记,可以同时检测两种病原菌,具有良好的应用前景,有望在水产养殖业得到推广应用。(本文来源于《中国化学会第30届学术年会摘要集-第四分会：生物分析和生物传感》期刊2016-07-01）
林冠峰[8]（2015）在《狂犬疫苗糖蛋白及乙肝表面抗原与甲胎蛋白双标记时间分辨免疫分析试剂的研制》一文中研究指出研究背景及目的狂犬病是世界性流行性疾病,是致命但可预防的人畜共患疾病,可导致严重卫生问题。该病是由狂犬病毒(Rabies Virus, RV)引起的人兽共患急性传染病,人和温血动物易感,犬是本病毒的敏感宿主和贮存宿主之一,在狂犬病的传播过程中起主要作用。狂犬病主要通过动物咬伤后,唾液中的狂犬病毒经破损皮肤或粘膜侵入体内,在局部组织的神经节繁殖,并进一步侵犯中枢神经系统,最终扩散至外周神经和唾液腺而致病。狂犬病毒在野生动物或圈养动物种群中传播,持续威胁着暴露在患有狂犬病的动物中的人类。狂犬病发生在超过150个国家和地区。亚洲,据估计占全球55000狂犬病死亡病例的56%,每年有31000人死亡,而大多数是儿童。这是一个非常沉重的代价。我国是世界上受狂犬病危害最为严重的国家之一,狂犬病发病率排名世界第二。预防和接触后治疗需要安全有效的疫苗。接种疫苗预防狂犬病的高危人群、暴露前免疫、暴露后预防性治疗和预防宠物动物被认为是最可行和最重要的方法之一。每年,全世界超过1500万人获得接触后接种疫苗防止狂犬病,这可以每年预防成千上万的狂犬病死亡病例。狂犬病病毒属于弹状病毒科,狂犬病病毒属,形态呈子弹状,长180nm,直径75 nm,其头部为半球形,末端常为平端,病毒颗粒由外壳和核心两部分组成。其基因组由11928-11932个核苷酸组成,为单链、不分节段的负链RNA,含5个大的开放阅读框,编码5种结构蛋自。基因组从3’端至5’端的排列顺序为N、P、M、G和L基因,分别编码病毒核蛋白(nucleoprotein, NP)、磷蛋白(phosphoprotein, NS)、膜基质蛋白(matrix protein,MP)、糖蛋白(glycoprotein, GP)和转录大蛋白(polymerase, LP)。糖蛋白是狂犬病毒中唯一能刺激机体产生中和抗体的抗原,其抗原性的保持主要依赖于其空间构象。狂犬病毒糖蛋白的结构特点与其抗原性和免疫原性密切相关,它在刺激机体产生免疫应答的过程中发挥重要作用。糖蛋白是狂犬病毒的主要保护性抗原。具有B、T细胞识别位点,能够诱导机体发生细胞和体液免疫应答,刺激机体分泌中和抗体。糖蛋白含量是狂犬病疫苗的主要质量指标,在狂犬病疫苗的研制过程中常需要及时进行抗原含量的检测,目前用于狂犬病毒疫苗效力评价的经典实验是美国国立卫生研究院(NIH)的方法。多年来我国也一直采用NIH法来测定。狂犬病疫苗使用NIH动物法测定存在成本昂贵、检测周期长、繁琐和涉及到使用活狂犬病毒的安全问题,以及受到国际动物保护协会对实验动物使用的制约,因此不适用于疫苗生产过程中各步骤的监测。因为狂犬病病毒糖蛋白的含量表明疫苗的效力,在单克隆抗体可以正确识别折迭糖蛋白的条件下,可以采用免疫检测方法定量糖蛋白含量,进而判定疫苗效价。已经有不少基于使用特定单克隆抗体对狂犬病病毒糖蛋白进行测定的研究报道：IFA法、EIA、双抗体夹心ELISA法等。因此,寻求更可靠、精确和快速的体外定量检测狂犬病毒疫苗糖蛋白含量的检测方法来替代NIH法势在必行。乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染的是诱发急性和慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌的主要原因之一。乙肝表面抗原(Hpatitis B surface antigen, HBsAg)是第一个可以在丝状或球形表面抗原颗粒并在复制的循环过程中被检测的病毒标志物。检测乙肝表面抗原量约为完整的病毒颗粒数量的1000倍。乙肝表面抗原可用测定技术在临床肝炎发展出现6到8周后检测到。此外,乙肝表面抗原在患者血清的数量远超过乙型肝炎病毒完整病毒粒子,并有强烈的免疫原性。HBsAg的检测是在大多数其他血清学标志物可能无法检测的情况下评估急性或慢性乙型肝炎病毒感染最重要的方法。HBsAg检测的另一个重要用途是筛查献血者的血液制品来排除乙肝病毒感染。肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)被认为是第五个最常见的癌症和第叁世界广泛的癌症相关死亡最常见的原因。由于全球大流行的乙肝和丙肝病毒感染,肝癌的发病率在亚洲和西方国家迅速增加,这一趋势将持续未来50年由于长期感染之间的延迟和肝细胞癌的发展。更重要的是,一些早期的肝癌患者往往无临床症状,这往往导致诊断的延误和高死亡率。肝癌的主要标志物是甲胎蛋白,是单一多肽链糖蛋白,它是特定的肝癌标志物并广泛用于肝细胞癌的诊断。使用甲胎蛋白对肝癌的早期检测是非常可取和重要的。现在,甲胎蛋白已经被用于筛查肝癌在高风险但无临床症状的患者,特别是早期可以治愈的肿瘤,可以减少疾病相关死亡率和改善生存和成本效益,这些优势使甲胎蛋白具有非常重要的临床意义。但由于晚期的肝细胞癌的预后仍然很悲观,因此新的治疗方案和诊断策略的开发迫在眉睫。目前已经有不少有关于甲胎蛋白和乙肝表面抗原免疫测定方法的报道。然而,所有这些都是检测一个分析物而不是检测拥有彼此互相关联多个生物标志物。甲胎蛋白和乙肝表面抗原如果可以在相同的单一分析进行测定,整个过程将变得简单,并缩短了检测时间。同时检测甲胎蛋白和乙肝表面抗原可以获得更多相关数据,帮助临床医生监控从慢性乙型肝炎到肝癌的整个转换过程和肝细胞癌的预后评估。双标记已经在各领域有潜在的应用。然而,传统的荧光标记在多个分析物测定上有很大的局限性,就是很难区别各个标志物的发射光区域。因此临床上也迫切需求开发一个快速、适合和简便的甲胎蛋白和乙肝表面抗原双标记免疫分析技术。标记免疫学,就是将标记技术和免疫学技术相结合进行分析测定的一门学科,是集基础医学、实验技术和临床应用于一体的学科,其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性和各标记物的高灵敏可测量性来检查各种生物活性物质的活性和浓度。随着标记技术、单克隆抗体技术和分子生物学技术的不断发展与完善,标记免疫学已广泛应用于医学、农业、环境及食品检测等多个领域。目前该方法包括一系列的免疫分析技术：荧光免疫分析(Fluoroimmunoassay,FIA)、放射免疫分析(Radioimmunoassay, RIA)、酶免疫分析(Enzymatic immunoassay, EIA)、胶体金免疫分析(Gold immunochromatographic assay, GICA)、时间分辨荧光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)、化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)等。时间分辨荧光免疫分析是一种灵敏的高端定量免疫检测技术,是以镧系稀土离子作为标记物来标记抗原或抗体,因镧系稀土离子具有独特的荧光特性,该技术能够获得极高的信噪比,从而具有很高的灵敏度(10-18mol/孔),且具有标记物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、标准曲线范围宽、操作流程短、易自动化、不受样品自然荧光干扰、多标记和应用范围十分广泛等优点。因此,时间分辨荧光免疫分析相对于酶免分析、放射免疫分析以及胶体金分析法有更高的临床应用价值。TRFIA技术适用于各种抗原抗体的临床检测,在市场上已得到广泛应用。本研究采用时间分辨荧光免疫分析技术研制狂犬病毒糖蛋白及甲胎蛋白和乙肝表面抗原的双标记定量检测试剂,评价各项性能指标,并与其它检测试剂盒进行比较,评价其在临床检测应用中的可行性。方法：采用双抗体夹心法研制狂犬疫苗糖蛋白及甲胎蛋白和乙肝表面抗原双标记时间分辨荧光免疫分析试剂。一、人用狂犬疫苗糖蛋白定量检测试剂的研制与应用1.狂犬病毒糖蛋白抗原的制备：根据狂犬病毒CTN株G基因膜外序列设计引物,提取狂犬病毒CTN株总RNA,采用AMV酶逆转录获得cDNA,利用PCR的方法从cDNA中扩增G基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体p ET32a(+)中,构建原核表达载体p ET32a/G。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达G基因的最佳诱导时间。SDS-PAGE和Western-blo讨表达产物进行检测和分析。2.人用狂犬病毒抗糖蛋白单克隆抗体的制备：以狂犬疫苗制剂为抗原免疫Bal/C小鼠,效价达到1：64000后,采用杂交瘤融合的方法制备单克隆抗体,使用狂犬病毒原液、人血清白蛋白及狂犬病毒核蛋白进行筛选对抗体进行初步筛选,筛出48株疑似糖蛋白单抗。3.单克隆抗体的纯化：用Protein G Sepharose 4 Fast flow亲和层析柱纯化,并用BCA试剂盒测抗体浓度。4.铕标记抗体与纯化：超滤管纯化抗体后,按质量比5：1与铕标记试剂充分混匀,25℃振荡过夜,次日过SephadexTM G-50凝胶层析柱纯化,同时收集流出液(1m1/管),收集液逐管取样测量荧光信号值,合并信号峰值的收集管,加10%BSA保护剂,—20℃保存。5.特异性糖蛋白抗体的筛选及配对：先用狂犬病毒原液作为双抗夹心的标准品,将48株抗糖蛋白单抗逐一包被,与另外47株铕标抗体配对,绘制标准曲线,筛出配较佳的配对组合,再用自制糖蛋白抗原和企业标准品作为标准品,从中绘制标准曲线,最终筛出配对得上的单抗。6.参考标准品的配备用标准品缓冲液将糖蛋白抗原配制成0、31.25、62.5、125、250和250 mEu/L系列参考标准溶液,每瓶1 m1分装冻干4℃保存备用。7.试剂性能指标的评价7.1标准曲线的绘制：以自制试剂中参考标准品浓度的对数为横坐标,信号值对数为纵坐标,由双对数数学模型Log-Log函数处理,绘图软件为OriginPro7.5 SR1 (Microcal, USA)。7.2灵敏度实验：将零值参考标准品当作样品测量20次,计算其均值及标准差。以其测定值的均值加上2倍标准差所得信号值减去本底信号值,代入标准曲线方程计算所得出的浓度,即为分析灵敏度。7.3 Hook效应：对浓度递增的多个参考标准品抗原进行测定。7.4准确度实验：以自制参考品为对照品,并以自制参考品的实测浓度与标示浓度的比值在0.90-1.10之间作为评价准确性合格的标准。7.5精密度实验：采用低、中、高3个质控品(质控品I、II、III)进行测定,得到各质控品检测值的均数、标准差及变异系数(CV)。7.6稀释线性实验：已知的3个浓度的样品使用标准缓冲液连续稀释进行平行度分析。7.7交叉反应：通过检测狂犬疫苗核蛋白来测定自制试剂的交叉反应情况。7.8与NIH法测值的比较实验：样本用自制试剂与NIH法所测浓度值进行相关性分析。二、采用双抗体夹心法研制乙肝表面抗原与甲胎蛋白双标记时间分辨荧光免疫定量检测分析试剂。1.用标准品稀释液将AFP抗原配制成系列浓度为：0 mIU/L、2 mIU/L 20 mIU/L、200 mIU/L、1000 mIU/L和2000 mIU/L;同时用标准品稀释液将HBsAg抗原配制成系列浓度为：0μg/L、0.4 μg/L、2 μg/L、10μg/L、50 μg/L和300 μg/L;再将两种母液分别从低浓度到高浓度按1：1混匀,最后AFP (mIU/L)/HBsAg(μg/L)标准品浓度为：0/0、1/0.2、10/1、100/5、500/25和1000/150；每瓶1ml分装冻干,4℃保存备用。2.固相包被抗体用包被液将AFP和HBsAg包被抗体稀释后,一同加入96微孔板中包被,37℃震荡2小时后,4℃过夜,37℃封闭3小时,真空抽干,4℃保存。3.Eu3+标记抗体制备超滤管纯化抗体后,按质量比5：1与铕标记试剂充分混匀,25℃振荡过夜,次日过SephadexTM G-50凝胶层析柱纯化,同时收集流出液(1ml/管),逐管测量荧光信号值,合并峰管,加10%BSA保护剂,-20℃保存。4.Sm3+标记抗体制备超滤管纯化抗体后,按质量比2：1与钐标记试剂充分混匀,25℃振荡过夜,次日过SephadexTM G-50凝胶层析柱纯化,同时收集流出液(1ml/管),然后逐管测定荧光信号值,合并峰管,加入10%浓度的BSA作保护剂,—20℃保存。5.试剂性能指标的评价5.1标准曲线的绘制以自制试剂中参考标准品浓度的对数为横坐标,信号值的对数为纵坐标,由双对数数学模型Log-Log函数处理,绘图软件采用OriginPro7.5 SRI (Microcal, USA)。5.2灵敏度实验以零参考标准品当作样品测量20次,计算其均值及标准差。以其测定值的均值加上2倍的标准差所得信号值再减去本底信号值,代入标准曲线方程计算所得出的浓度,即为其灵敏度。5.3准确度实验以自制参考品为对照品,计算试剂参考标准品的实测浓度与标示浓度的比值。5.4精密度实验精密度实验采用自制的低、中、高3个质控品(质控品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)进行测定,分析内精密度实验设置复孔,分析间精密度实验设多次测定,计算各质控品检测值的均数、标准差及CV值。5.5稀释线性实验使用标准缓冲液将已知浓度的血清样本从1/2至1/32连续倍比稀释进行平行度分析。5.6干扰实验检测本实验研发的分析试剂在干扰性物质(溶血、高血脂、高胆红素)存在的情况下检测标本的准确性。按试剂操作说明书对加入了血红蛋白、甘油叁酯和胆红素的阳性标本进行测定,计算其回收率。5.7与国外试剂的比较实验同时采用自制试剂及雅培化学发光两种试剂盒检测血清样本,使用统计软件分析测值相关性。结果：一、成功从狂犬CTN株获取目的基因,并构建p ET32a/G重组质粒,重组蛋白在BL21 (DE3)宿主菌中以包涵体的形式表达,通过包涵体洗涤、Ni离子亲和层析以及透析复性后抗体鉴定得到了纯度较高的有活性的狂犬病毒糖蛋白抗原。采用单克隆抗体制备的经典方案,以狂犬疫苗制剂免疫小鼠,取脾进行细胞融合成功制备出48株疑似狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体细胞株,进一步采用糖蛋白抗原筛选出符合使用要求的特异性糖蛋白单克隆抗体配对组合(S036-S053EU3+)。并以特异性糖蛋白单克隆抗体配对组合(S036-S053EU3+)为基础成功研制出狂犬疫苗糖蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂,自制试剂参考品实测浓度与标示浓度的比值在0.90-1.10之间；灵敏度为0.098mEU/mL,在样品浓度超过2000 mEU/mL将出现HOOK效应；试剂分析内变异系数和分析间变异系数均不超过10%；与狂犬核蛋白无交叉反应；189份狂犬病毒样品采用自制试剂和武汉病毒研究所糖蛋白ELISA检测试剂盒武汉进行平行检测,对所测数值进行相关性分析,结果显示两种方法所得的数值相关性良好：Y=1.00X+1.38, R2=0.912, P<0.0001；通过效力实验所得数据做出糖蛋白浓度与参考疫苗和各样品疫苗的线性关系,并计算出TRFIA所测得的疫苗效力值(T-NIH)。同时对TRFIA和NIH动物法所测得的39份疫苗效力值进行趋势和相关性分析,结果两种方法所得的数值趋势一致,相关性良好：Y=0.930X+0.114, R2=0.903, P<0.0001,两种方法所测的数值进行配对t检验,结果显示：t0.05/2,38=-1.223, P=0.229>0.05,表明两种方法所测的数值差异无统计学意义。二、自制乙肝表面抗原与甲胎蛋白双标记时间分辨荧光免疫免疫分析试剂在检测AFP和HBsAg的分析灵敏度分别为0.09 mIU/L和0.01 μg/L。检测范围分别为1-1000mIU/L和0.2-150 μg/L,在检测AFP时分析内和分析间变异系数分别为3.3-4.1%和5.7-7.2%,而在检测HBsAg时分析内和分析间变异系数分别为2.9-3.9%和4.9-6.8%。自制试剂临床血清样本测值同化学发光法测值相关性良好(R2AFP=0.989,P<0.0001；R2HBsAg=0.988,P<0.0001),两种方法所测的数值进行配对t检验,结果显示：tAFP 0.05/2,111=-0.846,P=0.399>0.05;tHBsAg 0.05/2,82=0.557,P=0.579>0.05,可以认为两种方法所测数值的差异无统计学意义。结论：上述结果表明本研究研制的狂犬疫苗糖蛋白及乙肝表面抗原与甲胎蛋白双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的各项指标(准确性、灵敏度、精密度和抗干扰性等)均达到检测试剂的使用要求,狂犬疫苗糖蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂疫苗样品测值与NIH法测值有良好相关性,有望替代NIH动物测定法用于疫苗生产的监控及其有效性的鉴定。乙肝表面抗原与甲胎蛋白双标记时间分辨荧光免疫分析试剂有望替代国外昂贵试剂应用于临床检测和基础医学的研究。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-05-01）
王永军,吕菲,王肖肖,王玲,丁春艳[9]（2015）在《病变组织细胞免疫组织化学P63/SMA双标记对乳腺癌的诊断效能》一文中研究指出目的探讨P63/平滑肌肌动蛋白(SMA)双标记法免疫组化检查对乳腺癌诊断的效能。方法体检发现乳腺肿块的患者150例,行乳腺针吸检查取病变组织,分别进行HE染色和P63/SMA双标记法免疫组化染色,光镜下观察结果并分析。结果乳腺肌上皮细胞同时表达P63和SMA,非肌上皮细胞均不表达P63。HE染色、P63/SMA双标记法免疫组化染色检查分别有32例、20例初诊报告为乳腺良性病变,分别有119例、121例初诊报告为可疑癌细胞或发现癌细胞。对比患者手术病理结果,HE染色对乳腺良性病变的诊断准确率为91%,P63/SMA双标记法免疫组化检查为97%;HE染色和P63/SMA双标记法免疫组化检查对乳腺恶性病变的诊断准确率均为100%。结论 P63/SMA双标记法免疫组化检查对乳腺癌的确诊率较高,且较HE染色可更好地鉴别乳腺良性病变。(本文来源于《山东医药》期刊2015年15期）
汪艳姣[10]（2015）在《基于金磁—量子点双标记的牛乳酪蛋白快速免疫检测新方法研究》一文中研究指出近年来,随着人们的生活水平日渐提高以及牛乳制品的广泛普及,牛乳过敏问题得到了人们的广泛关注。本论文将量子点良好的光学特性与金磁微粒可被快速富集的优势相结合,建立了基于金磁-量子点双标记的牛乳酪蛋白快速免疫检测的新方法,主要开展了以下几个方面的工作:一、以巯基乙酸为稳定剂,采用水相合成法成功制备了表面带有羧基的绿、黄、橙、红四种荧光颜色的Cd Te量子点;采用一锅法合成了氨基化的磁性复合微粒(Fe3O4-PEI),通过两次包金过程,得到了多层复合型金磁纳米微粒(Fe3O4-PEI-Au1-PEI-Au2)。并对其相关性能进行了表征与测试,实验结果表明,所制备的量子点具有良好的光学性能,其激发光谱宽且连续,发射光谱窄而对称,荧光强度较高、且不易聚沉;所制备的金磁微粒粒径均一,具有良好的分散性和晶体结构且磁性好,能很好的用于磁性分离和生物修饰,为本论文后续的拓展与应用研究提供了保证。二、以橙色CdTe量子点为代表,小鼠IgG作为模式抗原,兔抗鼠IgG和羊抗鼠Ig G均作为模式抗体,可与小鼠Ig G上的不同位点相结合。其中,羊抗鼠Ig G偶联Cd Te量子点得到荧光探针,兔抗鼠Ig G偶联金磁微粒得到金磁探针,在此基础上构建了金磁-量子点双标记快速免疫检测体并优化了两探针的合成条件。金磁探针与小鼠Ig G相结合,并结合量子点荧光探针上的兔抗鼠Ig G,最终形成“叁明治”式的复合物。根据复合物上荧光强度的大小,从而实现对小鼠Ig G的定量检测。实验结果表明,在优化的探针条件下,小鼠Ig G的量与荧光检测信号呈正相关。由此说明基于金磁-量子点双标记免疫检测体系成立,有望用于实际样品检测中。叁、在之前研究的基础上,采用两种可与牛乳酪蛋白不同作用位点结合的抗体,将其中单克隆抗体修饰到金磁微粒上作为捕获探针,多克隆抗体修饰到量子点上作为荧光检测探针,建立了一种基于“叁明治夹心式”的牛乳酪蛋白免疫检测新方法,并用于牛乳过敏原的实际检测。结果得到酪蛋白含量在6.25~100ng/m L范围内与荧光强度具有良好的线性关系,最低检出限为1.8 ng/m L。通过和ELISA方法的对比以及加标回收实验证明本检测方法准确性好,稳定性强,重复性佳,可以用于实际样品的检测。该金磁-量子点双标记免疫检测体系可以为牛乳过敏原的检测提供理论和现实依据。(本文来源于《上海师范大学》期刊2015-04-01）
免疫双标记论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果。方法 47例鼻咽癌患者作为研究对象,进行免疫组化和原位杂交双标记技术检测鼻咽癌细胞中EB病毒的表达情况,观察检测效果。结果免疫组化检测结果显示,广谱细胞角蛋白(CK)定位于细胞浆内。原位杂交双标记技术检测结果显示, EB病毒编码的小RNA(EBER)阳性反应定位于鼻咽癌细胞的细胞核上。免疫组化检测后的阳性细胞的胞膜表现为红色,原位杂交双标记技术检测后的阳性细胞核表现为蓝黑色,而双阳性细胞的核与膜呈现蓝红色,不仅对比鲜明同时背景十分清楚,双染成功后细胞及组织结构表现完整。结论免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌均有一定作用,但原位杂交双标记技术检测比免疫组化方法更灵敏,值得临床推广应用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
免疫双标记论文参考文献
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[2].古建雄,刘彬.免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察[J].中国实用医药.2019
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[9].王永军,吕菲,王肖肖,王玲,丁春艳.病变组织细胞免疫组织化学P63/SMA双标记对乳腺癌的诊断效能[J].山东医药.2015
[10].汪艳姣.基于金磁—量子点双标记的牛乳酪蛋白快速免疫检测新方法研究[D].上海师范大学.2015
标签：原位杂交; 免疫组化; 双标记技术; 移植后淋巴组织增生性疾病;