本文主要研究内容
作者何伟炜（2019）在《金枪鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽的分离鉴定及其作用机制初探》一文中研究指出：高尿酸血症是指人体血尿酸水平长期处于过饱和状态所引起的一系列症状总称,是诱发系列健康问题重要因素之一。目前常用的降尿酸药物(如别嘌呤醇)由于具有显著依赖性与毒副作用,使得天然安全高效的降尿酸肽的研究和开发日趋升温。前期实验研究发现金枪鱼蛋白水解物(TPH)可显著抑制高尿酸血症大鼠血清中黄嘌呤氧化酶(XO)活性,从而降低其血尿酸水平。本文旨在明晰TPH中黄嘌呤氧化酶抑制肽构效关系及XO抑制作用机制。首先通过对比不同缓冲试剂对TPH体外XO抑制活性的影响,获得最优体外XO抑制率检测模型,结合多种分离手段从TPH中富集强XO抑制活性组分,并通过质谱联用技术鉴定其氨基酸序列;采用固相合成法获得目标XO抑制肽,综合XO抑制活性及其残基与XO相互作用特点,分析XO抑制肽的构效关系及其XO抑制作用分子机制,为XO抑制肽研究与降尿酸肽产品开发提供理论和方法的参考。(1)针对目前未考虑不同缓冲体系中离子类型及强度对多肽和酶构象的影响,而直接参考其它小分子抑制剂活性测定方法来测定多肽XO抑制率的问题。本论文对比探究了三种常用缓冲试剂对多肽XO抑制率测定结果的影响。结果表明TPH在三种缓冲液中未见明显结构变化,但缓冲液HEPES与XO和TPH会产生相互作用,降低XO的α-螺旋含量,使得酶结构更加松弛,从而导致TPH在HEPES体系中具有更高的XO抑制率,为评价缓冲试剂对体外天然大分子生物活性的影响研究提供了参考。(2)采用乙醇溶液和Sephadex G-15对TPH中XO抑制多肽进行高效分离。结果发现醇溶组分(ESF)的XO抑制活性最好,这可能与其中含有更多疏水性氨基酸残基和<1 kDa的肽密切相关;采用体外XO抑制率为筛选指标,从Sphadex G-15 8个分离组分中确认P6组分活性最佳;并通过UPLC-Q-TOF-MS/MS从中鉴定出13条肽,其中FH的XO抑制活性最佳。同时对比本研究HPLC法和文献中使用的UV方法测定13条肽的XO抑制活性,发现UV法并不适用于测定包含Trp的肽。(3)利用分子对接方法探究了本研究鉴定的XO抑制肽与XO相互作用模式。首先归纳了已知抑制剂配体与XO的作用特点。通过XO抑制肽FH的抑制作用机制研究发现,FH可与底物竞争XO活性中心位点,并与XO活性中心Phe-914、Ser-876及Thr-1010残基之间存在相互作用,从而起到抑制XO活性作用。此外,Phe对肽的XO抑制活性至关重要,且碱性氨基酸能增强含Phe残基寡肽的XO抑制活性。
Abstract
gao niao suan xie zheng shi zhi ren ti xie niao suan shui ping chang ji chu yu guo bao he zhuang tai suo yin qi de yi ji lie zheng zhuang zong chen ,shi you fa ji lie jian kang wen ti chong yao yin su zhi yi 。mu qian chang yong de jiang niao suan yao wu (ru bie piao ling chun )you yu ju you xian zhe yi lai xing yu du fu zuo yong ,shi de tian ran an quan gao xiao de jiang niao suan tai de yan jiu he kai fa ri qu sheng wen 。qian ji shi yan yan jiu fa xian jin qiang yu dan bai shui jie wu (TPH)ke xian zhe yi zhi gao niao suan xie zheng da shu xie qing zhong huang piao ling yang hua mei (XO)huo xing ,cong er jiang di ji xie niao suan shui ping 。ben wen zhi zai ming xi TPHzhong huang piao ling yang hua mei yi zhi tai gou xiao guan ji ji XOyi zhi zuo yong ji zhi 。shou xian tong guo dui bi bu tong huan chong shi ji dui TPHti wai XOyi zhi huo xing de ying xiang ,huo de zui you ti wai XOyi zhi lv jian ce mo xing ,jie ge duo chong fen li shou duan cong TPHzhong fu ji jiang XOyi zhi huo xing zu fen ,bing tong guo zhi pu lian yong ji shu jian ding ji an ji suan xu lie ;cai yong gu xiang ge cheng fa huo de mu biao XOyi zhi tai ,zeng ge XOyi zhi huo xing ji ji can ji yu XOxiang hu zuo yong te dian ,fen xi XOyi zhi tai de gou xiao guan ji ji ji XOyi zhi zuo yong fen zi ji zhi ,wei XOyi zhi tai yan jiu yu jiang niao suan tai chan pin kai fa di gong li lun he fang fa de can kao 。(1)zhen dui mu qian wei kao lv bu tong huan chong ti ji zhong li zi lei xing ji jiang du dui duo tai he mei gou xiang de ying xiang ,er zhi jie can kao ji ta xiao fen zi yi zhi ji huo xing ce ding fang fa lai ce ding duo tai XOyi zhi lv de wen ti 。ben lun wen dui bi tan jiu le san chong chang yong huan chong shi ji dui duo tai XOyi zhi lv ce ding jie guo de ying xiang 。jie guo biao ming TPHzai san chong huan chong ye zhong wei jian ming xian jie gou bian hua ,dan huan chong ye HEPESyu XOhe TPHhui chan sheng xiang hu zuo yong ,jiang di XOde α-luo xuan han liang ,shi de mei jie gou geng jia song chi ,cong er dao zhi TPHzai HEPESti ji zhong ju you geng gao de XOyi zhi lv ,wei ping jia huan chong shi ji dui ti wai tian ran da fen zi sheng wu huo xing de ying xiang yan jiu di gong le can kao 。(2)cai yong yi chun rong ye he Sephadex G-15dui TPHzhong XOyi zhi duo tai jin hang gao xiao fen li 。jie guo fa xian chun rong zu fen (ESF)de XOyi zhi huo xing zui hao ,zhe ke neng yu ji zhong han you geng duo shu shui xing an ji suan can ji he <1 kDade tai mi qie xiang guan ;cai yong ti wai XOyi zhi lv wei shai shua zhi biao ,cong Sphadex G-15 8ge fen li zu fen zhong que ren P6zu fen huo xing zui jia ;bing tong guo UPLC-Q-TOF-MS/MScong zhong jian ding chu 13tiao tai ,ji zhong FHde XOyi zhi huo xing zui jia 。tong shi dui bi ben yan jiu HPLCfa he wen suo zhong shi yong de UVfang fa ce ding 13tiao tai de XOyi zhi huo xing ,fa xian UVfa bing bu kuo yong yu ce ding bao han Trpde tai 。(3)li yong fen zi dui jie fang fa tan jiu le ben yan jiu jian ding de XOyi zhi tai yu XOxiang hu zuo yong mo shi 。shou xian gui na le yi zhi yi zhi ji pei ti yu XOde zuo yong te dian 。tong guo XOyi zhi tai FHde yi zhi zuo yong ji zhi yan jiu fa xian ,FHke yu de wu jing zheng XOhuo xing zhong xin wei dian ,bing yu XOhuo xing zhong xin Phe-914、Ser-876ji Thr-1010can ji zhi jian cun zai xiang hu zuo yong ,cong er qi dao yi zhi XOhuo xing zuo yong 。ci wai ,Phedui tai de XOyi zhi huo xing zhi guan chong yao ,ju jian xing an ji suan neng zeng jiang han Phecan ji gua tai de XOyi zhi huo xing 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华南理工大学的何伟炜，发表于刊物华南理工大学2019-10-23论文，是一篇关于高尿酸血症论文,金枪鱼论文,黄嘌呤氧化酶抑制肽论文,构效关系论文,作用机制论文,华南理工大学2019-10-23论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华南理工大学2019-10-23论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：高尿酸血症论文; 金枪鱼论文; 黄嘌呤氧化酶抑制肽论文; 构效关系论文; 作用机制论文; 华南理工大学2019-10-23论文;