陈武哲1田英2陈芳玲2丁岚2廖婷馨2张彩平2龙石银2（1.湖南永州职业技术学院生化教研室425000；2.湖南南华大学药学与生物科学学院421001）
【摘要】目的：研究出血性脑卒中患者HDL亚类组成分布。方法：采用双向电泳免疫印记法分析66例正常对照及37例出血性脑卒中患者HDL亚类，并分析其组成和含量；采用生化分析仪测定两组人群的血浆TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量。结果：出血性脑卒中组血浆TC、LDL-C、apoB100和preβ1-HDL水平较正常对照组显著升高（P<0.05），而HDL-C（P<0.05）、apoAI（P<0.05）、HDL2a（P<0.05）、HDL2b（P<0.01）含量及apoAI/apoB100比值（P<0.01）显著降低。相关性分析发现出血性脑卒中患者中apoAI、HDL-C水平和apoAI/apoB100与HDL亚类呈显著性正相关（P<0.01）。结论：出血性脑卒中患者血浆HDL颗粒直径呈变小趋势，提示其HDL成熟代谢过程受阻。
【关键词】HDL亚类；脑卒中；双向电泳-免疫印记法；血脂【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】1671-8725（2014）11-0015-02
目前我国出血性脑卒中的死亡率呈显著上升趋势，出血性脑卒中不仅死亡率高，而且致残率、复发率高，严重危害人类健康和生命，也给社会和家庭带来了沉重的负担。大部分出血性脑卒中患者常伴有动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）。高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein，HDL）是组成、功能、电泳迁移率、颗粒大小及密度极不均一的一类脂蛋白，近年研究发现HDL各亚类的组成改变与As有良好的相关性[1]。目前虽然有许多关于心血管疾病与HDL亚类分布关系的研究[2]，但是对于出血性脑卒中患者HDL亚类分布的研究还很少。本研究旨在以出血性脑卒中患者为研究对象，通过双向电泳-免疫印迹法检测血浆中HDL亚类分布情况，研究其与血脂的关系，进一步了解出血性脑卒中患者HDL亚类分布的特点，试图为阐明HDL对脑血管系统的保护作用提供重要的依据。
1对象与方法1.1研究对象及其一般资料出血性脑卒中组：37例（男21例，女16例）均为南华大学附属医院的神经内科住院病人。年龄36-78岁，平均年龄61±13岁。出血性脑卒中的诊断均符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准[3]，均经头颅CT或MRI检查，排除脑栓塞及血液系统疾病导致的脑出血或脑梗死，并排除蛛网膜下腔出血和短暂性脑缺血发作。
健康对照组为66例体检职工（男34例，女32），年龄33-75岁，平均年龄58±12岁。经询问病史，体格检查，心电图及血生化检验排除心、肝、肺、肾内分泌及其他脂代谢相关疾病。且无脑梗塞、脑出血、蛛网膜下腔出血、合并心脑血管疾病或周围栓塞性疾病、大动脉炎、血液病、甲状腺疾病、严重的肾功能损害和近四周内使用过降脂药物者。
两组之间的年龄、性别比、既往病史、及吸烟饮酒情况无统计学差异。
1.2血浆样品全部受试者空腹12h，取血(加抗凝剂)，并立即离心分离血浆，并将血浆样品分为两份，一份用于血脂及载脂蛋白含量的测定，另一份-80℃冻存，用于HDL亚类的测定。
1.3血脂及载脂蛋白含量的检测血浆甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（totalcholesterol，TC）、血浆载脂蛋白（apo）A1和B100含量均由南华大学附属医院采用全自动生化分析仪（OlympusAU400，日本）进行测定。
1.4HDL亚类免疫印迹实验采用人血浆HDL亚类免疫印迹检测法进行测定，测定HDL各亚类相对百分比含量，并将测得的HDL各亚类的相对百分含量乘以血浆样品中apoAI含量，即为HDL各亚类的含量[4]。
1.5统计学处理应用SPSS13.0版统计学软件进行处理，所有数据采用均数±标准差（x±s）表示。各组间比较采用单因素方差分析，成组数据的比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1受试者血脂及载脂蛋白含量由表1可见，与正常对照组相比，出血性脑卒中组血浆TC、LDL-C和apoB100水平显著升高（P<0.05），而HDL-C（P<0.05）、apoAI（P<0.05）水平及apoAI/apoB100比值（P<0.01）显著降低。
表1出血性脑卒中患者血脂及载脂蛋白含量(x±s)
注：*P<0.05，△P<0.013讨论本研究发现出血性脑卒中组TC、LDL-C和apoB100与对照组相比显著升高，而HDL-C、apoAI水平及apoAI/apoB100比值降低（见表1）。表明TC、LDL-C和apoB100可能是导致出血性脑卒中的危险因素。血浆TC的升高可能会引起血管细胞黏附分子1表达增多，从而促使T淋巴细胞和单核细胞等炎性细胞黏附到动脉内皮上可引起As早期血管病理改变[5]。而氧化修饰的LDL-C和氧自由基升高等因素导致的炎性反应，可以进一步致使动脉内皮功能紊乱而应起血管病理改变，最终导致As，这个事实得到了大多数研究者的支持[6]。
本研究通过对37例出血性脑卒中患者和66例健康对照组的血浆脂蛋白进行双向电泳免疫印迹法检测，结果发现出血性脑卒中患者HDL各亚类含量降低，尤其以HDL2a、HDL2b最为显著。Tian等[7]研究表明，随着血浆HDL-C与apoAI水平升高，HDL各亚类会有所增加，其中大颗粒的HDL2a增加的尤为明显。当apoAI和HDL-C同水平增加时，大颗粒的HDL2b升高了116%，而小颗粒preβ1-HDL仅升高了26%，本实验结果与其基本符合。胆固醇逆向转运（reversecholesteroltranscription,RCT）过程就是HDL成熟代谢的过程，新生的preβ1-HDL通过preβ1-HDL→preβ2-HDL→HDL3→HDL2逐渐递变的代谢过程成为成熟的HDL从而完成胆固醇逆向转运，其中的apoAI是卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(lecithincholesterolacyltransferase,LCAT)的主要激活剂，LCAT只能在被apoAI激活后，才使胆固醇脂化，使新生的preβ-HDL转变为HDL3，并进一步转变成成熟球状的HDL2。另外apoAI能与肝细胞膜表面的清道夫受体BI（SR-BI）结合，介导HDL中的胆固醇脂被肝细胞摄取、转化、排泄。故apoAI含量降低导致LCAT活性降低，进而导致胆固醇酯化及HDL成熟过程受阻，使血浆中大颗粒HDL2减少。本研究显示出血性脑卒中患者HDL亚类中大颗粒HDL2a、HDL2b含量显著降低，提示出血性脑卒中患者血浆HDL成熟代谢过程受阻，从而降低了HDL抗As的作用。
相关性分析发现出血性脑卒中患者中apoAI、HDL-C和apoAI/apoB100与HDL亚类呈显著性正相关，但这些指标是否能作为出血性脑卒中临床诊断的指标还需加大实验样本量作进一步的研究。
参考文献[1]徐勇霞,傅明德,徐燕华等.冠心病患者血清HDL亚类组成的研究.华西医科大学报,2002;33(3):340-342.[2]田丽,杨鲁川,傅明德等.血脂正常者血清HDL亚类分布特征的研究.四川大学学报(医学版),2007;38(4):728-730.[3]中华医学会,中华神经科学会各类脑血管病诊断要点[J].中华神经科杂志,1996,29(6):379-380.[4]吴新伟,傅明德,刘秉文,等.人类血清HDL亚类免疫印迹检测法[J].中国动脉粥样硬化杂志,1999,7(3):253-255.[5]YangY,YanB,FuM,XuY,TianY*.RelationshipbetweenplasmalipidconcentrationsandHDLsubclasses.ClinChimActa,2005,Apr;354(1-2):49-58.[6]CavigiolioG,ShaoB,GeierEG,RenG,HeineckeJW,OdaMN.Theinterplaybetweensize,morphology,stability,andfunctionalityofhigh-densitylipoproteinsubclasses.Biochemistry.2008;47(16):4770-4779.*基金项目：湖南省教育厅项目（12C1246），湖南省科技厅项目（2013SK3120），湖南省重点学科建设项目，衡阳市科技局项目(2013KJ05)，南华大学“十二五”科技创新团队基金，南华大学留学归国人员启动基金，南华大学研究生科研创新项目(2013XCX20)资助。