导读:本文包含了丝腺生物反应器论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:家蚕,生物反应器,丝腺,表达系统
丝腺生物反应器论文文献综述
王红,黄精彩,周尧丽,王玉军[1]（2018）在《家蚕丝腺生物反应器的研究进展》一文中研究指出由于家蚕丝腺出色的蛋白合成能力,加之蚕丝蛋白成分相对简单以及家蚕幼虫易于室内饲养和基因工程操作,其作为生物反应器在实验室水平和产业化应用层面都受到越来越广泛的应用。家蚕丝腺生物反应器主要是利用家蚕丝腺的蛋白质高效合成能力进行外援蛋白的生产。家蚕生物反应器是一种真核表达系统,具有表达成本低及表达产物活性高的优势,其不仅在开发新型茧丝复合材料方面有着得天独厚的优势,随着生物技术的进展,其在表达有用活性蛋白方面也得到越来越广泛的应用。家蚕生物反应器主要分为家蚕丝腺生物反应器和家蚕杆状病毒表达系统。主要对家蚕丝腺生物反应器的研究进展进行了综述,提出其中存在的问题。(本文来源于《黑龙江科学》期刊2018年12期）
李小卫[2]（2016）在《家蚕丝腺生物反应器表达手足口病疫苗EV71的研究》一文中研究指出家蚕(Bombyx mori)是一种被驯化和利用5000年之久的重要经济昆虫,在我国农业、工业及科学研究中都占有重要的地位。丝腺是家蚕合成和分泌丝蛋白的特化器官,丝蛋白在五龄后期随核内有丝分裂大量合成,以丝状物形式高效分泌出来,结成一个重约0.5g的蚕茧。由于具有高效的蚕丝生产能力,加之饲养简单、生产成本低廉等优点,家蚕成为合成和生产外源蛋白的理想生物反应器。近年来,整个亚太地区,特别在中国手足口病(Hand, foot and mouth disease,HFMD)的爆发和流行,严重威胁着这一地区婴幼儿的健康。目前针对此病还没有特别有效的治疗药物,亟需开发一种抗原谱广、免疫原性高、安全稳定的疫苗,是预防这一疾病的根本措施。本论文利用含有piggyBac转座子基础元件的原始质粒,构建了中部丝腺组织与时空特异表达手足口病疫苗的转基因质粒,采用胚胎显微注射技术,经过遗传转化得到转基因阳性品系。为了提高外源蛋白的分离纯化效率,通过获得的转基因家蚕品系与丝胶茧突变体Nd-s品系杂交和筛选,我们得到了丝胶茧阳性品系。从个体生长发育过程和Inverse PCR结果可知,所转外源基因不影响家蚕幼虫个体的生长发育。RT-PCR 和 QPCR的结果显示目标基因VP1在中部丝腺特异性地高表达。SDS-PAGE 和 western blotting实验进一步证明VP1蛋白的成功表达。在探索VP1蛋白的分离纯化条件时,首先通过阳性丝胶茧不同处理时间的实验,我们得到丝胶茧的最适处理时间为60h。然后对比浓缩过的正常阳性茧和直接提取的丝胶茧的外源蛋白的提取效率,结果显示,每个丝胶茧和正常阳性茧中的VP1蛋白分别为41.7gg和9.8μg。根据目标蛋白大小,首先将上述两样品的总蛋白通过50kd的浓缩柱,再将过滤液通过30kd的浓缩柱,如此重复浓缩纯化3-5次,通过分子筛的原理即可得到比较纯净的VP1蛋白。通过和BSA蛋白标准品(1、2和5μg)对比,SDS-PAGE结果显示,每个丝胶茧和正常阳性茧得到目标蛋白分别为500ng和550ng,纯度分别为90%和70%。后经过ELISA活性检测,VP1抗原蛋白可以很好地和EV71VLP综合性抗体和mD5单克隆抗体结合,显示出良好的生物活性。以上结果证明了VP1蛋白成功高效地表达并分泌到丝胶茧中。为了提高VP1外源蛋白的表达量,我们尝试利用CRISPR/Cas9介导的定点整合技术将VP1和红色荧光蛋白的表达框序列定点插入到sericin1基因的翻译起始位点,然后借助serl基因内源启动子活性以及多线染色体的核内有丝分裂高效转录活性,试图最大可能地提高外源基因的表达量。我们构建了单、双靶点两种类型的donor,分别得到GO代蛹期嵌合体20头和8头,占蛹总数的7.14%和5.03%。其中,两种Donor得到的生殖腺特异的嵌合体占总嵌合体个数的比例分别为60%和50%。遗憾的是,这些嵌合体没有成功地通过遗传转化成稳定遗传的阳性品系。Cas9/sgRNA切割效率的检测,结果显示两个位点均有活性,但都不高,这可能没有得到阳性品系的原因。(本文来源于《福建农林大学》期刊2016-04-01）
黄绍华,董久鸣,刘云财,占鹏飞[3]（2015）在《利用转基因家蚕丝腺生物反应器生产重组蛋白的应用前景》一文中研究指出家蚕丝腺拥有较强合成丝蛋白的能力,通过利用这一能力,使其能够大量生产有价值的蛋白,人们开始引入转基因家蚕,使它能够在丝腺中合成重组蛋白并分泌到蚕茧中。获得的重组蛋白可在生物学、生物技术,和药学领域中得到广泛应用。我们通过控制合成蛋白在丝腺中的定位,在后部丝腺(PSG)中表达重组蛋白使其定位在不能溶解的丝素中,在中部丝腺(MSG)中表达则定位于亲水外层的丝胶层中。本文主要讨论将转基因家蚕丝腺生物反应器作为优良工具,应用于大量生产药用蛋白和在工业化水平生产相关重组蛋白的可能性,以及生产重组蛋白过程中所面临的挑战和未来的应用前景。(本文来源于《蚕桑通报》期刊2015年04期）
叶露鹏[4]（2015）在《高效家蚕丝腺生物反应器的关键因素分析》一文中研究指出家蚕是鳞翅目昆虫的典型代表,作为第二大模式昆虫,它不仅有着重要的研究价值,而且可以带来可观的经济价值。转基因技术的成功建立是生命科学领域的里程碑,它频繁的被用于改变生物的性状以及通过这种技术在生物体中表达一些珍贵的外源蛋白。PiggyBac转座子是最具吸引力的转座原件之一,它已经广泛的被应用于十多种生物的研究。PiggyBac转座子介导的转基因技术为家蚕的转基因研究提供了坚实的基础。家蚕丝腺有着惊人的蛋白合成和分泌的能力,是一种非常理想的生物反应器。经过数十年的努力,研究人员已经创建了家蚕中部和后部丝腺生物反应器。这些生物反应器已经成功表达了数十种外源蛋白。然而,现有的家蚕丝腺生物反应器效率依旧不高,主要体现在piggyBac转座子介导的转基因效率低、外源蛋白表达量较低、以及理想的转基因阳性个体筛选较复杂等等,这几个问题成为了建立高效家蚕丝腺生物反应器所面临的最大障碍。因此,提高转基因效率、提高外源基因表达量以及创建一种快速外源基因高效表达的转基因阳性个体筛选方法显得尤为重要。本文就针对这些科学问题展开了一系列的研究,取得的主要成果归纳如下：1、类转录激活因子效应蛋白介导piggyBac转座子的高效转座针对piggyBac介导的转基因效率不高这个问题,本研究创建了一种有效提高转座效率的新方法,该方法的核心是构建一个类转录激活因子效应蛋白(transcription activator-like effector, TALE)和piggyBac转座酶(PBase)的融合蛋白(TALE-PBase)。实验证明TALE-PBase融合蛋白可以显着地将转座效率提高到63.9%,这相当于是目前转座效率平均水平的7倍。而且新方法的转基因阳性蛾区中的阳性个体数每区平均达到近18条,比目前家蚕转基因实验的平均水平最大提高了5.7倍。TALE-PBase融合蛋白介导的转基因技术不仅提高了转基因阳性蛾区数,而且也明显提高了阳性蛾区中的阳性个体数。这两方面的提高是piggyBac转座子介导的转基因技术的巨大突破,为今后的转基因研究提供了很好的技术支撑。2、家蚕丝胶1启动子的结构与活性分析启动子是调控目的基因时空表达重要的调控原件之一。然而,绝大多数的研究将目光放在了核心启动子或近端启动子区域,而近端启动子5’端的序列常常被人们所忽视。本研究就4kb长度的家蚕丝胶1 (sericin 1, Serl)启动子序列通过生物信息学方法预测到种类众多的潜在的转录因子结合位点,采用转基因实验发现启动子序列包含的转录因子结合位点越多且种类越丰富时,启动子的转录活性就越强大。但是重复的近端启动子多个拷贝组合并不能提高下游基因的转录水平,而且重复的近端启动子拷贝数越多,下游基因的转录水平反而越低。结果说明,4 kb长度的Serl启动子要比其短的启动子活性要高,重复的近端启动子多个拷贝组合并不能提高下游基因转录活性。这个结果为今后构建高效家蚕丝腺生物反应器时选择合适长度的启动子提供了参考。3、PiggyBac转座子在家蚕基因中的定向转座转座子的随机转座时常不利于外源基因的表达,而且可能会引起内源基因的突变。TALE-PBase融合蛋白介导的转座理论上有可能实现定向转座。PBase通过TALE靶向蛋白的牵引到达目的位点,从而在目的位点实现定向转座。通过研究我们发现了TALE-PBase介导的转座改变了piggyBac转座子原先完全随机插入的特性,而是变的更加具有倾向性,但还没有得到真正定向转座的结果。我们还在71个转座家蚕中发现了2对插入位点一样的家蚕,这种现象在常规的piggyBac转座研究中是非常罕见的。由此可见,TALE对PBase在一定程度上起到了靶向引导作用,这为今后在个体水平实现定点转座提供了宝贵的参考价值。4、TALEN介导的家蚕同源重组家蚕受精卵相当于家蚕的早期个体,相比细胞,它更能反应生命的真实情况。因此,用家蚕受精卵进行同源重组(homologous recombination, HR)实验可以反应个体水平同源重组的发生概率。同源重组精确的基因组编辑能力可以弥补其它基因组打靶技术的不足,而且也可以解决piggyBac转座子随机插入基因组这一问题。但同源重组的低效率现象是阻碍其广泛应用的一个限制因素。本研究采用蚕卵为材料,将TALEN mRNA和供体同源重组质粒注射到产卵8h的家蚕受精卵内,经72 h后进行TALEN打靶效率的鉴定以及同源重组效率的检测,结果发现TALEN在显微注射后72 h就已经对靶位点产生了明显突变,在检测的15组样品中有12组出现了明显打靶,打靶效率达到80%。并且在15组受精卵中成功检测到3组包含阳性的同源重组个体,同源重组效率达到20%。这种蚕卵早期的TALEN打靶效率以及同源重组效率的检测可以在短期内评判实验的可行性,为后续阳性同源重组个体的筛选提供保障。同时也证明采用TALEN mRNA和供体同源重组质粒组合可以实现精确的基因组编辑。5、外源基因表达效率的辅助检测虽然piggyBac转座子是以随机的方式插入基因组,但是将外源基因表达框和标志基因表达框以相同转录方向紧密的构建在一起时,我们相信即使在不同的插入位点,两个表达框受到来自基因组的影响是相近的。我们构建了萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, FLuc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, EGFP)两个相邻的基因,作了转录水平的相关分析,结果表明即使插入位点不同,这两个基因的转录水平总是显着相关的。ELISA实验进一步显示EGFP的转录水平和翻译水平同样也是显着相关。所以,外源基因的表达水平可以通过检测标志基因(EGFP)的表达水平来简单的预测。综上所述,本论文从提高转基因效率、提高外源基因的表达效率以及建立外源基因表达效率的辅助检测方法这3个层次来优化家蚕丝腺生物反应器并取得了相应的成果,为最终建立高效家蚕丝腺生物反应器奠定了坚实的基础。TALEN打靶效率以及同源重组效率的检测可以在短期内评判实验的可行性,为后续阳性同源重组个体的筛选提供保障。同时也证明采用TALEN mRNA和供体同源重组质粒组合可以实现精确的基因组编辑。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-04-01）
王峰,马叁垣,赵萍,夏庆友[5]（2014）在《转基因家蚕丝腺生物反应器体系的建立和应用》一文中研究指出数千年来,家蚕的主要经济价值在于生产蚕丝,以此形成的蚕丝产业为人类经济发展和社会进步做出了卓越贡献。随着现代生物技术的快速发展,特别是在家蚕基因组计划以及家蚕功能基因组研究平台建立的促进下,家蚕丝腺高效合成与分泌丝蛋白的这一奇特现象逐渐被了解和重视,以家蚕丝腺作为生物反应器大规模、低成本生产高附加值有用蛋白质的应用潜力也逐步得以彰显,并有可能成为促进传统蚕丝产业改造及拓宽产业领域的重要方向之一。本文综合分析了过去10年国内外在家蚕丝腺生物反应器领域的发展线索及取得的研究成果,并就该领域的现存问题与发展趋势进行了初步分析和讨论。(本文来源于《蚕业科学》期刊2014年05期）
叶露鹏,钱秋杰,张玉玉,尤征英,车佳倩[6]（2014）在《家蚕丝腺生物反应器中丝胶蛋白1启动子的分析和外源基因表达效率的辅助检测(英文)》一文中研究指出Promoter is one of the most important regulatory elements in regulating target genes spatiotemporal expression. However,the majority of studies are focus on core or proximal promoter regions, so that the information far away from 5'-fianking region of proximal promoter is often neglected. In this study, a long length sequence(about 4-kb) of sericin1(Ser1) promoter was cloned from silkworm genome, which was further validated as a kind of conserved and tissue-specific promoter by bioinformatic analysis. The4-kb length of Ser1 promoter was divided into three sections and each section was predicted including a lot of potential transcriptional factor binding sites(TFBSs). The transgenic experiment suggested that the TFBSs facilitated enhancement of promoter driving activity. To our surprise, the combination of multi-copy proximal Ser1 promoters could not improve the transcriptional level of exogenous gene but reduction. We speculated that multi-copy promoters would disperse transcription pre-initiation complexes, therefore the driving force of promoters were weakened. The correlation analysis between two contiguous genes, target foreign gene(firefly luciferase, FLuc) and marker gene(enhanced green fluorescent protein, EGFP), was carried out.The results indicated that the correlation was highly significant between FLuc and EGFP regardless of different insertion sites.Moreover, the ELISA assay revealed the correlation between transcriptional and translational level of EGFP were also very significant. Therefore, the exogenous genes expression could be simply and conveniently predicted by using an adjacent marker gene.This is a low-cost, time- and labour-saving approach for large-scale screening high foreign protein expression transgenic strains. In sum, all those results provide important clues for researchers to further investigate underlying molecular mechanism of promoters,and a new way is discovered to quickly and accurately predict exogenous genes expression in transgenic studies.(本文来源于《中国蚕学会第八届青年学术研讨会论文集》期刊2014-08-13）
尤征英,危浩,阮系真,叶露鹏,王少华[7]（2013）在《家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白》一文中研究指出【目的】采用家蚕丝腺生物反应器这一蛋白高效表达系统,尝试建立一种高效、低廉、稳定生产狂犬病病毒核蛋白(RVNP)的技术体系,为生产基因工程疫苗奠定基础。【方法】通过RT-PCR方法克隆获得RVNP序列,采用家蚕丝胶蛋白基因(Ser1)启动子为特异性启动子,将RVNP构建到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记基因的piggyBac转座子表达载体(pBA3EGFP)中,并采用显微注射转基因家蚕技术构建家蚕丝腺生物反应器。【结果】G1代通过EGFP标记的筛选获得转基因家蚕阳性蛾区26个,蛾圈阳性率为59.09%。PCR实验证实RVNP已经整合到家蚕基因组中,Western blot分析表明RVNP蛋白可能附着于丝胶蛋白并随家蚕吐丝行为分泌到蚕茧中。【结论】获得了能够表达外源的RVNP蛋白的转基因家蚕品系,该系统有望成为高效、低廉、稳定地生产狂犬病基因工程疫苗的技术体系之一。(本文来源于《中国农业科学》期刊2013年18期）
钟伯雄,危浩,庄兰芳[8]（2011）在《piggyBac转座子介导的转基因家蚕丝腺生物反应器研究进展》一文中研究指出综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节:(1)外源目的基因高效插入家蚕基因组;(2)转基因家蚕的高效、快捷的检测;(3)具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的研究进展,为更好地利用转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白提供了参考。(本文来源于《中国农业科学》期刊2011年21期）
李艳梅[9]（2010）在《基于基因打靶载体和昆虫表达载体的转基因家蚕丝腺生物反应器表达hGM-CSF的研究》一文中研究指出人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,hGM-CSF)作为一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在当前具有重要的临床应用价值。如何获得高效表达、高活性、毒副作用小的hGM-CSF是近年来基因工程研究的热点。目前重组hGM-CSF已在多种表达系统中表达,随着重组hGM-CSF的临床研究的日趋成熟,其应用前景将更为广阔。家蚕转基因的研究已经有20多年的历史了,具有家蚕杆状病毒表达系统无可比拟的优势。但是,外源基因的有效导入、整合表达水平及遗传稳定性上还存在很多不足。本研究将带有以家蚕丝素重链基因第一外显子及其下游部分序列和第二外显子部分序列及其上游部分序列做为同源序列和A3启动子控制下的gfp报告基因以及由丝素轻链(fib-L)启动子控制下的hGM-CSF基因的打靶载体利用精子介导法导入家蚕,通过绿色荧光和分子生物学方法筛选转基因家蚕,首次利用基因打靶技术成功获得可以正常结茧传代的转基因家蚕,ELISA检测结果显示,hGM-CSF在每克鲜组织中的表达量为1.26 ng。同时,成功构建了具有hGM-CSF表达元件的昆虫细胞转化载体PIZT-hGM-CSF,转基因载体与辅助质粒分别共转染家蚕BmN细胞和昆虫Sf-9细胞,利用博莱霉素筛选获得持续表达hGM-CSF稳定转化细胞系,ELISA检测结果显示,hGM-CSF在106个稳定转化的家蚕BmN细胞和昆虫Sf-9细胞中的表达量分别为0.7 ng和0.3 ng;利用精子介导法将转基因载体导入家蚕,通过绿色荧光和分子生物学方法筛选转基因家蚕,western blot结果显示,转基因家蚕丝腺表达的hGM-CSF的分子量为22 kD。ELISA检测结果显示,每克鲜组织中hGM-CSF表达量为4.7 ng。证明昆虫表达载体plZT/V5- His可以直接应用于转基因家蚕研究。(本文来源于《苏州大学》期刊2010-04-01）
赵越[10]（2009）在《转基因家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ的研究》一文中研究指出家蚕丝腺是合成、分泌蚕丝蛋白的重要器官,具有作为生物反应器的基本特点。为了实现人类胰岛素生长因子-I(hIGF-I)在转基因家蚕细胞和丝腺组织中的表达,我们以家蚕丝胶基因启动子(Ser-1)驱动人胰岛素样生长因子(hIGF-I),构建了带有家蚕杆状病毒极早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3GFP-ser-hIGF-ie-neo,在可表达转座酶的辅助质粒存在下,转染BmN培养细胞,以700~800μg/mL的G418筛选,获得了稳定转化细胞系;ELISA检测检测结果显示,5×105个细胞/ml hIGF-I的表达水平约7.8×103 pg;转基因载体pigA3GFP-Ser-hIGF-ie-neo通过精子介导导入蚕卵,利用neo、gfp基因的双重筛选,经过PCR和点杂交鉴定,获得了转基因家蚕,ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2.44×103 pg。此外,用家蚕丝素Fhx/P25启动子驱动hIGF-I,构建了带有ie-1启动子控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP- Fhx/P25-hIGF-ie-neo,该载体以精子介导法导入蚕卵,通过筛选并结合分子生物学鉴定,获得了转基因家蚕,ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克后部丝腺组织中的表达水平为152×103 pg。(本文来源于《苏州大学》期刊2009-05-01）
丝腺生物反应器论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
家蚕(Bombyx mori)是一种被驯化和利用5000年之久的重要经济昆虫,在我国农业、工业及科学研究中都占有重要的地位。丝腺是家蚕合成和分泌丝蛋白的特化器官,丝蛋白在五龄后期随核内有丝分裂大量合成,以丝状物形式高效分泌出来,结成一个重约0.5g的蚕茧。由于具有高效的蚕丝生产能力,加之饲养简单、生产成本低廉等优点,家蚕成为合成和生产外源蛋白的理想生物反应器。近年来,整个亚太地区,特别在中国手足口病(Hand, foot and mouth disease,HFMD)的爆发和流行,严重威胁着这一地区婴幼儿的健康。目前针对此病还没有特别有效的治疗药物,亟需开发一种抗原谱广、免疫原性高、安全稳定的疫苗,是预防这一疾病的根本措施。本论文利用含有piggyBac转座子基础元件的原始质粒,构建了中部丝腺组织与时空特异表达手足口病疫苗的转基因质粒,采用胚胎显微注射技术,经过遗传转化得到转基因阳性品系。为了提高外源蛋白的分离纯化效率,通过获得的转基因家蚕品系与丝胶茧突变体Nd-s品系杂交和筛选,我们得到了丝胶茧阳性品系。从个体生长发育过程和Inverse PCR结果可知,所转外源基因不影响家蚕幼虫个体的生长发育。RT-PCR 和 QPCR的结果显示目标基因VP1在中部丝腺特异性地高表达。SDS-PAGE 和 western blotting实验进一步证明VP1蛋白的成功表达。在探索VP1蛋白的分离纯化条件时,首先通过阳性丝胶茧不同处理时间的实验,我们得到丝胶茧的最适处理时间为60h。然后对比浓缩过的正常阳性茧和直接提取的丝胶茧的外源蛋白的提取效率,结果显示,每个丝胶茧和正常阳性茧中的VP1蛋白分别为41.7gg和9.8μg。根据目标蛋白大小,首先将上述两样品的总蛋白通过50kd的浓缩柱,再将过滤液通过30kd的浓缩柱,如此重复浓缩纯化3-5次,通过分子筛的原理即可得到比较纯净的VP1蛋白。通过和BSA蛋白标准品(1、2和5μg)对比,SDS-PAGE结果显示,每个丝胶茧和正常阳性茧得到目标蛋白分别为500ng和550ng,纯度分别为90%和70%。后经过ELISA活性检测,VP1抗原蛋白可以很好地和EV71VLP综合性抗体和mD5单克隆抗体结合,显示出良好的生物活性。以上结果证明了VP1蛋白成功高效地表达并分泌到丝胶茧中。为了提高VP1外源蛋白的表达量,我们尝试利用CRISPR/Cas9介导的定点整合技术将VP1和红色荧光蛋白的表达框序列定点插入到sericin1基因的翻译起始位点,然后借助serl基因内源启动子活性以及多线染色体的核内有丝分裂高效转录活性,试图最大可能地提高外源基因的表达量。我们构建了单、双靶点两种类型的donor,分别得到GO代蛹期嵌合体20头和8头,占蛹总数的7.14%和5.03%。其中,两种Donor得到的生殖腺特异的嵌合体占总嵌合体个数的比例分别为60%和50%。遗憾的是,这些嵌合体没有成功地通过遗传转化成稳定遗传的阳性品系。Cas9/sgRNA切割效率的检测,结果显示两个位点均有活性,但都不高,这可能没有得到阳性品系的原因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
丝腺生物反应器论文参考文献
[1].王红,黄精彩,周尧丽,王玉军.家蚕丝腺生物反应器的研究进展[J].黑龙江科学.2018
[2].李小卫.家蚕丝腺生物反应器表达手足口病疫苗EV71的研究[D].福建农林大学.2016
[3].黄绍华,董久鸣,刘云财,占鹏飞.利用转基因家蚕丝腺生物反应器生产重组蛋白的应用前景[J].蚕桑通报.2015
[4].叶露鹏.高效家蚕丝腺生物反应器的关键因素分析[D].浙江大学.2015
[5].王峰,马叁垣,赵萍,夏庆友.转基因家蚕丝腺生物反应器体系的建立和应用[J].蚕业科学.2014
[6].叶露鹏,钱秋杰,张玉玉,尤征英,车佳倩.家蚕丝腺生物反应器中丝胶蛋白1启动子的分析和外源基因表达效率的辅助检测(英文)[C].中国蚕学会第八届青年学术研讨会论文集.2014
[7].尤征英,危浩,阮系真,叶露鹏,王少华.家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白[J].中国农业科学.2013
[8].钟伯雄,危浩,庄兰芳.piggyBac转座子介导的转基因家蚕丝腺生物反应器研究进展[J].中国农业科学.2011
[9].李艳梅.基于基因打靶载体和昆虫表达载体的转基因家蚕丝腺生物反应器表达hGM-CSF的研究[D].苏州大学.2010
[10].赵越.转基因家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ的研究[D].苏州大学.2009