导读:本文包含了粒系分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:乳腺癌,造血干细胞,粒系分化,转化生长因子
粒系分化论文文献综述
潘珍珍,姚敏敏,陈莺歌,邓九零,颜美秋[1]（2018）在《乳腺癌患者的粒系分化异常现象和TGF-β1的矛盾转换调节作用》一文中研究指出目的探讨乳腺癌患者外周血粒系分化异常的主要特点,并体外验证以转化生长因子(TGF-β1)为代表的肿瘤相关因子与造血干细胞(HSC)粒系分化和乳腺癌血象的关系。方法回顾性对比分析52例乳腺癌患者与47例正常人的外周血粒系血象的特点。通过小鼠脾脏HSC体外集落形成实验、流式细胞仪技术,分析TGF-β1对集落形成情况和Gr-1+CD11b+粒系细胞比例的影响,以验证肿瘤关键因子TGF-β1在HSC粒系分化中的作用及与肿瘤血象异常的关系。结果乳腺癌患者白细胞计数、中性粒细胞计数、粒细胞总数、粒细胞占白细胞比例、中性粒-淋巴细胞比率明显升高(P<0.05),而嗜酸性粒细胞计数及分类显着降低(P<0.05)。集落形成实验表明荷瘤小鼠脾细胞的粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、单核-巨噬细胞集落生成单位显着多于正常小鼠(P<0.05)。加入TGF-β1后荷瘤小鼠脾脏HSC的粒系分化能力受促进。结论乳腺癌患者存在明显的粒系分化异常,可能与癌组织分泌的TGF-β1等各类生长因子诱导HSC分化失衡有关。TGF-β1对脾脏HSC克隆、粒系分化的调节存在矛盾转换现象。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2018年07期）
孙琳琳[2]（2018）在《MiR-155-5p靶向调控STAT1在白血病细胞向粒系定向分化中的作用与机制》一文中研究指出背景白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病,细胞分化被阻滞在早期阶段而不具备成熟细胞的功能。诱导分化疗法通过诱导肿瘤细胞分化成熟,从而达到治疗目的,我国学者首次以全反式维甲酸(All-trans-retinoic acid,ATRA)诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)取得成功。但ATRA诱导疗法尚具有疗效不稳定、部分患者易复发等问题,因而进一步阐释其诱导白血病细胞分化机制将为临床治疗提供新的靶点与途径。信号转导与转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)作为STATs家族的重要成员之一,主要被干扰素(IFN)激活,参与机体抗感染,调节细胞增殖、分化、生长及凋亡,并在抑制肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。研究发现,维甲酸诱导的人组织细胞淋巴瘤U-937细胞分化与STAT1丝氨酸727位磷酸化密切相关,但其在人急性髓系白血病HL-60、NB4细胞向粒细胞分化中的作用机制尚不明确。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类小分子非编码单链RNA,其通过与靶基因3'UTR区特异性结合,负向调控靶基因表达,从而参与细胞生长分化、信号转导、增殖凋亡等生理过程及多种疾病的发生与发展。近来研究发现,miRNA在多种实体瘤及血液系统恶性肿瘤中表达升高,从而调控肿瘤细胞分化。然而miRNA在ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化过程的作用尚不清楚,此方面的深入探索有望从表观遗传调控角度阐释白血病细胞分化障碍的机理,为临床治疗提供新的靶点与思路。目的探讨STAT1信号通路在ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化过程中的作用及miRNA靶向调控机制,从表观遗传学角度阐释白血病细胞分化障碍的原因,为临床诊断及治疗提供新的靶点与途径。方法采用ATRA诱导筛选的敏感细胞株—人急性髓系白血病细胞(HL-60)及人急性早幼粒白血病细胞(NB4)向粒细胞分化,将细胞随机分为两组,观察组以ATRA(2μmol/L)诱导两种细胞向粒细胞分化,对照组加入相同浓度DMSO;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞表面CD11b表达;q-PCR检测STAT1及相关转录因子mRNA水平变化;Western blot实验检测STAT1总蛋白及磷酸化水平变化;STAT1活性抑制剂—氟达拉滨(Fludarabine)抑制STAT1活性,流式细胞术检测STAT1对细胞分化的影响,q-PCR检测相关转录因子表达变化。高通量芯片筛选诱导体系中差异miRNA,q-PCR验证差异miRNA表达;调控候选差异miRNA表达观察其对白血病源性粒细胞分化及STAT1信号通路的影响;荧光素酶报告基因实验确定差异miRNA与STAT1结合位点。结果HL-60、NB4细胞是ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化的敏感细胞株;与对照组比较,ATRA诱导后HL-60细胞数目减少,形状不规则,胞质增多,核浓缩,核仁变小或消失,杆状核、分叶核显着增多;NB4细胞体积变小,细胞群变分散,形状不规则化,核质比减低,杆状核、分叶核显着增多;ATRA诱导后细胞表面CD11b表达显着升高(P<0.05),提示HL-60、NB4细胞在ATRA作用下向粒细胞分化;细胞中STAT1mRNA、总蛋白及磷酸化水平均显着升高(P<0.05),提示STAT1信号通路活化在ATRA诱导HL-60、NB4细胞向粒细胞分化过程发挥重要作用;细胞中C/EBPε、C/EBPβ、PU.1表达显着增加(P<0.05);Fludarabine抑制STAT1蛋白活性后白血病源性粒细胞分化显着降低(P<0.05),同时C/EBPεmRNA表达明显降低,Pearson相关性分析显示STAT1与C/EBPεmRNA表达呈显着正相关(P<0.05),提示活化STAT1促进C/EBPε转录可能是ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化的关键机制之一。高通量芯片检测及qPCR验证显示ATRA诱导后miR-155-5p表达降低(P<0.05),Pearson相关性分析提示STAT1 mRNA与miR-155-5p表达呈显着负相关(P<0.05),Targetscan预测miR-155-5p与STAT1之间具有潜在结合位点。上调miR-155-5p表达能显着降低STAT1 mRNA、C/EBPεmRNA水平及白血病源性粒细胞分化比例(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验证实miR-155-5p与STAT1 mRNA 3'UTR具有互补结合。以上结果提示,ATRA可能通过降低miR-155-5p表达促进STAT1信号通路活化诱导白血病细胞向粒细胞分化。结论ATRA靶向调控miR-155-5p表达促进STAT1/C/EBPε信号通路活化,进而诱导白血病细胞向粒细胞分化,靶向调控miR-155-5p/STAT1信号通路可能成为诱导白血病细胞向粒细胞分化的有效靶点和途径。(本文来源于《济南大学》期刊2018-05-01）
韩杨,宋冠华,田静,廖琼,李莲莲[3]（2017）在《TRIM22靶向调控EIF4E在NB4细胞粒系定向分化过程中的作用与机制》一文中研究指出背景:叁基序蛋白22,也被称为TRIM22,因其具有包含RING区、B-box区和卷曲螺旋区的RBCC结构序列,而被归于TRIM家族。TRIM22是抑癌基因p53的靶基因之一,已有研究证明TRIM22可参与造血细胞的分化,病毒复制的抑制,并具有抗肿瘤细胞增殖作用,但其特定分子功能尚未阐明。真核细胞起始因子4E(EIF4E)是一种帽结合蛋白,可以特异性地识别mRNA的5'端的帽子结构,从而启动翻译。EIF4E过度表达会导致增加扩散、逃避凋亡、肿瘤侵袭和转移。血液肿瘤中,EIF4E高表达在淋巴瘤中多见,在髓系肿瘤包括骨髓增生异常综合症、慢性髓系白血病及急性髓系白血病中也较多见,尤其是M4、M5亚型和慢性髓细胞白血病急变期的患者。目的:探讨在NB4细胞粒系分化过程中TRIM22的功能及与EIF4E是否存在相互作用,从而进一步阐明TRIM22靶向调控EIF4E的机制。方法:体外实验建立NB4细胞诱导分化模型,应用q-PCR及Western Blot技术检测TRIM22与EIF4E的基因与蛋白表达的变化,并通过电穿孔转染技术敲低或过表达TRIM22后利用CCK-8和流式细胞术检测其对细胞功能的影响,及对EIF4E蛋白表达水平的影响,最后利用CO-IP验证TRIM22与EIF4E的相互作用。结果:ATRA诱导NB4细胞后,TRIM22基因及蛋白表达水平逐渐升高,EIF4E反之(P<0.01)。过表达TRIM22后,流式检测ATRA作用后细胞表面CD11b表达比对照组增高(t=9.54,P<0.01),过表达同时敲低TRIM22后,流式检测ATRA作用后细胞表面CD11b表达比过表达组降低(t=8.187,P<0.01)。同时,过表达TRIM22基因水平后,EIF4E蛋白水平会反向变化(t=8.36,P<0.05)。CO-IP实验验证TRIM22通过结合EIF4E而作用。结论:TRIM22在NB4细胞粒系定向分化过程中促进细胞分化,并且可通过靶向结合EIF4E抑制其表达而发挥重要作用。(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2017-10-26）
韩杨[4]（2017）在《TRIM22靶向调控eIF4E在白血病细胞粒系定向分化过程中的作用与机制》一文中研究指出背景叁基序蛋白TRIM22(tripartite motif 22),也被称为Staf50(stimulated trans-acting factor of 50 kD),因其具有包含RING区,B-box区和卷曲螺旋区的RBCC结构序列,而被归于叁基序蛋白TRIM家族中的一员。TRIM22是抑癌基因P53的靶基因之一,其过表达可以激活NF-κB,并且N端RING结构域及C端SPRY结构域对其在NF-κB活动,抗病毒以及自身免疫疾病中的介导过程十分重要。已有研究证明TRIM22呈现RING结构域依赖性E3泛素连接酶活性,可参与病毒复制的抑制,具有抗肿瘤增殖作用,但其特定分子功能尚未阐明。真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,简称“eIF4E”)是一种帽结合蛋白,可以特异性地识别mRNA的5'端的帽子结构,从而启动翻译。eIF4E过度表达会导致增加扩散,逃避凋亡,肿瘤侵袭和转移。血液肿瘤中,eIF4E高表达在急性淋巴系统白血病中较少发生,在淋巴瘤,骨髓增生异常综合症,急慢性髓系白血病(尤其是M4,M5亚型和慢性髓系白血病急变期的患者)中较多见,对eIF4E基因表达水平的检测对监测AML疾病状况有重要意义。课题组前期发现在全反式维甲酸(all-trans-Retinoic acid,ATRA)诱导急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22与eIF4E呈反向变化。TRIM19已被证明依赖RING结构域通过与eIF4E结合来抑制其活动,那么我们推测有相似结构的TRIM22也可能有相似作用,并有望成为急性髓系白血病治疗的新靶点。目的探讨在人急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22的功能及与eIF4E的相互作用,从而进一步阐明TRIM22靶向调控eIF4E的机制,为白血病治疗寻找新靶点提供重要依据。方法体外实验建立ATRA诱导HL-60及NB4细胞分化模型,应用RT-PCR,q-PCR及Western Blotting技术检测TRIM22与e IF4E的基因与蛋白表达的变化,并通过电穿孔转染技术敲低或过表达TRIM22后,利用CCK-8和流式细胞术检测其对细胞功能的影响,以及Western Blotting技术检测对eIF4E蛋白表达水平的影响。最后采用免疫共沉淀实验(CO-IP)验证TRIM22与eIF4E的相互作用。结果ATRA诱导HL-60及NB4细胞后,TRIM22的基因及蛋白表达水平均升高,eIF4E的基因及蛋白表达水平均降低。其中q-PCR检测NB4细胞在诱导前后mRNA相对表达量由1.01±0.15逐渐升高到30.98±2.79(F=280.70,P=0.000),Western blotting检测其蛋白相对表达水平由0.22±0.03逐渐升高至0.51±0.05(F=51.43,P=0.000)。反之,eIF4E的mRNA相对表达量由1.01±0.09逐渐降低至0.47±0.06(F=20.52,P=0.000),蛋白相对表达水平由0.97±0.02逐渐降低至0.64±0.09(F=14.70,P=0.001)。流式细胞术检测TRIM22过表达后ATRA干预组(78.8±2.0)%比空载体ATRA干预组(58.7±2.7)%的PE-CD11b表达水平高(t=9.54,P=0.000);共转染后ATRA干预组(61.6±3.8)%比TRIM22过表达后ATRA干预组PE-CD11b表达水平(78.8±2.0)%低(t=8.19,P=0.000)。过表达TRIM22组的NB4细胞72h后增殖抑制率(0.25±0.01)%高于空载体组(0.03±0.02)%(t=15.47,P=0.000)。同时,过表达TRIM22基因水平后,eIF4E蛋白水平会降低(t=4.99,P=0.007)。CO-IP实验验证TRIM22通过结合eIF4E而作用。结论在ATRA诱导HL-60,NB4细胞粒系分化过程中,TRIM22的mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,而eIF4E的mRNA及蛋白表达水平逐渐降低。TRIM22在NB4细胞粒系定向分化过程中可抑制细胞增殖并促进其在ATRA作用下的细胞分化,并且可通过靶向结合eIF4E抑制其表达而发挥重要作用。(本文来源于《济南大学》期刊2017-05-01）
韩杨,田静,廖琼,任霞,郭强[5]（2016）在《TRIM22靶向EIF4E在白血病细胞粒系定向分化过程中的作用与调控机制研究》一文中研究指出目的:通过检测TRIM22和e IF4E在急性早幼粒细胞分化中的表达变化,重点探讨TRIM22在急性早幼粒细胞中的功能,并进一步阐明Trim22是否通过泛素化EIF4E而发挥调控白血病细胞向粒系的定向诱导分化,从而为白血病靶点治疗提供新途径。方法:CCK8测定K562细胞增值实验,基因芯片和蛋白芯片检测差异基因和差异蛋白,分析RT-PCR和qPCR测定目的基因表达,Western blot测定目的蛋白表达水平,Ch IP实验测定转录调控蛋白对靶基因的结合,Co IP检测蛋白之间的结合,荧光素报告基因测定启动子活性,流式细胞仪测定白血病细胞的分化。结果:诱导分化后,芯片证实TRIM22表达升高,EIF4E降低,干扰他们的表达影响细胞的分化水平。TRIM22与EIF4E能够靶向结合,拟进一步证实TRIM22是否具有E3泛素化连接酶活性,通过降解EIF4E而参与细胞的增值、分化方面的调节。结论:TRIM22可能靶向EIF4E泛素化降解在白血病细胞粒系定向分化过程中发挥作用。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2016-11-04）
王齐,王建,李庆华,庞天翔[6]（2015）在《shRNA干扰CIAPIN1基因表达对K562细胞粒系分化的影响》一文中研究指出目的:探讨沉默CIAPIN1基因对慢性粒细胞白血病K562细胞向粒系分化的影响。方法:针对CIAPIN1基因构建短shRNA真核表达载体并转染细胞。瑞氏染色观察细胞形态学变化;电镜观测细胞超微结构的改变;real-time PCR方法检测粒系分化标志基因mRNA水平的改变;Western blotting检测ERK1/2、JNK、p38 MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果:CIAPIN1基因沉(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2015年10期）
宋冠华,史露露,潘素飞,任霞,俞林昌[7]（2014）在《PADI4靶向sox4在HL-60细胞定向分化为粒系的功能及表达调控机制》一文中研究指出目的:通过体外实验探讨PADI4基因靶向sox4基因与白血病细胞分化是否有关为切人点,重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后PADI4和sox4表达变化,以及两者是否存在相互作用,并进一步阐明PADI4靶向调控sox4的机制。结果:全反式维甲酸诱导HL60细胞后,在诱导的96h内,PADI4在转录和翻译水平呈现出一致的升高趋势,干扰PADI4后,流式检测到细胞表面的CD11b降低,即PADI4影响白血病细胞的分化。Western Blot检测到PADI4由胞浆转移到胞核发挥作用。免疫细胞化学结果说明PADI4在细胞核内发挥作用。在转录和翻译水平检测sox4,结果呈现和PADI4相反的降低趋势,且设计siRNA干扰PADI4后,RT-PCR结果sox4的表达升高,说明PADI4调控sox4的表达。构建sox4启动子荧光素酶报告基因载体后,做报告基因实验检测PADI4可以结合sox4的启动子,通过ChIP实验证明PADI4可以结合sox4启动子-220-0区域。Co-IP实验证明PADI4和sox4蛋白间存在相互作用。结论:PADI4基因与白血病细胞的分化有关。随着HL60细胞分化程度的提高,PADI4在转录和翻译水平均逐渐升高,干扰PADI4后,抑制细胞的分化。PADI4可转移到细胞核内,作为转录因子,调控基因的转录。sox4在转录和翻译水平均逐渐降低,干扰PADI4后,sox4的表达升高,说明PADI4可以调控sox4的表达。PADI4可结合sox4的启动子-220-0区域且两者之间存在蛋白间的相互作用。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
史露露[8]（2014）在《PADI4靶向调控sox4在HL-60细胞定向分化为粒系的功能及表达调控机制》一文中研究指出背景肽酰基精氨酸脱亚胺酶--PADI4（Peptidylarginine deiminase4），广泛分布于动物组织中，其编码的酶可以催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，此过程称为瓜氨酸化。PADI4在造血细胞中很少表达，但是在经ATRA和PMA诱导HL60细胞向粒细胞以及巨噬细胞分化过程中可以检测到PADI4的表达， PADI4包含2238个碱基对，编码663个氨基酸，分子量为67KDa，随着白血病细胞粒系分化，在转录水平和翻译水平都可以检测到PADI4的增高，因此考虑PADI4和白血病细胞的分化与凋亡有关。但是在生理状态下，PADI4的功能及其其作用的机制还不是很明确。Sox家族分子为一类基因转录调控基因，其蛋白以HMG-box与DNA结合，参与性别决定、神经嵴细胞的发育、中枢神经系统、软骨形成、晶状体发育、心脏发育和造血等多种重要的生物学过程。Sox4是Sox(SRY-related HMG-box)转录因子家族重要成员，编码474个氨基酸，分子量为47KDa，在发育发展中起重要作用，可作为转录因子协同PU.1，CREB，PML/RARα以及增强PI3K/AKT和MAPK信号通路等多种机制抑制白血病细胞分化，诱导白血病发生。在急性白血病细胞中，sox4是PI3K/AKT和MAPK途径的重要激活剂。白血病属于血液系统的恶性克隆性疾病，目前大部分仍无法彻底治愈。文献报道，PADI4在多种恶性肿瘤中高表达且参与其发生发展，在良性肿瘤中低表达或不表达，表明PADI4在恶性肿瘤中发挥相应的作用。然而，PADI4在白血病细胞HL-60中不表达，随着细胞向粒系分化，PADI4的表达逐渐增高，而sox4通过多种途径抑制白血病细胞的分化，猜想PADI4和sox4之间有一定的关联性，为此进行研究，希望可以成为治疗白血病的新靶点。在前人研究的基础上，我们设计了相关实验，探讨PADI4和sox4与白血病细胞分化的关系，为其临床治疗提供新的理论依据和治疗靶点。目的通过体外实验探讨PADI4基因靶向sox4基因与白血病细胞分化是否有关为切入点，重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后PADI4和sox4表达变化，以及两者是否存在相互作用，并进一步阐明PADI4靶向调控sox4的机制。方法建立全反式维甲酸诱导HL60细胞模型，于诱导的0h和96h后，流式检测CD11b的表达，以及吉姆撒染色观察细胞形态验证模型建立是否成功。于诱导的0h、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测PADI4表达变化，干扰PADI4后流式检测CD11b的表达，检验PADI4是否影响细胞分化。提取ATRA诱导HL-60后的浆蛋白和核蛋白，检测PADI4的变化趋势，免疫细胞化学检测PADI4的定位。于诱导的0h、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测sox4表达变化，体外细胞实验，采用RNAi技术，合成干扰PADI4的siRNA转染至HL60细胞，调控PADI4在HL60细胞中的表达，RT-PCR观察对sox4基因表达的影响；构建sox4启动子的双荧光素酶报告载体，转染HEC293T细胞，检测PADI4与其结合部位，通过ChIP检测其具体结合域；构建sox4的四个结构域，通过Co-IP检测PADI4与sox4蛋白间的相互作用。每组实验都要必须重复至少3次，实验数据结果采用均数±标准差表示，均数采用t检验分析，以P<0.05为有统计学意义。结果全反式维甲酸诱导HL60细胞后，在诱导的96h内，PADI4在转录和翻译水平呈现出一致的升高趋势，干扰PADI4后，流式检测到细胞表面的CD11b降低，即PADI4影响白血病细胞的分化。Western Blot检测到PADI4由胞浆转移到胞核发挥作用。免疫细胞化学结果说明PADI4在细胞核内发挥作用。在转录和翻译水平检测sox4，结果呈现和PADI4相反的降低趋势，且设计siRNA干扰PADI4后，RT-PCR结果sox4的表达升高，说明PADI4调控sox4的表达。构建sox4启动子荧光素酶报告基因载体后，做报告基因实验检测PADI4可以结合sox4的启动子，通过ChIP实验证明PADI4可以结合sox4启动子-220-0区域。Co-IP实验证明PADI4和sox4蛋白间存在相互作用。结论PADI4基因与白血病细胞的分化有关。随着HL60细胞分化程度的提高，PADI4在转录和翻译水平均逐渐升高，干扰PADI4后，抑制细胞的分化。PADI4可转移到细胞核内，作为转录因子，调控基因的转录。sox4在转录和翻译水平均逐渐降低，干扰PADI4后，sox4的表达升高，说明PADI4可以调控sox4的表达。PADI4可结合sox4的启动子-220-0区域且两者之间存在蛋白间的相互作用。(本文来源于《济南大学》期刊2014-05-01）
王建,王迟鹃,许华,张丽媛,蔺亚妮[9]（2013）在《shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化》一文中研究指出目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1(NCF1)、血清黏蛋白1(ORM1)以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)、低氧诱导因子1α(HIF1α)mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制(P<0.05);K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高(P<0.05);CD11b表达升高(P<0.01);ERK1/2磷酸化水平升高(P<0.05),而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2013年20期）
陈艾,陈红英,刘文君[10]（2010）在《人类巨细胞病毒对粒系祖细胞分化过程中HOXA9基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中HOXA9基因表达情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)进行干扰,探讨HCMV对HOXA9基因的影响。方法体外定向培养CFU-G,经MTT法检测后,HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/mL,按0.1mL105PFU/mL接种培养体系。采用RT-PCR技术测定HOXA9基因表达。结果随时间推移,HOXA9基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;HOXA9基因受HCMV影响下调(P<0.05)。结论 HOXA9基因在脐血粒系祖细胞发育过程中呈规律表达,提示HOXA9基因与粒系造血活动有相关性;HCMV下调HOXA9表达的同时,HCMV干扰细胞集落生成较正常组差,提示HCMV可能通过调控HOXA9基因表达异常引起HSPC增殖分化异常。(本文来源于《重庆医学》期刊2010年15期）
粒系分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病,细胞分化被阻滞在早期阶段而不具备成熟细胞的功能。诱导分化疗法通过诱导肿瘤细胞分化成熟,从而达到治疗目的,我国学者首次以全反式维甲酸(All-trans-retinoic acid,ATRA)诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)取得成功。但ATRA诱导疗法尚具有疗效不稳定、部分患者易复发等问题,因而进一步阐释其诱导白血病细胞分化机制将为临床治疗提供新的靶点与途径。信号转导与转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)作为STATs家族的重要成员之一,主要被干扰素(IFN)激活,参与机体抗感染,调节细胞增殖、分化、生长及凋亡,并在抑制肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。研究发现,维甲酸诱导的人组织细胞淋巴瘤U-937细胞分化与STAT1丝氨酸727位磷酸化密切相关,但其在人急性髓系白血病HL-60、NB4细胞向粒细胞分化中的作用机制尚不明确。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类小分子非编码单链RNA,其通过与靶基因3'UTR区特异性结合,负向调控靶基因表达,从而参与细胞生长分化、信号转导、增殖凋亡等生理过程及多种疾病的发生与发展。近来研究发现,miRNA在多种实体瘤及血液系统恶性肿瘤中表达升高,从而调控肿瘤细胞分化。然而miRNA在ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化过程的作用尚不清楚,此方面的深入探索有望从表观遗传调控角度阐释白血病细胞分化障碍的机理,为临床治疗提供新的靶点与思路。目的探讨STAT1信号通路在ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化过程中的作用及miRNA靶向调控机制,从表观遗传学角度阐释白血病细胞分化障碍的原因,为临床诊断及治疗提供新的靶点与途径。方法采用ATRA诱导筛选的敏感细胞株—人急性髓系白血病细胞(HL-60)及人急性早幼粒白血病细胞(NB4)向粒细胞分化,将细胞随机分为两组,观察组以ATRA(2μmol/L)诱导两种细胞向粒细胞分化,对照组加入相同浓度DMSO;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞表面CD11b表达;q-PCR检测STAT1及相关转录因子mRNA水平变化;Western blot实验检测STAT1总蛋白及磷酸化水平变化;STAT1活性抑制剂—氟达拉滨(Fludarabine)抑制STAT1活性,流式细胞术检测STAT1对细胞分化的影响,q-PCR检测相关转录因子表达变化。高通量芯片筛选诱导体系中差异miRNA,q-PCR验证差异miRNA表达;调控候选差异miRNA表达观察其对白血病源性粒细胞分化及STAT1信号通路的影响;荧光素酶报告基因实验确定差异miRNA与STAT1结合位点。结果HL-60、NB4细胞是ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化的敏感细胞株;与对照组比较,ATRA诱导后HL-60细胞数目减少,形状不规则,胞质增多,核浓缩,核仁变小或消失,杆状核、分叶核显着增多;NB4细胞体积变小,细胞群变分散,形状不规则化,核质比减低,杆状核、分叶核显着增多;ATRA诱导后细胞表面CD11b表达显着升高(P<0.05),提示HL-60、NB4细胞在ATRA作用下向粒细胞分化;细胞中STAT1mRNA、总蛋白及磷酸化水平均显着升高(P<0.05),提示STAT1信号通路活化在ATRA诱导HL-60、NB4细胞向粒细胞分化过程发挥重要作用;细胞中C/EBPε、C/EBPβ、PU.1表达显着增加(P<0.05);Fludarabine抑制STAT1蛋白活性后白血病源性粒细胞分化显着降低(P<0.05),同时C/EBPεmRNA表达明显降低,Pearson相关性分析显示STAT1与C/EBPεmRNA表达呈显着正相关(P<0.05),提示活化STAT1促进C/EBPε转录可能是ATRA诱导白血病细胞向粒细胞分化的关键机制之一。高通量芯片检测及qPCR验证显示ATRA诱导后miR-155-5p表达降低(P<0.05),Pearson相关性分析提示STAT1 mRNA与miR-155-5p表达呈显着负相关(P<0.05),Targetscan预测miR-155-5p与STAT1之间具有潜在结合位点。上调miR-155-5p表达能显着降低STAT1 mRNA、C/EBPεmRNA水平及白血病源性粒细胞分化比例(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验证实miR-155-5p与STAT1 mRNA 3'UTR具有互补结合。以上结果提示,ATRA可能通过降低miR-155-5p表达促进STAT1信号通路活化诱导白血病细胞向粒细胞分化。结论ATRA靶向调控miR-155-5p表达促进STAT1/C/EBPε信号通路活化,进而诱导白血病细胞向粒细胞分化,靶向调控miR-155-5p/STAT1信号通路可能成为诱导白血病细胞向粒细胞分化的有效靶点和途径。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
粒系分化论文参考文献
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