导读:本文包含了酶活鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:有柄灵芝,鉴定,生物学特征,木质纤维素
酶活鉴定论文文献综述
马博,王凯,周树,张婷婷,冯邦朝[1]（2019）在《野生灵芝BSU01的分离鉴定、生物学特性及其木质纤维素酶活分析》一文中研究指出灵芝作为传统中药,具有重要的医药和经济价值。本研究以一株野生灵芝属真菌BSU01为实验材料,通过形态特征和ITS序列聚类分析对其进行了鉴定,探讨了该菌株菌丝生长的最适碳源、氮源、C/N、pH及温度等生物学特征,以及该菌株产木质纤维降解素酶的能力。结果表明,菌株BSU01的形态特征与有柄灵芝相符;且与有柄灵芝ITS序列一致性达99%,并在系统发育树上聚在一起;菌株BSU01菌丝生长最适碳源为果糖或者葡萄糖,氮源为酵母提取物,C/N比为20/1到30/1,温度为30℃,pH值为5.5;菌株BSU01的漆酶、木质素过氧化物酶和Mn依赖过氧化物酶分别为12.13 U/L、0.52 U/L和0.33 U/L;CMCase和木聚糖酶酶活分别为7.14 U/mL和1.88 U/m L。本研究结果将为该菌的进一步开发利用提供数据参考。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年03期）
强玮,夏科,赵许朋,付维,满建民[2]（2019）在《木本曼陀罗中一条新的TRI基因克隆与酶活功能鉴定》一文中研究指出托品酮还原酶I(tropinone reductase I, TRI)是托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)合成途径中游分支点处的关键酶,可引导托品酮代谢流进入TAs合成,因此是TAs代谢工程重要的靶标基因。本研究从木本曼陀罗(Datura arborea)中克隆到了一条新的TRI基因,命名为DaTRI2 (GenBank登录号为MH705164)。DaTRI2基因cDNA全长1 135 bp,与DaTRI序列一致性为96.8%,预测编码272个氨基酸。DaTRI2蛋白具备茄科TRI保守的结合NADPH的TGXXXGXG基序、结合底物托品酮的11个保守氨基酸残基以及发挥催化活性的N-S-Y-K四联体基序。进化关系上, DaTRI2和茄科的TRI成员聚为一支,与Datura属的TRI亲缘关系最近。对DaTRI2进行原核表达,纯化的重组蛋白能催化托品酮还原反应和托品氧化反应,最适pH值分别为8.0和9.6。DaTRI2在pH=6.4时,对托品酮的Km和Vmax分别为210.05μmol·L~(-1)和69.6 nkat·mg~(-1) protein,在pH=9.6时,对托品的K_m和V_(max)分别为188.03μmol·L~(-1)和114 nkat·mg~(-1) protein。qPCR检测表明DaTRI2在幼叶中表达量最高,其次是须根。DaTRI2基因的克隆和酶活力分析为深入研究木本植物中TAs的生物合成分子机制奠定了基础,同时为TAs代谢工程提供了一个更高效的候选靶基因。(本文来源于《药学学报》期刊2019年03期）
付丽[3]（2018）在《秸秆降解菌株的筛选及酶活分析与关键基因功能鉴定》一文中研究指出秸秆资源是世界上丰富的、可再生的生物质资源,其中富含碳、氮、磷、钾及矿物质元素,对改善土壤耕作性、增加有机质含量具有重要意义。但秸秆具有由纤维素、半纤维素、木质素等相互缠绕形成的致密结构,不易被降解利用。环保、有效的生物降解方法近年来备受关注,微生物分泌纤维素酶、半纤维素酶及木质素酶能有效降解秸秆中的主要成分,对提高秸秆的综合利用率发挥着重要的作用。本研究从盐碱土壤中分离筛选得到3株秸秆降解细菌,并对其秸秆降解发酵条件、秸秆降解能力、酶活特性及关键酶基因进行克隆及功能分析,具体研究结果如下:1.通过对6种土样中内切葡聚糖酶(EG)、β-葡萄糖苷酶(BG)、木聚糖酶(xylanase)、木质素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Lac)的酶活比较分析,从各酶活较高的盐碱土、松树土、杨树土中分离筛选出3株秸秆降解菌yj1,yj2,yj3,经革兰氏染色及16SrDNA鉴定分别确定为假单胞菌属(G﹣)、芽孢杆菌属(G﹢)、短杆菌属(G﹢)。3株菌降解秸秆的最适培养温度及最适初始pH值分别为37℃、8;30℃、8;37℃、7。培养8天时秸秆降解率分别为:25.58%、26.61%、23.71%,且发酵液pH一直保持在8左右。说明本实验获得的3种秸秆降解菌具有一定的耐碱性,对玉米秸秆具有较强的降解能力,其中秸秆降解菌yj2的降解能力最强。2.秸秆降解需要多种纤维素降解酶共同参与。以CMCNa为碳源时,yj2的EG、BG及xylanase酶活最高值分别为37.34U、266.89U、516.08U,而yj1、yj3无xylanase酶活,且EG、BG酶活仅为2.34U、2.23U。以秸秆为碳源时,yj2的EG、BG、xylanase、LiP、MnP、Lac的酶活相较于yj1、yj3均较高,6种酶共同作用降解秸秆,而yj1、yj3没有xylanase,主要依靠LiP、MnP、Lac降解秸秆。因此推断菌株yj2降解效果好主要由xylanase发挥作用。3.以CMCNa、秸秆为碳源的条件下,菌株yj2的EG、BG、xylanase叁个基因表达量均表现为24h高于12h,EG、BG、xylanase基因表达量与酶活变化趋势一致。4.对3株菌的酶活分析可知,xylanase对秸秆降解具有重要作用,克隆得到该基因,命名为xylanase,大小为642bp,与NCBI提交木聚糖酶基因序列相似度均达95%以上。通过生物信息学分析表明,克隆得到的木聚糖酶属于糖基水解酶家族11(GH11),是一种带信号肽的、亲水的碱性胞外分泌蛋白。将xylanase基因与表达载体pET-30a连接,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,经SDS-PAGE蛋白电泳检测其融合蛋白大小为28 KDa。利用DNS法测定木聚糖酶酶活,BL21(pET-30a-xylanase)菌株xylanase酶活24 h内随时间的增加而增加,在24 h时酶活达到最大为387.26U,酶活的变化呈显着性差异。本研究还克隆得到内切葡聚糖酶基因,命名为EG,大小为1500bp。通过生物信息学分析可知属于糖基水解酶家族5(GH5),同时还含有碳水化合物结合域3(CBM3),同样为带信号肽的、亲水的碱性胞外分泌蛋白。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-05-01）
张齐,牛庆昌,姜琳,黄君,马俊[4]（2018）在《非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定》一文中研究指出利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。(本文来源于《大连工业大学学报》期刊2018年02期）
任璐,刘思雨,钟燕,索化夷[5]（2018）在《毛霉型豆豉发酵菌株分离鉴定与酶活分析》一文中研究指出毛霉是毛霉型豆豉发酵的主要菌株,从永川豆豉和叁台豆豉中分离到2株毛霉YC-1和ST-1,经分离、纯化、测序,鉴定为总状毛霉。用福林酚试剂法、滤纸酶活测定法和CMC酶活测定法分别测定2株总状毛霉YC-1和ST-1产蛋白酶、纤维素酶和β-葡萄糖苷酶3种酶的活力。结果表明:两株总状毛霉3种酶的酶活不同,YC-1和ST-1产蛋白酶活分别为176.891U/mL和51.201U/mL;产纤维素总体酶活分别为107.645 U/mL和66.762 U/mL;产β-葡萄糖苷酶活分别为80.430 U/mL和95.362U/mL。(本文来源于《中国调味品》期刊2018年01期）
王全,王会,李红亚,李术娜[6]（2016）在《一株高效木质素降解菌株LG-1的筛选、鉴定及酶活测定》一文中研究指出试验筛选得到了一株对木质素具有较高降解作用的芽孢杆菌菌株LG-1。利用苯胺蓝平板脱色法从牛粪中初步筛选得到了14株降解菌株,利用管碟法复筛得到了1株对木质素降解活性较高的菌株LG-1,并对这株菌进行了菌落特征、菌体形态的观察及一系列生理生化试验和16S rDNA的序列测定,并对其产酶活性进行了测定。结果表明,菌株LG-1为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),菌株LG-1在发酵60 h时,木质素过氧化酶达到1 773.3 U/l,锰过氧化酶达到610.8 U/l。对玉米秸秆发酵16 d后木质素降解率达到23.6%。枯草芽孢杆菌菌株LG-1是一株优良的木质素降解菌株。(本文来源于《饲料工业》期刊2016年12期）
黄惠娟,方界群,陈华文,陈迪文,黄莹[7]（2016）在《蔗渣纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶活的测定》一文中研究指出为充分利用蔗渣,筛选高效降解蔗渣的菌株,本文从堆肥中分离得到有显着透明圈、可产纤维素酶的真菌8株,选其中3株测定了羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活性。结果表明,菌株SC8的透明圈直径、CMCase和FPA活性均最大。经菌落形态特征分析,初步鉴定菌株SC8属于曲霉属(Aspergillus)。相关性分析表明,所筛选菌株在纤维素透明圈直径的大小与CMCase、FPA酶活性成极显着正相关(p<0.01)。(本文来源于《甘蔗糖业》期刊2016年03期）
韩杰,郑继平,言普,庹德财,黎小瑛[8]（2016）在《原核表达番木瓜环斑病毒NIa-Pro及其双重酶活鉴定》一文中研究指出番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)编码的核内涵体蛋白a蛋白酶(Nuclear inclusion body a proteinase,NIa-Pro)是一种多功能病毒非结构蛋白,在病毒侵染宿主及病毒与宿主互作中起着重要作用。本研究利用以麦芽糖结合蛋白(MBP)为融合表达框架的原核表达系统构建了表达NIa-Pro的重组载体pMAL-c5xNP,并转化大肠杆菌,经IPTG诱导和Ni~(2+)-NTA-琼脂糖亲和层析纯化获得了可溶的重组融合蛋白MBP-NIa(N端和C端分别融合MBP和His标签),然后利用蛋白酶Factor Xa切去重组融合蛋白中的MBP,再通过直链淀粉树脂亲和层析纯化获得了可溶的重组蛋白NIa-Pro。活性检测结果表明,重组蛋白PRSV-NIa-Pro具有非特异的双链DNA酶和特异的蛋白酶双重活性。(本文来源于《热带作物学报》期刊2016年04期）
林润泽[9]（2016）在《东北农田木霉菌的鉴定、酶活评价及其纤维素酶发酵工艺》一文中研究指出近几年来,木霉菌在食品工业、生物防治、农业发展、造纸和纺织工业、酿造以及环境保护等领域得到了诸多方面的应用,特别是木霉菌的产酶功能在食品发酵领域得到了越来越多的重视和发掘。本论文以采自东北叁省十五个城市不同农作物根际土壤中分离到的木霉菌为试验样本,对木霉菌进行分离、形态学和遗传学分类鉴定,拮抗性木霉菌的霉功能评价和产纤维素酶发酵条件优化等几个方面进行了研究,以期为木霉菌在食品工业和农业生防上的开发与应用奠定基础。本论文主要完成了以下几项内容：我国东北地区采集土样135份,分离得到木霉菌173株,通过形态学观察的方法和ITS-rRNA序列在NCBI数据库进行Blast比对的方法,共鉴定得出10种木霉属木霉菌,分别为：棘孢木霉(T.asperellum)、钩状木霉(T.hamatum)、里氏木霉(T.reesei)、拟康宁木霉(T.koningiopsis)、猬木霉(T.erinaceum)、短密木霉(T.brevicompactum)、深绿木霉(T.atroviride)、毛簇木霉(T.velutinum)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、哈慈木霉(T.harzianum)。其中棘孢木霉(T.asperellum)、毛簇木霉(T.velutinum)和短密木霉(T.brevicompactum)在东北地区具有较高的种群优势,分离数量分别占全部分离总数量的24.85%、18.49%和15.02%。通过对木霉菌纯化和平板对峙培养,筛选出对灰霉葡萄孢和尖孢镰刀菌具有抑制效果的木霉菌。对灰霉葡萄孢抑制效果大于75%的木霉菌有30株,分别为：棘孢木霉6株,里氏木霉2株,拟康宁木霉2株,短密木霉1株,深绿木霉3株,毛簇木霉6株,长枝木霉5株,哈慈木霉5株。对灰霉葡萄孢抑制率最高的为棘孢木霉,菌株编号为：CTCCSJ-A-DK1-0009,抑菌率为88.36%。对尖孢镰刀菌抑制效果大于75%的木霉菌有38株,包括棘孢木霉13株,里氏木霉1株,拟康宁木霉2株,短密木霉6株,深绿木霉2株,毛簇木霉5株,长枝木霉5株,哈慈木霉4株。对尖孢镰刀菌抑制率最高的为棘孢木霉,菌株编号为：CTCCSJ-A-YM1-00155,抑菌率为88.26%。木霉菌分泌的纤维素酶、几丁质酶和胞外蛋白酶是在食品工业、农业、环境保护和发酵工业具有重要价值的酶类活性物质。对筛选到的木霉菌这叁种酶酶活性进行初筛和复筛,采用抑菌圈法和DNS显色法,测定几类木霉菌产酶活性的大小。结果表明,木霉菌纤维素酶活性、几丁质酶活性和胞外蛋白酶活性在发酵初期酶活性皆为上升趋势,发酵第4d时为酶活性最高,之后酶活性随着时间的延长而逐渐降低。木霉菌是具有生产纤维素酶能力较强的真菌,优化木霉菌产纤维素酶发酵工艺对于食品发酵工业具有较大价值。本试验采用响应面的方法,通过Design-expert软件建立模型,采用叁因素(发酵时间、发酵温度、发酵液装液量)叁水平的方法对产纤维素酶条件进行优化,最终确定最佳的发酵工艺为发酵温度为30℃,发酵液装液量180mL,发酵时间110h。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2016-04-01）
郭晋霞[10]（2016）在《重组双碱基内肽酶在毕赤酵母中的表达制备及酶活鉴定》一文中研究指出Kex2即双碱基内肽酶,也称为Kexin、Paired-basic endopeptidase、Prohormone-processing endoprotease等,这些名称从不同的角度反应了Kex2的酶学性质。Kex2基因来自酿酒酵母Saccharomyces cerevisia,属于枯草杆菌蛋白酶家族,是一个钙离子依赖型的丝氨酸蛋白水解酶。Kex2能特异性识别蛋白质或多肽中的双碱性氨基酸残基对(Lys-Arg、Arg-Arg)及Pro-Arg,从第二个氨基酸残基羧基端(即R-)切断肽键,发挥作用。Kex2作为前体加工酶的原型,对其的研究大大促进了其他各种真核生物前体加工酶的研究进步。另外,人们还发现Kex2能在体内和体外环境下完成对于一些激素原前体、蛋白前体的酶切加工。所以,由于其酶切位点的特异性,近几年Kex2在生物制药领域逐渐显示地位。要想深入进行上述研究,首先必须得到大量Kex2酶,才能进行体内和体外各项研究。目前对于Kex2的结构及酶活性等研究已经较为全面,而对于Kex2的重组构建及制备的研究还较少。虽然已有相关文献报道,但是能够筛选到高表达量的重组工程菌,用于发酵并完成后续纯化过程得到Kex2纯品的研究相对较少,本文致力于完成这一研究目标和内容。研究目的:本项目中创新地设计重组双碱基内肽酶Kex2蛋白序列和应用于毕赤酵母系统表达的核苷酸序列,构建能够正确表达Kex2酶的毕赤酵母重组表达菌从而提高Kex2产量;摸索重组表达菌上罐发酵工艺,为工业化生产打下基础;建立稳定、重复性好、回收率高的纯化工艺,以得到Kex2纯品;建立Kex2浓度测定方法、活性测定方法,并将其用于蛋白类底物的酶切实验,以验证其活性。研究方法:1重组Kex2 c DNA序列的设计参阅文献,选择Kex2蛋白序列2-660残基,并在N端设计His标签LEKRSARGSHHHHHH以利于下游纯化,;并根据P.Pastoris密码子使用偏好性,设计了Kex2的c DNA,设计终止密码子TGA和TAA,设计上下游酶切位点Xho I(CTCGAG)和Not I(GCGGCCGC)限制性酶切位点。2重组表达菌pPICZαA-Kex2/X-33的构建全基因合成cDNA序列,得到含有目的序列的甘油菌。抽提质粒,Xho I和Not I双酶切后连入载体p PICZαA,转化Top10F’感受态细胞,筛选后得到重组质粒p PICZαA-Kex2。用Sac I线性化重组质粒,电转化进入X-33感受态细胞,挑取阳性克隆进行甲醇诱导表达,利用抗性平板等方法筛选高表达菌株,并对其进行鉴定,确定为发酵用表达菌。3发酵工艺建立初期用摇瓶发酵的方式来筛选重组表达菌最适温度、p H、溶氧等条件,随后上罐发酵,摸索并建立发酵工艺,确定发酵培养基、诱导时间、诱导方式等等。4发酵上清的纯化工艺建立根据设计蛋白序列的创新性,优选试用Ni离子金属鳌合柱进行初纯化。后选择离子柱进行纯化,去掉多余的杂质。5自制Kex2样品酶切活性鉴定针对于Kex2酶切特异性选择特异性测活底物、短肽、蛋白类叁种不同底物,建立各自酶切方法,分别验证自制Kex2酶切活性和特异性。研究结果:本研究成功构建了pPICZαA-Kex2/X-33重组表达菌,完成了Kex2在毕赤酵母系统的重组表达;对筛选出的表达量最高的菌株完成了10L上罐发酵,并创新地采用Ni离子金属鳌合柱初纯化、脱盐柱处理后阴离子柱再纯化,得到了电泳纯度95%以上的重组Kex2样品;随后对样品进行了浓度和纯度检测,最重要的是对酶切效率和特异性进行了叁种底物水平的检测,证明自制的Kex2样品在以特异性底物Boc-QRR-p NA、短肽(含有KR识别位点)、蛋白质水平(甘精胰岛素前体,含有KR和RR识别位点)都可以发挥其酶切作用,且不会发生错切现象,这对Kex2今后的应用及Kex2的工业化生产都有极大的意义。(本文来源于《重庆理工大学》期刊2016-03-20）
酶活鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
托品酮还原酶I(tropinone reductase I, TRI)是托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)合成途径中游分支点处的关键酶,可引导托品酮代谢流进入TAs合成,因此是TAs代谢工程重要的靶标基因。本研究从木本曼陀罗(Datura arborea)中克隆到了一条新的TRI基因,命名为DaTRI2 (GenBank登录号为MH705164)。DaTRI2基因cDNA全长1 135 bp,与DaTRI序列一致性为96.8%,预测编码272个氨基酸。DaTRI2蛋白具备茄科TRI保守的结合NADPH的TGXXXGXG基序、结合底物托品酮的11个保守氨基酸残基以及发挥催化活性的N-S-Y-K四联体基序。进化关系上, DaTRI2和茄科的TRI成员聚为一支,与Datura属的TRI亲缘关系最近。对DaTRI2进行原核表达,纯化的重组蛋白能催化托品酮还原反应和托品氧化反应,最适pH值分别为8.0和9.6。DaTRI2在pH=6.4时,对托品酮的Km和Vmax分别为210.05μmol·L~(-1)和69.6 nkat·mg~(-1) protein,在pH=9.6时,对托品的K_m和V_(max)分别为188.03μmol·L~(-1)和114 nkat·mg~(-1) protein。qPCR检测表明DaTRI2在幼叶中表达量最高,其次是须根。DaTRI2基因的克隆和酶活力分析为深入研究木本植物中TAs的生物合成分子机制奠定了基础,同时为TAs代谢工程提供了一个更高效的候选靶基因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶活鉴定论文参考文献
[1].马博,王凯,周树,张婷婷,冯邦朝.野生灵芝BSU01的分离鉴定、生物学特性及其木质纤维素酶活分析[J].基因组学与应用生物学.2019
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[10].郭晋霞.重组双碱基内肽酶在毕赤酵母中的表达制备及酶活鉴定[D].重庆理工大学.2016