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【摘要】高效液相色谱法是一种由经典液相色谱法和气相色谱法相结合，主要对药物成分进行分析和分离的有效方法。检测结果准确，灵敏度高，适用于大多数的有机化合物测定，常用于多种天然药物检测分析以及鉴别等方面。本文介绍了高效液相色谱法并分析了高效液相色谱法在药物分析方面的应用。
【关键词】高效液相色谱法；药物分析；应用
一、前言
高效液相色谱（HPLC），是一种由经典液相色谱法和气相色谱法相结合，主要对药物成分进行分析和分离的有效方法。相比较于经典液相色谱法，其分离药物有效成分速度、分析药物含量速率更快，分析灵敏度更高，检测限更小；相较于气相色谱而言，其对药物分析的范围更广，在应用上更广泛。目前高效液相色谱法主要应用于对药物有效成分的测定、有效成分分离、含量分析以及附加成分的检测消除等方面。
二、高效液相色谱法概况
1.原理
在药物分析中，色谱过程是指溶质分子在互不相溶的两相（固定相和流动相）中进行的分配过程。由于样品中不同组分在两相中的分配比不同，溶剂中各组分的展开性质也随之发生变化，在两相中的分配发生变化，从而达到分离的目的。由于高效液相色谱法结合了气相色谱法，利用载气携带样品分子在固定相和流动相之间不断游走分配，使有效成分得到高效分离。
2.本质
经典液相色谱的填料特点决定了分析特点，即分析速度慢、分析效率和对药物有效分析成分的敏感度低，所以它主要用于制备样品，而不是对样品进行分析。高效液相色谱法填料颗粒更小、填料更均匀，这决定了其分离的效率更高、溶质分析传递阻力更小，也更有利于样品的分析。目前的高效液相色谱在填料时采用新的方法，相较于早期的涂渍法，其液膜厚度更小、柱效更高。然而随之而来的也有一系列问题：（1）由于填料颗粒更细、孔隙更小，柱流动阻力大大增大，为了达到更好的分离效果，必须采用高压输液泵来进行输液；（2）由于表面能的增大，对装柱技术的要求也有了很大的提高。
在本质上来看，高效液相色谱和经典液相色谱的区别不大的，二者的不同仅仅表现在药物分析的效率和智能自动化操作上。这种差别的存在，是由于高效液相色谱的色谱柱更高效、输液泵压力更大以及检测器灵敏度更高，这导致经典液相色谱在分析的效率、分析速度和对药物的敏感程度度较高效液相色谱而言更低。在高效液相色谱结合自动化技术后，在应用和操作上更加简便、在分析和处理数据上则更加精确，这使得高效液相色谱走在现代化分析领域的前沿。
在经典液相色谱中，由于其填料颗粒大、不均匀等，其流动相无法在高压下进行输送，从而导致其柱效较低，分析的时间较长，所以在相同时间内，高效液相色谱能够分析测定的药物有效种类相当于经典液相色谱的20倍。另外一点，高效液相色谱的分析灵敏度也远非经典液相色谱可比，其最小检测限大约是经典液相色谱的100倍，分析种类大大增加。虽然高效液相色谱法结合气相色谱，但由于气相色谱只能分析在固定温度下汽化却不反应的物质，所以相较于气相色谱法，高效液相色谱的分析范围更广泛。
三、高效液相色谱法在药物分析中的应用
高效液相色谱法在化学领域应用很多，比如测定中药有效成分，分析复杂药物以及天然药物的组成成分等方面。
1.高效液相色谱法应用于药物鉴别
高效液相色谱法是根据药物成分的保留时间不同进行鉴别，不同的结构性质对应不同的保留时间。可根据高效液相色谱图中主峰对应保留时间进行比对鉴别，比如头抱拉定，头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液等多种药物均采用高效液相色谱法进行鉴别。
高效液相色谱法应用于药物检测杂质
高效液相色谱法效率高，分离效果好，速度快，反应灵敏，因而被广泛应用。在药物成分中，不仅有易获取的有效成分，还有很多可检测的难分离的杂质成分。若杂质是已知的，可用杂质标样做对照进行检测。若杂质是未知的，可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检测，如甲磺酸帕珠沙星等莫西沙星等沙星类，氟康唑，替硝唑等药品都是用此法进行鉴别。
2.1峰面积归一化法
用于测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂志以及杂志的总量限度。但缺点是检测结果比较粗略，不精确，不用于微量杂质的检测，该法只是计算化合物的相对含量而不是绝对含量。
2.2主要成分自身对照法
加校正因子：在有杂质对照溶液的情况下，通过得各种方法测得到杂质的校正因子来得到杂质的总量限度。
不加校正因子：在没有对照溶液进行检测时，采用这种方法，前提是杂质和主要有效成分的最大吸收波长相一致，通过确定最大吸收波长进行杂质检测。
2.3内标法加校正因子法
对于有杂质对照溶液的情况，采用内标加校正因子法，首先内标物是一定要有的，必须提前确定，内标法检测结果准确，能够有效减小不确定性因素以及系统误差带来的影响。
此外，高效液相色谱法在药物杂质限量检查方面应用也比较广泛，越来越多的国家采用高效液相色谱法进行相关项目的检测，以美国药典为例，营养强化剂中选用高效液相色谱法进行鉴别、检测的品种数占一半以上，选用高效液相色谱法测定含量的药品品种数也很多，这些足以说明高效液相色谱法会被应用在越来越多的实际操作过程中。
3.高效液相色谱法应用于药物含量测定
将高效液相色谱应用于药物含量的测定时，可以有效的检测出药物的杂质成分以及其他附加剂等，并为其进行消除提供依据。另外，高效液相色谱法可用于中药材有效成分的测定，由于中药材有效成分复杂，经典液相色谱无法完全分析，所以高效液相色谱法在中药材有效成分测定方面有很大的作用。除此之外，在药物指纹图谱、药物残留以及农药检测等方面，高效液相色谱也发挥了很大的作用。
四、总结
高效液相色谱法在实际实验操作中应用广泛，它在使用过程中简单便捷，检测结果准确，灵敏度高，适用于大多数的有机化合物测定，常用于多种天然药物检测分析以及鉴别等方面。近几年随着科技的不断发展，高效液相色谱将被越来越多的应用在多个研究领域。
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