复方红景片中红景天苷含量的高效液相色谱测定

复方红景片中红景天苷含量的高效液相色谱测定

郑丽丽*(通讯作者)李嗣斌(新疆维吾尔自治区中医医院药学部830000)

【中图分类号】R282【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2013)04-0406-02

【摘要】目的建立测定复方红景片中红景天苷的高效液相色谱方法。方法色谱柱为ShimapackODS(4.6×250mm,5μm),流动相为甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠(17∶83),检测波长275nm,流速为1.00mL•min-1,柱温为40℃。结果红景天苷在20.4μg•mL-1~102.0μg•mL-1间呈良好的线性关系,r=0.9998(n=5),平均回收率为99.90%(n=9),RSD为1.92%(n=9),稳定性RSD为1.21%(n=5),重复性RSD为1.35%(n=6),精密度RSD为1.12%(n=6)。结论建立的定量方法操作简单、精密度高、重现性好,是控制复方红景片质量的有效方法。

【关键词】复方红景片红景天苷高效液相色谱法

复方红景片是由红景天、黄芪、西红花、降香等八味中药组成的复方制剂,具有活血化瘀、益气养阴、养治结合之功效,用于治疗心肌缺血,效果显著,为有效地控制其质量,对其红景天中红景天苷含量测定方法进行了研究。研究建立了复方红景片中红景天苷的高效液相色谱测定方法,且阴性对照无干扰,可作为复方红景片的含量测定方法,以控制复方红景片的产品质量。

1仪器与试药

1.1仪器SPD-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津制造所);LibrorAEG-200电子天平(日本岛津制造所);Milliporesimplicity-185超纯水器(美国密理博公司);LS-3120超声波发生器(美国科学系统公司)。

1.2试药复方红景片(批号:100424、100426、100428)及其空白样品由新疆维吾尔自治区中医医院药学部提供;红景天苷对照品(批号:110736-200628)由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为美国Fisher公司产色谱纯,水为双蒸水,其它试剂均为分析纯。

2含量测定方法与结果

2.1色谱条件[1,4][6~8]色谱柱:ShimapackODS(4.6×250mm,5μm);柱温:40℃;检测波长:275nm;流动相:甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠(17∶83);流速:1.00mL•min-1。

2.2对照品溶液制备精密称取红景天苷对照品5.1mg,置25mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得每1mL中含204µg的红景天苷对照品溶液。

2.3供试品溶液制备[1~5]取本品10片研细,取细粉约0.5g,精密称定,置25mL量瓶中,加甲醇约20mL,超声处理(功率50W,频率50kHz,水浴温度20℃)20min,放至室温,用甲醇稀释至刻度,摇匀,离心(转速为每分钟6000转)5分钟,取上清液,过0.45µm滤膜,即得。

2.4阴性样品溶液制备取缺红景天的阴性片细粉约0.5g,精密称定,置25mL量瓶中,依“2.3供试品溶液制备”方法项下,制备阴性样品溶液。

红景天苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液的HPLC色谱图,如图1、2、3。

2.5线性范围的考察精密吸取上述红景天苷对照品贮备液(204µg•mL-1)1、2、3、4、5mL,分别置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成含红景天苷浓度为20.4、40.8、61.2、81.6、102.0µg•mL-1的对照品系列溶液。分别精密吸取10µL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以进样浓度(µg•mL-1)为横坐标,峰面积为纵坐标,进行回归,得标准曲线方程为:y=11285x+6690,r=0.9998。结果表明,红景天苷在20.4µg•mL-1~102.0µg•mL-1范围内,峰面积与进样浓度具有良好线性关系。

2.6回收率测定采用标准添加法测定回收率。取本品20片(批号:100316-2),研细,取细粉0.25g,精密称定,共10份,分别置25mL量瓶中,第一份作为空白回收,其余分三组,每组分别加入浓度为0.58mg•mL-1的红景天苷对照品溶液各2.0、2.5、3.0mL,照“2.3供试品溶液制备”方法处理,“2.1色谱条件”下,进样10μL,记录峰面积,用外标法计算回收率,红景天苷平均回收率为99.90%(n=9),RSD为1.92%(n=9)。结果见表1。

表1红景天苷回收率测定结果

2.7稳定性实验取本品(批号:100316-2),按照上述“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液,在上述色谱条件下,每隔2h进样一次,每次10μL,5次进样峰面积为885485、871567、883154、899814、893457,计算RSD为1.21%,表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.8精密度实验取同一供试品溶液(批号:100316-2),在相同条件下重复进样6次,样品峰面积为879545、881985、884347、899644、895244、873464,RSD%为1.12%。

2.9重复性实验取本品(批号:100316-2),精密称取6份,照“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液,按“2.1色谱条件”进行测定,含量分别为3.922、3.952、3.802、3.898、3.904、3.933mg•g-1,RSD为1.35%。

2.10十批样品测定取十批供试品,照“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液,在“2.1色谱条件”下重复测定二次,结果见表2。

表2十批样品红景天苷测定结果

根据上述试验结果,考虑到药材的来源,以及制剂生产、储藏等因素,最终保证临床疗效,暂定本品每克含红景天以红景天苷(C21H18O11)计,不得低于3.2mg。

3讨论

3.1本实验中在药典色谱条件基础上,结合文献,用甲醇:水、乙腈:水、甲醇:磷酸、甲醇:磷酸二氢钠等色谱条件进行分离,乙腈:水条件较好,主峰响应值大,但分析时间长,样品分离度不好,溶剂毒性大于甲醇等因素,该色谱条件不适宜分析本品;甲醇:磷酸条件下样品杂质少,但响应值低,且噪音大,也不适宜分析本品;依据上述分析,综合考虑后,确定最终分析条件为:流动相:甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠(17∶83);流速:1.00mL•min-1,检测波长:275nm;该色谱条件下红景天苷的保留时间适中,对称因子、分离度和理论踏板数均符合要求的色谱条件。

3.2在实验中对样品超声时间(10、20、30、60min)进行了研究,结果分别对应为3.0148,3.8113,3.9019,3.9031mg•g-1(n=3),从数据可以看出,超声提取20、30、60min,红景天苷含量接近,故超声时间定为20min。

参考文献

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