郑丽丽*(通讯作者)李嗣斌（新疆维吾尔自治区中医医院药学部830000）
【中图分类号】R282【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2013）04-0406-02
【摘要】目的建立测定复方红景片中红景天苷的高效液相色谱方法。方法色谱柱为ShimapackODS(4.6×250mm，5μm)，流动相为甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠（17∶83），检测波长275nm，流速为1.00mL•min-1，柱温为40℃。结果红景天苷在20.4μg•mL-1～102.0μg•mL-1间呈良好的线性关系，r=0.9998（n=5），平均回收率为99.90%（n=9），RSD为1.92%（n=9），稳定性RSD为1.21%（n=5），重复性RSD为1.35%（n=6），精密度RSD为1.12%（n=6）。结论建立的定量方法操作简单、精密度高、重现性好，是控制复方红景片质量的有效方法。
【关键词】复方红景片红景天苷高效液相色谱法
复方红景片是由红景天、黄芪、西红花、降香等八味中药组成的复方制剂，具有活血化瘀、益气养阴、养治结合之功效，用于治疗心肌缺血，效果显著，为有效地控制其质量，对其红景天中红景天苷含量测定方法进行了研究。研究建立了复方红景片中红景天苷的高效液相色谱测定方法，且阴性对照无干扰，可作为复方红景片的含量测定方法，以控制复方红景片的产品质量。
1仪器与试药
1.1仪器SPD-10AVP型高效液相色谱仪（日本岛津制造所）；LibrorAEG-200电子天平（日本岛津制造所）；Milliporesimplicity-185超纯水器（美国密理博公司）；LS-3120超声波发生器（美国科学系统公司）。
1.2试药复方红景片（批号：100424、100426、100428）及其空白样品由新疆维吾尔自治区中医医院药学部提供；红景天苷对照品（批号：110736-200628）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为美国Fisher公司产色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2含量测定方法与结果
2.1色谱条件[1,4][6～8]色谱柱：ShimapackODS(4.6×250mm，5μm)；柱温：40℃；检测波长：275nm；流动相：甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠（17∶83）；流速：1.00mL•min-1。
2.2对照品溶液制备精密称取红景天苷对照品5.1mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中含204µg的红景天苷对照品溶液。
2.3供试品溶液制备[1～5]取本品10片研细，取细粉约0.5g，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声处理（功率50W，频率50kHz，水浴温度20℃）20min，放至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心（转速为每分钟6000转）5分钟，取上清液，过0.45µm滤膜，即得。
2.4阴性样品溶液制备取缺红景天的阴性片细粉约0.5g，精密称定，置25mL量瓶中，依“2.3供试品溶液制备”方法项下，制备阴性样品溶液。
红景天苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液的HPLC色谱图，如图1、2、3。
2.5线性范围的考察精密吸取上述红景天苷对照品贮备液（204µg•mL-1）1、2、3、4、5mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含红景天苷浓度为20.4、40.8、61.2、81.6、102.0µg•mL-1的对照品系列溶液。分别精密吸取10µL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样浓度（µg•mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归，得标准曲线方程为：y=11285x+6690，r=0.9998。结果表明，红景天苷在20.4µg•mL-1～102.0µg•mL-1范围内，峰面积与进样浓度具有良好线性关系。
2.6回收率测定采用标准添加法测定回收率。取本品20片（批号：100316-2），研细，取细粉0.25g，精密称定，共10份，分别置25mL量瓶中，第一份作为空白回收，其余分三组，每组分别加入浓度为0.58mg•mL-1的红景天苷对照品溶液各2.0、2.5、3.0mL，照“2.3供试品溶液制备”方法处理，“2.1色谱条件”下，进样10μL，记录峰面积，用外标法计算回收率，红景天苷平均回收率为99.90%（n=9），RSD为1.92%（n=9）。结果见表1。
表1红景天苷回收率测定结果
2.7稳定性实验取本品（批号：100316-2），按照上述“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下，每隔2h进样一次，每次10μL，5次进样峰面积为885485、871567、883154、899814、893457，计算RSD为1.21%，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。
2.8精密度实验取同一供试品溶液（批号：100316-2），在相同条件下重复进样6次，样品峰面积为879545、881985、884347、899644、895244、873464，RSD%为1.12%。
2.9重复性实验取本品（批号：100316-2），精密称取6份，照“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液，按“2.1色谱条件”进行测定，含量分别为3.922、3.952、3.802、3.898、3.904、3.933mg•g-1，RSD为1.35%。
2.10十批样品测定取十批供试品，照“2.3供试品溶液制备”方法制成供试品溶液，在“2.1色谱条件”下重复测定二次，结果见表2。
表2十批样品红景天苷测定结果
根据上述试验结果，考虑到药材的来源，以及制剂生产、储藏等因素，最终保证临床疗效，暂定本品每克含红景天以红景天苷（C21H18O11）计，不得低于3.2mg。
3讨论
3.1本实验中在药典色谱条件基础上，结合文献，用甲醇：水、乙腈：水、甲醇：磷酸、甲醇：磷酸二氢钠等色谱条件进行分离，乙腈：水条件较好，主峰响应值大，但分析时间长，样品分离度不好，溶剂毒性大于甲醇等因素，该色谱条件不适宜分析本品；甲醇：磷酸条件下样品杂质少，但响应值低，且噪音大，也不适宜分析本品；依据上述分析，综合考虑后，确定最终分析条件为：流动相：甲醇-0.5mol•L-1磷酸二氢钠（17∶83）；流速：1.00mL•min-1，检测波长：275nm；该色谱条件下红景天苷的保留时间适中，对称因子、分离度和理论踏板数均符合要求的色谱条件。
3.2在实验中对样品超声时间（10、20、30、60min）进行了研究，结果分别对应为3.0148，3.8113，3.9019，3.9031mg•g-1(n=3)，从数据可以看出，超声提取20、30、60min，红景天苷含量接近，故超声时间定为20min。
参考文献
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