本文主要研究内容
作者高洁（2019）在《分子马达对狂犬病病毒胞内感染影响的初步研究》一文中研究指出：狂犬病病毒（RABV）是弹状病毒科狂犬病毒属的一种单股负链RNA病毒,能引起人和动物发生高度致死性狂犬病。病毒粒子由核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）和大蛋白（L）组成。N、P、L蛋白包裹病毒RNA基因组构成核糖核蛋白复合物（RNPs）,N蛋白与基因组RNA结合,能够保护病毒RNA免于被降解;M蛋白与包膜下的RNPs相互作用,有助于病毒粒子组装;G蛋白能够识别细胞表面受体,在RABV与胞膜融合及胞内运输过程中起重要作用。尽管对RABV研究众多,但微管和马达分子对RABV胞内感染的影响还有待深入研究。本研究首先使用微管抑制剂Nocodazole预处理N2a细胞,然后进行RABV感染。分别采用RT-qPCR、Western blot检测RABV N基因及蛋白表达量,通过免疫荧光观察Nocodazole处理对RABV在N2a细胞的感染率及上清中病毒TCID50滴度的影响,研究微管在RABV感染中的作用。随后N2a细胞感染RABV12 h后,用Nocodazole处理,收集不同处理时间样品,进行RT-qPCR、TCID50检测,分析病毒出胞时间及微管对病毒出胞过程的影响。为验证dynein分子马达在RABV感染中的作用,通过特异性抑制剂Na3VO4处理或马达复合物亚基成分的重组质粒pcDNA4.0-myc-CC1和pcDNA3.1-flag-p50转染细胞,检测RABV N基因、蛋白表达量及上清病毒滴度,评价dynein在RABV感染中的作用。另外,还通过转染重组质粒pcDNA3.1-flag-KHCct,检测了分子马达kinesin-1在RABV感染中的作用。通过内质网标志蛋白CNX、PDI与RABV结构蛋白共定位来检验内质网是否参与RABV感染。结果显示,Nocodazole预处理抑制了微管形成,使RABV N基因拷贝数降低约25%、N蛋白降低约50%,病毒感染率降低约70%,上清液中病毒滴度由106.5TCID50/mL下降至104.5TCID50/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于微管骨架的参与。RABV感染后用微管抑制剂处理也得出相似结论。Na3VO4预处理抑制dynein,RABV N基因降低约60%、N蛋白降低约45%,病毒感染率降低约75%,上清病毒滴度由107.5TCID50/mL降至105.5TCID50/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于逆向运输分子马达dynein参与。重组质粒pcDNA4.0-myc-CC1、pcDNA3.1-flag-p50的表达均可竞争性抑制dynein功能,N基因分别降低约75%、40%,N蛋白降低约50%、70%,单细胞内病毒感染率均显著减少,上清液中病毒滴度分别由107.5TCID50/mL降至105.5TCID50/mL、107.0TCID50/mL降至105.75TCID50/mL。胞内转染重组质粒pcDNA3.1-flag-KHCct竞争性抑制了kinesin-1功能,RABV N基因降低约25%、N蛋白降低约25%,细胞内病毒感染显著减少,上清病毒滴度由106.75TCID50/mL降至105.5TCID50/mL,证明RABV胞内感染也依赖于分子马达kinesin-1。应用抗RABV G蛋白抗体染色,发现ER标志蛋白CNX、PDI与RABV G蛋白有明显共定位。进一步检测发现,RABV P蛋白也与ER标志蛋白CNX、PDI有明显共定位。以上结果表明,RABV感染N2a细胞需要微管及马达分子dynein、kinesin-1运输系统的参与,其中以dynein的作用更大。初步结果显示,内质网参与RABV G蛋白、P蛋白的胞内复制。本实验为进一步研究RABV胞内感染及装配细节奠定了基础。
Abstract
kuang quan bing bing du （RABV）shi dan zhuang bing du ke kuang quan bing du shu de yi chong chan gu fu lian RNAbing du ,neng yin qi ren he dong wu fa sheng gao du zhi si xing kuang quan bing 。bing du li zi you he dan bai （N）、lin dan bai （P）、ji zhi dan bai （M）、tang dan bai （G）he da dan bai （L）zu cheng 。N、P、Ldan bai bao guo bing du RNAji yin zu gou cheng he tang he dan bai fu ge wu （RNPs）,Ndan bai yu ji yin zu RNAjie ge ,neng gou bao hu bing du RNAmian yu bei jiang jie ;Mdan bai yu bao mo xia de RNPsxiang hu zuo yong ,you zhu yu bing du li zi zu zhuang ;Gdan bai neng gou shi bie xi bao biao mian shou ti ,zai RABVyu bao mo rong ge ji bao nei yun shu guo cheng zhong qi chong yao zuo yong 。jin guan dui RABVyan jiu zhong duo ,dan wei guan he ma da fen zi dui RABVbao nei gan ran de ying xiang hai you dai shen ru yan jiu 。ben yan jiu shou xian shi yong wei guan yi zhi ji Nocodazoleyu chu li N2axi bao ,ran hou jin hang RABVgan ran 。fen bie cai yong RT-qPCR、Western blotjian ce RABV Nji yin ji dan bai biao da liang ,tong guo mian yi ying guang guan cha Nocodazolechu li dui RABVzai N2axi bao de gan ran lv ji shang qing zhong bing du TCID50di du de ying xiang ,yan jiu wei guan zai RABVgan ran zhong de zuo yong 。sui hou N2axi bao gan ran RABV12 hhou ,yong Nocodazolechu li ,shou ji bu tong chu li shi jian yang pin ,jin hang RT-qPCR、TCID50jian ce ,fen xi bing du chu bao shi jian ji wei guan dui bing du chu bao guo cheng de ying xiang 。wei yan zheng dyneinfen zi ma da zai RABVgan ran zhong de zuo yong ,tong guo te yi xing yi zhi ji Na3VO4chu li huo ma da fu ge wu ya ji cheng fen de chong zu zhi li pcDNA4.0-myc-CC1he pcDNA3.1-flag-p50zhuai ran xi bao ,jian ce RABV Nji yin 、dan bai biao da liang ji shang qing bing du di du ,ping jia dyneinzai RABVgan ran zhong de zuo yong 。ling wai ,hai tong guo zhuai ran chong zu zhi li pcDNA3.1-flag-KHCct,jian ce le fen zi ma da kinesin-1zai RABVgan ran zhong de zuo yong 。tong guo nei zhi wang biao zhi dan bai CNX、PDIyu RABVjie gou dan bai gong ding wei lai jian yan nei zhi wang shi fou can yu RABVgan ran 。jie guo xian shi ,Nocodazoleyu chu li yi zhi le wei guan xing cheng ,shi RABV Nji yin kao bei shu jiang di yao 25%、Ndan bai jiang di yao 50%,bing du gan ran lv jiang di yao 70%,shang qing ye zhong bing du di du you 106.5TCID50/mLxia jiang zhi 104.5TCID50/mL,shui ming kuang quan bing bing du bao nei gan ran yi lai yu wei guan gu jia de can yu 。RABVgan ran hou yong wei guan yi zhi ji chu li ye de chu xiang shi jie lun 。Na3VO4yu chu li yi zhi dynein,RABV Nji yin jiang di yao 60%、Ndan bai jiang di yao 45%,bing du gan ran lv jiang di yao 75%,shang qing bing du di du you 107.5TCID50/mLjiang zhi 105.5TCID50/mL,shui ming kuang quan bing bing du bao nei gan ran yi lai yu ni xiang yun shu fen zi ma da dyneincan yu 。chong zu zhi li pcDNA4.0-myc-CC1、pcDNA3.1-flag-p50de biao da jun ke jing zheng xing yi zhi dyneingong neng ,Nji yin fen bie jiang di yao 75%、40%,Ndan bai jiang di yao 50%、70%,chan xi bao nei bing du gan ran lv jun xian zhe jian shao ,shang qing ye zhong bing du di du fen bie you 107.5TCID50/mLjiang zhi 105.5TCID50/mL、107.0TCID50/mLjiang zhi 105.75TCID50/mL。bao nei zhuai ran chong zu zhi li pcDNA3.1-flag-KHCctjing zheng xing yi zhi le kinesin-1gong neng ,RABV Nji yin jiang di yao 25%、Ndan bai jiang di yao 25%,xi bao nei bing du gan ran xian zhe jian shao ,shang qing bing du di du you 106.75TCID50/mLjiang zhi 105.5TCID50/mL,zheng ming RABVbao nei gan ran ye yi lai yu fen zi ma da kinesin-1。ying yong kang RABV Gdan bai kang ti ran se ,fa xian ERbiao zhi dan bai CNX、PDIyu RABV Gdan bai you ming xian gong ding wei 。jin yi bu jian ce fa xian ,RABV Pdan bai ye yu ERbiao zhi dan bai CNX、PDIyou ming xian gong ding wei 。yi shang jie guo biao ming ,RABVgan ran N2axi bao xu yao wei guan ji ma da fen zi dynein、kinesin-1yun shu ji tong de can yu ,ji zhong yi dyneinde zuo yong geng da 。chu bu jie guo xian shi ,nei zhi wang can yu RABV Gdan bai 、Pdan bai de bao nei fu zhi 。ben shi yan wei jin yi bu yan jiu RABVbao nei gan ran ji zhuang pei xi jie dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自吉林大学的高洁，发表于刊物吉林大学2019-06-25论文，是一篇关于狂犬病病毒论文,微管论文,动力蛋白论文,驱动蛋白论文,内质网论文,胞内感染论文,吉林大学2019-06-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林大学2019-06-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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