导读:本文包含了线粒体遗传论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:母系遗传糖尿病伴耳聋,线粒体疾病,人工耳蜗植入
线粒体遗传论文文献综述
刘怡陶,李永新[1]（2019）在《线粒体遗传糖尿病伴耳聋的研究进展》一文中研究指出线粒体遗传的糖尿病伴耳聋(maternally inherited diabetes and deafness, MIDD)在糖尿病患者人群中约占1%,多数伴有感音神经性耳聋,其遗传学特点主要是由于线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变。准确的遗传诊断对临床检查、诊断、管理和遗传咨询具有重要意义。本文概述了MIDD发病机制的研究进展,以及诊断方法和治疗手段,分析了MIDD的听力损失发生机制以及听力重建的效果。(本文来源于《中国听力语言康复科学杂志》期刊2019年06期）
郭宝平[2]（2019）在《多房棘球绦虫致病差异与线粒体遗传标志相关性的研究》一文中研究指出目的:泡型包虫病(alveolar echinococcosis,AE)是由多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,E.m)的幼虫泡球蚴引起的致死性寄生虫病,在肝实质内呈弥漫性浸润生长,被称为“虫癌”。研究表明,泡球蚴病在我国西部省份流行非常严重,AE感染病人占世界患病人数的90%以上。然而,目前还没有有效的疫苗和药物来控制该病,同时宿主感染泡球蚴导致的肝损伤机制目前也不清楚。有研究表明,泡球蚴来源不同,其对人和动物的致病性存在差异;不同源地的泡球蚴感染宿主导致的肝损伤也存在差异,然而目前并不清楚这些差异。因此,本研究以5株不同来源的泡球蚴为研究对象,包括阿拉斯加株(EM-1)、新疆株(EM-2)、日本株(EM-4)、宁夏株(EM-5)和青海株(EM-6),比较不同源地泡球蚴腹腔接种后产生PSCs的差异、致小鼠肝损伤的差异及线粒体(Mitochondria)基因组的差异,试图阐明不同源地泡球蚴致病性差异与进化规律的关系,为进一步了解泡球蚴致病机制奠定基础,为解决上述若干问题,本研究拟通过叁个实验来完成:1.建立5株EM的小鼠腹腔感染模型,探讨泡球蚴保种传代的方法,不同株原头蚴(Protoscoleces,PSCs)传代后小鼠体重、肝脏、脾脏和PSCs数量的差异。2.建立5株EM的小鼠肝门静脉感染模型,分析动物感染后肝脏病理变化的差异,外周血Th1/Th2/Th17的之间平衡与抗感染的关联以及致病性最强和最弱的两株转录表达谱的差异。3.运用生物信息学和比较基因组学方法,分析5株EM的不同分类阶元线粒体基因组中分类基因,PCGs基因(Protein Coding Genes)的碱基组成、序列分化、单个蛋白基因的密码子使用、变异率等特征,探讨不同源地泡球蚴线粒体基因的演化模式。方法:1.用5株不同来源的PSCs腹腔接种昆明小鼠各10只,每只5000个PSCs。120天后小鼠称重,处死实验小鼠,计算感染率;包囊称重,分离PSCs,计算PSCs的体积;肝脏、脾脏称重,将感染的脏器用4%多聚甲醛固定,HE染色,100倍下镜检5个视野,计算PSCs平均数;计算包囊重量及PSCs的线性关系。2.小鼠肝门静脉接种5株不同来源的PSCs,每组15只实验小鼠,每只2000个PSCs。120天后小鼠称重,处死实验小鼠并采血;解剖实验小鼠,观察感染情况;将部分感染的肝脏用4%多聚甲醛固定,进行HE和Masson染色,以及免疫组织化学分析,比较不同株之间实验小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、III型胶原蛋白(Collagen type III alpha I,COL3A1)、细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)的差异;用CBA(Cytometric Bead Array)法检测外周血相关细胞因子(Th1/Th2/Th17)的表达量,比较不同株之间的差异;通过高通量测序技术筛选肝脏区域关键免疫分子在EM-1及EM-4的表达差异,并用实时荧光定量验证筛选的部分差异表达基因。3.提取5株PSCs的基因组DNA,构建文库,Illumina方法进行线粒体基因组测序,并完成线粒体环拼接。使用DnaSPv 5、Mega 6.0、Network 5.0及DNAMAN 5.2.2软件分析各株mtDNA序列的差异,对12个PCGs基因的密码子使用情况和相对同义密码子使用频率(Relative Synonymous Codon Usage,RSCU)进行统计,同时进行核苷酸和氨基酸的遗传距离分析、核苷酸聚类分析、核苷酸及氨基酸与参考基因的变异率及同源性分析。结果:1.不同株PSCs小鼠腹腔接种结果显示,EM-1感染率最高,为87.50%,EM-4最低,为50.00%;产生PSCs数量分别为EM-1(280.00±100.00)>EM-5(183.33±83.33)>EM-2(90.56±55.00)>EM-6(70.00±36.00)>EM-4(40.00±32.00)。肝脏PSCs平均数依次为EM-1(11.52±2.22)>EM-5(8.16±0.83)>EM-2(7.80±0.96)>EM-4(3.80±0.07)>EM-6(1.5±0.45)。包囊重量与包囊内PSCs呈正相关性(r=0.4178,p=0.0241);包囊重量与肝脏内的PSCs呈正相关性(r=0.4946,p=0.0102)。2.不同株的PSCs小鼠肝门静脉接种结果显示,EM-1组实验小鼠成“泡”率最高,达到50.00%,EM-4组的感染症状最轻,未见成“泡”感染;感染强度次序为:EM-1>EM-2>EM-5>EM-6>EM-4。HE染色镜检肝脏病灶数量显示EM-1病灶数最多,EM-4病灶数最少;依次为EM-1(27.58±7.85)>EM-2(24.64±7.97)>EM-5(21.4±5.68)>EM-6(15.36±3.19)>EM-4(15.00±3.00)。Masson染色显示,EM-1与EM-2感染的肝脏纤维化程度与空白对照组(Control,CON)相比差异极显着(P<0.001),纤维化的发生主要以胶原沉积为主,可见明显的纤维化病灶,EM-5与EM-6次之,EM-4最弱,但均与对照组差异显着(P<0.05)。免疫组化结果显示,感染的肝脏病灶周围均有大量的α-SMA及ERK表达,其中EM-1与EM-2组表达量最高,EM-5和EM-6次之,EM-4组最弱,EM-1与EM-2组的α-SMA及ERK表达程度与对照组相比差异极显着(P<0.001)。CBA法检测不同株血清中细胞因子水平,结果显示,EM-1组IL-2值最高,与空白对照组(Control,CON)相比,差异显着(P<0.05),其它组与CON组差异不显着(P>0.05);EM-4组IL-4值最高,与CON相比,差异显着(P<0.05),其它组与CON组相比,差异不显着(P>0.05);所有感染组的IL-6值均低于CON组,EM-4组与CON组差异不显着(P>0.05),其余组差异均显着(P<0.05),;EM-4组IFN-γ值最高,EM-2组与CON组差异显着(P<0.05),其余组差异均不显着(P>0.05);EM-2组TNF-α值最高,所有组与CON组相比均无统计学差异(P>0.05);EM-4组IL-17A值最高,所有组与CON组相比均无统计学差异(P>0.05)(P>0.05);EM-5组IL-10值最高,EM-4组与CON组差异显着(P<0.05),但其它组与CON组相比,差异不显着(P>0.05)。EM-1与EM-4肝脏转录组结果显示,上调基因231个,包含致炎症反应的CD163分子和ATP酶;下调基因350个,包含加重宿主免疫反应的SPN分子。3.线粒体基因组测序结果显示,EM-1、EM-2、EM-4、EM-5及EM-6全长分别为13,740bp、13,737bp、13,737bp、13,738bp及13,740bp。5株线粒体基因组中,亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸和丝氨酸等4个氨基酸含量最高,分别为14.88%、13.12%、12.41%和10.32%。对5株线粒体基因组的12个PCGs进行分析,发现ATP6、Cox1、Cox3、Nad1及Nad5氨基酸遗传距离大于核苷酸的遗传距离;Cob、Nad2、Nad3、Nad4及Nad6的核苷酸遗传距离大于氨基酸的遗传距离;Cox2与Nad4l最为保守,氨基酸与核苷酸的遗传距离基本相等,进化最慢。对5株EM的进行遗传距离及Network 5.0分析,均显示EM-1与其他4个株差异较大,与参考基因比较,EM-1的核苷酸及氨基酸变异率高于其他4株,较其他几株同源性略低。结论:1.成功建立了5株不同源地的泡球蚴昆明小鼠实验动物感染模型,并且能够稳定传代。不同源地的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中EM-1(阿拉斯加株)感染小鼠后,包囊及肝脏中PSCs的数量最多,其次为EM-5(宁夏株)、EM-2(新疆株)、EM-6(青海株),EM-4(日本株)产生的PSCs数量最少。5株泡球蚴包囊内和肝脏中PSCs的数量与包囊的重量均呈正相关。2.成功建立了不同源地的泡球蚴肝门静脉注射感染动物模型,不同源地的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中EM-1致病力最强,EM-4致病力最弱。小鼠感染泡球蚴后,不同株肝脏纤维化程度、病灶周围α-SMA和ERK表达情况、血清中Th1/Th2/Th17相关细胞因子的表达水平均存在差异。对致病力最强(EM-1)和最弱(EM-4)的两株进行的基因表达谱分析,发现231个上调基因和350个下调基因。3.成功对5个不同源地泡球蚴线粒体基因组进行了测序,序列分析结果显示,5株泡球蚴mtDNA全长序列差异很小,但是EM-1株核苷酸和氨基酸变异率高于其它4株,从线粒体基因组分子水平上解析了泡球蚴线粒体基因组结构特点及致病性之间的关系。EM-1的12个PCGs遗传距离与其他4株距离均较远;10个PCGs聚类分析发现EM-1与其他4株距离均较远,EM-1的核苷酸变异率最高,与参考基因比较同源性最低,致病性最强;EM-4的核苷酸变异率最低,与参考基因比较同源性最高,致病性最弱。在12个PCGs中,ATP6、Cox1、Cox3、Nad1及Nad5进化较快,泡球蚴致病力可能与上述5个进化较快的PCGs有关。(本文来源于《石河子大学》期刊2019-06-01）
张姝,贺瑞红,赵宇翔,张永杰[3]（2018）在《蛹虫草线粒体基因型快速检测体系的构建及线粒体遗传稳定性的初步研究》一文中研究指出本研究的目的是建立一种快速确定蛹虫草菌株线粒体基因型的技术体系,并探讨蛹虫草连续传代培养后线粒体的遗传稳定性。从已知线粒体基因组的蛹虫草菌株中扩增线粒体内含子位点,将扩增产物混合并制作出两套DNA分子量标准,即在8个内含子位点分别具有内含子的8条扩增条带组成的M-I和在6个内含子位点分别缺失内含子的6条扩增条带组成的M-II。从待检测的蛹虫草菌株(包括3个已知和2个未知线粒体基因组的菌株)中扩增同样的(假定)内含子位点,然后通过琼脂糖凝胶电泳分别与制备好的两个DNA分子量标准进行比较,能够准确判断蛹虫草菌株的线粒体内含子分布模式,从而验证了所构建的线粒体基因型快速检测体系的有效性。选择10个蛹虫草组织分离菌株和8个单分生孢子菌株连续转接培养15代,没有发现线粒体内含子分布模式发生改变。本研究成功构建了快速检测蛹虫草线粒体基因型的技术体系,并发现蛹虫草线粒体具有很高的遗传稳定性,为开展蛹虫草线粒体遗传规律的研究奠定了基础。(本文来源于《菌物学报》期刊2018年08期）
[4]（2018）在《伴糖尿病的线粒体遗传综合征专家讲坛专刊预告》一文中研究指出(本文来源于《实用糖尿病杂志》期刊2018年04期）
户国,程磊,马波,孙大江,王斌[5]（2018）在《中国达氏鳇野生群体和两个养殖群体的线粒体遗传多样性分析》一文中研究指出达氏鳇(Huso dauricus)是黑龙江流域土着鲟,近几十年来野生资源急剧下降,被确定为濒危物种之一。本研究采用线粒体DNA的Cyt b基因和D-loop区域的多态性信息评估了黑龙江抚远段野生群体、北京房山国家级鲟鱼原种场的保种群体及浙江衢州国家级鲟鱼良种场的繁殖群体等3个达氏鳇群体的遗传多样性水平。所有测试个体在Cyt b基因位点的核苷酸水平上没有检测到多样性,均具有相同的Cyt b单倍型,而在D-loop区域中发现了9种单倍型,对于D-loop区,单倍型多样性(H_d)达到0.593,但核苷酸多样性(π)仅为0.00213。在8尾野生个体中检测到6种D-loop单倍型,2个养殖群体共计58尾个体共计检出5种D-loop单倍型个体。分析结果显示:野生达氏鳇群体遗传多样性极低,历史上可能经历过严重的遗传瓶颈,同时达氏鳇人工繁殖过程中每批次可能只有极少个体参与了繁殖。此外,基于Cyt b基因部分序列的分析结果提示,达氏鳇与其他太平洋鲟类的亲缘关系较近,而与欧鳇(Huso huso)关系较远,传统上鳇属(Huso)的分类地位得不到有效的分子生物学数据支持。(本文来源于《中国水产科学》期刊2018年04期）
李彪,赖康,鲜方海,向国栋,周明[6]（2018）在《唐家河国家级自然保护区中华蜜蜂(Apis cerana cerana)的线粒体遗传多样性分析》一文中研究指出【目的】了解唐家河国家级自然保护区中华蜜蜂的遗传多样性,为进一步保护和利用唐家河中华蜜蜂资源提供科学依据。【方法】以基因片段mt DNA t RNAleu~COⅡ的非编码区作为分子标记,对唐家河各个地区共37个中蜂样本进行序列测定及相关分析。【结果】唐家河中蜂的核苷酸多样度(Pi)为0.030 34,单倍型多样性(Hd)为0.839±0.041;共发现14个单倍型,主体单倍型TJH2和TJH4分别占总样本数的29.73%和27.03%。此外本研究首次报道了3个新发现的单倍型。【结论】唐家河中蜂具有丰富的遗传多样性,其单倍型的分布与地理、气候等因素有较大关系。(本文来源于《四川农业大学学报》期刊2018年03期）
[7]（2018）在《伴糖尿病的线粒体遗传综合征专家讲坛专刊预告》一文中研究指出2018年第4期1线粒体脑病的识别、特征及处理2Leigh综合征的认识、特征及处理3Alpers综合征的认识、特征及处理4线粒体肌病的认识、特征及处理5慢性进行性眼外肌麻痹的认识、特征及临床处理6脊椎小脑共济失调伴癫痫综合征的认识、特征及处理(本文来源于《实用糖尿病杂志》期刊2018年03期）
刘树虎[8]（2018）在《新疆叁个隔离人群Y染色体和线粒体遗传多样性分析》一文中研究指出新疆地处亚欧大陆腹地,自古以来是联系东西方文明的纽带。新疆地区人群的遗传多样性是长期以来东西方人群交流融合的结果,也是中华民族总体遗传构成中不可或缺的重要组成部分,是我国独特的遗传资源。而世居新疆的人群、尤其是至今仍然很少与外界交流、处于相对隔离生活状态的人群,是研究人群基因交流、环境适应以及地域性高发疾病的宝贵遗传资源。对新疆罗布人、克里雅人、刀郎人进行系统的遗传多样性研究,利用基因组数据研究人群的迁移和融合,开展以新疆隔离人群为模型的环境适应和疾病基因定位研究具有重要意义。Y染色体严格遵循父系遗传,而Y-NRY在减数分裂过程中不与X染色体配对,这使其只通过碱基突变来积累变异信息。通过测定Y-NRY的突变标记,可追踪父系遗传的进程。Y-SNP具有很强的地域特异性,测定不同地域人群的Y染色体单倍群类型,可推断人群进化、迁徙及相关历史活动,能有效地评估群体的遗传结构。通过对叁个隔离人群Y染色体遗传多样性分析结果表明:克里雅人群检出12种单倍群,高频单倍群有J2a1b1(25.64%),R1a1a1b2a(20.51%),R2a(17.95%),R1a1a1b2a2(15.38%);罗布人群检出16种单倍群,高频单倍群有J2a1(43.75%),J2a2(14.06%),R2(9.38%),L1c(7.81%);刀郎人群检出40种单倍群,高频单倍群有R1b1a1a1(9.21%),R1a1a1b2a1a(7.89%),R1a1a1b2a2b(6.58%),C3c1(6.58%),叁个隔离人群与维吾尔族亲缘关系较近;在单倍群类型和频率上与维吾尔族最接近且无显着性差异(f=0.833,p=0.367)。此外,叁个隔离人群单倍群类型和频率显示明显的亚欧混合现象,经过长期基因融合使其具有中亚人群的典型特征,适用于法医遗传学。人类线粒体DNA是核外唯一遗传物质,呈闭合环状全长16569bp,由控制区和编码区构成,控制区碱基多态性使人群间存在高度特异性,这种碱基多态性可为人群的进化提供参考资料。mt DNA具有高突变率、母系遗传、无重组、单拷贝、不受选择压力影响等特征,使其成为人类学研究中重要的分子载体。通过对叁个隔离人群mtDNA遗传多样性分析结果表明:克里雅人、罗布人、刀郎人mtDNA变异位点分别检出256,315,735处,其中多态性位点分别检出245,298,639处,A263G,A750G,A8860G,A15326G 4处位点在叁人群中变异率均为100%;克里雅人检测出20种单倍型,高频单倍型有F1a1(15.71%),M8a2a1(12.86%),H1t(11.43%),M11a2(10.00%),罗布人检测出27种单倍型,高频单倍型有B5b2c(31.71%),H6a1b2(18.90%),D4c2a(13.41%),刀郎人检测出100种单倍型,主要集中在D,H,U,C主单倍型,各单倍型频率都不高,最高的为H2a1a(4.47%);叁人群单倍型多样性分别为0.9264,0.8360,0.9910,平均核苷酸配对差异数目为30.2714,36.1220,32.5506,个体识别率为0.9132,0.8309,0.9854.叁个人群单倍群类型和频率与维吾尔族最接近,亲缘关系最密切。此外,叁个人群mtDNA遗传结构显示明显的亚欧混合现象,这与丝绸之路贸易的兴起-昌盛-衰落密不可分,是人群长期基因融合的结果。原发性高血压(essential hypertension,EH):是一种由某些先天性遗传基因与许多致病性增压因素和环境因素综合引起的多因素疾病,特点是不能发现导致血压升高的确切病因。本课题组在问卷调查和体质指标的测量时发现罗布人高血压患病率异常高,通过对罗布人基本临床指标和EH患者全线粒体基因组关联分析结果表明,罗布人EH患病率高达37.20%,年龄、BMI、腰围与EH有显着的关联性;线粒体全基因组分析在EH组共发现变异位点235处,未报道过的10处,对照组共发现变异位点253处,未报道过的13处;70个位点变异只在EH组中被发现,这些位点可能与原发性高血压的发生有直接关联,87个位点变异只在对照组中被发现,这些位点可能对原发性高血压的发生有抑制作用。获得的tRNA变异位点tRNA~Argrg T10410C,tRNA~Leueu A12308G,tRNA~Thrhr A15951G可能与EH相关;线粒体蛋白质基因变异位点ND1(G3316A,G3438A,T4248C),ND2(A4824G,C4919T,T4937C),COⅠ(T5964C,C6104T,G6734A,G6852A,A6881G),COⅡ(T7954C,G8020A),ATPase8(T8473C),ATPase6(A8633G,C8794T),COⅢ(G9477A,C9536T,A9632T,A9667G),ND3(C10181T),ND4(C11215T,A11467G),ND5(C12346T,G12372A,T13617C,C13720T,A13857G,T14287C,G14305A,T14319C,T14470C),Cytb(A14793G,C14815T,A14927G,T14979C,T15440C,C15448A,G15596A,A15758G)对EH的深入研究有意义。(本文来源于《新疆大学》期刊2018-05-25）
编辑部[9]（2018）在《线粒体与糖尿病——伴糖尿病的线粒体遗传综合征》一文中研究指出编者按:近期本刊专家讲坛,想重点谈线粒体与糖尿病的相关问题。浅意思是因在糖尿病分型中,涉猎"线粒体基因突变糖尿病",以及"伴糖尿病的遗传综合征"。介绍一下近来的进展,自1959年Ernster等首次报导伴糖尿病的代谢亢进性线粒体综合征以来,1995年Gerbitz等报导目前伴糖尿病的线粒体遗传综合征已有60余种;更从线粒体的数量上、功能上、遗传特点上,直到线粒体在人的生存与衰老,健康与疾病等方面,远远超越与糖尿病的关系,更从大概念上了解线粒体(本文来源于《实用糖尿病杂志》期刊2018年02期）
黄勋和,余哲琪,翁茁先,何丹林,易振华[10]（2018）在《广东省地方鸡线粒体遗传多样性与母系起源》一文中研究指出系统评估地方鸡的遗传变异水平并追溯其母系起源,可为保护利用优质家禽种质资源库提供科学依据。本研究测定了广东省和邻省共12个地方鸡品种的线粒体DNA D-loop序列,分析品种间的遗传距离与系统关系,并构建单倍型系统发生树和中介网络图。360份样品共检测到60个突变位点,均为转换。定义了85种单倍型,归属于单倍型类群A、B、C和E,在12个鸡品种中均有分布,其中B是优势单倍型类群(187个,51.94%),E次之(76个,21.11%)。B02和C01是优势单倍型(85个,23.61%;48个,13.33%),为12个鸡品种共有;E03位居第叁(35个,9.72%),杏花鸡、黄郎鸡和宁都叁黄鸡未见此单倍型。杏花鸡集中分布在单倍型类群B,惠阳胡须鸡和中山沙栏鸡则主要分布在单倍型类群E;怀乡鸡的单倍型数量最多,中山沙栏鸡的最少。广东地方鸡品种间遗传距离为0.012–0.015,单倍型多样性0.805±0.047至0.949±0.026,核苷酸多样性0.0102±0.0017至0.0138±0.0009。邻接树和中介网络图将85种单倍型划分为进化枝A、B、C和E,广东省与邻省地方鸡单倍型的地理分布模式相似。中性检验显示广东地方鸡未经历明显的群体历史扩张。结果表明广东地方鸡处于较好的保护状态,遗传多样性水平较高,品种的形成受到邻省和北方家鸡的影响,东南亚红原鸡对广东地方鸡也有重要的遗传贡献。(本文来源于《生物多样性》期刊2018年03期）
线粒体遗传论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:泡型包虫病(alveolar echinococcosis,AE)是由多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,E.m)的幼虫泡球蚴引起的致死性寄生虫病,在肝实质内呈弥漫性浸润生长,被称为“虫癌”。研究表明,泡球蚴病在我国西部省份流行非常严重,AE感染病人占世界患病人数的90%以上。然而,目前还没有有效的疫苗和药物来控制该病,同时宿主感染泡球蚴导致的肝损伤机制目前也不清楚。有研究表明,泡球蚴来源不同,其对人和动物的致病性存在差异;不同源地的泡球蚴感染宿主导致的肝损伤也存在差异,然而目前并不清楚这些差异。因此,本研究以5株不同来源的泡球蚴为研究对象,包括阿拉斯加株(EM-1)、新疆株(EM-2)、日本株(EM-4)、宁夏株(EM-5)和青海株(EM-6),比较不同源地泡球蚴腹腔接种后产生PSCs的差异、致小鼠肝损伤的差异及线粒体(Mitochondria)基因组的差异,试图阐明不同源地泡球蚴致病性差异与进化规律的关系,为进一步了解泡球蚴致病机制奠定基础,为解决上述若干问题,本研究拟通过叁个实验来完成:1.建立5株EM的小鼠腹腔感染模型,探讨泡球蚴保种传代的方法,不同株原头蚴(Protoscoleces,PSCs)传代后小鼠体重、肝脏、脾脏和PSCs数量的差异。2.建立5株EM的小鼠肝门静脉感染模型,分析动物感染后肝脏病理变化的差异,外周血Th1/Th2/Th17的之间平衡与抗感染的关联以及致病性最强和最弱的两株转录表达谱的差异。3.运用生物信息学和比较基因组学方法,分析5株EM的不同分类阶元线粒体基因组中分类基因,PCGs基因(Protein Coding Genes)的碱基组成、序列分化、单个蛋白基因的密码子使用、变异率等特征,探讨不同源地泡球蚴线粒体基因的演化模式。方法:1.用5株不同来源的PSCs腹腔接种昆明小鼠各10只,每只5000个PSCs。120天后小鼠称重,处死实验小鼠,计算感染率;包囊称重,分离PSCs,计算PSCs的体积;肝脏、脾脏称重,将感染的脏器用4%多聚甲醛固定,HE染色,100倍下镜检5个视野,计算PSCs平均数;计算包囊重量及PSCs的线性关系。2.小鼠肝门静脉接种5株不同来源的PSCs,每组15只实验小鼠,每只2000个PSCs。120天后小鼠称重,处死实验小鼠并采血;解剖实验小鼠,观察感染情况;将部分感染的肝脏用4%多聚甲醛固定,进行HE和Masson染色,以及免疫组织化学分析,比较不同株之间实验小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、III型胶原蛋白(Collagen type III alpha I,COL3A1)、细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)的差异;用CBA(Cytometric Bead Array)法检测外周血相关细胞因子(Th1/Th2/Th17)的表达量,比较不同株之间的差异;通过高通量测序技术筛选肝脏区域关键免疫分子在EM-1及EM-4的表达差异,并用实时荧光定量验证筛选的部分差异表达基因。3.提取5株PSCs的基因组DNA,构建文库,Illumina方法进行线粒体基因组测序,并完成线粒体环拼接。使用DnaSPv 5、Mega 6.0、Network 5.0及DNAMAN 5.2.2软件分析各株mtDNA序列的差异,对12个PCGs基因的密码子使用情况和相对同义密码子使用频率(Relative Synonymous Codon Usage,RSCU)进行统计,同时进行核苷酸和氨基酸的遗传距离分析、核苷酸聚类分析、核苷酸及氨基酸与参考基因的变异率及同源性分析。结果:1.不同株PSCs小鼠腹腔接种结果显示,EM-1感染率最高,为87.50%,EM-4最低,为50.00%;产生PSCs数量分别为EM-1(280.00±100.00)>EM-5(183.33±83.33)>EM-2(90.56±55.00)>EM-6(70.00±36.00)>EM-4(40.00±32.00)。肝脏PSCs平均数依次为EM-1(11.52±2.22)>EM-5(8.16±0.83)>EM-2(7.80±0.96)>EM-4(3.80±0.07)>EM-6(1.5±0.45)。包囊重量与包囊内PSCs呈正相关性(r=0.4178,p=0.0241);包囊重量与肝脏内的PSCs呈正相关性(r=0.4946,p=0.0102)。2.不同株的PSCs小鼠肝门静脉接种结果显示,EM-1组实验小鼠成“泡”率最高,达到50.00%,EM-4组的感染症状最轻,未见成“泡”感染;感染强度次序为:EM-1>EM-2>EM-5>EM-6>EM-4。HE染色镜检肝脏病灶数量显示EM-1病灶数最多,EM-4病灶数最少;依次为EM-1(27.58±7.85)>EM-2(24.64±7.97)>EM-5(21.4±5.68)>EM-6(15.36±3.19)>EM-4(15.00±3.00)。Masson染色显示,EM-1与EM-2感染的肝脏纤维化程度与空白对照组(Control,CON)相比差异极显着(P<0.001),纤维化的发生主要以胶原沉积为主,可见明显的纤维化病灶,EM-5与EM-6次之,EM-4最弱,但均与对照组差异显着(P<0.05)。免疫组化结果显示,感染的肝脏病灶周围均有大量的α-SMA及ERK表达,其中EM-1与EM-2组表达量最高,EM-5和EM-6次之,EM-4组最弱,EM-1与EM-2组的α-SMA及ERK表达程度与对照组相比差异极显着(P<0.001)。CBA法检测不同株血清中细胞因子水平,结果显示,EM-1组IL-2值最高,与空白对照组(Control,CON)相比,差异显着(P<0.05),其它组与CON组差异不显着(P>0.05);EM-4组IL-4值最高,与CON相比,差异显着(P<0.05),其它组与CON组相比,差异不显着(P>0.05);所有感染组的IL-6值均低于CON组,EM-4组与CON组差异不显着(P>0.05),其余组差异均显着(P<0.05),;EM-4组IFN-γ值最高,EM-2组与CON组差异显着(P<0.05),其余组差异均不显着(P>0.05);EM-2组TNF-α值最高,所有组与CON组相比均无统计学差异(P>0.05);EM-4组IL-17A值最高,所有组与CON组相比均无统计学差异(P>0.05)(P>0.05);EM-5组IL-10值最高,EM-4组与CON组差异显着(P<0.05),但其它组与CON组相比,差异不显着(P>0.05)。EM-1与EM-4肝脏转录组结果显示,上调基因231个,包含致炎症反应的CD163分子和ATP酶;下调基因350个,包含加重宿主免疫反应的SPN分子。3.线粒体基因组测序结果显示,EM-1、EM-2、EM-4、EM-5及EM-6全长分别为13,740bp、13,737bp、13,737bp、13,738bp及13,740bp。5株线粒体基因组中,亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸和丝氨酸等4个氨基酸含量最高,分别为14.88%、13.12%、12.41%和10.32%。对5株线粒体基因组的12个PCGs进行分析,发现ATP6、Cox1、Cox3、Nad1及Nad5氨基酸遗传距离大于核苷酸的遗传距离;Cob、Nad2、Nad3、Nad4及Nad6的核苷酸遗传距离大于氨基酸的遗传距离;Cox2与Nad4l最为保守,氨基酸与核苷酸的遗传距离基本相等,进化最慢。对5株EM的进行遗传距离及Network 5.0分析,均显示EM-1与其他4个株差异较大,与参考基因比较,EM-1的核苷酸及氨基酸变异率高于其他4株,较其他几株同源性略低。结论:1.成功建立了5株不同源地的泡球蚴昆明小鼠实验动物感染模型,并且能够稳定传代。不同源地的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中EM-1(阿拉斯加株)感染小鼠后,包囊及肝脏中PSCs的数量最多,其次为EM-5(宁夏株)、EM-2(新疆株)、EM-6(青海株),EM-4(日本株)产生的PSCs数量最少。5株泡球蚴包囊内和肝脏中PSCs的数量与包囊的重量均呈正相关。2.成功建立了不同源地的泡球蚴肝门静脉注射感染动物模型,不同源地的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中EM-1致病力最强,EM-4致病力最弱。小鼠感染泡球蚴后,不同株肝脏纤维化程度、病灶周围α-SMA和ERK表达情况、血清中Th1/Th2/Th17相关细胞因子的表达水平均存在差异。对致病力最强(EM-1)和最弱(EM-4)的两株进行的基因表达谱分析,发现231个上调基因和350个下调基因。3.成功对5个不同源地泡球蚴线粒体基因组进行了测序,序列分析结果显示,5株泡球蚴mtDNA全长序列差异很小,但是EM-1株核苷酸和氨基酸变异率高于其它4株,从线粒体基因组分子水平上解析了泡球蚴线粒体基因组结构特点及致病性之间的关系。EM-1的12个PCGs遗传距离与其他4株距离均较远;10个PCGs聚类分析发现EM-1与其他4株距离均较远,EM-1的核苷酸变异率最高,与参考基因比较同源性最低,致病性最强;EM-4的核苷酸变异率最低,与参考基因比较同源性最高,致病性最弱。在12个PCGs中,ATP6、Cox1、Cox3、Nad1及Nad5进化较快,泡球蚴致病力可能与上述5个进化较快的PCGs有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
线粒体遗传论文参考文献
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标签：母系遗传糖尿病伴耳聋; 线粒体疾病; 人工耳蜗植入;