导读:本文包含了肌细胞分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:电针,多裂肌,修复,形态学
肌细胞分化论文文献综述
刘通,于佳妮,邹德辉,邝伟川,王小寅[1]（2019）在《电针调控miRNA206/HDAC4轴促进损伤多裂肌修复过程中成肌细胞分化的机制》一文中研究指出背景:作者前期的动物及细胞实验研究已证明电针可提高损伤腰多裂肌中Pax7和成肌分化抗原的表达,促进多裂肌的损伤修复。亦有研究证明miRNA206促进成肌分化主要是通过抑制组蛋白去乙酰化酶4实现的。目的:观察电针对布比卡因致大鼠腰多裂肌损伤修复过程中miRNA206/组蛋白去乙酰化酶4表达的影响。方法:实验方案经广东省第二中医院动物实验伦理委员会批准(批准号为048604)。将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组10只。模型组、电针组采用0.5%布比卡因肌内注射复制大鼠多裂肌损伤模型;对照组予注射等量生理盐水。对照组与模型组不进行针刺干预,电针组予针刺双侧委中穴、肾俞穴,针刺后连接电针,波形选用疏密波,电针频率采用2 Hz/10 Hz,电流强度选择1 mA,持续治疗20 min,每天治疗1次,共治疗7 d。干预7 d后,通过苏木精-伊红染色观察损伤部位多裂肌形态学变化,采用qRT-PCR检测多裂肌中miRNA206的表达量,Western-blot检测多裂肌中成肌分化抗原、Myogenin及组蛋白去乙酰化酶4蛋白的表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色显示,7d后,对照组可见视野中骨骼肌纤维大部分排列整齐,无明显破坏及巨噬细胞浸润;模型组视野内可见大量肌纤维被破坏,但出现部分肌纤维修复,巨噬细胞数量仍较多;电针组新生肌纤维较多,巨噬细胞较模型组减少;(2)Western-blot结果显示,7d后,模型组成肌分化抗原、Myogenin、组蛋白去乙酰化酶4蛋白表达均较对照组升高(P<0.05或P<0.01);电针组成肌分化抗原、Myogenin蛋白表达较模型组升高(P <0.01),组蛋白去乙酰化酶4蛋白较模型组降低(P <0.01);(3)qRT-PCR结果显示,7d后,模型组miRNA206表达高于对照组(P<0.01),电针组miRNA206表达高于模型组(P<0.05);(4)结果说明,电针可促进多裂肌损伤后成肌分化,其作用可能是通过提高miRNA206表达抑制组蛋白去乙酰化酶4活性实现的。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年33期）
胡晓阳[2]（2019）在《Ran对小鼠C2C12成肌细胞分化的影响》一文中研究指出随着生活水平的提高,肉类食品在食物构成中所占的比例不断增加,人们对肉类食品品质的要求也越来越高。目前,国内肉用牛养殖中品种繁多,牛肉产量偏低、品质也参差不齐,牛肉的产量和质量已不能满足人们的需求。通过遗传育种的方式获得高品质的肉牛品种是目前解决这一问题最快速有效的方法。另外,在骨骼肌受到损伤时,潜伏的骨骼肌卫星细胞可以通过增殖和分化完成肌纤维的再生,修复损伤的肌肉组织。因此,研究肌肉分化的机理不仅具有巨大的商业价值,也能够为医学领域内相关疾病的治疗提供新思路。Ran(Ras-related nuclear protein,Ran)作为真核生物细胞中含量最为丰富的小G蛋白,参与细胞分裂间期的核质转运、DNA复制和RNA转录;在细胞分裂期参与核膜破裂、纺锤体组装、染色体分配、核膜装配和细胞分裂等细胞过程。肌肉分化是肌源性细胞通过增殖、分化和彼此间相互融合成多核肌管,并最终形成具有收缩功能的肌纤维的过程。本研究以小鼠C2C12成肌细胞为研究对象,通过Ran的过表达和siRNA干扰研究Ran的对C2C12细胞体外分化过程的影响,并进一步探究Ran对分化影响的可能机制。具体实验内容及结果如下:(1)Ran在C2C12细胞分化过程中的表达:分别收集分化0 d至5 d的C2C12细胞蛋白样,进行Western blot实验。结果显示,随着C2C12细胞分化程度的提高,Ran的表达量也逐渐升高。(2)Ran在C2C12细胞分化过程中的分布:通过对未分化、分化早期、分化中期和分化晚期的C2C12细胞进行间接免疫荧光染色。发现在未分化的C2C12细胞中,Ran主要聚集于细胞核内;随着分化时间的延长,Ran在细胞质中的浓度升高。(3)Ran过表达对C2C12细胞分化的影响:构建Ran的过表达载体,转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量升高,MyoG和MYH的表达量也显着升高;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显升高。Ran表达量的升高促进了C2C12细胞的分化。(4)Ran的siRNA干扰对C2C12细胞分化的影响:Ran的siRNA干扰片段转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显下降。Ran表达量的降低抑制了C2C12细胞的分化。(5)TGF-β/Smad信号通路对C2C12细胞分化的影响:C2C12细胞中添加TGF-β/Smad信号通路抑制剂LY2109761。Western blot检测发现,磷酸化smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低。LY2109761的添加抑制了C2C12细胞的分化。(6)Ran对TGF-β/Smad信号通路的影响:分别使用Ran的过表达载体和siRNA干扰片段来改变Ran在C2C12细胞分化过程中的表达量。Western blot结果表明,在C2C12细胞分化第2 d,Ran的表达量升高,Smad2的蛋白含量也显着提高;Ran的表达量降低,Smad2的蛋白含量也明显降低。而在分化第4 d和第6 d,Smad2的蛋白含量不受Ran表达量变化的影响。在C2C12细胞分化的不同时期,Ran表达量升高时,磷酸化Smad2的含量均显着升高;Ran的表达量下降时,磷酸化Smad2的含量也均显着降低。Ran的表达量升高激活TGF-β/Smad信号通路,Ran的表达量下降抑制TGF-β/Smad信号通路。(7)C2C12细胞的分化过程中,Ran与TGF-β/Smad信号通路之间的关系:LY2109761处理后,C2C12细胞中磷酸化Smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也显着降低;LY2109761处理C2C12细胞并转入Ran过表达载体,Ran表达量的升高,使磷酸化Smad2的含量和MyoG与MYH的表达量恢复到不添加抑制剂时的水平。说明Ran可以通过提高TGF-β/Smad信号通路中Smad2和磷酸化Smad2的含量促进C2C12细胞分化。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
葛瑶[3]（2019）在《TCEA3通过ANXA1介导TGF-β通路进而影响小鼠成肌细胞分化》一文中研究指出骨骼肌生成是一个高度有序的过程,包括成肌细胞的增殖、细胞融合形成肌管以及这些肌管进一步分化为肌纤维。这一过程需要依赖转录因子和信号转导途径之间的连续级联调节作用。实验室之前的一项研究表明,TCEA3能促进牛骨骼肌卫星细胞的分化,但是其作用的分子机制尚不清楚。本实验以小鼠为模型,研究TCEA3的作用及分子机制。TCEA3是转录延伸因子家族的成员。其不仅可以促进转录,在细胞质中还行使其他作用。我们通过免疫共沉淀实验发现ANXA1与TCEA3相互作用,我们推测TCEA3和ANXA1在小鼠成肌细胞分化的过程中扮演重要角色。在本研究中,我们检测了TCEA3和ANXA1在C2C12成肌细胞中的表达,定位和作用;检测了TCEA3在过表达和抑制后蛋白质表达量的变化和肌纤维数量的改变;并发现TCEA3与ANXA1相互作用通过调节TGF-β途径影响细胞分化;以此说明TCEA3在小鼠成肌细胞分化中的作用。主要获得的研究结果如下:(1)随着C2C12成肌细胞肌管的增加TCEA3的表达逐渐增加。在增殖期(0 D)和不同分化期(分化1-9 D)间,随着C2C12成肌细胞肌管逐渐增加,TCEA3的荧光强度逐渐增加。Western blotting结果显示随着C2C12成肌细胞分化的进行,MyoG和TCEA3蛋白的表达逐渐增加。(2)TCEA3主要在细胞质中积聚,随着分化的进展,细胞质中TCEA3的表达水平呈上升趋势。将pEGFP-N2-TCEA3转染到C2C12成肌细胞中并在荧光显微镜下观察,利用核质蛋白分离检测TCEA3在细胞核和细胞质中的表达。(3)过表达TCEA3可促进C2C12成肌细胞分化,在抑制TCEA3后观察到相反的结果。siRNA、TCEA3过表达载体和CRISPR/Cas9构建技术分别激活和抑制TCEA3的表达。肌细胞生成素(MyoG)、肌管融合指数和表达水平随着TCEA3过表达而增加。在抑制TCEA3后观察到相反的结果。(4)ANXA1作为TCEA3潜在结合配偶体的膜联蛋白。我们通过免疫共沉淀进行蛋白质分离和凝胶染色并进行测序来检测与其相互作用的蛋白。检测到ANXA1,其与TCEA3相似,它位于细胞质中。(5)过表达ANXA1可促进C2C12成肌细胞分化,在抑制ANXA1后观察到相反的结果。转染ANXA1抑制性载体后,ANXA1和MYOG蛋白的表达显着降低。形态学上,ANXA1的抑制影响肌管形成。ANXA1过表达载体转染C2C12细胞,Western blot检测当ANXA1表达增加时,MYOG的表达增加。结果表明ANXA1的活化可以在体外激活C2C12分化。(6)TCEA3通过ANXA1影响TGF-β信号通路,从而影响C2C12细胞分化。首先我们证明TGF-β信号通路促进C2C12分化。当抑制TGF-β信号传导时,TCEA3促进C2C12分化的功能也被抑制。为了测试TCEA3是否通过ANXA1起作用,我们在ANXA1抑制后过表达TCEA3并检测smad2,p-smad2,MYOG,TCEA3和ANXA1蛋白水平的变化。与单独抑制ANXA1相比,抑制ANXA1同时过表达TCEA3,检测p-smad2,MYOG水平并没有显着变化。通过以上研究,TCEA3与ANXA1相互作用,通过影响TGF-β信号通路,从而影响C2C12细胞分化。研究结果为进一步了解骨骼肌生长发育机制和基因治疗肌肉病变奠定理论基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永[4]（2019）在《山羊FGF9基因克隆及其在成肌细胞分化中的表达模式研究》一文中研究指出旨在克隆山羊FGF9基因序列并对其进行生物信息学分析,阐明FGF9基因组织表达特性及其在成肌细胞分化过程中的表达差异。试验动物为简州大耳羊,利用RT-PCR技术克隆FGF9基因序列,再用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测FGF9在山羊各组织中的表达特性及其在成肌细胞不同分化阶段的表达情况。结果显示,克隆得到山羊FGF9基因序列818 bp,其中ORF区627 bp,编码208个氨基酸,其CDS区核苷酸序列与牛和绵羊有99%的同源性。FGF9蛋白具有1个跨膜结构域和1个FGF家族同源性结构域,为不稳定亲水蛋白。FGF9基因在山羊各组织中均有表达,在肾脏中表达水平最高,极显着高于其他组织(P<0.01)。FGF9基因在诱导分化第2天表达水平显着高于分化前(P<0.05),且在第4天达到极显着水平(P<0.01)。推测其可作为调控山羊成肌细胞分化的候选基因。为进一步探究FGF9基因在山羊肌肉生长中的作用提供理论依据。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年03期）
荆海军[5]（2019）在《PPARδ在小鼠成肌细胞分化过程中对肌纤维类型的影响》一文中研究指出目的:通过小鼠成肌细胞分化过程中添加PPARδ特异性激动剂GW0742和拮抗剂GSK0660的方法,研究小鼠成肌细胞分化过程中肌球蛋白重链(MHC)亚型的表达水平,进一步探讨PPARδ在成肌细胞分化过程中对肌纤维类型的影响。方法:培养C2C12成肌细胞株和新生昆明小鼠原代成肌细胞。各自分为叁组,分别为对照组(DMSO组)、PPARδ激动剂组(GW0742组)、PPARδ拮抗剂组(GW0742+GSK0660组)。培养各组细胞至90%左右汇合度时,C2C12细胞株换生长培养基(DMEM培养基+10%FBS)为分化培养基(DMEM培养基+2%HS),小鼠原代成肌细胞换生长培养基(F10培养基+20%FBS+5ng/ml鼠bFGF)为分化培养基(DMEM培养基+2%HS);分别在C2C12成肌细胞株分化培养基培养的第4、8、12天和昆明小鼠原代成肌细胞分化培养基培养的第2、4、6天收取细胞样品;MHC免疫荧光鉴定成肌细胞分化情况;q-RT-PCR检测MHC各亚型和PPARδ表达情况。结果:(1)C2C12成肌细胞分化第4天,MHC免疫荧光可见有肌管形成,叁组细胞分化形成的肌管数量大致相当;分化第8天和12天,PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于其余两组。(2)小鼠原代成肌细胞分化第2天,MHC免疫荧光可见PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于对照组;分化第4天和第6天,PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于其余两组。(3)C2C12成肌细胞分化的第4天,PPARδ激动剂组MHC各亚型表达量均显着高于其余两组;分化第8天,PPARδ激动剂组MHCⅠ和MHCⅡx表达量较对照组相比上调大于2倍,MHCⅡa上调大于3倍;分化第12天,MHCⅠ表达量较对照组相比上调大于3倍,MHCⅡa上调大于4倍。(4)原代成肌细胞分化第2天,PPARδ激动剂组MHCⅠ、MHCⅡa表达量较对照组相比上调大于2倍,分化第4天,MHCⅠ、MHCⅡx表达量较对照组相比上调大于2倍,MHCⅡa表达量上调大于3倍;分化第6天,MHCⅠ表达量较对照组相比上调大于4倍,MHCⅡa表达量较对照组相比上调大于6倍。结论:1 PPARδ可以促进小鼠成肌细胞分化。2 PPARδ在C2C12成肌细胞株和小鼠原代成肌细胞分化过程中显着上调氧化型纤维的表达量。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
贺甜甜[6]（2019）在《ARF6在骨骼肌成肌细胞分化及融合过程中的作用》一文中研究指出骨骼肌细胞也称为骨骼肌肌纤维,由胚胎中胚层单核成肌前体细胞分化融合形成。骨骼肌损伤修复再生过程是肌卫星细胞增殖分化为成肌细胞,后者融合形成新的肌纤维或者与受损肌纤维融合的过程。这些过程的关键环节是成肌细胞融合。体外诱导哺乳动物成肌细胞融合以及动物肌肉损伤模型是研究成肌细胞融合的常用手段。本研究通过这两种方法探究成肌细胞融合的机制,为提高成肌细胞的融合效率提供更多的理论依据。我们前期研究发现PLD1在成肌细胞融合过程中被招募到细胞膜上并影响成肌细胞次级融合过程,但其作用机制并不十分明确。研究表明ARF6是PLD1的上游调节因子之一,在成肌细胞分化融合早期ARF6-GTP表达增加,然而ARF6在成肌细胞融合过程中发挥的作用并不明确,其激活PLD1在成肌细胞融合过程发挥的作用也不明确。因此我们将探究ARF6及其激活PLD1在成肌细胞融合过程中的作用,从而进一步揭示成肌细胞融合机制。目的:1.ARF6在成肌细胞融合过程中的作用。2.ARF6/PLD1在成肌细胞融合过程中的作用。方法:1.利用半定量PCR和实时荧光定量PCR(qP CR)检测ARF6在骨骼肌损伤后修复及成肌细胞融合过程中的表达情况。2.在大鼠成肌细胞系L6内过表达ARF6-Q67L-HA(持续GTP结合的激活状态)和ARF6-WT-HA(野生型),观察对比成肌细胞融合过程并统计融合指数,免疫荧光和Western blot检测相关功能基因表达水平。3.在小鼠成肌细胞C2C12内过表达ARF6-Q67L-HA和ARF6-N48I-HA(PLD1非结合型),观察对比成肌细胞融合过程并统计融合指数,免疫荧光和Western blot检测相关功能基因表达水平。结果:1.半定量PCR和实时荧光定量PCR结果显示在骨骼肌损伤后修复过程中ARF6表达水平显着上升;在成肌细胞融合过程中ARF6表达水平没有显着变化。2.大鼠成肌细胞L6过表达ARF6-Q67L-HA后分化早期新生肌管和成熟肌管融合指数显着增加,分化晚期成熟肌管融合指数显着增加,分布在肌管细胞内的细胞核的比例也显着增加,并且在d1-2时myogenin、myosin表达时间提前、表达量增加;而过表达ARF6-WT-HA后融合指数无明显变化,分布在肌管细胞内的细胞核的比例亦无明显变化,在d1-2时myogenin、myosin表达时间提前。3.小鼠成肌细胞C2C12过表达ARF6-Q67L-HA后分化早期新生肌管和成熟肌管融合指数显着增加,分化晚期成熟肌管融合指数显着增加,分布在肌管细胞内的细胞核的比例也显着增加;过表达ARF6-N48I-HA后,分化早期和晚期成熟肌管融合指数下降,并且分化融合过程中myogenin、myosin表达水平下降。结论:1.ARF6参与骨骼肌损伤后修复。2.过表达激活的ARF6促进成肌细胞融合,在分化早期促进新生肌管和成熟肌管的生成,在分化晚期促进成熟肌管的生成。3.ARF6不能激活PLD1时抑制成肌细胞融合过程中成熟肌管的生成。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
尹翠翠[7]（2019）在《Kirrel1蛋白对骨骼肌成肌细胞分化及融合的影响》一文中研究指出研究背景细胞-细胞融合对于多细胞生物的发育至关重要。骨骼肌是由许多肌纤维组成的独特组织,每个肌纤维都是由成百上千个成肌细胞相互融合的产物。成肌细胞融合不仅对胚胎发育过程中骨骼肌形成至关重要,而且对成人肌卫星细胞介导的肌肉再生也至关重要。为了发生成肌细胞融合,两个融合伴侣必须相互识别粘附其质膜,打开融合孔以允许细胞中的物质相互交换,并最终合并成一个细胞。在果蝇胚胎中,有两种不同类型的成肌细胞,肌肉创始细胞(founder cells,FCs)和融合感受态成肌细胞(fusion competent myoblasts,FCMs),FCs和FCMs膜表面表达的不同蛋白之间相互作用,促成它们相互识别和粘附。在FCs中,两个旁系同源物Dumbfounded(Duf)亦被称为Kin-of-Irre(Kirre)和Roughest(Rst)亦被称为Irre C,在成肌细胞融合过程中具有多种功能。在FCMs中,Sticks and stones(Sns)作为主要胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs),其功能部分由其旁系同源物Hibris(Hbs)补偿。类似胚胎肌肉的发育,多核果蝇成年肌肉由表达Duf-Rst的创始细胞吸引周围表达Sns-Hbs的FCMs相互融合形成。果蝇中Rst和Kirre的哺乳动物同源物是Kirrel基因家族,包括Kirrel1、Kirrel2和Kirrel3,Kirrel1有Kirrel A和Kirrel B两种基因亚型。果蝇中Sns的哺乳动物的同源物是Nephrin,并且我们的前期实验已经证实了Nephrin在斑马鱼成肌细胞融合过程中很重要。在果蝇和斑马鱼中骨骼肌的成肌细胞融合过程已被大家熟知,但是对哺乳动物成肌细胞融合还知之甚少。故本课题旨在研究Kirrel1蛋白对小鼠骨骼肌成肌细胞分化融合的影响,以期找到证据支持Kirrel家族成员在调节小鼠骨骼肌成肌细胞融合过程起作用。研究目的1.研究Kirrel A和Kirrel B在小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12分化融合过程中及小鼠肌肉损伤修复重建过程中m RNA的表达变化;2.探究敲低Kirrel1、Kirrel A和Kirrel B对小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12分化融合的影响。研究方法通过半定量RT-PCR和RT-q PCR检测Kirrel A和Kirrel B在小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12分化融合过程中及在小鼠肌肉损伤重建过程中m RNA的表达变化;通过Western Blot验证Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA在C2C12细胞中敲低Kirrel A和Kirrel B效果;在C2C12细胞系中转染Control-、Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA质粒,通过药筛建立稳转细胞系;通过半定量RT-PCR和RT-q PCR验证稳转细胞系的建立。免疫荧光检测Control-、Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA细胞系在分化融合过程中分化第二天(Day2,D2)和分化第五天(Day5,D5)myosin的表达,计算融合指数;Western Blot检测Control-、Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA细胞系在分化融合过程中D0~D5 myosin和myogenin蛋白表达量。(myosin主要在肌管中表达,反映肌管形成的多少;myogenin是促分化因子,启动细胞分化;融合指数是指在同一显微视野中,肌管中细胞核数和总细胞核数的比值。)结果1.基于半定量RT-PCR和RT-q PCR结果显示:Kirrel A和Kirrel B在C2C12细胞分化融合过程中及在小鼠肌肉损伤重建过程中m RNA的表达量明显增加,并且RT-q PCR结果显示与D0相比这种增加具有统计学意义(p<0.05,n=3)。2.转染Control-、Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA表达质粒至C2C12细胞系中。Myosin免疫荧光结果显示:在C2C12细胞分化D2、D5和对照组相比,Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA的融合指数均比对照组低且有统计学意义(p<0.05,n=6)。3.转染Control-、Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA表达质粒至C2C12细胞系中。Myosin Western Blot结果显示:在C2C12细胞分化D0~D5 Kirrel A-、Kirrel B-、Kirrel1-sh RNA myosin蛋白的表达量均比对照组低且有统计学意义(p<0.05,n=3);myogenin蛋白的表达量和对照组相比表达量有差异但没有统计学意义(p>0.05,n=3)。结论1.Kirrel A和Kirrel B参与成肌细胞分化融合及肌肉损伤重建过程。2.敲低Kirrel1、Kirrel A、Kirrel B能够抑制C2C12细胞融合。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
邱昌俊,浑婷婷,赵莹彤,詹悦维,赵峰[8]（2019）在《细胞外基质蛋白模式对成肌细胞分化的影响》一文中研究指出成肌细胞分化机理至今尚不明确,为此主要研究细胞外基质蛋白模式对成肌细胞分化的影响。采用微接触印刷技术制备4种不同的纤维粘连蛋白微图案(平行组、随机组、垂直组、对照组)培养成肌细胞,用免疫荧光染色法分析7 d后各组成肌细胞的分化情况,并分析2、6、18 h后各组中的黏附分子、Vinculin以及微丝蛋白F-actin的分布情况,每组实验重复3次,每次取3个样本。肌管形成个数平行排列组与对照组相比,无显着性差异(17.33±0.58 vs 16.00±1.73),与垂直组(7.00±1.00)和无极性组(10.89±0.19)相比则显着高(P<0.05)。在2 h时,微丝在细胞中排列与局部微图案一致;在6 h时,微丝开始沿整体图案长轴方向排列;在12 h时,微丝分布与条带整体图案长轴方向一致;18 h时,所形成的黏着斑会沿着微图案区域分布。细胞外基质蛋白模式会对成肌细胞的分化有影响,不同FN极性排列微图案对成肌细胞的骨架和黏附影响不同,这也可能是后期产生不同分化结果的一个原因。(本文来源于《中国生物医学工程学报》期刊2019年01期）
李婷[9]（2018）在《怀乡鸡GHR基因天然反义转录本（GHR-AS）对原代成肌细胞分化的影响》一文中研究指出肌肉是家禽生产中重要的经济性状之一,胚胎期骨骼肌的发育影响肌肉产量。鸡GHR基因可双向转录,不仅具有GHR mRNA(即GHR正义转录本,G HR-S),而且存在一种天然反义转录本(GHR-AS),两种转录本部分序列反向互补,且存在互作。目前GHR-AS在骨骼肌发育过程中的作用尚不清楚,本研究首先从组织水平分析GHR-AS的表达规律,然后采用差速贴壁法分离怀乡鸡腿肌的原代成肌细胞,分析GHR-AS对成肌细胞分化过程中的影响及可能的调控机制。论文主要研究结果如下:(1)GHR-AS在鸡胚胎期的表达量比出壳后高,鸡胚胎E12-E17是肌纤维形成的关键时期,表明GHR-AS可能参与鸡骨骼肌发育过程。比较GHR-AS和G HR-S(GHR mRNA)的表达规律发现两者呈显着正相关关系。在肌肉组织中G HR-AS的表达量低于GHR-S,且差异显着(P<0.05)。(2)用含2%马血清的DMEM培养基诱导怀乡鸡成肌细胞向肌纤维分化;在增殖期、分化期进行亚细胞定位和半衰期检测,发现GHR-AS在细胞核中的表达量高于细胞质,且GHR-AS的稳定性低于GHR-S。(3)在鸡成肌细胞分化过程中GHR-AS表达量呈上升趋势。成肌细胞转染过表达载体pGHR-AS后发现GHR-AS促进成肌细胞分化,且分化标记基因MyHC表达量呈上升趋势,表明GHR-AS对肌纤维的形成具有促进作用。(4)在鸡原代成肌细胞中添加鸡GH蛋白后,GHR-AS表达量升高,下游IGF1在mRNA和蛋白质水平均升高,成肌细胞分化标志基因MyHC表达量显着上升,表明GHR-AS可能通过GH-GHR-IGF1通路在成肌细胞分化过程中起作用。5-杂氮-2’-脱氧胞苷能够使成肌细胞中的GHR-AS表达量显着上升且成肌细胞的分化过程增强,表明GHR-AS受甲基化调控,去甲基化后有助于肌纤维的形成。本研究发现GHR-AS参与骨骼肌的发育过程,研究结果为家禽骨骼肌发育调控、确立肌肉发育的分子育种新靶点提供理论依据。(本文来源于《广东海洋大学》期刊2018-11-01）
邢义珅,胡鑫,任玲,王亚慧,徐凌洋[10]（2018）在《牛胎儿骨骼肌来源成肌细胞分化相关microRNA的筛查与鉴定》一文中研究指出旨在发掘牛胎儿骨骼肌来源的成肌细胞分化过程中差异表达的miRNA,为进一步研究牛胎儿期成肌细胞分化的分子机理提供理论基础。本研究体外培养3头4月龄的牛胎儿骨骼肌来源的成肌细胞,运用高通量测序技术对成肌细胞分化起始和终末两个不同时期进行miRNA测序,并对测序结果进行生物信息学分析,鉴定差异表达的miRNA。随机选取差异表达miRNA,进行荧光定量PCR验证。结果表明,本研究从6个测序文库中共鉴定出已知miRNA 619个,其中差异表达miRNA 150个。差异表达miRNA中bta-miR-199a-5p等多个miRNA已经被证实与肌肉发育相关。通过靶基因预测富集到MAPK等多个与肌肉分化相关的通路。随机选取其中的8个miRNA进行荧光定量PCR验证,定量结果与测序结果完全一致。本研究鉴定出了150个与牛胎儿骨骼肌来源的成肌细胞分化相关的差异表达miRNAs。本研究结果将为研究miRNA调控牛胎儿骨骼肌发育提供科学依据。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年06期）
肌细胞分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
随着生活水平的提高,肉类食品在食物构成中所占的比例不断增加,人们对肉类食品品质的要求也越来越高。目前,国内肉用牛养殖中品种繁多,牛肉产量偏低、品质也参差不齐,牛肉的产量和质量已不能满足人们的需求。通过遗传育种的方式获得高品质的肉牛品种是目前解决这一问题最快速有效的方法。另外,在骨骼肌受到损伤时,潜伏的骨骼肌卫星细胞可以通过增殖和分化完成肌纤维的再生,修复损伤的肌肉组织。因此,研究肌肉分化的机理不仅具有巨大的商业价值,也能够为医学领域内相关疾病的治疗提供新思路。Ran(Ras-related nuclear protein,Ran)作为真核生物细胞中含量最为丰富的小G蛋白,参与细胞分裂间期的核质转运、DNA复制和RNA转录;在细胞分裂期参与核膜破裂、纺锤体组装、染色体分配、核膜装配和细胞分裂等细胞过程。肌肉分化是肌源性细胞通过增殖、分化和彼此间相互融合成多核肌管,并最终形成具有收缩功能的肌纤维的过程。本研究以小鼠C2C12成肌细胞为研究对象,通过Ran的过表达和siRNA干扰研究Ran的对C2C12细胞体外分化过程的影响,并进一步探究Ran对分化影响的可能机制。具体实验内容及结果如下:(1)Ran在C2C12细胞分化过程中的表达:分别收集分化0 d至5 d的C2C12细胞蛋白样,进行Western blot实验。结果显示,随着C2C12细胞分化程度的提高,Ran的表达量也逐渐升高。(2)Ran在C2C12细胞分化过程中的分布:通过对未分化、分化早期、分化中期和分化晚期的C2C12细胞进行间接免疫荧光染色。发现在未分化的C2C12细胞中,Ran主要聚集于细胞核内;随着分化时间的延长,Ran在细胞质中的浓度升高。(3)Ran过表达对C2C12细胞分化的影响:构建Ran的过表达载体,转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量升高,MyoG和MYH的表达量也显着升高;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显升高。Ran表达量的升高促进了C2C12细胞的分化。(4)Ran的siRNA干扰对C2C12细胞分化的影响:Ran的siRNA干扰片段转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显下降。Ran表达量的降低抑制了C2C12细胞的分化。(5)TGF-β/Smad信号通路对C2C12细胞分化的影响:C2C12细胞中添加TGF-β/Smad信号通路抑制剂LY2109761。Western blot检测发现,磷酸化smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低。LY2109761的添加抑制了C2C12细胞的分化。(6)Ran对TGF-β/Smad信号通路的影响:分别使用Ran的过表达载体和siRNA干扰片段来改变Ran在C2C12细胞分化过程中的表达量。Western blot结果表明,在C2C12细胞分化第2 d,Ran的表达量升高,Smad2的蛋白含量也显着提高;Ran的表达量降低,Smad2的蛋白含量也明显降低。而在分化第4 d和第6 d,Smad2的蛋白含量不受Ran表达量变化的影响。在C2C12细胞分化的不同时期,Ran表达量升高时,磷酸化Smad2的含量均显着升高;Ran的表达量下降时,磷酸化Smad2的含量也均显着降低。Ran的表达量升高激活TGF-β/Smad信号通路,Ran的表达量下降抑制TGF-β/Smad信号通路。(7)C2C12细胞的分化过程中,Ran与TGF-β/Smad信号通路之间的关系:LY2109761处理后,C2C12细胞中磷酸化Smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也显着降低;LY2109761处理C2C12细胞并转入Ran过表达载体,Ran表达量的升高,使磷酸化Smad2的含量和MyoG与MYH的表达量恢复到不添加抑制剂时的水平。说明Ran可以通过提高TGF-β/Smad信号通路中Smad2和磷酸化Smad2的含量促进C2C12细胞分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肌细胞分化论文参考文献
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