导读:本文包含了肺炎链球菌黏附素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肺炎链球菌,PsaA,抗原性,原核表达
肺炎链球菌黏附素论文文献综述
吴艳丽,孙文平,杨光,罗红[1]（2009）在《肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达及免疫保护性研究》一文中研究指出目的利用基因工程技术获取原核表达的肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)蛋白并初步研究其对小鼠的免疫保护性。方法根据基因库中psaA基因序列设计合成特异性引物,从临床分离到的肺炎链球菌中提取DNA,PCR技术扩增目的基因psaA,克隆后构建原核表达载体PET-32a(+)/psaA,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,获得重组蛋白,并通过Western-blot鉴定其免疫活性。将重组蛋白免疫小鼠,观察对肺炎链球菌感染动物的保护作用。结果经酶切及测序鉴定,克隆出870bp的目的基因,DNA序列与Gen-Bank中的相应数据符合率为100%;成功构建出原核表达载体pET-32a/psaA;经IPTG诱导,表达出了约57kD左右的融合蛋白,与预期大小相符,并且具有抗体结合活性;重组PsaA蛋白对肺炎链球菌感染小鼠具有一定保护作用。结论在原核细胞中成功表达出PsaA蛋白,能在一定程度上抵抗肺炎链球菌感染,为基于黏附素的新型疫苗的研究提供线索。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2009年21期）
章德广[2]（2009）在《初免加强免疫增强肺炎链球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究》一文中研究指出肺炎链球菌是导致细菌性肺炎、菌血症、脑膜炎等侵袭性疾病的重要原因,同时也是导致急性中耳炎和鼻窦炎的主要病原菌。由于抗生素的广泛运用,已导致多种耐药菌的产生。已经用于临床的预防疫苗主要为23价多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗,但前者是T细胞非依赖性抗原,对免疫系统发育不完善的2岁以下婴幼儿以及老年人的保护性有限;后者包含的血清型有限,而且生产成本高,不适合在我国大范围应用。PsaA是肺炎链球菌毒力因子之一,属于金属结合脂蛋白家族成员,分子量为37-kDa,有309个氨基酸残基构成,其氨基酸序列和免疫原性高度保守,属于ABC-型转运蛋白,PsaA在ABC型转运体系中属于细胞膜外蛋白质,一项功能是负责结合金属锰离子和锌离子;另一项功能是肺炎链球菌的一种黏附素。本研究根据基因库中肺炎链球菌表面黏附素的基因序列(序列号U53509),设计引物,运用PCR法从肺炎链球菌基因组中克隆出psaA基因,回收PCR产物并对其进行酶切,将其分别插入到pVAX1真核表达载体和pET28a原核表达载体,分别构建出表达PsaA的核酸疫苗pVAX1-psaA及其重组原核表达载体pET28a-psaA,并对它们进行鉴定。将pET28a-psaA转化大肠杆菌BL21(DE3),经ITPG诱导,采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。10只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,将构建正确的核酸疫苗pVAX1-psaA对BALB/c小鼠(n=5)进行3次核酸疫苗免疫,隔周免疫一次,共3次,为初免,第叁次免疫2周后,腹腔免疫50μg重组PsaA纯化蛋白。对照组仅隔周免疫3针100μg pVAX1空载体,加强免疫50μl生理盐水。所有动物分别于0、2、4、6、7周尾静脉取血,间接ELISA法测定其抗PsaA抗体水平。本实验结果表明我们成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时成功实现了PsaA蛋白纯化;动物实验结果表明核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度明显高于其他组别(P＜0.01)。采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能显着增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性,为研制开发用于临床的肺炎球菌核酸疫苗奠定了基础。(本文来源于《复旦大学》期刊2009-04-05）
章德广,王正敏,徐江红,陈兵,戴文佳[3]（2009）在《肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达和抗原性分析》一文中研究指出目的应用基因工程技术制备肺炎链球菌表面黏附素A(pneumococcal surface adhesin A,PsaA),并分析其抗原性。方法根据基因库中报道的psaA基因序列,从肺炎链球菌基因组中扩增出psaA基因,连接到原核表达载体pET28a中,构建出重组质粒pET28a-psaA,转化大肠杆菌BL21(DE3),采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。结果克隆出的psaA基因同基因库中报道的psaA基因序列一致。成功构建出重组质粒pET28a-psaA,基因测序证实重组质粒构建正确。成功表达和纯化出PsaA蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白分子量为37-kDa,最终得到纯度较高的蛋白,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析显示在37-kDa处见到目的蛋白条带。结论利用基因工程技术可以克隆出psaA基因,并成功表达和纯化出PsaA蛋白,其抗原性良好。(本文来源于《中国眼耳鼻喉科杂志》期刊2009年01期）
张巧,马千里,李琦,曾雪峰,王长征[4]（2008）在《肺炎链球菌黏附素A基因疫苗的构建及对小鼠鼻咽部肺炎链球菌携带的防御作用》一文中研究指出目的探讨肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)基因疫苗的免疫原性及其对小鼠鼻咽部肺炎链球菌携带的防御作用。方法PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增PsaA基因,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-PsaA,脂质体法转染BHK-21细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)检测重组质粒在BHK-21细胞中的转录和表达。应用PsaA基因疫苗肌肉注射免疫BABL/c小鼠,ELISA检测脾细胞上清IFN-γ分泌,特异性抗体IgG水平及其亚型分布(IgG1/IgG2a)。利用BABL/c小鼠肺炎链球菌D39株鼻咽部携带模型,鼻咽部灌洗液菌落计数观察免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌携带改变。结果RT-PCR及Western blot显示重组PsaA蛋白在BHK-21细胞瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清高水平的IFN-γ及特异性IgG抗体(IgG1/IgG2a<1),小鼠攻击实验证明PsaA基因疫苗免疫组小鼠D39携带菌落计数明显少于对照组(P<0.01)。结论肺炎链球菌表面毒力蛋白PsaA基因疫苗免疫小鼠激发了抗原特异性的细胞及体液免疫反应,显着减少了小鼠鼻咽部肺炎链球菌的携带,为肺炎链球菌DNA疫苗理想侯选抗原之一。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2008年08期）
何斌,朱虹[5]（2007）在《肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)的研究进展》一文中研究指出肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)是各型肺炎链球菌共有的种特异性表面结合脂蛋白,具有较好的免疫原性,在肺炎链球菌黏附呼吸道粘膜过程中起关键作用,PsaA的编码基因psaA在遗传上高度保守,PsaA是目前肺炎链球菌抗原研究的热点之一。本文就十年来PsaA的研究进展作一简要综述。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2007年03期）
何斌,朱虹,端青[6]（2007）在《重组肺炎链球菌表面黏附素A(rPsaA)的融合表达及抗原性分析》一文中研究指出为探索一种大量表达功能性重组肺炎链球菌表面黏附素A(rPsaA)的方法,用PCR和基因重组技术将基因psaA的先导序列替换为伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)信号肽基因序列,并在大肠杆菌中表达。表达产物用SDS-PAGE检测,Western blot分析抗原性。结果表明,rPsaA表达量明显提高且有较好的抗原性。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2007年02期）
李为民,陈文彬[7]（2002）在《部分细胞因子及一氧化氮对肺炎链球菌黏附气道上皮细胞的影响》一文中研究指出肺炎链球菌是慢性支气管炎、肺炎、中耳炎、败血症或脑膜炎的主要病原菌。Ｃｕｎｄｅｌｌ等[1] 发现 ,有 0 1%的肺炎链球菌可黏附于静息状态非活化的血管内皮细胞上 ,肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)α及白细胞介素 (ＩＬ) 1β可分别增加肺炎链球菌黏附于血管(本文来源于《中华内科杂志》期刊2002年05期）
肺炎链球菌黏附素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肺炎链球菌是导致细菌性肺炎、菌血症、脑膜炎等侵袭性疾病的重要原因,同时也是导致急性中耳炎和鼻窦炎的主要病原菌。由于抗生素的广泛运用,已导致多种耐药菌的产生。已经用于临床的预防疫苗主要为23价多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗,但前者是T细胞非依赖性抗原,对免疫系统发育不完善的2岁以下婴幼儿以及老年人的保护性有限;后者包含的血清型有限,而且生产成本高,不适合在我国大范围应用。PsaA是肺炎链球菌毒力因子之一,属于金属结合脂蛋白家族成员,分子量为37-kDa,有309个氨基酸残基构成,其氨基酸序列和免疫原性高度保守,属于ABC-型转运蛋白,PsaA在ABC型转运体系中属于细胞膜外蛋白质,一项功能是负责结合金属锰离子和锌离子;另一项功能是肺炎链球菌的一种黏附素。本研究根据基因库中肺炎链球菌表面黏附素的基因序列(序列号U53509),设计引物,运用PCR法从肺炎链球菌基因组中克隆出psaA基因,回收PCR产物并对其进行酶切,将其分别插入到pVAX1真核表达载体和pET28a原核表达载体,分别构建出表达PsaA的核酸疫苗pVAX1-psaA及其重组原核表达载体pET28a-psaA,并对它们进行鉴定。将pET28a-psaA转化大肠杆菌BL21(DE3),经ITPG诱导,采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。10只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,将构建正确的核酸疫苗pVAX1-psaA对BALB/c小鼠(n=5)进行3次核酸疫苗免疫,隔周免疫一次,共3次,为初免,第叁次免疫2周后,腹腔免疫50μg重组PsaA纯化蛋白。对照组仅隔周免疫3针100μg pVAX1空载体,加强免疫50μl生理盐水。所有动物分别于0、2、4、6、7周尾静脉取血,间接ELISA法测定其抗PsaA抗体水平。本实验结果表明我们成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时成功实现了PsaA蛋白纯化;动物实验结果表明核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度明显高于其他组别(P＜0.01)。采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能显着增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性,为研制开发用于临床的肺炎球菌核酸疫苗奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肺炎链球菌黏附素论文参考文献
[1].吴艳丽,孙文平,杨光,罗红.肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达及免疫保护性研究[J].中国现代医学杂志.2009
[2].章德广.初免加强免疫增强肺炎链球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究[D].复旦大学.2009
[3].章德广,王正敏,徐江红,陈兵,戴文佳.肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达和抗原性分析[J].中国眼耳鼻喉科杂志.2009
[4].张巧,马千里,李琦,曾雪峰,王长征.肺炎链球菌黏附素A基因疫苗的构建及对小鼠鼻咽部肺炎链球菌携带的防御作用[J].第叁军医大学学报.2008
[5].何斌,朱虹.肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)的研究进展[J].微生物学免疫学进展.2007
[6].何斌,朱虹,端青.重组肺炎链球菌表面黏附素A(rPsaA)的融合表达及抗原性分析[J].微生物学免疫学进展.2007
[7].李为民,陈文彬.部分细胞因子及一氧化氮对肺炎链球菌黏附气道上皮细胞的影响[J].中华内科杂志.2002