本文主要研究内容
作者谢盼（2019）在《基于MDCK细胞悬浮培养扩增H9N2流感病毒的维持培养基开发及应用》一文中研究指出：禽流感大爆发严重威胁养殖业和人类健康,并给社会带来巨大的经济损失,而接种禽流感疫苗是目前主要的预防措施。无血清单细胞悬浮培养因其易于放大、工艺稳定、过程可控等优势,正成为流感疫苗生产的主流技术。面对禽流感疫苗市场供不应求的现状,如何应用无血清单细胞悬浮培养技术提高禽流感病毒产量的研究工作尤为重要。其中,无血清培养基是影响流感病毒生产最关键的因素之一。但当下无血清培养基多依赖国外进口,其价格昂贵、配方保密、不利于过程优化。此外,病毒生产特性不同于细胞生长,而在研究或工业生产中,病毒生产阶段所用维持培养基大多与细胞生长培养基是同一种,这种营养组分的不平衡限制了流感病毒的高效扩增。因此,迫切需要针对病毒生产阶段开发适于流感病毒生产的维持培养基。本文以MDCK细胞和H9N2禽流感病毒为研究对象,首先基于现有的MDCK细胞悬浮培养工艺,连续运用Simplex Lattice、Placektt-Burman和中心组合实验设计三种统计学方法,开发了一种支持H9N2流感病毒在MDCK悬浮细胞中高效扩增的Opt-MM培养基。接着,在摇瓶体系中对稀释接毒工艺进行优化,优化后最优稀释比例为1:1;在2L生物反应器中采用该工艺验证Opt-MM培养基,最高病毒滴度达到214.55 HAU/1O0μl,单细胞产毒率达到51 888.11 virions/cell,与原细胞生长培养基(XP培养基)相比分别提高了 1.22倍和1.26倍。然后进一步研究了该高产过程下的细胞代谢特性,与XP培养基相比,该培养基主要增强了细胞中的糖酵解,提高了Ser、Arg、Val、Ile、Leu、His、Cys、Phe、Lys、Met、His、Tyr、Thr和Gly等氨基酸的比消耗速率以及降低了Ala的比生成速率。最后,该维持培养基的效果除了在不同培养体系中得到验证,还在不同胰酶、毒株及细胞传代等方面进行了相应的验证。通过本文研究,开发了适于流感病毒高效扩增的维持培养基,为禽流感疫苗工业化生产奠定基础;研究了高产过程的细胞代谢特性,为其他细胞系的病毒疫苗培养基开发提供指导。
Abstract
qin liu gan da bao fa yan chong wei xie yang shi ye he ren lei jian kang ,bing gei she hui dai lai ju da de jing ji sun shi ,er jie chong qin liu gan yi miao shi mu qian zhu yao de yu fang cuo shi 。mo xie qing chan xi bao xuan fu pei yang yin ji yi yu fang da 、gong yi wen ding 、guo cheng ke kong deng you shi ,zheng cheng wei liu gan yi miao sheng chan de zhu liu ji shu 。mian dui qin liu gan yi miao shi chang gong bu ying qiu de xian zhuang ,ru he ying yong mo xie qing chan xi bao xuan fu pei yang ji shu di gao qin liu gan bing du chan liang de yan jiu gong zuo you wei chong yao 。ji zhong ,mo xie qing pei yang ji shi ying xiang liu gan bing du sheng chan zui guan jian de yin su zhi yi 。dan dang xia mo xie qing pei yang ji duo yi lai guo wai jin kou ,ji jia ge ang gui 、pei fang bao mi 、bu li yu guo cheng you hua 。ci wai ,bing du sheng chan te xing bu tong yu xi bao sheng chang ,er zai yan jiu huo gong ye sheng chan zhong ,bing du sheng chan jie duan suo yong wei chi pei yang ji da duo yu xi bao sheng chang pei yang ji shi tong yi chong ,zhe chong ying yang zu fen de bu ping heng xian zhi le liu gan bing du de gao xiao kuo zeng 。yin ci ,pai qie xu yao zhen dui bing du sheng chan jie duan kai fa kuo yu liu gan bing du sheng chan de wei chi pei yang ji 。ben wen yi MDCKxi bao he H9N2qin liu gan bing du wei yan jiu dui xiang ,shou xian ji yu xian you de MDCKxi bao xuan fu pei yang gong yi ,lian xu yun yong Simplex Lattice、Placektt-Burmanhe zhong xin zu ge shi yan she ji san chong tong ji xue fang fa ,kai fa le yi chong zhi chi H9N2liu gan bing du zai MDCKxuan fu xi bao zhong gao xiao kuo zeng de Opt-MMpei yang ji 。jie zhao ,zai yao ping ti ji zhong dui xi shi jie du gong yi jin hang you hua ,you hua hou zui you xi shi bi li wei 1:1;zai 2Lsheng wu fan ying qi zhong cai yong gai gong yi yan zheng Opt-MMpei yang ji ,zui gao bing du di du da dao 214.55 HAU/1O0μl,chan xi bao chan du lv da dao 51 888.11 virions/cell,yu yuan xi bao sheng chang pei yang ji (XPpei yang ji )xiang bi fen bie di gao le 1.22bei he 1.26bei 。ran hou jin yi bu yan jiu le gai gao chan guo cheng xia de xi bao dai xie te xing ,yu XPpei yang ji xiang bi ,gai pei yang ji zhu yao zeng jiang le xi bao zhong de tang jiao jie ,di gao le Ser、Arg、Val、Ile、Leu、His、Cys、Phe、Lys、Met、His、Tyr、Thrhe Glydeng an ji suan de bi xiao hao su lv yi ji jiang di le Alade bi sheng cheng su lv 。zui hou ,gai wei chi pei yang ji de xiao guo chu le zai bu tong pei yang ti ji zhong de dao yan zheng ,hai zai bu tong yi mei 、du zhu ji xi bao chuan dai deng fang mian jin hang le xiang ying de yan zheng 。tong guo ben wen yan jiu ,kai fa le kuo yu liu gan bing du gao xiao kuo zeng de wei chi pei yang ji ,wei qin liu gan yi miao gong ye hua sheng chan dian ding ji chu ;yan jiu le gao chan guo cheng de xi bao dai xie te xing ,wei ji ta xi bao ji de bing du yi miao pei yang ji kai fa di gong zhi dao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华东理工大学的谢盼，发表于刊物华东理工大学2019-07-16论文，是一篇关于细胞论文,流感病毒论文,维持培养基论文,悬浮培养论文,细胞代谢论文,华东理工大学2019-07-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华东理工大学2019-07-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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