导读:本文包含了流感病毒样颗粒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:流感病毒,基因优化,HLHA(HA,stem),5M2e,HL5M2e,NP
流感病毒样颗粒论文文献综述
刘静,任志广,王铁成,李元果,孙伟洋[1]（2019）在《通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备》一文中研究指出目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成为近年研究的热点。本研究旨在建立H5亚型禽流感病毒通用型病毒样颗粒疫苗的制备方法。方法将优化的H5N1 A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5个M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的头部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分别插入pFastBacDual载体,得到相应的重组供体。然后将重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。结果酶切和PCR鉴定表明成功构建了含目的基因的重组杆粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1)。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,IFA试验和Western blot试验皆证实,优化的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP基因和M1基因编码的蛋白均获得表达。透射电子显微镜观察VLPs转染Sf9细胞上清的浓缩液中,有球形结构和100 nm左右典型VLPs存在。结论在Sf9昆虫杆状病毒表达系统中成功表达H5N1 A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并组装成3种VLPs,为进一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年07期）
高晓艺[2]（2019）在《2.3.4.4分支H5亚型禽流感病毒样颗粒（VLP）的制备及其免疫原性研究》一文中研究指出H5亚型高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是严重危害世界养禽业的一种重要疫病,同时,给社会公共卫生安全造成严重威胁。目前,我国流行H5亚型HPAIV主要是2.3.4.4分支。利用SPF鸡胚生产H5亚型HPAI疫苗存在操作环境条件要求高、鸡胚来源受限、生物安全性相对较差等缺点。本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,成功构建了2.3.4.4分支HPAI病毒样颗粒(Virus-Like Particle,VLP),并研究其免疫原性,旨在为病毒样颗粒疫苗研发提供了理论依据。1.构建THX4#-HA、THX4#-NA、THX4#-M1重组杆状病毒载体质粒。采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支HPAIV HA、NA和M1 3个基因片段,分别克隆至pFastBac1载体,通过双酶切、测序鉴定,成功获得pFastBac1-THX4#-HA、pFastBac1-THX4#-NA、pFastBac1-THX4#-M1质粒,转化至DH10Bac细胞转座形成重组杆状病毒载体质粒。2.VLP包装和鉴定。将上述重组杆状病毒载体质粒共转染至sf9昆虫细胞,采用血凝(HA)试验、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜观察等方法鉴定VLP表达。结果表明转染后5 d,细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;病毒扩增至第3代,细胞上清血凝HA效价达到6Log2;HA、NA、M1 3个目的基因成功表达;电镜下观察到直径80~120 nm有囊膜的禽流感VLPs。3.VLP免疫原性研究。SPF鸡二免后15 d,利用ELISA方法检测其血清IgG1、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ含量,同时采用HI试验、中和试验检测血清抗体水平。结果表明,血清H5亚型禽流感病毒HI抗体效价最高达到10Log2;VLP免疫血清对相同分支毒株中和抗体滴度为2~(-7.15),对其它分支毒株中和抗体滴度为2~(-6.85)。VLP疫苗免疫组血清IL-4、IFN-γ、IL-10含量显着高于阴性对照组(P<0.05),IgG1、IL-2含量均高于阴性对照组。综上所述,本研究成功构建由2.3.4.4分支H5亚型HPAIV HA、NA和M1蛋白组装的VLP,其具有良好的免疫原性。本研究将为2.3.4.4分支H5亚型禽流感新型候选疫苗研发及该病的有效防控奠定坚实基础,为保证养禽安全生产提供了条件。(本文来源于《河北工程大学》期刊2019-06-01）
高晓艺,蒋菲,王传彬,王乃迪,李建峰[3]（2019）在《H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究》一文中研究指出本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制试验、透射电镜、Western-blot等方法鉴定。利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化VLPs,选择不同剂量VLPs免疫6周龄SPF鸡,评价其免疫原性。结果显示,成功构建重组杆粒,转染的sf9细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;在细胞盲传3代后,含有VLPs的细胞上清液的血凝效价可达1∶2~7;Western-blot证实3个目的蛋白均成功表达;透射电镜观察结果表明,VLPs与天然禽流感病毒颗粒具有相似的形态特征;动物试验结果表明,二免后2周,血清抗体效价最高可达到1∶2~(10),抗体亚型主要为Ig G1。本研究首次成功构建了2.3.4.4分支H5亚型禽流感VLPs,为开发新型、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年08期）
宋金奇[4]（2018）在《利用杆状病毒表达系统组装H7N9亚型禽流感病毒样颗粒的研究》一文中研究指出2013年,我国华东地区出现了新型H7N9禽流感病毒疫情。截止到2017年,我国累计报告人感染H7N9禽流感病例共1398例,死亡约500人,病例覆盖我国20多个省市地区。尽管国家采取了一系列的疾病防控措施,但是H7N9禽流感病毒致人发病的病例至今仍有散在发生。面对如此严峻的形势,对于安全且高效的新型禽流感疫苗的研制开发,成为H7N9亚型禽流感防控的关键。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是一种新型的基因工程疫苗,它具有安全性高、免疫效果好以及不易失活等优点,使其在病毒疫苗开发中具有重要的研究意义。目前全世界已有大量关于VLPs的研究报道,其中人类乳头瘤病毒样颗粒(HPV VLPs)疫苗已经成功上市,预示着病毒样颗粒疫苗具有广阔的市场前景。禽流感病毒样颗粒疫苗不含病毒核酸,使用时没有生物安全风险,而且可以诱导细胞免疫并对同型的异源病毒提供免疫保护,是目前最有希望替代现有禽流感疫苗的候选疫苗。因此,禽流感病毒样颗粒疫苗的研制具有极为重要的科学价值和社会效益。本研究首先对我国H7N9亚型禽流感病毒流行状况进行广泛流行病学调查,然后在此基础上筛选出流行毒株作为疫苗用毒株,将其主要结构蛋白HA基因、NA基因和M1基因进行密码子优化和全基因合成作为抗原基因,然后将HA基因和M1基因通过常规酶切克隆方法连接到pYBDM-IM转移载体中,将NA基因通过常规酶切克隆方法连接到pUCDM-XIGP转移载体中,将得到的重组转移载体通过酶切鉴定,琼脂糖凝胶电泳发现特异性目的条带,说明重组转移载体已经构建成功,并将其测序进一步验证抗原基因是否正确。将验证正确的两种转移载体pYBDM-IM-HA-M1和pUCDM-XIGP-NA,通过转座和位点特异性重组的方法同时重组到SW106Am/asd~-/InvC~+感受态细胞中,采取抗性筛选、蓝白斑筛选和菌液PCR等方法筛选阳性重组菌液,将得到的阳性重组菌液命名为Am-HA-NA-M1-IM-XIGP。将重组菌液采用本实验室建立的细菌感染方法直接感染Sf9昆虫细胞,收获重组病毒BV-HA-NA-M1-IM-XIGP,因为重组病毒同时携带GFP和mCherry两种报告基因,因此在荧光显微镜下可以同时观察到红色荧光和绿色荧光。收集病毒感染的Sf9细胞上清提取病毒基因组DNA,并利用设计的特异性引物进行检测,结果表明基因组DNA均PCR扩增出特异性目的条带,这说明HA基因、NA基因和M1基因已经成功重组至杆状病毒基因组中;另外,收集病毒感染的Sf9细胞沉淀进行SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定,用叁种目的基因各自携带标签的特异性抗体检测HA蛋白、NA蛋白和M1蛋白的表达情况,结果发现63KD、53KD和29KD的蛋白条带,说明H7N9亚型禽流感的HA蛋白、NA蛋白和M1蛋白在Sf9昆虫细胞中成功得到表达。将重组病毒大量感染Sf9昆虫细胞,5天后收集病毒感染细胞进行蛋白质纯化,然后将纯化的蛋白质置于透射电子显微镜下进行观察,结果发现直径大小为80~120nm的病毒样颗粒结构。这说明,M1、NA和HA蛋白在Sf9昆虫细胞中得到了很好地表达,并且组装成了VLPs结构。这进一步说明了,本研究成功利用杆状病毒表达系统生产了H7N9亚型禽流感病毒样颗粒,为以后生产和制备H7N9亚型禽流感疫苗提供了技术支撑。(本文来源于《南阳师范学院》期刊2018-12-01）
高晓艺,王传彬,石玉祥,刘玉良[5]（2018）在《禽流感病毒样颗粒疫苗研究进展》一文中研究指出病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒的一个或几个结构蛋白组装形成的在形态上类似于病毒的颗粒,无核酸和感染性。近年来,国内外在禽流感VLPs研究领域取得了一些新进展。目前,已有H1N1、H3N2、H5N1、H5N3、H7N1、H7N9和H9N2等多种亚型禽流感VLPs包装成功的研究报道。禽流感VLPs作为疫苗安全性好,可刺激机体产生体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫,并且不同亚型间可提供交叉免疫保护,因此在禽流感新型疫苗创制方面具有独特优势和广阔的应用前景。本文就禽流感VLPs的研究进展作一综述,旨在为新型禽流感疫苗研发和防控等工作提供参考和借鉴。(本文来源于《病毒学报》期刊2018年06期）
高晓艺,王传彬,石玉祥,刘玉良[6]（2018）在《H5N1亚型禽流感病毒样颗粒构建及其免疫原性研究》一文中研究指出引言H5亚型高致病性禽流感(HPAI)给我国和世界养禽业发展及公共卫生安全造成了严重威胁,其预防措施主要依靠疫苗免疫和加强生物安全管理等措施。目前,预防H5亚型HPAI的商品化疫苗多为利用SPF鸡胚生产的灭活疫苗,其生产方式存在操作要求高、鸡胚来源受限、生产成本高等缺点。病毒样颗粒疫苗安全性高,免疫原性好,是一种新型疫苗研发思路,已有多种病毒样颗粒候选疫苗研发报道,(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
潘学,陈新武,季雅宁,李雪松,刘芹防[7]（2019）在《H9N2亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备研究》一文中研究指出目前,我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的免疫效果及其安全性优于灭活苗,成为近年研究的热点。本研究旨在建立一种H9N2亚型流感病毒VLP疫苗制备的方法。将优化的H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因和未优化的HA、NA基因分别插入到pFastBack~(TM)Dual载体中,得到相应的重组供体。然后将这些重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,红细胞凝集试验、SDS-PAGE和Western blot结果显示,优化的HA、NA基因编码的蛋白在Sf9昆虫细胞中获得了成功表达。通过透射电子显微镜观察细胞上清的浓缩液,能检测到VLP。结果表明,本研究在Sf9昆虫表达系统中成功表达了H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA蛋白,并形成了VLP,为进一步研究该病毒VLP疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2019年01期）
李红丽,闫巍文,王红宝,郭雪丽,张晋强[8]（2018）在《新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒的构建与鉴定》一文中研究指出为了构建新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒(cVLP),试验以目前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒为研究对象,通过昆虫杆状病毒表达系统构建了3种重组杆状病毒,分别为rBV-M、rBV-HN及r BV-FHA,并以适当比例感染悬浮昆虫Sf9细胞,经蔗糖密度梯度纯化后获得嵌合型病毒样颗粒,同时采用新城疫和H9亚型禽流感标准阳性血清对嵌合型病毒样颗粒进行血凝和血凝抑制试验。结果表明:嵌合型病毒样颗粒以新城疫病毒M蛋白作为颗粒骨架,插入了新城疫病毒HN蛋白和经F蛋白胞内域融合的禽流感病毒HA蛋白,在电镜下观察纯化的嵌合型病毒样颗粒具有完整的囊膜结构及纤突,该颗粒具有结合两种阳性血清的能力。说明试验成功构建了包含有新城疫病毒M蛋白、HN蛋白和H9亚型禽流感病毒HA蛋白的嵌合型病毒样颗粒,并且保留了良好的生物学活性。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年17期）
秦岭松[9]（2018）在《新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的构建及免疫原性研究》一文中研究指出新城疫与禽流感并列为世界公认的最重要的两大禽类疫病,二者为OIE规定的动物必报疾病。新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种急性烈性高度接触性传染病,可经呼吸道,消化道,眼结膜等多种途径传播,致死率极高。流行病学调查显示,国内近年来新城病毒流行毒株以基因VII型为主。H9N2亚型禽流感(Avian influenza,AI)是由H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的一种接触性传染病,传播途径与NDV相同。H9N2 AIV属于中低等毒力毒株,大部分情况不致死,但会引起动物生产性能的严重下降,给养禽业造成了巨大的经济损失,且因A型流感病毒基因的抗原漂移与抗原转换,AIV对公共卫生安全造成了极大地威胁。在临床案例中NDV经常与H9N2 AIV伴随感染,因而对ND和H9N2亚型禽流感的联合防控十分必要。黏膜组织是动物机体最大的防御屏障,是抵御病原入侵的第一道防线。95%以上的病原入侵发生在黏膜组织。研究数据表明鼻腔免疫不仅可以诱发良好的局部免疫保护,还可以诱导产生全身体液免疫反应。在众多黏膜免疫细胞中,树突状细胞(Dendritic cells,DCs)作为一种专职免疫细胞其抗原递呈能力最强,树突状细胞参与决定免疫应答的性质,强度以及免疫记忆性。树突状细胞诱导肽(Dendritic cell-targeting peptide,DCpep)是由12个氨基酸组成的短链肽,可以特异性靶向DCs,有利于DCs对抗原的识别捕获,从而诱发高效的黏膜免疫反应,进而主导和调节黏膜免疫。已有研究证明,重组丙型肝炎病毒抗原融合DCpep(树突状细胞靶向肽)后再作用于DCs,可诱发机体产生强烈的免疫反应,并且发现抗原融合DCpep没有修改DCs的表型和功能,而是介导DCs靶向识别抗原刺激抗原成熟,起到生物佐剂作用。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是一种高度结构化的空心蛋白颗粒,并且不含病毒基因组,因而病毒样颗粒具有良好的免疫原性且无散播病毒基因的风险,HN蛋白是NDV的主要免疫保护性抗原,由其诱导小鼠产生的特异性抗体足以保护小鼠免受NDV强毒威胁。HA蛋白是H9N2亚型AIV的主要免疫保护性抗原,可诱发机体产生中和抗体,这种抗体可以在感染以及发病过程中起到强有力的抵抗作用。Fan等研究表明,重组杆状病毒表达的AIV HA能够诱导小鼠产生强烈的免疫反应,可完全保护小鼠免受H9N2病毒感染~([1])。针对以上问题,本实验构建了两种可一针两防,与流行毒株相匹配的,无基因污染风险,可引起强烈免疫应答的新型新城疫-禽流感二联苗,NDV-AIV病毒样颗粒:(1)将NDV的F蛋白胞外域替换成H9N2亚型禽流感病毒HA的胞外域,命名为FcHA;(2)将DCpep基因与H9N2病毒基因的HA胞外域N端融合,将融合之后的基因替换NDV F蛋白的胞外域,命名为DCpep-FcHA。将二者分别与HN共表达在M蛋白构成的ND VLPs表面。分别命名为VLP-HA/HN和DCpep-VLP-HA/HN。将病毒样颗粒纯化后,经不同方式给SPF鸡免疫,通过比较两种病毒样颗粒以及灭活的新城疫-H9N2型禽流感二联苗的免疫原性。结合免疫方式,免疫路径,评价出优势病毒样颗粒侯选苗,为防控新城疫和禽流感提供新的策略。1、重组杆状病毒rBV-HA和rBV-DCpep-HA的构建与鉴定。首先设计引物对目的基因F胞内域跨膜域、HA基因胞外域进行扩增并引入酶切位点,通过overlapPCR将两者连接,构建FcHA。DCpep与FcHA的融合基因DCpep-FcHA由实验室保存,利用引物通过PCR引入酶切位点,进而将目的基因FcHA和DCpep-FcHA引入pFastBac 1载体中,测序鉴定后转化感受态DH10Bac,参照Bac to Bac?使用说明提取重组杆粒rBacmid-FcHA与rBacmid-DCpep-FcHA,分别转染Sf9细胞,获得rBV-HA和rBV-DCpep-HA,收集培养上清,经Western Blot鉴定表达蛋白正确。2、嵌合病毒样颗粒VLP-HA/HN及DCpep-VLP-HA/HN的表达与鉴定。利用昆虫杆状病毒表达系统构建重组杆状病毒rBV-HA和rBV-DCpep-HA,将构建好的rBV-HA和rBV-DCpep-HA分别与实验室已有的rBV-M和rBV-HN共转染Sf9细胞,表达VLP-HA/HN与DCpep-VLP-HA/HN。经Western Blot鉴定,蛋白表达正确。扫描电镜下观察可见直径80nm-200nm左右的病毒样粒子。3、重组病毒样颗粒VLP-HA/HN和DCpep-VLP-HA/HN的免疫及攻毒保护效果评价。商品化NDV-H9N2二联苗组采用肌肉注射的方式对SPF鸡进行免疫,VLP-HA/HN和DCpep-VLP-HA/HN组采用肌肉注射和点眼滴鼻的方式对SPF鸡进行免疫,免疫后对动物进行攻毒,检测体重,存活率、病毒载量、排毒时间几个指标,从而对实验动物的体液免疫,细胞免疫,和呼吸道黏膜免疫进行免疫效果评价。通过上述实验我们得到以下结论:(1)本实验构建的两种病毒样颗粒有完整的生物学形态以及良好的生物学活性。(2)嵌合病毒样颗粒可以诱导良好的体液免疫、细胞免疫以及黏膜免疫。综合免疫效果DCpep-VLP-HA/HN>VLP-HA/HN≥商品苗。(3)病毒样颗粒可以不添加佐剂使用,因此可通过点眼滴鼻途径免疫,点眼滴鼻产生的黏膜免疫效果要优于肌肉注射。(4)DCpep-VLP-HA/HN与传统疫苗相比,免疫途径简单,降低散毒风险,而且缩短病毒在鸡体内存在时间及病毒排出时间,能够体现出疫苗和强毒株基因型匹配的优势。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
赵永坤[10]（2017）在《H7N9亚型流感病毒样颗粒免疫原制备与精制免疫球蛋白研究》一文中研究指出H7N9亚型流感病毒是一种新发流感病毒,于2013年3月在上海和安徽两地首次发现,截止到2017年2月22日,全球共报道1230例H7N9亚型流感病毒感染人的病例,其中428例死亡,死亡率达到34.80%。目前,多个国家已经着手开展H7N9亚型流感病毒病诊断、防治等相关产品的研发工作。对于高风险人群,接种疫苗是一种有效的预防手段;对于易感人群和感染患者,被动免疫则是一种有效的紧急预防和治疗手段。因此,有必要研制安全、有效、经济实用的流感疫苗和治疗抗体。流感病毒的致病性主要受到病毒的分子特性和宿主的种属差异影响,构建流感病毒动物感染模型,开展病毒的致病性分子机制研究,将有助于我们有针对性地对该病进行免疫预防和治疗研究。Palladino等用中和单抗治疗免疫缺陷的A型流感病毒感染小鼠,显示出良好的治疗效果,提示抗体疗法可能成为未来对抗H7N9亚型流感有效的手段之一。人源抗体是最理想的治疗抗体,但是短期难以获得大量的人源血清,因此异源抗体(动物源免疫球蛋白)成为现阶段必然的抗体治疗替代手段之一。在各种动物中,马抗血清制品生产和应用已有100多年的历史,具有易于大规模制备、特异性好、制备周期相对较短等优点,在应对传统疾病和新发/突发传染病中发挥了巨大作用。本研究以研制马抗H7N9亚型流感精制免疫球蛋白为研究目标,首先建立了H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型,为H7N9流感治疗性抗体研究提供了评价平台;其次,利用昆虫细胞—杆状病毒表达系统,包装出含有A/Shanghai/2/2013(H7N9)毒株HA、NA和M1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并对VLPs进行体外生物学活性检测和小鼠体内免疫原性研究;最后,以VLPs作为免疫原免疫马匹,通过优化生产工艺对马高免血清进一步精制,获得了马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白F(ab′)2,并评价其预防和治疗效果。1、H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型的构建及致病性分子基础研究选取BALB/c小鼠作为实验动物模型,将A/Shanghai/2/2013(H7N9)毒株通过鼠肺连续传代获得鼠适应株P10M1、P10M2和P10M3。通过小鼠半数致死量、病死率、病毒复制效率、组织嗜性等评价指标,成功建立了H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型,为H7N9亚型流感治疗药物和疫苗预防效果评价建立了平台。基因组序列分析发现,PA、HA、NA、M和NP基因上的若干个位点发生变异,推测发现其中PA-T97I可能是H7N9亚型流感病毒对哺乳动物致病性增强的分子基础之一。2、H7N9亚型流感病毒样颗粒制备利用昆虫细胞——杆状病毒表达系统,构建了表达A/Shanghai/2/2013(H7N9)毒株HA、NA和M1的重组杆状病毒,经PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定,目的蛋白获得成功表达。将重组杆状病毒感染昆虫细胞后成功组装成H7N9亚型流感病毒样颗粒在透射电镜下可观察到球形、直径约100nm、表面有典型纤突的流感VLPs,血凝效价为1:27~1:28。将VLPs通过肌肉注射或滴鼻方式,免疫BALB/c小鼠10μg VLPs/只,二免后两周,在H7N9亚型流感病毒小鼠适应株10MLD50剂量的攻击下,可以对小鼠提供100%的免疫保护。因此,所制备的H7N9亚型流感VLPs具有很好的免疫原性,为H7N9亚型流感免疫球蛋白的免疫原制备奠定了基础。3、H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白研究以VLPs制备免疫原免疫马匹,五免后获得HI抗体效价为1:10240的高免血清。利用已构建的H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型,用10个MLD50采用滴鼻方式进行攻毒,攻毒前36h、攻毒后24h,各组小鼠分别腹腔注射0.2ml高免血清,小鼠的存活率均达100%,而对照组全部死亡。由此证明,制备的马抗H7N9亚型流感病毒高免血清对该亚型流感病毒感染具有良好的紧急预防和治疗效果。在传统马抗血清纯化工艺的基础上,对制备工艺进行了改进和优化,采用酶切纯化工艺去除抗体的Fc片段,亲和柱层析方法纯化免疫球蛋白F(ab′)2。经SDS-PAGE、薄层扫描,结果表明,所获得的精制免疫球蛋白F(ab′)2的纯度在93%以上。采用固定病毒—稀释免疫球蛋白方法,测得的中和抗体效价为1:5120。利用已构建的H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型,用10个MLD50采用滴鼻方式进行攻毒,攻毒前4h、攻毒感染后8h,0.2mg给药剂量即可100%保护小鼠;攻毒24h后,0.4mg给药剂量的小鼠存活率为75%。小鼠实验证明,制备的精制免疫球蛋白F(ab′)2对H7N9亚型流感有较好的预防和治疗效果。综上所述,本研究通过构建感染模型发现了H7N9对哺乳动物致病的关键分子标记。进而,利用所构建的H7N9亚型流感病毒小鼠感染模型证实H7N9亚型流感VLPs具有良好的免疫保护效果,而且马抗H7N9亚型流感VLPs精制免疫球蛋白F(ab′)2在预防和治疗H7N9亚型流感中表现出潜在的应用价值,为H7N9亚型流感治疗药物和疫苗的研制提供了科技支撑。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2017-05-23）
流感病毒样颗粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
H5亚型高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是严重危害世界养禽业的一种重要疫病,同时,给社会公共卫生安全造成严重威胁。目前,我国流行H5亚型HPAIV主要是2.3.4.4分支。利用SPF鸡胚生产H5亚型HPAI疫苗存在操作环境条件要求高、鸡胚来源受限、生物安全性相对较差等缺点。本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,成功构建了2.3.4.4分支HPAI病毒样颗粒(Virus-Like Particle,VLP),并研究其免疫原性,旨在为病毒样颗粒疫苗研发提供了理论依据。1.构建THX4#-HA、THX4#-NA、THX4#-M1重组杆状病毒载体质粒。采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支HPAIV HA、NA和M1 3个基因片段,分别克隆至pFastBac1载体,通过双酶切、测序鉴定,成功获得pFastBac1-THX4#-HA、pFastBac1-THX4#-NA、pFastBac1-THX4#-M1质粒,转化至DH10Bac细胞转座形成重组杆状病毒载体质粒。2.VLP包装和鉴定。将上述重组杆状病毒载体质粒共转染至sf9昆虫细胞,采用血凝(HA)试验、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜观察等方法鉴定VLP表达。结果表明转染后5 d,细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;病毒扩增至第3代,细胞上清血凝HA效价达到6Log2;HA、NA、M1 3个目的基因成功表达;电镜下观察到直径80~120 nm有囊膜的禽流感VLPs。3.VLP免疫原性研究。SPF鸡二免后15 d,利用ELISA方法检测其血清IgG1、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ含量,同时采用HI试验、中和试验检测血清抗体水平。结果表明,血清H5亚型禽流感病毒HI抗体效价最高达到10Log2;VLP免疫血清对相同分支毒株中和抗体滴度为2~(-7.15),对其它分支毒株中和抗体滴度为2~(-6.85)。VLP疫苗免疫组血清IL-4、IFN-γ、IL-10含量显着高于阴性对照组(P<0.05),IgG1、IL-2含量均高于阴性对照组。综上所述,本研究成功构建由2.3.4.4分支H5亚型HPAIV HA、NA和M1蛋白组装的VLP,其具有良好的免疫原性。本研究将为2.3.4.4分支H5亚型禽流感新型候选疫苗研发及该病的有效防控奠定坚实基础,为保证养禽安全生产提供了条件。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
流感病毒样颗粒论文参考文献
[1].刘静,任志广,王铁成,李元果,孙伟洋.通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备[J].中国病原生物学杂志.2019
[2].高晓艺.2.3.4.4分支H5亚型禽流感病毒样颗粒（VLP）的制备及其免疫原性研究[D].河北工程大学.2019
[3].高晓艺,蒋菲,王传彬,王乃迪,李建峰.H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究[J].中国兽医科学.2019
[4].宋金奇.利用杆状病毒表达系统组装H7N9亚型禽流感病毒样颗粒的研究[D].南阳师范学院.2018
[5].高晓艺,王传彬,石玉祥,刘玉良.禽流感病毒样颗粒疫苗研究进展[J].病毒学报.2018
[6].高晓艺,王传彬,石玉祥,刘玉良.H5N1亚型禽流感病毒样颗粒构建及其免疫原性研究[C].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.2018
[7].潘学,陈新武,季雅宁,李雪松,刘芹防.H9N2亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备研究[J].中国动物传染病学报.2019
[8].李红丽,闫巍文,王红宝,郭雪丽,张晋强.新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒的构建与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[9].秦岭松.新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的构建及免疫原性研究[D].吉林大学.2018
[10].赵永坤.H7N9亚型流感病毒样颗粒免疫原制备与精制免疫球蛋白研究[D].中国人民解放军军事医学科学院.2017