导读:本文包含了胚胎后肾间充质干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:间充质干细胞,肾脏发育,低氧,胚胎
胚胎后肾间充质干细胞论文文献综述
宋娜娜,刘少鹏,郭佳,俞小芳,朱加明[1]（2015）在《低氧对后肾间充质干细胞分化能力和胚胎肾脏发育的影响及其机制研究》一文中研究指出目的低氧对肾脏发育的影响尚不明确。胚胎肾脏所处宫内环境的氧浓度较空气的氧含量显着降低。肾单位(集合管除外)主要由后肾间充质发育而来。因此,探讨低氧对于后肾间充质干细胞(MMSCs)分化的影响及机制对于理解肾脏发育和缺氧条件下肾脏疾病的发生发展至关重要。方法孕18.5天SD大鼠胚胎内分离出肾脏,酶消化法取得后肾间充质干细胞(MMSCs),分别(本文来源于《中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2015年学术年会资料汇编》期刊2015-10-15）
陈佳,王桂艳,张宇[2]（2015）在《北京鸭胚胎后肾间充质干细胞分离培养及鉴定》一文中研究指出建立禽类后肾间充质干细胞(Metanephric mesenchymal stem cells,MMSCs)体外培养体系,研究其生物学特性和多向分化潜能。采用酶消化法分离北京鸭胚胎MMSCs,绘制生长曲线,通过免疫荧光和RT-PCR对MMSCs进行鉴定,诱导MMSCs向脂肪细胞和胰岛细胞分化。结果表明,鸭胚胎MMSCs具有良好的增殖活力,表达间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)特异性标志物,并诱导分化为脂肪细胞和胰岛细胞。北京鸭胚胎MMSCs在体外具有较强的自我更新能力及多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞进行保存。(本文来源于《生物技术通报》期刊2015年06期）
陈文清[3]（2012）在《胚胎后肾间充质干细胞分化为上皮细胞的关键因子和Notch信号通路的初步研究》一文中研究指出前言肾脏疾病已经成为威胁人类健康的第叁大主要疾病。急性损伤、严重创伤后患者易发生多器官功能衰竭,据统计,其死亡率高达45%。研究显示严重创伤、严重感染和强应激状态下可以引起患者体内细胞因子的瀑布样释放,呈现级联放大作用。肾脏在应激和炎症反应中起重要作用,多器官功能障碍患者,一旦肾脏受累则预后明显不良,由于超负荷的细胞因子释放,多种应激信号通路的过度开放,肾脏作为最容易被打击的器官首先发生衰竭症状,激化全身各脏器功能衰竭,导致患者死亡。持续性肾脏替代治疗(CRRT)作为最主要的治疗方法,其昂贵的治疗费用,和治疗功能的局限,以及疾病本身的凶险多变,使得治愈率一直在50%左右。在对肾脏发育及固有细胞分化机制明确研究的基础上,发展应用细胞疗法修复肾脏损伤,将成为急性肾损伤治疗的一大重点和难点。为解决急性肾脏损伤的诊治引入新的技术方案,具有重要的社会意义和科学意义。另一方面,全球有10%的患者罹受慢性肾脏疾病困扰,其中又有10%的患者进展为慢性肾功能不全。患病率高,医疗费用巨大,预后差,并且患者人数呈持续增长趋势,造成了严重的社会经济负担。由于慢性肾脏病病因复杂多样,发病机制尚未完全明了,对于慢性肾病的治疗仅局限于对症支持治疗而没有取得突破性的进展。肾移植是目前治疗终末期肾病(ESRD)最好方案。我国约有100万慢性肾功能不全患者,每年新增12万人,每年约有50万患者需要肾移植。然而每年全国可供移植的肾源仅有4000个,有的病人只能一边做血透,一边等待,不仅费用巨大,以每个患者每年5万元的透析费用计算,我国每年花费在血液透析上的医疗费用高达250亿元人民币。而且许多人因为长期等不到供体,病情加重,最后丧失了移植的良机。肾移植随着近年来移植免疫研究的不断深入和新型免疫抑制剂的不断问世,急性排异发生率显着下降,一年移植物的存活率得到了明显的提高,但其长期生存情况仍不乐观,十年长期存活率目前只有50%-61%左右。目前直接针对肾脏疾病本身的研究,在发病机制和治疗上均无突破性进展,而又有研究表明人类叁分之一的慢性肾脏疾病与肾脏发育紊乱相关。因而从肾脏胚胎发育着手,研究肾脏正常发育的分子机制和信号通路,为阐明肾脏疾病的发生发展机制,提出新的干预治疗修复策略已成为肾病领域的又一研究重点。本课题旨在研究后肾向肾脏固有细胞分化过程,明确期间起重要作用的Notch信号通路,阐明其信号传导通路和分子机制。目的是为将来能够修复肾脏损伤和体外构建或克隆培育一个可供移植的肾脏奠定理论和实验基础。第一部分小鼠胚肾发育过程中Notch信号通路关键基因筛选目的严密观察胚胎后肾间充质向肾脏固有细胞分化过程,利用高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法,筛选相关候选基因,即关键信号,进一步探索肾小管胚胎发育过程中起关键作用的信号分子及分子调控机制,为阐明肾脏疾病的发生发展机制,为将来能够修复肾脏损伤和体外构建或克隆培育一个可供移植的肾脏奠定理论和实验基础。方法1.采用清洁级健康雌性小鼠BALB/c,雄性小鼠BALB/c,体重均为18～23g。将雌雄小鼠同笼受孕。在孕10.5天、孕12.5天、孕14.5天、孕16.5天和孕18.5天处死孕鼠,并获取各孕期的小鼠胚胎肾脏组织进行HE染色,严密观察胚胎后肾间充质向肾脏固有细胞分化过程。2.获取孕12.5天、孕14.5天、孕16.5天和孕18.5天的小鼠胚胎肾脏组织,以高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法,Oligo GEArray基因芯片筛选相关候选基因,即关键信号。针对芯片原始数据利用MultiClassDif工具进行各分组间的差异基因筛选；筛选出的差异表达基因利用GeneFunNet工具构建基因的功能关联网络,根据基因的功能属性,计算目标基因间属性距离,根据属性关系确定基因间作用方向,以此构建基因-基因网络,然后计算出各基因的网络特征值,确定网络中枢性调控基因。着重研究在胚胎肾脏发育起决定作用的时间段逗形期到S形期,也是肾脏固有细胞生成的重要时期,Notch信号通路的重要作用,有助于我们锁定候选基因。结果通过对获取的各孕期小鼠胚胎肾脏组织,进行HE染色,观察并验证了胚胎后肾间充质向肾脏固有细胞分化过程,同时验证了获取的胚肾组织各孕期的正确性。通过高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法,Oligo GEArray基因芯片筛选相关候选基因,得到叁种表达趋势变化的差异性表达基因。即E12.5、E14.5天表达量逐渐增加,到E16.5天表达量达到高峰,而E18.5天表达减少的基因ADAM10、 MFNG; E12.5-18.5表达量逐渐增加的基因Pparg; E12.5-18.5天表达量逐渐减少的基因Ccne1。结论利用高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法,进一步探索肾小管胚胎发育过程中起关键作用的信号分子及分子调控机制,筛选获得在胚胎肾脏发育逗形期到S形期起决定作用的时间段,也是肾脏固有细胞生成的重要时期2个特异性基因ADAM10、MFNG。第二部分小鼠胚胎后肾间充质干细胞体外分化中Notch信号通路关键基因的作用目的1.从基因和蛋白质水平分别验证利用高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法筛选获得的相关候选基因在小鼠胚胎后肾间充质干细胞体外分化中Notch信号通路的作用。2.使用ADAM10特异性抑制剂GI254023X拮抗金属蛋白酶的作用,阻断Notch信号通路,观察其对胚胎后肾间充质干细胞向肾脏固有细胞分化的抑制作用。方法1.采用清洁级健康雌性小鼠BALB/c,雄性小鼠BALB/c,体重均为18～23g。将BALB/c雌性小鼠与BALB/c雄性小鼠同笼受孕。在12.5天、14.5天、16.5天和18.5天数处死孕鼠,并取各孕期的小鼠胚胎肾脏组织。2.提取各孕期的小鼠胚胎肾脏组织的蛋白质,使用Western blot方法从蛋白质水平验证利用高通量基因芯片(Notch signaling pathway)方法筛选获得的相关候选基因在小鼠胚胎肾脏组织的表达量。提取各孕期的小鼠胚胎肾脏组织的总RNA,使用RT-PCR方法从基因水平验证基因芯片筛选获得的相关候选基因在小鼠胚胎肾脏组织的表达量。从而进一步证明筛选获得的相关候选基因在小鼠胚胎后肾间充质干细胞体外分化中Notch信号通路的重要作用。3.分离培养原代E14.5天胚胎后肾间充质干细胞,使用ADAM10特异性抑制剂G1254023X拮抗金属蛋白酶的作用,阻断Notch信号通路,抑制胚胎后肾间充质干细胞向肾脏固有细胞分化过程。并通过细胞免疫组化观察检测间充质干细胞表达标志物Pax-2、WT1,上皮细胞标志物E-cadherin、Cytokeratin8染色情况。结果通过RT-PCR方法从基因水平、Western blot方法从蛋白质水平分别验证了ADAM10、MFNG基因E12.5、E14.5天表达量逐渐增加,到E16.5天表达量达到高峰,而E18.5天表达减少。分离培养原代E14.5天胚胎后肾间充质干细胞,ADAMIO特异性抑制实验，细胞免疫组化：间充质干细胞表达标志物Pax-2、WT1阳性率药物组较对照组低，上皮细胞标志物E-cadherin、Cytokearitn8阳性率药物组较对照组低。结论1.荧光定量RT-PCR检测结果显示小鼠胚胎肾脏发育的各时期，均能检测到肾脏发育关键因子ADAM10、 MFNG基因的表达。2.Western Blot检测结果显示小鼠胚胎肾脏发育的各时期，均能检测到肾脏发育关键因子ADAM10、MFNG基因的蛋白表达。3.通过从基因及蛋白水平上验证，利用高通量基因芯片（Notch signaling pathway)方法获得ADAM10、MFNG这两个基因在小鼠胚胎后肾间充质干细胞分化中的重要作用及其变化趋势。4.使用体外ADAM10特异性抑制剂GI254023X拮抗金属蛋白酶作用，可有效的阻断Notch信号通路，抑制胚胎后肾间充质干细胞向肾脏固有细胞分化过程。验证了逗形期到S形期是胚胎肾脏发育起决定作用的时间段，也是肾脏固有细胞生成的重要时期。第叁部分药物干扰Notch信号通路对小鼠胚胎肾脏发育的影响目的评价有机磷农药毒死蜱对胚胎肾脏发育的影响，并评估Notch2-Jaggedl信号通路在此过程的重要作用方法妊娠7.5-11.5天的母鼠予以连续皮下注射毒死蜱5mg/kg/day (6只），对照组（6只）注射生理盐水。于妊娠16.5天处死母鼠，取胚胎肾脏组织、心脏组织、肝脏组织于福尔马林固定，石蜡包埋切片。组织切片HE染色观察两组胚胎肾脏组织、心脏组织、肝脏组织形态学不同,并采用ABC法免疫组化鉴定两组胚胎肾脏、心脏组织、肝脏组织Notch2、Jagged1的表达情况。结果1.正常小鼠胚胎肾脏在E16.5天时已形成S形体,并发育成具有肾单位并可能开始分泌尿液的原肾。HE染色发现CPF药物处理组,胚胎肾脏发育明显迟缓,E16.5天时没有出现S形体和肾单位。两组胚胎肝脏均出现熟的肝细胞及成形的肝内胆管,两组组织形体学上未见到明显异常。两组胚胎心脏均已完成腔室分化、房室瓣形成,心肌细胞分化增殖使心壁致密变厚,两组HE染色组织形体学上未见到明显异常。2.免疫组化染色显示正常妊娠16.5天的胚胎肾Notch2-Jagged1信号通路中的Notc2、Jagged1抗体表达也明显比毒死蜱处理组强。两组胚胎心脏、胚胎肝脏Notch2、Jagged1抗体均为阴性染色。结论1.毒死蜱特异性影响了胚胎肾发育过程中的Notch2-Jagged1信号通路。2.Notch2-Jagged1的信号通路在S形体向原肾脏发育过程中起重要作用。(本文来源于《浙江大学》期刊2012-05-01）
潘静,吴小川,易着文,何庆南,党西强[4]（2010）在《胚胎后肾间充质干细胞对多柔比星肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响》一文中研究指出目的探讨胚胎后肾间充质干细胞对多柔比星肾病(ADN)模型(微小病变型)大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响。方法将大鼠随机分为模型组、胚胎后肾间充质干细胞注射组(RIMM-18细胞组)和对照组,各18只。模型组、RIMM-18细胞组大鼠一次性尾静脉注射多柔比星5 mg.kg-1,对照组予尾静脉注射9 g.L-1盐水3 mL。造模3 d后RIMM-18细胞组及对照组分别予尾静脉注射1×107L-1RIMM-18细胞和1 mL无血清培养液。造模第6、17、31天检测各组大鼠24 h尿蛋白、血清清蛋白、血清胆固醇及肾脏病理改变,采用免疫荧光及Western blot检测各组大鼠Nephrin、Podocin表达情况。结果在造模第31天RIMM-18细胞组大鼠24 h尿蛋白及血清胆固醇较模型组明显减少,血清清蛋白明显升高,足突融合情况明显减轻,足细胞Nephrin、Podocin表达明显增多(Pa<0.05)。结论尾静脉注射胚胎后肾间充质干细胞可减少ADN大鼠的蛋白尿,减轻ADN大鼠肾组织足细胞足突融合。其可能的机制是通过上调Podocin、Nephrin蛋白的表达从而维持蛋白复合体的结构和功能的完整。(本文来源于《实用儿科临床杂志》期刊2010年17期）
李芙蓉,张莹,光丽霞,王代红,程悦[5]（2009）在《SD大鼠胚胎后肾间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究》一文中研究指出目的对SD大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMSCs)进行分离培养,并检测其生物学特性。方法采用胚胎后肾微组织块接种培养法,检测其生长曲线和生长周期,并进行细胞表面抗原和成骨能力的鉴定。结果MMSCs体外培养生长状况良好,具有活跃的增殖能力。细胞周期显示90%以上细胞处于G0/G1期。表面抗原检测绝大多数细胞阳性表达波形蛋白(vimen-tin)和纤维连接蛋白(fibronectin),几乎不表达CD34。在体外能够向成骨细胞分化。结论原代分离、培养的细胞为MMSCs,细胞纯度高、扩增迅速、生物学性状稳定,可为组织工程提供比较理想的种子细胞。(本文来源于《重庆医学》期刊2009年11期）
李芙蓉[6]（2009）在《胚胎后肾组织体外诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化实验研究》一文中研究指出背景和目的:慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)发病率不断增加,在成人中的发生率已达10%,其主要特征是细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)过度沉积和纤维化,引起肾功能进行性下降,发展的最终结局是终末期肾衰(end stage renal disease,ESRD),目前只能依赖血透、腹透和肾移植来治疗。血透、腹透只能部分替代肾脏的滤过功能。肾移植供体短缺、抗排异药物副作用大,这些治疗方法均存在严重缺陷。寻找更完美的新治疗方法和途径是肾脏病工作者迫在眉睫的任务。近来研究发现骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有高度可塑性(plasticity),在体的胚胎组织可诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞(renal stem cells)或肾脏固有细胞分化,异种胚胎组织也可诱导人骨髓间充质干细胞向肾干细胞或肾脏固有细胞分化,但在胚胎内诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化无临床应用前景,因为难以从胚胎组织中分离纯化由骨髓间充质干细胞分化而来的肾干细胞。如果能在体外诱导骨髓间充质干细胞分化为肾干细胞,则诱导的细胞可被轻而易举地分离和纯化,具有广阔的临床应用前景。大量资料表明,干细胞的分化发育及其发育方向,取决于其所处的微环境(microenvironment)。在后肾发育过程中,后肾间充质细胞(metanephric mesenchyme cells,MMCs)即胚肾干细胞,具有自我更新及多向分化的能力,除了集合管起源于输尿管芽(ureteric bud,UB)外,后肾间充质细胞分化形成所有的肾单位和基质细胞,在离开胚肾组织仍能发育成肾固有细胞,这提示胚肾组织具有干细胞微环境特征。鉴于以上科学研究背景,本课题拟在体外,用Transwell小室共培养体系,将骨髓间充质干细胞与后肾间充质细胞和输尿管芽分室共培养,利用胚肾组织按内在规律释放的可溶性因子,诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化,观察诱导后的干细胞在体外诱导输尿管芽分枝的能力,为以后探讨诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化所需的调控因子及建立单纯用诱导因子在体外诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化的方法提供实验依据,为肾脏组织工程研究以及将来采用肾干细胞在纤维化的肾组织形成有功能的新肾单位的实验研究提供充足的无免疫原性的肾脏种子细胞。方法:1.用密度梯度离心和贴壁培养相结合的方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态及生长特点,四唑盐比色法(Methylthio tetrazole, MTT)观察细胞增殖及更新能力,透射电镜观察细胞内部结构,流式细胞仪检测细胞周期及细胞表面CD44、CD45、CD90分子的表达,免疫细胞技术检测细胞波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、角蛋白(Keratin)、E-钙粘蛋白(E-cadherins)、CD34等的表达,同时对培养细胞进行成脂、成骨诱导分化,采用油红(Oil red)O染色及骨钙素(osteocalcim,OCN)观察大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化情况。细胞鉴定后,将其接种于细胞外基质胶中进行叁维立体(three-dimensional,3D)培养,倒置相差显微镜观察细胞在细胞外基质胶中的形态变化,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞外基质胶不同层面的细胞形态。2.在解剖显微镜下分离孕13.5d(E13.5d)大鼠胚胎,获取胚胎后肾并去除输尿管芽,将胚胎后肾间充质细胞以组织块法进行原代培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态演变,MTT法观察细胞增殖及更新能力,透射电镜和扫描电镜观察细胞内部结构和表面结构,流式细胞仪检测细胞周期及细胞表面CD44、CD45、CD90分子的表达,免疫细胞技术检测细胞Vimentin、Fibronectin、Keratin、E-cadherins及CD34的表达,同时进行细胞多向诱导分化(成脂肪细胞、成骨细胞)实验,分别采用油红O及OCN染色观察诱导分化情况。细胞鉴定后,将其接种于细胞外基质胶中进行叁维立体培养,倒置相差显微镜观察细胞在细胞外基质胶中的形态变化,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞外基质胶不同层面的细胞形态变化。3.在解剖显微镜下分离孕13.5d(E13.5d)大鼠胚胎,获取胚胎后肾,消化法得到完整的输尿管芽,将其种植于Transwell小室上室中的细胞外基质胶中,后肾间充质细胞种植于Transwell小室下室中,二者进行分室共培养,倒置相差显微镜下观察输尿管芽的形态,免疫细胞技术对其进行鉴定,激光扫描共聚焦显微镜下观察输尿管芽的形态变化。4.建立大鼠骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化的体外诱导共培养模型,并分为5组,A:骨髓间充质干细胞+后肾间充质细胞;B:骨髓间充质干细胞+输尿管芽;C:骨髓间充质干细胞+后肾间充质细胞+输尿管芽;D:骨髓间充质干细胞;E:空白对照组。用倒置相差显微镜观察诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞形态变化,流式细胞仪检测诱导后细胞周期及细胞表面CD44、CD45、CD90分子的表达,免疫荧光化学法检测诱导后细胞的细胞标志物Vimentin、Fibronectin、Keratin、E-cadherins蛋白的表达。诱导后细胞与输尿管芽共培养,用激光扫描共聚焦显微镜观察诱导后细胞对输尿管芽的诱导能力。结果:1.大鼠原代BMSCs呈集落样生长,细胞形态呈梭形,传代后细胞生长迅速,形态比较均一,大部分细胞为成纤维样或多角形,细胞增殖能力强,具有自我更新能力;透射电镜结果显示细胞核较大,核呈椭圆形或不规则形,有核突,含有1-2个核仁,胞浆内含有粗面内质网和线粒体,其他细胞器较少,胞浆内可见分泌小泡,表现出未分化细胞的特征;细胞周期结果显示,只有少数细胞进入增殖活跃期,大部分细胞处于静止期;流式细胞仪检测细胞表面分子标志物的结果显示,细胞强表达CD44、CD90,不表达CD45;免疫细胞化学染色结果显示BMSCs明显表达Vimentin、Fibronectin,不表达Keratin、E-cadherin及CD34;BMSCs在特定诱导条件下可以向脂肪细胞、成骨细胞分化,加入成脂肪诱导培养基3w后,细胞内可见多个折光性强的圆形脂肪滴,油红O染色呈红色;在加入成骨诱导培养基诱导后,可见圆形或卵圆形矿化结节,OCN表达阳性。在本实验中,大鼠BMSCs在由80%Ⅰ型胶原与20%的微量生长因子基质胶组成的细胞外基质胶中生长状态较好。2.培养的大鼠MMSCs贴壁生长,梭形,成纤维细胞样,单个核,核仁大,,形态均一,细胞增殖能力强,具有自我更新能力;透射电镜结果显示,细胞为长梭形或不规则形状,核不规则,核仁大,胞浆中滑面内质网发达,可见分泌颗粒;扫描电镜结果示,细胞呈梭形或多角形,核仁明显,细胞连接紧密,表面有微绒毛突起,梭形细胞胞浆向两极伸出长突起,多角形细胞突起呈树枝状,紧紧贴于盖玻片上;细胞周期结果显示,90%以上的细胞处于静止期,只有少部分细胞处于增殖期;流式细胞仪检测结果显示,几乎所有细胞都明显表达CD44、CD90,几乎所有细胞不表达CD45;免疫细胞化学染色法结果显示,大鼠MMSCs明显表达间充质细胞标志蛋白Vimentin、Fibronectin,不表达Keratin、E-cadherin及CD34;细胞在特定诱导条件下具有多向分化能力,可以向脂肪细胞、成骨细胞分化,诱导分化后的脂肪细胞油红O染色呈特异性红色,OCN表达呈阳性,并可形成钙结节。倒置相差显微镜下观察叁维立体培养的大鼠MMSCs结果显示,不同层面细胞都呈长梭形,培养2-3d可见细胞连接,细胞增殖能力强;激光扫描共聚焦显微镜下观察可见叁维立体培养的细胞明显表达Vimentin、Fibronectin,不表达Keratin及E-cadherin。叁维立体培养体系中,大鼠MMSCs形状立体感强,生长状态好。3.倒置相差显微镜下观察E13.5d大鼠的UB呈T形,接种于细胞外基质中不断分枝发芽。激光扫描共聚焦显微镜下,用FITC-DB标记UB,结果显示大鼠UB以二叉分枝方式进行分枝、生长,UB顶端的细胞生长迅速,其颈部细胞较顶端(壶腹)部细胞的生长速度慢。随着生长时间的延长,大鼠UB不断以二叉分枝方式扩展延伸,逐渐形成树状结构。4.倒置相差显微镜下观察诱导后的大鼠BMSCs,结果显示细胞生长密集,界限不清,呈梭形;流式细胞仪检测诱导后的细胞周期结果显示,90%以上的细胞处于静止期,只有少部分细胞处于增殖期;流式细胞仪检测诱导后的细胞表面标记物,结果显示几乎所有细胞都明显表达CD44、CD90,几乎所有细胞不表达CD45;免疫荧光检测诱导后的细胞结果显示,大鼠后肾间充质干细胞明显表达间充质细胞标志蛋白Vimentin、Fibronectin,不表达上皮细胞标志蛋白Keratin及E-cadherin;激光扫描共聚焦显微镜下观察到C组诱导后的细胞对大鼠UB有诱导作用,C组的UB以二叉分枝的方式分枝发芽。结论:1.我们成功分离培养了大鼠BMSCs和MMSCs,这些细胞具有典型的间充质细胞形态及干细胞表型,具有多向分化能力。2.我们成功分离、培养、鉴定了大鼠UB。3.我们建立了大鼠BMSCs在体外向肾干细胞分化模型,实现了BMSCs向肾干细胞的转型。在体外诱导后的大鼠BMSCs能促进大鼠UB分枝发芽。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2009-05-01）
潘静[7]（2009）在《胚胎后肾间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响》一文中研究指出目的:探讨胚胎后肾间充质干细胞对阿霉素肾病(微小病变型)大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响。方法:实验分叁组:对照组、模型组和RIMM-18细胞组。模型组、细胞组采用单次尾静脉注射阿霉素5 mg/kg造模,3天后细胞组给予注射1×10~7RIMM-18细胞(胚胎后肾间充质干细胞)。对照组给予正常大鼠尾静脉注射生理盐水,3天后对照组给予尾静脉注射1mL无血清培养基。造模后第6、17、31天检测各组大鼠的24h尿蛋白、血清白蛋白、血清胆固醇及肾脏病理改变,采用免疫荧光及Westernblot检测各组大鼠Nephrin、Podocin的表达情况。结果:(1)制模成功。(2)RIMM-18细胞对实验大鼠24h尿蛋白的影响:对照组、模型组、细胞组叁组大鼠造模后第6天尿蛋白分别为10.15±0.47mg/L、10.98±0.85mg/L、10.92±0.73mg/L,叁组大鼠间24小时蛋白尿没有明显差异(P＞0.05),第17天分别为10.32±0.57mg/L、83.88±7.88mg/L、78.5±6.44mg/L,模型组与细胞组之间无明显差异(P＞0.05),而两组24小时尿蛋白明显高于对照组(P＜0.01),第31天分别为10.27±1.21mg/L、150.33±8.8mg/L、111.68±8.66mg/L,细胞组24小时尿蛋白明显低于模型组(P＜0.01),而细胞组与模型组24小时尿蛋白明显高于对照组(P＜0.01)。(3)RIMM-18细胞对实验大鼠血清白蛋白的影响:对照组、模型组、细胞组叁组大鼠造模后第6天血清白蛋白分别为40.47±1.03g/L、39.05±1.39g/L、37.88±1.81g/L,叁组大鼠间血清白蛋白没有明显差异(P＞0.05);第17天分别为39.83±1.32g/L、21.54±1.86g/L、23.68±1.68g/L,模型组与细胞组之间无明显差异(P＞0.05),而两组血清白蛋白明显低于对照组(P＜0.01);第31天分别为38.98±1.41g/L、15.72±1.03g/L、22.13±1.54g/L,细胞组血清白蛋白明显高于模型组(P＜0.01),而细胞组与模型组血清白蛋白明显低于对照组(P＜0.01)。(4)RIMM-18细胞对实验大鼠血清胆固醇的影响:对照组、模型组、细胞组叁组大鼠造模后第6天血清胆固醇分别为1.23±0.11mmol/L、1.33±0.11mmol/L、1.27±0.13mmol/L,叁组大鼠间血清胆固醇没有明显差异(P＞0.05);第17天分别为1.17±0.14mmol/L、6.25±0.43mmol/L、6±0.23mmol/L,模型组与细胞组之间无明显差异(P＞0.05),而两组血清胆固醇明显高于对照组(P＜0.01);第31天分别1.2±0.13mmol/L、8.4±0.36 mmol/L、5.7±0.36mmol/L,细胞组血清胆固醇明显低于模型组(P＜0.01),而细胞组与模型组血清胆固醇明显高于对照组(P＜0.01)。(5)胚胎后肾间充质干细胞对实验大鼠肾组织病理的影响:光镜下肾组织病理改变不明显,各组之间无明显差别。电镜下模型组与对照组相比,造模后第6天即可见足突轻度融合,第17天足突节段性融合,第31天出现足突广泛融合,而细胞组在第6、17天与模型组及相比无明显差别,于31天细胞组足突融合情况较模型组减轻。(6)胚胎后肾间充质干细胞对实验大鼠肾小球足细胞蛋白Nephrin、Podocin表达的影响:①对照组大鼠肾组织免疫荧光染色足细胞裂孔膜蛋白Nephrin及Podocin沿肾小球毛细血管袢呈连续线状分布。模型组第6天即可发现Nephrin、Podocin免疫荧光染色表现为不连续段状,并随着病情的发展荧光强度逐渐减弱;细胞组免疫荧光染色在第6、17天与模型组相比没有明显差别,第31天荧光强度明显强于模型组。②蛋白质表达:在第6天对照组模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Nephrin分别表达为0.74±0.03、0.53±0.04、0.55±0.09,模型组及细胞组与对照组相比Nephrin表达明显下调(P＜0.01),在第17天模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Nephrin分别表达为0.29±0.05、0.32±0.04,两者之间无明显差异(P＞0.05);在第31天对照组、模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Nephrin分别表达为0.73±0.04、0.15±0.01、0.21±0.02,细胞组Nephrin蛋白的表达明显高于模型组(P＜0.01),模型组及细胞组Nephrin蛋白的表达明显低于对照组(P＜0.01)。在第6天对照组、模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Podocin分别表达为0.47±0.02、0.28±0.01、0.3±0.02,模型组及细胞组与对照组相比Podocin表达明显下调(P＜0.01),在第17天模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Podocin分别表达为0.18±0.02、0.19±0.01,两者之间无明显差异(P＞0.05);在第31天对照组、模型组及细胞组大鼠肾组织足细胞标志蛋白Podocin分别表达为0.48±0.02、0.08±0.01、0.12±0.03,细胞组Podocin蛋白的表达明显高于模型组(P＜0.01),模型组及细胞组Podocin蛋白的表达明显低于对照组(P＜0.01)。结论:(1)尾静脉注射胚胎后肾间充质干细胞可以降低ADN(微小病变型)大鼠的蛋白尿,减轻AND大鼠肾组织足细胞足突融合。(2)其可能的机制是通过上调Podocin、Nephrin两种蛋白的表达从而维持蛋白复合体的结构和功能的完整。(本文来源于《中南大学》期刊2009-05-01）
周剑锋,光丽霞,李娜,于军,袁发焕[8]（2007）在《大鼠胚胎后肾间充质干细胞体外诱导分化的实验研究》一文中研究指出目的研究大鼠胚胎后肾间充质干细胞(MMSCs)体外诱导分化的生物学特性。方法原代分离培养后肾间充质干细胞,在体外特定诱导条件下观察细胞向成骨细胞、脂肪细胞及肾小管上皮细胞的分化及其形态演变,采用细胞免疫荧光检测细胞表面特定蛋白的表达变化。结果大鼠后肾间充质干细胞在特定诱导条件下可向成骨细胞、脂肪细胞及上皮细胞分化,免疫荧光结果显示分化后的上皮细胞E-cadherin蛋白表达明显增强,而vimentin、fibronectin的表达则明显降低甚至无表达。结论大鼠胚胎后肾间充质干细胞在特定条件下有定向分化的能力,具有潜在分化为肾实质细胞的能力。(本文来源于《重庆医学》期刊2007年05期）
胚胎后肾间充质干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
建立禽类后肾间充质干细胞(Metanephric mesenchymal stem cells,MMSCs)体外培养体系,研究其生物学特性和多向分化潜能。采用酶消化法分离北京鸭胚胎MMSCs,绘制生长曲线,通过免疫荧光和RT-PCR对MMSCs进行鉴定,诱导MMSCs向脂肪细胞和胰岛细胞分化。结果表明,鸭胚胎MMSCs具有良好的增殖活力,表达间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)特异性标志物,并诱导分化为脂肪细胞和胰岛细胞。北京鸭胚胎MMSCs在体外具有较强的自我更新能力及多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞进行保存。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胚胎后肾间充质干细胞论文参考文献
[1].宋娜娜,刘少鹏,郭佳,俞小芳,朱加明.低氧对后肾间充质干细胞分化能力和胚胎肾脏发育的影响及其机制研究[C].中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2015年学术年会资料汇编.2015
[2].陈佳,王桂艳,张宇.北京鸭胚胎后肾间充质干细胞分离培养及鉴定[J].生物技术通报.2015
[3].陈文清.胚胎后肾间充质干细胞分化为上皮细胞的关键因子和Notch信号通路的初步研究[D].浙江大学.2012
[4].潘静,吴小川,易着文,何庆南,党西强.胚胎后肾间充质干细胞对多柔比星肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响[J].实用儿科临床杂志.2010
[5].李芙蓉,张莹,光丽霞,王代红,程悦.SD大鼠胚胎后肾间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究[J].重庆医学.2009
[6].李芙蓉.胚胎后肾组织体外诱导骨髓间充质干细胞向肾干细胞分化实验研究[D].第叁军医大学.2009
[7].潘静.胚胎后肾间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin表达的影响[D].中南大学.2009
[8].周剑锋,光丽霞,李娜,于军,袁发焕.大鼠胚胎后肾间充质干细胞体外诱导分化的实验研究[J].重庆医学.2007