导读:本文包含了新型分子标记论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:基于内含子扩增多态性,花生,功能型分子标记技术,内含子
新型分子标记论文文献综述
熊发前,刘俊仙,刘菁,贺梁琼,蒋菁[1]（2018）在《IBAP新型功能型分子标记技术的开发和应用》一文中研究指出本研究首次开发出了一种新型功能型分子标记技术-基于内含子扩增多态性(intron based amplifled polymorphism,IBAP),该技术根据真核生物基因组中基因内含子区域富含AT设计并合成单引物,提取样品基因组DNA作为模板,利用设计好的单引物和所提取的样品DNA模板在常规PCR反应体系和PCR反应程序下(退火温度为35℃)进行扩增,扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离,检测单引物在基因组基因内含子区域中的两个结合位点间的多态性;其中,所用单引物的序列长度为17bp,5′端的6个碱基填充序列为富含GC碱基的限制性内切酶酶切位点序列或富含GC碱基的随机序列,中间核心区序列是由8个AT碱基随机排列组成,这14个碱基组成核心序列,最后3′端是3个选择性碱基。基于此引物设计原理,设计了32条单引物并应用于花生(24份)、水稻(16份)、玉米(11份)、甘蔗(24份)、马铃薯(9份)、木薯(5份)、菜心(16份)等多种农作物的遗传多样性分析和DNA多态性检测上,甚至在不同真菌上也得到了成功的扩增,该技术具有操作简单高效、扩增结果可靠、扩增重复性较好、扩增效率高、扩增条带数多、多态性丰富、引物设计简单、引物通用性强等特点,该技术已获授权国家发明专利1项。这些为下一步花生及其它作物种质资源的分子精准鉴定和评价提供了一定技术支持,值得大力推广应用。(本文来源于《中国作物学会油料作物专业委员会第八次会员代表大会暨学术年会综述与摘要集》期刊2018-11-19）
熊发前,刘俊仙,贺梁琼,刘菁,蒋菁[2]（2018）在《EBAP新型功能型分子标记技术的开发和应用》一文中研究指出本研究首次开发出了一种新型功能型分子标记技术-基于外显子扩增多态性(exon based amplifled polymorphism,EBAP),该技术根据真核生物基因组中基因外显子区域富含GC设计并合成单引物,提取样品基因组DNA作为模板,利用设计好的单引物和所提取的样品DNA模板在常规PCR反应体系和PCR反应程序下(退火温度为50℃)进行扩增,扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离,检测单引物在基因组基因外显子区域中的两个结合位点间的多态性;其中,所用单引物的序列长度为17bp,5′端的6个碱基填充序列为富含AT碱基的限制性内切酶酶切位点序列或富含AT碱基的随机序列,中间核心区序列是由8个GC碱基随机排列组成,这14个碱基组成核心序列,最后3′端是3个选择性碱基。基于此引物设计原理,设计了36条单引物并应用于花生(24份)、水稻(16份)、玉米(11份)、甘蔗(24份)、马铃薯(9份)、木薯(5份)、菜心(16份)等多种农作物的遗传多样性分析和DNA多态性检测上,甚至在不同真菌上也得到了成功的扩增,该技术具有操作简单高效、扩增效率高、扩增条带丰富、扩增产生的多态性丰富、扩增结果可靠、扩增重复性好、引物设计简单、引物通用性强等特点,该技术已获授权国家发明专利2项。这些为下一步花生及其它作物种质资源的分子精准鉴定和评价提供了一定技术支持,值得大力推广应用。(本文来源于《中国作物学会油料作物专业委员会第八次会员代表大会暨学术年会综述与摘要集》期刊2018-11-19）
韩娜[3]（2018）在《新型分子探针~(11)C和~(18)F标记PI3K抑制剂GDC-0941在乳腺癌中应用价值研究》一文中研究指出目的本研究旨在利用合成模块,建立11C标记GDC-0941作为新型PET分子探针的方法,并通过乳腺癌细胞的体外/内实验,评价11C标记GDC-0941的药代动力学特征,为预测GDC-0941在体内的药效情况提供帮助。材料与方法1.制备标准品:前体GDC-0941购自美国Selleck公司。用强碱Na H(4.5-5.0eq)和CH3I(4.5-5.0eq)进行冷标记,溶剂为四氢呋喃,产物用柱分离,对前体GDC-0941甲基化。2.制备11C-GDC-0941:11C标记GDC-0941由美国GE公司的自动化合成设备TRACERLAB FXC Pro通过一步法合成,产物通过半制备型HPLC分离纯化,纯化后用分析型HPLC测定放化纯。3.不同乳腺癌亚型细胞对[11C]-GDC-0941的摄取实验:PI3K/Akt/m TOR通路的活化与PIK3CA的突变有关,而PIK3CA的突变与PI3Kp110α的蛋白表达量相关,因此选取PI3Kp110α表达不同的两种乳腺癌细胞MCF-7(PI3Kp110α高表达)和MDA-MB-231(PI3Kp110α低表达)培养,并用Western blot对两种细胞该蛋白的表达情况鉴定。测定不同时间点(10、30和60min)上述细胞对[11C]-GDC-0941的摄取率。4.尾静脉注射[11C]-GDC-0941行正常昆明小鼠60min动态显像及上述乳腺癌细胞荷瘤鼠60min静态显像及不同时间点(10、30和60min)的生物分布研究。结果1.用原料GDC-0941进行甲基化反应时,产生了两个异构体,对这两个异构体做了1H-NMR和13C-NMR分析,确定了两个标准品的结构,分别命名为GDCM和GDCI。2.[11C]标记GDC-0941时得到两种同分异构体产物,分别取两种产物进行分析型HPLC与标准品比对,证实为[11C]-GDCM及[11C]-GDCI,因GDCI对两种乳腺癌细胞的半数抑制浓度与原药GDC-0941相近,而GDCM远高于GDC-0941,且GDCI的产率高于GDCM,因此本实验中我们选取[11C]-GDCI作为目标产物。后文中便于描述将[11C]-GDCI描述为[11C]-GDC-0941,其标记率为33.7±9.3%(n=6),比活度52.2±17GBq/μmo L(n=6)。分析型HPLC的结果显示[11C]-GDC-0941的放化纯在10、30、60及90min均大于95%,体外稳定性良好。3.经Western blot及肿瘤组织的免疫组化结果鉴定,MCF-7细胞及肿瘤组织的PI3Kp110α蛋白表达明显高于MDA-MB-231。细胞摄取实验显示MCF-7和MDA-MB-231在10、30及60min的细胞摄取率分别为3.10±0.29%vs.1.42±0.06%(P=0.0001)、3.23±0.15%vs.1.58±0.09%(P<0.0001)、4.32±0.64%vs.2.14±0.10%(P=0.002)。4.Micro-PET动态显像研究显示[11C]-GDC-0941主要经肝脏及肠道排泄,其他组织对该显像剂摄取较少。PET静态显像及生物分布表明在注射显像剂1h后MCF-7荷瘤鼠对[11C]-GDC-0941的摄取最高,肿瘤/肌肉(T/M)为3.22±0.54,而MDA-MB-231肿瘤的T/M仅为1.28±0.30,二者具有显着性差异(P=0.045)。Micro-PET显像显示阻断组MCF-7荷瘤鼠肿瘤未见确切显影。结论我们首次用11C标记PI3K抑制剂GDC-0941,其标记方法简单,作为一种新型分子探针可为了解GDC-0941在体内的药效情况提供帮助。但是在体内分布动力学特性并不十分理想,肝脏和肠道摄取过高,而且11C半衰期过短,不利于更长时间点的显像。因此,改善GDC-0941的水溶性,以及利用半衰期较长的18F进行标记需要进一步研究。目的本研究旨在将叁乙二醇(triethylene glycol,HO-PEG3-OH)连接到GDC-0941,并使用半衰期更长的放射性核素18F对其进行标记,制备18F-PEG3-GDC-0941新型分子探针,并通过乳腺癌细胞的体外实验、乳腺癌肿瘤动物模型的在体显像,评价18F-PEG3-GDC-0941的在体药代动力学特征以及肿瘤的摄取。材料与方法1.前体GDC-0941-PEG-OTs的制备、纯化和鉴定:先制备HO-PEGOTs,然后将HO-PEG-OTs与GDC-0941在K2CO3溶液中混合,得到GDC-PEGOH化合物,用硅胶柱分离,得到前体GDC-PEG3-OTs,产物用碳谱和氢谱进行鉴定2.18F-PEG3-GDC-0941的制备:18F标记前体GDC-PEG3-OTs由美国GE公司的自动化合成设备TRACERLAB FX-XN合成,产物18F-PEG3-GDC-0941通过HPLC分离纯化,纯化后测定放化纯。3.不同乳腺癌亚型细胞对[18F]-PEG3-GDC-0941的摄取实验:选取PI3Kp110α表达不同的两种乳腺癌细胞MCF-7(PI3Kp110α高表达)和MDA-MB-231(PI3Kp110α低表达)培养,并用Western blot进行两种细胞该蛋白的表达情况鉴定。测定不同时间点(10、30、60和120min)上述细胞对18F-PEG3-GDC-0941的摄取率。4.尾静脉注射[11C]-GDC-0941行正常昆明小鼠及上述乳腺癌细胞荷瘤鼠Micro-PET 120min动态显像及生物分布研究。结果使用分析型HPLC测定18F-PEG3-GDC-0941的标记率为65.25%±3.85%,比活度为(43.25±1.75)Ci/mmol(n=3)。18F-PEG3-GDC-0941在人血清中的稳定性良好,4小时其放化纯在95%以上。用PEG修饰后,18F-PEG3-GDC-0941的Log P值为1.12±0.01(n=3)。细胞摄取实验显示MCF-7和MDA-MB-231对18FPEG3-GDC-0941的摄取随时间的增加而增加,后者细胞摄取明显低于前者。MCF-7和MDA-MB-231在10、30、60和120min对18F-PEG3-GDC-0941的摄取率分别为2.17±0.23%vs.1.92±0.07%(P=0.11)、2.92±0.29%vs.2.58±0.27%(P=0.13)、3.27±0.07%vs.2.85±0.08%(P=0.000)、3.35±0.08%vs.3.04±0.02%(P=0.003),两种细胞的摄取率在60和120min有显着性差异。4.正常昆明小鼠Micro-PET动态显像研究显示18F-PEG3-GDC-0941仍要经肝脏及肠道排泄,但是肝脏摄取较[11C]-GDC-0941明显降低且排泄速度加快。生物分布结果显示,MCF-7荷瘤鼠在60min时T/M值达到最高为5.76±1.23,而MDA-MB-231荷瘤鼠T/M值为3.00±1.10,二者具有显着性统计学差异(P=0.01)。但是两种荷瘤鼠的血液本底都偏高。结论本研究成功制备了18F-PEG3-GDC-0941,其标记率高、稳定性好,通过连接PEG3增加了探针的水溶性。初步在体研究显示,18F-PEG3-GDC-0941仍主要经肝脏及肠道排泄,但是其肝脏排泄速度明显快于[11C]-GDC-0941,且在PI3Kp110α高表达乳腺癌中有较好摄取。18F-PEG3-GDC-0941是一种有前景的预测GDC-0941疗效的分子探针。但是连接PEG后其血液清除时间延长的问题不可忽视,进一步的研究仍需要进行。目的叁阴性乳腺癌是乳腺癌亚型中预后最差的一种类型,其转移发生早,致死率高。尽管其治疗取得了很大进步,但因缺乏有效治疗靶点,患者的总生存率仍较低。本研究旨在探究应用PI3K抑制剂GDC-0941对叁阴性乳腺癌的肿瘤抑制作用,并用18F-FDG小动物PET进行疗效观察。方法培养小鼠叁阴性乳腺癌4T1细胞,接种于裸鼠右前肢的外侧皮下(n=20只)。每2天观察一次,用游标卡尺测量并记录肿瘤直径,同时测量记录小鼠体重。GDC-0941溶于0.5%甲基纤维素及0.2%Tween80。每只小鼠按0.1ml/10g的体积给药。肿瘤大小按以下公式计算:肿瘤体积(mm3)=长径×短径2/2。当肿瘤大小长至250 mm3时将小鼠随机分成2组:治疗组(10只),每天口饲GDC-0941(100mg/kg);对照组(10只):每天口饲0.5%甲基纤维素及0.2%Tween80。实验组及对照组均连续给药21天。每组选3只模型鼠进行小动物18F-FDG PET扫描,治疗前(0w)及治疗后(3w)各扫描一次。对其肿瘤组织进行p-Akt(Ser473)免疫组化染色,比较治疗组与对照组p-Akt(Ser473)表达情况。结果PI3K抑制剂GDC-0941对抑制4T1肿瘤生长作用不明显,治疗组与对照组肿瘤大小差异无统计学差异(P=0.117,n=7/组),但是对抑制肿瘤肺转移的作用却十分显着,治疗组和对照组小鼠的肺转移数目分别为(9±3)个和(44±8)个,治疗组明显少于对照组(P=0.002)。另外,治疗3周后18F-FDG显像结果提示治疗组小鼠肿瘤/肌肉值明显低于对照组,分别为4.43±0.27(实验组)和6.65±0.25(对照组),P=0.001(n=3/组)。结论本研究证实了GDC-0941对治疗叁阴性乳腺癌有疗效,但是由于PI3K/Akt/m TOR信号通路与其他信号通路存在交互作用,提示联合用药的必要性。18F-FDG对评估GDC-0941的疗效有一定作用,这为进一步应用18F标记GDC-0941对GDC-0941的疗效预测打下坚实的基础。18F-PEG3-GDC-0941有望在GDC-0941的疗效评估中发挥更大的作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
梁瑞,刘莹,赵倩,庄晓青,李娟[4]（2018）在《~(131)I标记新型靶向FGF8分子探针的制备及生物活性评价》一文中研究指出目的探索~(131)I标记小分子多肽HSQAAVP(组氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-丙氨酸-缬氨酸-脯氨酸)制备的最佳条件,并研究~(131)I-HSQAAVP在体外的稳定性及生物学活性。方法采用氯胺-T法对多肽HSQAAVP进行~(131)I标记,通过正交实验筛选最优标记条件。测定~(131)I–HSQAAVP的标记率、放射化学纯度。将标记好的~(131)I-HSQAAVP放置在室温及37℃温水浴箱内观察其稳定性。用CCK-8法检测~(131)I-HSQAAVP对人前列腺癌细胞系LNCaP、DU145的增殖抑制率,判定~(131)I-HSQAAVP的生物学活性。结果最佳标记条件为室温下(25℃)在50μL、0.5 mol·L~(-1)、pH 7.4 PBS缓冲液中,加入50μg多肽、~(131)I 74BMq(2m Ci),再加入10μg·μL~(-1)的新鲜配制的氯胺T,震荡反应时间5min,终止反应,测得标记率可达(71.5±3.03)%。经分离纯化后,其放射化学纯度为(97.8±1.6)%。体外稳定性实验表明在体外放置24h后,其放射化学纯度仍大于90%。~(131)I-HSQAAVP和HSQAAVP对前列腺癌细胞LNCaP、DU145增殖的抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究制备的~(131)I-HSQAAVP方法简单、高效,新分子探针~(131)I-HSQAAVP的生物活性仍被保留,可用于进一步诊断和治疗的研究。(本文来源于《宁夏医科大学学报》期刊2018年04期）
李林林[5]（2018）在《放射性核素（~(125)I/~(131)I）标记新型分子探针多肽F3实现叁阴性乳腺癌SPECT/CT显像和治疗的实验研究》一文中研究指出第一部分放射性碘标记新型分子探针多肽F3目的:建立放射性碘标记新型分子探针多肽F3的方法学,并与放射性碘标记的西妥昔单抗(Cetuximab,以下简称为Ab)作比较,探究放射性碘标记F3的理化性质。方法:利用氯胺-T法实现F3多肽和Ab的~(125)I标记,用Sephadex G-25柱分离纯化,测定标记率、放射化学纯度和体外稳定性。结果:新型分子探针多肽F3可被~(125)I标记,标记率为(88.0±0.5)%,纯化后的放射化学纯度为(99.1±0.2)%;~(125)I-Ab的标记率为(90.8±1.9)%,纯化后的放射化学纯度为(91.5±2.0)%。~(125)I-F3和~(125)I-Ab在4℃条件下存放较稳定,放置8h时其放射化学纯度均可达到90%以上。结论:氯胺-T法成功标记多肽F3,并且标记率及放射化学纯度高,体外稳定性较好,适合4℃保存。此方法操作简便、可重复性好,为下一步实验打下基础。第二部分~(125)I-F3实现叁阴性乳腺癌SPECT/CT显像的实验研究目的:通过叁阴性乳腺癌细胞4T1的细胞结合实验、荷叁阴性乳腺癌4T1细胞裸鼠的体内分布及SPECT/CT显像,验证~(125)I标记的新型分子探针多肽F3对叁阴性乳腺癌的靶向显像能力。方法:通过细胞结合实验比较~(125)I-F3和~(125)I-Ab与叁阴性乳腺癌细胞4T1的结合能力;建立裸鼠叁阴性乳腺癌皮下移植瘤模型,经荷瘤裸鼠尾静脉注射300μCi/200μL标记物,分别于注射后即刻、1h、2h、4h、6h、8h和24h行SPECT/CT显像,观察~(125)I-F3和~(125)I-Ab在荷瘤裸鼠中的显像结果;取30只雌性荷瘤裸鼠,随机分成两组(~(125)I-F3组和~(125)I-Ab组),经尾静脉注入标记物注射液40μCi/200μL,分别于注射后0.5h、1h、2h、4h和8h眼球取血后处死,取心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、骨、肌肉、肿瘤及皮肤等组织器官,计算各组织器官每克组织的百分注入剂量(%ID/g),比较尾静脉注射后不同时间,~(125)I-F3和~(125)I-Ab在荷瘤裸鼠的体内分布情况。结果:在1h、2h、4h、8h及24h,~(125)I-F3与4T1细胞的结合率分别为(4.32±0.18)%、(7.34±0.73)%、(10.58±0.16)%、(10.76±0.35)%及(13.76±0.73)%,~(125)I-Ab与4T1细胞的结合率分别为(0.32±0.05)%、(0.49±0.05)%、(0.73±0.04)、(0.90±0.06)%及(1.77±0.36)%。~(125)I-F3及~(125)I-Ab细胞结合率均随作用时间延长而增高,~(125)I-F3在2h以后的细胞结合率与1h相比,有显着性差异(P<0.01);~(125)I-Ab在2h的细胞结合率与1h相比,差异无统计学意义(P>0.05),4h与1h相比,差异有统计学意义(P<0.05),8h以后的细胞结合率与1h相比,有显着性差异(P<0.01)。SPECT/CT显像示尾静脉注射~(125)I-F3后1h即能显示肿瘤部位,随着时间延长,裸鼠本底降低,肿瘤部位的显像更清晰,在药物注射后4h时肿瘤部位显像最清晰,之后肿瘤部位的放射性逐渐减少,至注射后24h肉眼已观察不到肿瘤显像;尾静脉注射~(125)I-Ab后1h肿瘤部位可见淡影,随着时间延长,裸鼠本底降低,至注射后2h肿瘤部位放射性达高峰,随后肿瘤部位的放射性迅速减少,至注射后8h肉眼已难辨肿瘤部位显影。体内分布显示尾静脉注射125I-F3后2h,肿瘤部位放射性摄取最高,达到(3.16±0.05)%,随后肿瘤部位放射性降低,至8h时,降低到(0.84±0.09)%;尾静脉注射~(125)I-Ab后1h,肿瘤部位放射性摄取最高,为(2.46±0.49)%,随后肿瘤部位放射性降低,至8h时,降低到(0.81±0.53)%。结论:~(125)I-F3可与叁阴性乳腺癌细胞4T1结合,并可在叁阴性乳腺癌肿瘤部位特异性聚集,可能成为叁阴性乳腺癌的靶向显像剂。第叁部分~(131)I-F3治疗叁阴性乳腺癌的实验研究目的:通过荷瘤裸鼠瘤内给药研究131I-F3对叁阴性乳腺癌的内照射治疗作用,并通过免疫组化测定肿瘤部位的EGFR表达证实治疗有效。方法:用氯胺-T法实现F3和Ab的~(131)I标记;验证对荷瘤裸鼠的治疗作用,实验组瘤内注射~(131)I-F3 50μL/只(约200μCi/只),设~(131)I-Ab为对照组一及生理盐水为对照组二;首次注射完成后,隔天重复注射一次,共注射3次。通过HE染色和免疫组化检测未治疗和各组治疗后的肿瘤组织中EGFR表达情况。结果:~(131)I-F3的标记率为(92.0±2.1)%,~(131)I-Ab的标记率为(89.2±0.4)%。FX Pro小动物成像系统显像示治疗第5天,两组肿瘤部位均可显像,但放射性不等;随治疗时间延长,两组肿瘤部位的放射性均减少。治疗20天后~(131)I-F3组抑瘤率为(11.46±7.78)%;~(131)I-Ab组抑瘤率为(37.76±14.68)%。HE染色显示肿瘤细胞的生长受到抑制,免疫组化显示治疗后肿瘤内EGFR表达减少,阳性细胞比例较对照组少。结论:131I-F3可对叁阴性乳腺癌肿瘤细胞的生长起抑制作用,有可能成为一种有临床应用价值的内照射治疗药物。(本文来源于《苏州大学》期刊2018-04-01）
李捷[6]（2017）在《基于转录组学的肝细胞肝癌新型分子标记物筛选、验证及功能研究》一文中研究指出背景肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种来源于肝实质细胞的肝脏原发性恶性肿瘤。HCC是全球第五大恶性肿瘤,每年的致死人数在所有恶性肿瘤中排名第二。我国是HCC高发国家,每年HCC的发病人数和致死人数都占全球半数以上。在我国60岁以下的男性恶性肿瘤患者中,HCC发病率和致死率高居第一位。近年来,随着影像学、外科学等技术的不断发展,HCC的诊治已经取得了长足的进步,但是仍然存在有效诊断标记物缺乏、术后复发率高和术后生存率低等问题。甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein,AFP)是一个传统的HCC分子标记物,其作为HCC血清学诊断标记物的阳性率只有60%-70%,许多HCC患者确诊时,往往已经处于病程进展的中晚期,失去了治疗机会。目前HCC的治疗也倾向于多元化,除外传统的手术切除,放化疗、药物靶向治疗等越来越普及,但是化疗及药物靶向治疗的效果往往不佳,原因之一就是许多患者对各种抗肿瘤药物具有耐药性。针对这一现象,我们发现泛素特异性蛋白酶22(Ubiquitin-specificprotease22,USP22)是肝癌多药耐药的分子标记物并揭示了相关作用机制,为肝癌病人药物靶向治疗的个性化选择提供了新思路。目前,转录组学(transcriptomics)、基因组学(genomics)和蛋白质组学(proteomics)等组学研究方兴未艾。转录组学是从RNA水平研究基因表达情况的一门学科。通过转录组学的研究,越来越多的肿瘤关键分子标记物有望被发现。这些关键分子标记物在肿瘤发生发展分子机制、肿瘤筛查与早诊、预后预警和治疗靶点筛选及疗效评判等方面发挥重要作用。目的本研究基于HCC临床样本,通过转录组学技术,筛选出与HCC诊断、恶性生物学特征和预后预警等相关的潜在分子标记物;通过在HCC细胞中上调或者下调这些分子标记物的表达,对它们进行功能研究,明确这些分子标记物的在HCC中的作用及相关机制;最终,根据临床验证和细胞学实验结果,明确它们是HCC的分子标记物,为HCC的诊断、预后预警和治疗靶点筛选等提供新思路。方法一、运用包含39303个长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)序列和32205个mRNA序列的Agilent表达谱芯片,检测并分析比较5对HCC组织及对应癌旁组织的表达谱差异,根据P值大小和差异倍数,并结合文献阅读,发现可以作为HCC潜在分子标记物的差异基因(包括mRNA或lncRNA)。二、收集临床样本(包括组织和血液),通过免疫组化、酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和Western免疫印迹等实验,研究差异基因表达情况并统计分析其与HCC患者临床病理参数和预后等的关系。明确这些差异基因是HCC的分子标记物,可以作为潜在的HCC诊断标记物、预后预警指标或治疗靶点。叁、应用Bel-7402、Huh7等HCC细胞株,通过分别上调或者下调差异基因表达水平,开展Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验、细胞侵袭和迁移实验、流式细胞凋亡和周期实验等细胞功能学实验,检测差异基因对HCC细胞各种肿瘤生物学行为的影响;运用慢病毒构建稳定转染差异基因的HCC细胞,通过裸鼠皮下成瘤实验,研究差异基因对HCC细胞体内成瘤能力的影响,明确这些差异基因对HCC的具体作用。四、基于细胞功能学结果,进一步运用表达谱芯片技术,通过Western免疫印迹实验,研究差异基因表达改变后HCC细胞中其它肿瘤关键蛋白或者通路的改变情况,明确这些差异基因对HCC的作用机制。结果一、人微纤丝关联蛋白 4(microfilament-associated protein 4,MFAP4)是HCC诊断和预后预警的分子标记物,在HCC中发挥抑癌作用1.表达谱芯片显示,mRNAMFAP4在HCC组织中显着低表达(P<0.05)。2.荧光定量PCR结果显示MFAP4的mRNA水平在HCC组织中表达水平明显低于对应癌旁组织(P<0.05)。3.Western免疫印迹结果显示MFAP4蛋白在HCC癌组织中表达水平明显低于对应癌旁组织(P<0.05)。4.酶联免疫吸附剂测定显示,和正常人相比,肝硬化和单纯肝癌病人血清中MFAP4表达都有显着降低(P<0.05),通过检测血清中MFAP4的浓度可有效鉴别诊断HCC患者与正常人、HCC患者与单纯肝硬化患者、HCC患者与单纯肝硬化患者;临床病理参数分析结果显示肝癌病人血清中MFAP4表达与性别有相关性(P=0.000),男性HCC患者血清MFAP4浓度明显高于女性HCC患者。5.免疫组化结果显示,MFAP4在HCC组织中表达显着下调(P<0.05)。在HCC的发生发展过程中,MFAP4表达量逐渐降低(P<0.05)。HCC组织中,MFAP4表达普遍降低;HCC癌旁组织中,MFAP4表达量越低,患者预后越差(P=0.027)。6.在肝癌Bel-7402细胞中上调MFAP4表达后,细胞增殖、侵袭和迁徙能力降低;细胞凋亡增加且有S期阻滞现象;细胞体内成瘤能力也降低。7.在肝癌Bel-7402细胞中上调MFAP4表达后,一些肿瘤相关蛋白的表达量会发生改变。p27、pRB、BCL-Xs、CDK4和CDK6蛋白表达量升高。二、长链非编码 RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)RP11 是 HCC的新型预后预警分子标记物和潜在治疗靶点,在HCC中发挥促癌作用1.表达谱芯片显示,lncRNARP11在HCC组织中显着高表达(P<0.05)。2.荧光定量PCR结果显示RP11在HCC组织中表达水平明显高于对应癌旁组织(P<0.05)。3.HCC组织中RP11的表达水平与肿瘤大小和组织学分化有明显相关性(P=0.017和P=0.020)。肿瘤越大、组织学分化越差,HCC组织中RP11表达量越高;HCC组织中RP11表达量越高,患者总体生存率也越低(P=0.019)4.下调RP11表达后,HCC细胞增殖、侵袭和迁徙能力显着减弱,细胞凋亡增加,细胞周期改变;上调RP11表达后,HCC细胞增值和体内成瘤能力显着增强。5.下调RP11后,HCC细胞CyclinE表达降低,活化Caspase-3和活化PARP表达升高。通过表达谱芯片筛选与进一步验证,发现下调RP11的表达可以激活HCC细胞的TGF-β/SMAD信号通路。结论一、MFAP4在HCC患者血清及HCC组织中都显着低表达。MFAP4在血清中的表达差异可有效鉴别诊断HCC患者与正常人、HCC患者与单纯肝硬化患者、HCC患者与单纯肝硬化患者;MFAP4在HCC癌旁组织中的表达水平越低,患者预后越差。MFAP4是HCC诊断和预后预警的新型分子标记物二、MFAP4是HCC的抑癌基因,上调MFAP4的表达可有效抑制HCC细胞的肿瘤生物学行为和体内成瘤能力;通过影响p27等肿瘤关键蛋白的表达,MFAP4发挥抑癌作用;叁、RP11在HCC组织表达水平显着高于对应癌旁组织,RP11在癌组织的表达水平越高,患者预后越差。RP11在HCC组织中的表达量还与肿瘤大小和分化程度有明显相关性。RP11是HCC的潜在预后预警分子标记物;四、RP11是HCC的促癌基因,在HCC细胞中下调RP11的表达水平可显着抑制HCC细胞肿瘤生物学行为,在HCC细胞中上调RP11的表达水平可显着促进HCC细胞肿瘤生物学行为和体内成瘤能力,是HCC的潜在治疗靶点;RP11可以影响CyclinE、Caspase-3等肿瘤关键蛋白的表达,下调的RP11可以激活TGF-β/SMAD信号通路(本文来源于《浙江大学》期刊2017-09-01）
陶爱芬,谢丽丽,祁建民,方平平,林荔辉[7]（2017）在《与黄麻炭疽病抗性相关的SSR分子标记筛选及新型SNP标记开发》一文中研究指出为筛选出与黄麻炭疽病抗性相关的新型分子标记,本研究在前期黄麻炭疽病抗性QTL定位结果的基础上,开发出7对可能与黄麻炭疽病抗性基因连锁的新型SNP标记.同时,在前期对重组自交系群体进行田间炭疽病抗性鉴定的基础上,分别以6个抗病株系和6个感病株系的基因组DNA构建了抗池和感池.以抗、感池的DNA为模板,对36对SSR引物和7对SNP引物进行了多态性筛选,从中初步筛选出具有多态性的SSR引物15对,SNP引物2对.继而,分别以12份抗病和感病株系的基因组DNA为模板,对上述具有多态性的SSR和SNP引物进行进一步验证,最终获得1对与黄麻炭疽病抗性相关的SNP标记,其产生的多态性片段大小约为600 bp.(本文来源于《福建农林大学学报(自然科学版)》期刊2017年01期）
范惠玲,孙万仓,白生文,张芬琴,雷玉明[8]（2016）在《一种基于花器形态特征、育性、恢保关系和分子标记的新型甘蓝型油菜雄性不育材料的鉴定和分类（英文）》一文中研究指出细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)材料的创制已成为油菜(Brassica napus)遗传改良和杂种优势利用的有效手段。通过甘蓝型油菜品种Pfnergy(PF)与陇油2号(Longyou 2)的杂交,在后代中发现了植物学形态特征不同于油菜品种玻里马(Polima cytoplasmic male sterility,Pol CMS)的雄性不育材料PL(Pfnergy×Longyou 2)CMS。为了明确PL CMS不育系是否为一种不同于现有雄性不育系的新型不育材料,本研究以Pol CMS和Ogura不育系(Ogura cytoplasmic male sterility,Ogu CMS)为对照,分别从花器表型特征、不育性、恢保关系和DNA分子标记这4个方面进行了对比分析。结果表明,雄性不育系PL CMS的植物学形态特征与Ogu CMS和Pol CMS的不同。PL CMS的不育株率和不育度都达到了100%,而Ogu CMS的不育株率和不育度分别是98.5%和99.71%,Pol 5A的不育株率和不育度分别是93.84%和99.36%。PL CMS的恢保关系与Pol CMS、Ogu CMS的完全不同。Pol CMS的保持系和恢复系都是PL CMS和Ogu CMS的保持系,而PL CMS的恢复系是Pol CMS和Ogu CMS的保持系,且Ebolite-04冬134和Ebleme-04冬151仅是PL CMS的恢复系。mt DNA的随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)标记结果表明,研究中所用的3类不育系被聚为3类。研究表明,PL CMS为一种不同于Pol CMS和Ogu CMS的新型不育系,这一结果有助于扩大油菜种质资源的类型,避免不育材料的单一化和遗传脆弱性。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2016年06期）
张伟[9]（2016）在《系列~(68)Ga标记新型分子探针PET/CT显像初探》一文中研究指出研究内容一68Ga-BNOTA-PRGD2和18F-FDG PET/CT对术前胶质瘤分级的比较研究研究目的：胶质瘤的术前分级及治疗策略仍然面临诸多挑战。叁肽序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp, RGD)能够特异性的识别胶质瘤细胞中的整合素受体表达。本研究将比较68 镓-1,4,7-叁氮杂环壬烷-1,4,7-叁乙酸-(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)2(68Ga-SCN-Bn-1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacetic acid-PEG3-E[c(RGDyK)]2,68Ga-BNOTA-PRGD2,简称68Ga-PRGD2)和18F-FDG PET/CT对术前胶质瘤分级的价值。研究方法：前瞻性入组29例胶质瘤患者,术前常规行68Ga-PRGD2和18F-FDG PET/CT显像。测量肿瘤SUVmax及肿瘤／本底(T/N)比值。采用Spearman等级相关性检验比较两种PET/CT显像方法同最终手术或活检病理的一致性。受试者工作曲线(ROC)分析两种方法对术前分级的诊断效能。通过获得两种方法的最佳截断值,并对两种方法术前分级的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性做比较。研究结果：29例患者中,最终经手术和活检证实有7例低级别胶质瘤(WHO分级Ⅰ和Ⅱ级),22例高级别胶质瘤(WHO分级Ⅲ和Ⅳ级)。68Ga-PRGD2 PET/CT所有参数均能很好的区分低级别和高级别胶质瘤(其中SUVmax的P值=0.04,T/N的P值=0.014)。FDG PET/CT对于区分低级别和高级别胶质瘤效能欠佳(其中SUVmax的P值=0.129,T/N的P值=0.067)。ROC曲线研究表明,68Ga-PRGD2 PET/CT比FDG PET/CT更好地区分了胶质瘤的级别,SUVmax曲线下面积分别为0.883与0.795,T/N比值为0.812与0.805。根据ROC曲线获得的截断值,FDG PET/CT对预测胶质瘤分级的敏感性均高于68Ga-PRGD2 PET/CT (SUVmax分别为86.4%与77.3%,T/N比值分别为90.9%与72.7%)。但是68Ga-PRGD2 PET/CT特异性较FDGPET/CT高(SUVmax分别为85.7%与71.4%,T/N比值分别为100%与71.4%)。线性回归分析显像FDG PET/CT (SUVmax:r=0.64, P<0.001; T/N:r=0.72, P<0.001)和68Ga-PRGD2 PET/CT(SUVmax:r=0.74,P<0.001; T/N:r=0.55,P=0.002)均与WHO分级显着相关。研究结论：68Ga-PRGD2 PET/CT是一种无创、有效的区分胶质瘤边界及术前分级的显像方法。研究内容二68Ga-NEB在淋巴系统疾病的初步临床应用研究研究目的验证68Ga-NEB作为一种全新的正电子淋巴显像剂对各种淋巴系统疾病的评估价值。研究方法将合成的68Ga-NEB注入13例怀疑不同种类淋巴系统疾病的患者皮下,采用PET/CT显像模式,并与99mTc-SC淋巴闪烁显像相比较,观察二者对淋巴系统疾病的诊断效能。研究结果68Ga-NEB PET/CT能够清晰的显示所有病人淋巴系统疾病的异常。与99mTc-SC淋巴闪烁显像相比较,68Ga-NEB PET/CT能够使38.5%(5/13)的患者观察到额外的淋巴系统异常信息。结论68Ga-NEB PET/CT能够更快、更准确地显示淋巴系统疾病的异常,是一种具有广阔发展前景的可替代常规99mTc-SC淋巴闪烁显像的新型正电子淋巴显像方法。研究内容叁68Ga-DOTATATE在小细胞肺癌中的应用初探研究目的：小细胞肺癌(Small cell lung cancer, SCLC)容易出现广泛转移,并且肿瘤的分期对于治疗决策的影响非常重要。但是目前仍然没有一个标准的方法来评估其分期。SCLC高表达生长抑素受体(somatostatin receptor, SSTR),用68Ga标 记 的1,4,7,10-tetraazacyclododecane-N,N',N",N'"-tetraacetic-acid-D-Phe1,Tyr3-octreotate (DOTATATE) (68Ga-DOTATATE,简称68Ga-TATE)是一种较新的用于PET研究的SSTR显像剂,能特异地被体内含SSTR-2的组织摄取。本研究的目的是比较68Ga-DOTATATE与18F-FDG PET/CT对SCLC病变的探测效能。研究方法：12例活检证实为SCLC的患者同时行18F-FDG及68Ga-DOTATATE PET/CT检查。两种显像剂均用于评价肿瘤原发灶及远处病变。以其他显像方式(如CT、MRI或者后续的PET/CT)及临床资料作为判断标准。研究结果：12例SCLC患者原发灶在18F-FDG及68Ga-DOTATATE PET/CT上均能显示。对于骨骼病变,50%(6/12)患者在68Ga-TATE PET/CT上有显示,但是这6例患者中,有2例患者在18F-FDG PET/CT上显示为阴性。68Ga-DOTATATE PET/CT显示为骨骼摄取阴性的患者,18F-FDG PET/CT上同样为阴性。18F-FDG及68Ga-DOTATATE PET/CT对于SCLC骨病变的探测存在统计学差异(P=0.001)。但是18F-FDG及68Ga-DOTATATE PET/CT对于原发灶(P=0.052)及淋巴结病变(P=0.387)探测没有统计学差异。研究结论：68Ga-TATE或许比18F-FDG PET/CT对于SCLC骨骼病变的探测更具灵敏性,是一种重要的对于SCLC的分期补充方法。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2016-04-01）
马欢,唐禹,杨远友,刘宁,廖家莉[10]（2016）在《~(131)I标记新型小分子肽VP2》一文中研究指出本文通过双功能偶联剂5-(叁正丁基锡)-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPC)将131I标记到小分子融合多肽VP2上,研究了131I标记多肽VP2的体内外稳定性及在正常小鼠体内的代谢与分布。结果表明,该标记药物室温下放置48h后放化纯度仍可达97%,其在小鼠体内可通过胃肠道快速代谢,在甲状腺的摄取较低。用间接标记法得到的131I-SPC-VP2在体内外有良好的稳定性。(本文来源于《同位素》期刊2016年01期）
新型分子标记论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究首次开发出了一种新型功能型分子标记技术-基于外显子扩增多态性(exon based amplifled polymorphism,EBAP),该技术根据真核生物基因组中基因外显子区域富含GC设计并合成单引物,提取样品基因组DNA作为模板,利用设计好的单引物和所提取的样品DNA模板在常规PCR反应体系和PCR反应程序下(退火温度为50℃)进行扩增,扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离,检测单引物在基因组基因外显子区域中的两个结合位点间的多态性;其中,所用单引物的序列长度为17bp,5′端的6个碱基填充序列为富含AT碱基的限制性内切酶酶切位点序列或富含AT碱基的随机序列,中间核心区序列是由8个GC碱基随机排列组成,这14个碱基组成核心序列,最后3′端是3个选择性碱基。基于此引物设计原理,设计了36条单引物并应用于花生(24份)、水稻(16份)、玉米(11份)、甘蔗(24份)、马铃薯(9份)、木薯(5份)、菜心(16份)等多种农作物的遗传多样性分析和DNA多态性检测上,甚至在不同真菌上也得到了成功的扩增,该技术具有操作简单高效、扩增效率高、扩增条带丰富、扩增产生的多态性丰富、扩增结果可靠、扩增重复性好、引物设计简单、引物通用性强等特点,该技术已获授权国家发明专利2项。这些为下一步花生及其它作物种质资源的分子精准鉴定和评价提供了一定技术支持,值得大力推广应用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
新型分子标记论文参考文献
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标签：基于内含子扩增多态性; 花生; 功能型分子标记技术; 内含子;