本文主要研究内容
作者吴会杰（2019）在《SLCCNV和MNSV侵染性克隆的构建及致病因子鉴定》一文中研究指出：甜瓜（Cucumis melo）是我国重要的经济作物之一。近年来,新突发病毒病严重影响甜瓜产业发展。中国南瓜曲叶病毒（squash leaf curl China virus）和甜瓜坏死斑点病毒（melon necrotic spot virus）是中国新近报道为害甜瓜的种。为阐明两种病毒的致病机理,构建了SLCCNV和MNSV两种甜瓜病毒的侵染性克隆,分析了病毒编码的病毒致病因子,以期为防控该病毒病奠定基础。目前取得以下结果:1、鉴定了甜瓜是SLCCNV的新寄主,构建了SLCCNV侵染性克隆并进行了烟粉虱传染试验。测定了SLCCNV-HN全基因组序列并进行了系统进化分析,结果表明SLCCNV-HN甜瓜分离物与SLCCNV-Hn南瓜分离物、SLCCNV-Hn61和SLCCNV-SY西葫芦分离物聚为一类。构建了SLCCNV-HN侵染性克隆载体,接种甜瓜后植株矮化、叶片皱缩。进行了烟粉虱传染试验,发现烟粉虱接种的植株表现出与接种野生型一致的症状。2、明确了AC5基因是SLCCNV的致病因子,证实了AC5是SLCCNV编码的沉默抑制子,其沉默抑制活性与核定位信号相关。将表达AC5基因的PVX异源载体接种本氏烟后叶片表现枯斑、皱缩,表明AC5是致病因子并激发了植物的过敏性坏死反应,DAB染色说明过敏性坏死反应与H2O2的积累相关。不仅如此,利用SLCCNV侵染性克隆定点突变AC5基因,进一步证实了AC5基因是该病毒的致病因子。利用p35S-AC5与p35S-GFP共浸润接种16c本氏烟,接种5 d后接种部位出现明显的绿色荧光信号,表明了AC5基因可抑制局部沉默。利用p35S-GFP、p35S-dsGFP和p35S-AC5共浸润野生本氏烟,接种5 d后在接种部位未发现绿色荧光信号,表明AC5不抑制双链GFP（IR-PTGS）诱导的沉默。在AC5基因ORF之前引入终止密码子,明确了AC5是在蛋白水平发挥作用。利用AC5核定位信号缺失突变体与p35S-GFP共浸润16c本氏烟,发现该突变体失去了沉默抑制作用,表明AC5蛋白的核定位信号与沉默抑制活性相关。3、证实了p42是MNSV的致病因子,与寄主因子3-羟基异丁酸脱氢酶（3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase-like 1,3HID1）互作。将表达p42基因的PVX异源载体接种本氏烟后植株新叶枯死,证实p42是MNSV的致病因子。构建了MNSV侵染性克隆,在此基础上构建了携带GFP的MNSV侵染性克隆载体。在MNSV侵染性克隆的基础上进行了p42基因突变,发现p42的R-domain和S-domain是致病功能域。此外,构建了受MNSV侵染的甜瓜cDNA文库,筛选到与p42互作的6个寄主因子,经酵母双杂交、BIFC及共定位一对一验证,表明3HID1与p42互作,本研究为揭示p42与寄主互作的机制奠定了基础。
Abstract
tian gua （Cucumis melo）shi wo guo chong yao de jing ji zuo wu zhi yi 。jin nian lai ,xin tu fa bing du bing yan chong ying xiang tian gua chan ye fa zhan 。zhong guo na gua qu xie bing du （squash leaf curl China virus）he tian gua huai si ban dian bing du （melon necrotic spot virus）shi zhong guo xin jin bao dao wei hai tian gua de chong 。wei chan ming liang chong bing du de zhi bing ji li ,gou jian le SLCCNVhe MNSVliang chong tian gua bing du de qin ran xing ke long ,fen xi le bing du bian ma de bing du zhi bing yin zi ,yi ji wei fang kong gai bing du bing dian ding ji chu 。mu qian qu de yi xia jie guo :1、jian ding le tian gua shi SLCCNVde xin ji zhu ,gou jian le SLCCNVqin ran xing ke long bing jin hang le yan fen shi chuan ran shi yan 。ce ding le SLCCNV-HNquan ji yin zu xu lie bing jin hang le ji tong jin hua fen xi ,jie guo biao ming SLCCNV-HNtian gua fen li wu yu SLCCNV-Hnna gua fen li wu 、SLCCNV-Hn61he SLCCNV-SYxi hu lu fen li wu ju wei yi lei 。gou jian le SLCCNV-HNqin ran xing ke long zai ti ,jie chong tian gua hou zhi zhu ai hua 、xie pian zhou su 。jin hang le yan fen shi chuan ran shi yan ,fa xian yan fen shi jie chong de zhi zhu biao xian chu yu jie chong ye sheng xing yi zhi de zheng zhuang 。2、ming que le AC5ji yin shi SLCCNVde zhi bing yin zi ,zheng shi le AC5shi SLCCNVbian ma de chen mo yi zhi zi ,ji chen mo yi zhi huo xing yu he ding wei xin hao xiang guan 。jiang biao da AC5ji yin de PVXyi yuan zai ti jie chong ben shi yan hou xie pian biao xian ku ban 、zhou su ,biao ming AC5shi zhi bing yin zi bing ji fa le zhi wu de guo min xing huai si fan ying ,DABran se shui ming guo min xing huai si fan ying yu H2O2de ji lei xiang guan 。bu jin ru ci ,li yong SLCCNVqin ran xing ke long ding dian tu bian AC5ji yin ,jin yi bu zheng shi le AC5ji yin shi gai bing du de zhi bing yin zi 。li yong p35S-AC5yu p35S-GFPgong jin run jie chong 16cben shi yan ,jie chong 5 dhou jie chong bu wei chu xian ming xian de lu se ying guang xin hao ,biao ming le AC5ji yin ke yi zhi ju bu chen mo 。li yong p35S-GFP、p35S-dsGFPhe p35S-AC5gong jin run ye sheng ben shi yan ,jie chong 5 dhou zai jie chong bu wei wei fa xian lu se ying guang xin hao ,biao ming AC5bu yi zhi shuang lian GFP（IR-PTGS）you dao de chen mo 。zai AC5ji yin ORFzhi qian yin ru zhong zhi mi ma zi ,ming que le AC5shi zai dan bai shui ping fa hui zuo yong 。li yong AC5he ding wei xin hao que shi tu bian ti yu p35S-GFPgong jin run 16cben shi yan ,fa xian gai tu bian ti shi qu le chen mo yi zhi zuo yong ,biao ming AC5dan bai de he ding wei xin hao yu chen mo yi zhi huo xing xiang guan 。3、zheng shi le p42shi MNSVde zhi bing yin zi ,yu ji zhu yin zi 3-qiang ji yi ding suan tuo qing mei （3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase-like 1,3HID1）hu zuo 。jiang biao da p42ji yin de PVXyi yuan zai ti jie chong ben shi yan hou zhi zhu xin xie ku si ,zheng shi p42shi MNSVde zhi bing yin zi 。gou jian le MNSVqin ran xing ke long ,zai ci ji chu shang gou jian le xie dai GFPde MNSVqin ran xing ke long zai ti 。zai MNSVqin ran xing ke long de ji chu shang jin hang le p42ji yin tu bian ,fa xian p42de R-domainhe S-domainshi zhi bing gong neng yu 。ci wai ,gou jian le shou MNSVqin ran de tian gua cDNAwen ku ,shai shua dao yu p42hu zuo de 6ge ji zhu yin zi ,jing jiao mu shuang za jiao 、BIFCji gong ding wei yi dui yi yan zheng ,biao ming 3HID1yu p42hu zuo ,ben yan jiu wei jie shi p42yu ji zhu hu zuo de ji zhi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华中农业大学的吴会杰，发表于刊物华中农业大学2019-07-15论文，是一篇关于甜瓜病毒病论文,中国南瓜曲叶病毒论文,甜瓜坏死斑点病毒论文,病毒侵染性克隆论文,致病因子论文,华中农业大学2019-07-15论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华中农业大学2019-07-15论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：甜瓜病毒病论文; 中国南瓜曲叶病毒论文; 甜瓜坏死斑点病毒论文; 病毒侵染性克隆论文; 致病因子论文; 华中农业大学2019-07-15论文;