导读:本文包含了稳定表达细胞株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:大电导钙激活钾通道,内向整流通道Kir4.1,肾小管,钾离子排泄
稳定表达细胞株论文文献综述
应思琦,张娅,郭琴,杨阳,刘爽[1]（2019）在《稳定表达大电导钙激活钾通道α亚基的细胞株构建及其排钾的分子机制研究》一文中研究指出目的·构建稳定表达大电导钙激活钾通道(large conductance Ca~(2+)-activated K+channel, MaxiK或BK)α亚基的HEK293细胞株,探讨BKα通道的排钾机制。方法·构建带Myc标签的BKα质粒,采用脂质体转染方法将BKα质粒转染至HEK293细胞系中,用药物G418筛选阳性单克隆细胞株,分别以Western blotting和细胞免疫荧光法检测BKα蛋白表达及定位。将稳定表达BKα蛋白的HEK293细胞系培养于玻片,形成单细胞层,分别给予5 mmol/L和100 mmol/L钾离子浓度的浴液,膜片钳单通道记录BKα的离子流。内向整流性钾通道Kir4.1的野生型和突变型(G77R、G130R、C140R和R297C)分别转染稳定转染BKα的HEK293细胞后提取膜蛋白,Western blotting检测BKα的表达情况。结果·转染后的HEK293细胞中挑选表达BKα通道的细胞株,细胞免疫荧光验证了BKα通道表达及其在细胞膜上表达。在给予100 mmol/L钾离子浓度浴液的情况下,BKα的通道开放频率(NPo)快速增加。Kir4.1的野生型和突变型分别转染稳定转染BKα的HEK293细胞后提取膜蛋白,Western blotting检测发现转染Kir4.1突变体质粒的HEK293细胞的BKα表达较野生型增加(P<0.05)。结论·成功地建立了稳定表达BKα的HEK293细胞株,BKα通道可以被高钾溶液激活;BKα通道的膜表达水平与Kir4.1通道功能状态有关,可能是由于突变的Kir4.1通道导致细胞去极化,从而激活BKα。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2019年10期）
林志坚,肖斌,孙朝晖,李林海[2]（2019）在《稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定》一文中研究指出目的构建重组人源GRM4基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法 PCR扩增GRM4基因片段,扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒载体表达质粒中,构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4,同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒p MD2. G、ps PAX2共转染293T包装细胞中,24 h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态; 48 h后收集病毒上清液,以病毒上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达GRM4蛋白的细胞株;采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞系中GRM4基因的转录及蛋白表达量。结果 DNA测序证实重组慢病毒质粒构建成功;重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后,获得表达GRM4的重组慢病毒;乳腺癌MDA-MB-231细胞经慢病毒感染、药物筛选后,可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光;实时荧光定量PCR和Western blot结果表明稳定表达株中GRM4表达水平显着高于对照组(P <0. 01)。结论成功构建了重组GRM4基因的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达GRM4的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确GRM4在乳腺癌的发生发展中的作用机制奠定了基础。(本文来源于《实用癌症杂志》期刊2019年07期）
周佳丽,吴艳阳,罗玉霜,袁玉菊,刘明俊[3]（2019）在《稳定表达RFP-GFP-LC3的大鼠胰岛β细胞株的构建》一文中研究指出为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降, P62蛋白表达量以及S6K磷酸化水平降低,加入10μmol/L氯喹部分抑制自噬后, GFP/RFP荧光点比值回升。以上结果表明稳定表达RFP-GFP-LC3的RIN-m5f构建成功,并能够以简单的检测方式准确表达自噬全过程,为自噬在糖尿病药物机理方面的研究奠定了基础。(本文来源于《生命科学研究》期刊2019年02期）
陈敏华,宁晓敏,李冬锟,钱莉[4]（2019）在《构建稳定表达小鼠RAE1ε的B16F10细胞株》一文中研究指出目的 通过转染及流式细胞术筛选获得稳定表达小鼠RAE1ε分子的B16F10细胞株。方法 将本研究团队前期构建的含有小鼠RAE1ε基因的真核表达载体通过脂质体法转染B16F10细胞,经流式细胞仪(flow cytometry,FCM)筛选后,建立稳定高表达的B16F10细胞株,将该细胞株与NK细胞共培养后,检测IFN-γ的分泌情况。结果 建立了稳定表达RAE1ε基因的B16F10细胞株,该细胞株上的RAE1ε具有刺激NK细胞高分泌IFN-γ的功能。结论 获得了稳定表达RAE1ε分子的B16F10细胞株,为后续研究奠定了物质基础。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2019年07期）
李昂,伦新新,陈园坤,杨甜,杨安钢[5]（2019）在《构建稳定表达病毒相关RNA的真核细胞株及其对抗肿瘤免疫促凋亡分子的影响》一文中研究指出目的:构建稳定表达病毒相关RNA(virus-associated RNA,VA RNA)的293F-VA细胞株,并探讨其对靶向HER2阳性肿瘤的免疫促凋亡分子表达水平的影响。方法:采用PCR方法,扩增含VA RNA的功能序列,克隆入Piggy Bac转座系统质粒,将VA RNA编码序列转入293F细胞中,经过抗性筛选和流式细胞仪鉴定,得到293F-VA细胞株。将萤光素酶、红色荧光蛋白及免疫促凋亡分子编码质粒分别转入293F-VA细胞株或亲本293F细胞株,通过萤光素酶活力检测和Western Blot实验,比较两种细胞株对外源目的蛋白表达水平的影响。结果:成功构建了Piggy Bac-VA质粒。共转染Piggy Bac-VA质粒可以明显提高细胞内Fluc蛋白的表达水平(P <0. 05)。VA RNA编码序列通过Piggy Bac转座系统转入293F细胞中,获得293F-VA细胞株。与293F亲本细胞相比,293F-VA细胞株将萤火虫萤光素酶Fluc蛋白的表达水平提高363. 9%(P<0. 05);对海肾萤光素酶Rluc蛋白及红色荧光蛋白m Cherry的表达均表现出3倍左右的提高(P <0. 05)。293F-VA细胞株不仅能够提高免疫促凋亡分子e23-Fc-Fdt-t Bid在细胞内的表达水平,并且显着增加目的蛋白向细胞外分泌的水平,较293F亲本细胞提高4. 2倍(P <0. 05)。结论:建立了稳定表达VA RNA的细胞株293F-VA,该细胞株能够显着提高抗肿瘤免疫促凋亡分子的表达水平。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年03期）
陆睿,彭誉,刘亦恒,马志健,付媛[6]（2018）在《脑源性神经营养因子过表达慢病毒载体及稳定表达脂肪干细胞株的建立》一文中研究指出目的:构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)的重组慢病毒载体,并转染构建高表达BDNF的小鼠脂肪干细胞株。方法:构建pHBLV-CMVIE-BDNF-ZsGreen-Puro慢病毒载体,测序鉴定载体构建情况,转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染情况。收集到的病毒上清转染小鼠脂肪干细胞,Real-time PCR检测各组细胞BDNF mRNA水平,Western blotting法检测细胞中BDNF表达。结果:经测序鉴定成功构建了pHBLV-CMVIE-BDNF-ZsGreen-Puro慢病毒载体。小鼠脂肪干细胞内BDNF mRNA水平及蛋白表达升高。结论:本研究成功构建了BDNF慢病毒载体,建立了BDNF稳定表达的小鼠脂肪干细胞株,为BDNF基因修饰的脂肪干细胞在AD治疗的潜在应用打下基础。(本文来源于《海南医学院学报》期刊2018年24期）
陆琤,周晨辰,张鹏飞,张硌,张鹏[7]（2018）在《稳定表达人巨噬细胞集落刺激因子的L929细胞株的建立》一文中研究指出目的:建立稳定表达人巨噬细胞集落刺激因子(hMCSF)的L929细胞株,用于体外培养人源巨噬细胞。方法:采用慢病毒感染的方法将载体质粒pCDH-hMCSF-HA导入L929细胞中,通过荧光显微镜观察病毒感染情况,利用免疫印迹实验检测细胞及培养上清中hMCSF的表达。结果:慢病毒感染的方法使L929细胞株能够稳定表达hMCSF,并已稳定传代。结论:采用慢病毒重组系统能够成功建立稳定表达hMCSF的L929细胞株,并高效表达hMCSF,为体外培养人源的巨噬细胞提供高效途径。(本文来源于《中国医学装备》期刊2018年11期）
吴伊雪,肖斌,孙朝晖,陈丽丹,黄晓燕[8]（2018）在《稳定表达GRIK3乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选及鉴定》一文中研究指出目的构建稳定表达GRIK3的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为研究GRIK3在乳腺癌中的生物学功能奠定基础。方法以非病毒质粒3×Flag-GRIK3为模板,PCR扩增目的基因,将目的基因与慢病毒载体表达质粒重组连接,重组质粒、包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染293T包装细胞,将获得的重组慢病毒感染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,连续使用嘌呤霉素7天筛选稳定转染的细胞株。在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP的表达情况以鉴定稳定表达目的基因细胞株,采用QPCR和Western blotting分别检测稳定表达细胞株及空载体对照细胞中GRIK3的表达。结果 PCR成功扩增出目的基因,扩增后产物与慢病毒载体成功连接,连接后的重组慢病毒载体经DNA测序鉴定插入基因序列正确。重组慢病毒质粒、包装质粒psPAX2以及包膜质粒Pmd2.G成功转染293T细胞,收集的慢病毒能够成功转染MDA-MB-231细胞,并且在显微镜下能够观察到稳定表达GRIK3 MDA-MB-231细胞中明亮的绿色荧光。QPCR结果显示,GRIK3 mRNA在重组MDA-MB-231细胞中的表达水平为5. 443±0. 459,显着高于对照组的1. 0±0. 152,差异有统计学意义(P<0. 01)。Western blotting结果显示,GRIK3蛋白在重组MDA-MB-231细胞中的表达水平为2. 502±0. 092,高于对照组的0. 653±0. 032,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论成功构建了重组GRIK3慢病毒载体,并筛选出稳定表达GRIK3蛋白的MDA-MB-231细胞株,为进一步探索GRIK3在乳腺癌发生、发展中的机制奠定了基础。(本文来源于《临床肿瘤学杂志》期刊2018年11期）
张永军,李静静,郑典鹏,李金龙[9]（2018）在《慢病毒介导稳定表达MCM7、CDC6细胞株的建立》一文中研究指出[目的]构建包装微小染色体维持蛋白7(Mcm7)、细胞分裂周期蛋白6(Cdc6)过表达慢病毒,并筛选Hep G2和LO2稳定过表达细胞株。[方法]通过PCR获得人的mcm7、cdc6基因,采用双酶切法构建重组慢病毒过表达载体。慢病毒过表达载体与ps PAX2、p MD2. G包装质粒共转染293T细胞后包装出慢病毒。慢病毒感染Hep G2和LO2后,通过有限稀释法筛选获得稳转细胞株,再经q PCR以及Western Blot鉴定过表达效果,FACS检测周期分布。[结果]成功构建并包装出了慢病毒,慢病毒滴度为1. 3×106TU/m L,感染Hep G2和LO2细胞后筛选获得稳转细胞株,并从mRNA和蛋白水平验证,Mcm7稳转株过表达效率超过0. 4倍,Cdc6稳转株过表达效率超12倍,稳转株周期分布与母代细胞没有显着差异(P> 0. 05)。[结论]Mcm7、Cdc6稳转株构建成功,稳转株过表达效果明显,Mcm7、Cdc6的稳定过表达没有扰乱细胞周期进程。(本文来源于《生物技术》期刊2018年05期）
温贵兰,张升波,李昌红,徐丽[10]（2018）在《稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP_2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究》一文中研究指出为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP_2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP_2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5'Flag-Nsp_2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧光(IFA)与western blot方法进行鉴定,获得了1株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,命名为NSP_2-11C1-HEK293;将TNF-α作用于该细胞株,采用IFA分析稳转细胞内NSP_2对p65入核的影响。IFA结果显示NSP_2主要在细胞浆中围绕细胞核表达,在细胞中的表达率达95%以上;western blot结果显示出现120 ku的蛋白条带,与预期相符。结果表明本研究获得了一株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,在该稳转细胞内NSP_2对p65的入核并没有影响,这为进一步研究揭示PRRSV的致病机理奠定基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年09期）
稳定表达细胞株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建重组人源GRM4基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法 PCR扩增GRM4基因片段,扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒载体表达质粒中,构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4,同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒p MD2. G、ps PAX2共转染293T包装细胞中,24 h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态; 48 h后收集病毒上清液,以病毒上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达GRM4蛋白的细胞株;采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞系中GRM4基因的转录及蛋白表达量。结果 DNA测序证实重组慢病毒质粒构建成功;重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后,获得表达GRM4的重组慢病毒;乳腺癌MDA-MB-231细胞经慢病毒感染、药物筛选后,可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光;实时荧光定量PCR和Western blot结果表明稳定表达株中GRM4表达水平显着高于对照组(P <0. 01)。结论成功构建了重组GRM4基因的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达GRM4的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确GRM4在乳腺癌的发生发展中的作用机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
稳定表达细胞株论文参考文献
[1].应思琦,张娅,郭琴,杨阳,刘爽.稳定表达大电导钙激活钾通道α亚基的细胞株构建及其排钾的分子机制研究[J].上海交通大学学报(医学版).2019
[2].林志坚,肖斌,孙朝晖,李林海.稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定[J].实用癌症杂志.2019
[3].周佳丽,吴艳阳,罗玉霜,袁玉菊,刘明俊.稳定表达RFP-GFP-LC3的大鼠胰岛β细胞株的构建[J].生命科学研究.2019
[4].陈敏华,宁晓敏,李冬锟,钱莉.构建稳定表达小鼠RAE1ε的B16F10细胞株[J].齐齐哈尔医学院学报.2019
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[7].陆琤,周晨辰,张鹏飞,张硌,张鹏.稳定表达人巨噬细胞集落刺激因子的L929细胞株的建立[J].中国医学装备.2018
[8].吴伊雪,肖斌,孙朝晖,陈丽丹,黄晓燕.稳定表达GRIK3乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选及鉴定[J].临床肿瘤学杂志.2018
[9].张永军,李静静,郑典鹏,李金龙.慢病毒介导稳定表达MCM7、CDC6细胞株的建立[J].生物技术.2018
[10].温贵兰,张升波,李昌红,徐丽.稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP_2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究[J].中国预防兽医学报.2018
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