本文主要研究内容
作者王宁（2019）在《大豆抱囊线虫（Heterodera glycines）溶菌酶基因克隆及功能初步分析》一文中研究指出：大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)是大豆上最重要的土传病原物之一。线虫在发育过程中经常会受到病原菌的威胁。为了抵御病原菌的危害,线虫往往会表达抗菌蛋白质,如溶菌酶,但是线虫对病原菌的具体防卫机制至今还不明确。溶菌酶是线虫中重要的防御酶,对植物线虫溶菌酶基因的功能研究,有助于解释线虫的具体防御机制,为植物线虫的防控提供理论基础。本研究通过筛选转录组文库,从大豆孢囊线虫中分离了3个溶菌酶基因;采用原位杂交技术确定溶菌酶基因在大豆孢囊线虫中的表达部位;采用qPCR方法检测溶菌酶基因在参与线虫防御作用中的转录特性,分析细菌感染线虫后线虫三个溶菌酶基因的表达模式;通过对溶菌酶基因RNA干扰后的大豆孢囊线虫放置三种细菌中1-7天存活率的测定来对溶菌酶的防御功能进行初步研究;采用计算菌落数、浊度测定法两种方法测定体外表达的溶菌酶蛋白对细菌的抑制作用。原位杂交结果表明Hg23324、Hg21698和Hg17337这3个溶菌酶基因均在肠细胞中表达。基因表达量变化分析结果表明,在枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌诱导下,Hg23324基因表达显著上调。在金黄色葡萄球菌诱导下Hg21698和Hg17337基因表达显著上调。由此推测溶菌酶参与了线虫的防御作用。采用RNA干扰技术对溶菌酶的功能进行了初步的分析,经过dsRNA浸泡后,通过qPCR技术检测溶菌酶基因转录水平明显下降。线虫存活率的检测实验表明线虫溶菌酶基因Hg23324干扰后,线虫在枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低;溶菌酶基因Hg17337干扰后,线虫在金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低;溶菌酶基因Hg21698干扰后,线虫在金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低。推测是溶菌酶基因的干扰使得线虫免疫系统受到影响,对细菌感染变得敏感,存活率下降,以上表明溶菌酶可以发挥特定的作用来帮助线虫抵抗细菌。烟草瞬时表达溶菌酶基因后提取烟草蛋白,通过计算菌落数、浊度测定法两种方法测定粗提蛋白对细菌的抑制作用,结果表明:Hg23324重组蛋白可以抑制枯草芽孢杆菌;Hg17337重组蛋白可以抑制金黄色葡萄球菌;Hg23324和Hg21698重组蛋白可以抑制苏云金芽孢杆菌。从这些结果可知溶菌酶可在体外发挥作用。本研究首次分离了大豆孢囊线虫的溶菌酶基因,详细研究了其在线虫抵抗细菌中的表达水平和抑菌功能,为线虫防御机理的研究提供参考,为线虫生物防治机理的研究提供更好的方向。
Abstract
da dou bao nang xian chong (Heterodera glycines)shi da dou shang zui chong yao de tu chuan bing yuan wu zhi yi 。xian chong zai fa yo guo cheng zhong jing chang hui shou dao bing yuan jun de wei xie 。wei le di yu bing yuan jun de wei hai ,xian chong wang wang hui biao da kang jun dan bai zhi ,ru rong jun mei ,dan shi xian chong dui bing yuan jun de ju ti fang wei ji zhi zhi jin hai bu ming que 。rong jun mei shi xian chong zhong chong yao de fang yu mei ,dui zhi wu xian chong rong jun mei ji yin de gong neng yan jiu ,you zhu yu jie shi xian chong de ju ti fang yu ji zhi ,wei zhi wu xian chong de fang kong di gong li lun ji chu 。ben yan jiu tong guo shai shua zhuai lu zu wen ku ,cong da dou bao nang xian chong zhong fen li le 3ge rong jun mei ji yin ;cai yong yuan wei za jiao ji shu que ding rong jun mei ji yin zai da dou bao nang xian chong zhong de biao da bu wei ;cai yong qPCRfang fa jian ce rong jun mei ji yin zai can yu xian chong fang yu zuo yong zhong de zhuai lu te xing ,fen xi xi jun gan ran xian chong hou xian chong san ge rong jun mei ji yin de biao da mo shi ;tong guo dui rong jun mei ji yin RNAgan rao hou de da dou bao nang xian chong fang zhi san chong xi jun zhong 1-7tian cun huo lv de ce ding lai dui rong jun mei de fang yu gong neng jin hang chu bu yan jiu ;cai yong ji suan jun la shu 、zhuo du ce ding fa liang chong fang fa ce ding ti wai biao da de rong jun mei dan bai dui xi jun de yi zhi zuo yong 。yuan wei za jiao jie guo biao ming Hg23324、Hg21698he Hg17337zhe 3ge rong jun mei ji yin jun zai chang xi bao zhong biao da 。ji yin biao da liang bian hua fen xi jie guo biao ming ,zai ku cao ya bao gan jun he su yun jin ya bao gan jun you dao xia ,Hg23324ji yin biao da xian zhe shang diao 。zai jin huang se pu tao qiu jun you dao xia Hg21698he Hg17337ji yin biao da xian zhe shang diao 。you ci tui ce rong jun mei can yu le xian chong de fang yu zuo yong 。cai yong RNAgan rao ji shu dui rong jun mei de gong neng jin hang le chu bu de fen xi ,jing guo dsRNAjin pao hou ,tong guo qPCRji shu jian ce rong jun mei ji yin zhuai lu shui ping ming xian xia jiang 。xian chong cun huo lv de jian ce shi yan biao ming xian chong rong jun mei ji yin Hg23324gan rao hou ,xian chong zai ku cao ya bao gan jun 、su yun jin ya bao gan jun zhong de cun huo lv jun jiang di ;rong jun mei ji yin Hg17337gan rao hou ,xian chong zai jin huang se pu tao qiu jun 、su yun jin ya bao gan jun zhong de cun huo lv jun jiang di ;rong jun mei ji yin Hg21698gan rao hou ,xian chong zai jin huang se pu tao qiu jun 、su yun jin ya bao gan jun zhong de cun huo lv jun jiang di 。tui ce shi rong jun mei ji yin de gan rao shi de xian chong mian yi ji tong shou dao ying xiang ,dui xi jun gan ran bian de min gan ,cun huo lv xia jiang ,yi shang biao ming rong jun mei ke yi fa hui te ding de zuo yong lai bang zhu xian chong di kang xi jun 。yan cao shun shi biao da rong jun mei ji yin hou di qu yan cao dan bai ,tong guo ji suan jun la shu 、zhuo du ce ding fa liang chong fang fa ce ding cu di dan bai dui xi jun de yi zhi zuo yong ,jie guo biao ming :Hg23324chong zu dan bai ke yi yi zhi ku cao ya bao gan jun ;Hg17337chong zu dan bai ke yi yi zhi jin huang se pu tao qiu jun ;Hg23324he Hg21698chong zu dan bai ke yi yi zhi su yun jin ya bao gan jun 。cong zhe xie jie guo ke zhi rong jun mei ke zai ti wai fa hui zuo yong 。ben yan jiu shou ci fen li le da dou bao nang xian chong de rong jun mei ji yin ,xiang xi yan jiu le ji zai xian chong di kang xi jun zhong de biao da shui ping he yi jun gong neng ,wei xian chong fang yu ji li de yan jiu di gong can kao ,wei xian chong sheng wu fang zhi ji li de yan jiu di gong geng hao de fang xiang 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的王宁，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于大豆孢囊线虫论文,溶菌酶论文,表达位点论文,干扰论文,防御作用论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：大豆孢囊线虫论文; 溶菌酶论文; 表达位点论文; 干扰论文; 防御作用论文; 中国农业科学院2019-07-05论文;