导读:本文包含了角膜移植免疫排斥反应论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:干扰素γ,角膜移植,移植物排斥,组织工程
角膜移植免疫排斥反应论文文献综述
宫玉波,刘勇,赵宏伟,许倩倩,郭惠玲[1]（2018）在《Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应的表达》一文中研究指出背景:移植免疫反应是导致角膜移植术后失败的主要原因,但其具体发病机制不明确。有研究报道,Foxp3和吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)与移植免疫有关。目的:研究Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法:以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体建立角膜移植实验模型。将30只BALB/c小鼠随机分为3组,正常组6只;角膜移植组12只;地塞米松治疗组12只。角膜移植组:给予生理盐水;地塞米松治疗组:给予地塞米松注射液10 mg/kg,分别于角膜移植术后0,2,4,6,8,10 d经腹腔注射给药。用裂隙灯观察移植排斥情况,免疫组织化学检测植片γ-干扰素表达,Real-time PCR检测植片内Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达。结果与结论:(1)地塞米松治疗组发生排斥反应时间(20.667±1.033)d,较角膜移植组(14.833±1.472)d明显延迟(P<0.05);(2)角膜移植组术后第14天角膜植片内γ-干扰素及Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达较地塞米松治疗组明显增强(P<0.05);(3)结果提示,γ-干扰素及Foxp3,IDO在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用,降低角膜植片γ-干扰素及Foxp3,IDO表达可能有助于诱导耐受。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年28期）
王昕[2]（2018）在《IL-1β通过调控Th17细胞促进角膜移植免疫排斥反应》一文中研究指出目的:研究白介素-1(interleukin-1β,IL-1β)在角膜移植免疫排斥反应中的作用,进一步探讨IL-1β参与角膜移植免疫排斥反应的机制。方法:(1)构建小鼠穿透性角膜移植模型,并随机分为正常对照组、同系移植组、异系移植组、异系移植并IL-1β中和性抗体处理组。在此基础上,通过裂隙灯观察IL-lβ中和性抗体对角膜移植免疫排斥反应的影响;并利用Real-time PCR和Western blot检测各组小鼠角膜植片中IL-lβ及其受体IL-1R1等的表达水平;免疫荧光分析IL-lβ受体IL-1R1的表达水平及其分布情况。(2)分别利用野生型小鼠和NLRP3缺陷小鼠构建穿透性角膜移植模型,并随机分为正常对照组、同系移植组和异系移植组。在此基础上,通过临床观察研究干预NLRP3炎症小体抑制IL-lβ成熟对角膜抑制免疫排斥反应的影响;并进一步利用Western Blot和免疫荧光技术分析角膜移植免疫排斥过程中NLRP3和IL-1β表达水平的变化;使用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测角膜植片中白介素-17(Interleukin-17,IL-17)和干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的含量。此外,我们还利用NLRP3炎症小体抑制剂Glubide验证阻断NLRP3炎症小体活化对角膜移植免疫排斥反应的影响。(3)体外无菌分离小鼠骨髓,通过巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage-colony stimulating factor,M-SCF)诱导骨髓源巨 噬细胞(Bone marrow derived macrophages,BMDMs)在此基础上,行脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和叁磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)刺激,并通过Western Blot分析不同组别内巨噬细胞中IL-1β表达水平的变化,ELISA检测各组细胞培养上清中IL-1β的含量。(4)无菌分离脾细胞,并将其分成空白对照组、IL-6+TGFβl处理组以及IL-6+TGFβl+IL-1β 处理组;同时利用 Anti-CD3(15μg/ml)和 anti-CD28(5μg/ml)刺激96h,通过流式细胞术检测不同组别细胞中Th17细胞的相对含量,并采用FLLSA检测不同组别细胞培养上清中IL-17的含量。(5)构建小鼠穿透性角膜移植模型,随机分为异系移植组、异系移植并IL-17抗体治疗组。在此基础上,通过临床观察评估IL-17中和性抗体对角膜移植免疫排斥反应的影响;通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)评估不同组别角膜植片的病理改变。结果:(1)与同系移植组相比较,异系移植组小鼠角膜植片中的IL-1β mRNA水平明显着增加;Western blot结果显示:活化形式的IL-1β在异系移植组中的水平明显高于同系移植组。同时,IL-1β受体IL-1R1的表达水平在角膜免疫排斥过程中也显着增强,且广泛表达于发生免疫排斥小鼠角膜植片的上皮层、基质层和内皮层。IL-1β中和实验表明IL-1β中和性抗体可显著延长角膜植片的存活时间。以上结果提示IL-1β可促进角膜移植免疫排斥反应的发生。(2)Western blot结果表明,发生免疫排斥反应的小鼠角膜植片中NLRP3的表达水平显着增加,且主要表达于角膜植片的上皮层、基质层以及内皮层。与对照组相比,利用Glubide抑制NLRP3炎症小体的活性可明显延长角膜植片的存活时间,并有效减轻角膜移植排斥反应。与野生型小鼠模型比较,NLRP3缺陷小鼠角膜植片存活时间明显延长;但向NLRP3缺陷小鼠回输IL-1β则可明显促进角膜移植免疫排斥反应的发生。通过ELISA检测发现,NLRP3缺陷小鼠角膜植片中IL-17的水平显着降低,而IFN-γ的水平则没有显著变化,提示NLRP3炎症小体可能通过影响Th17细胞免疫反应参与角膜移植免疫排斥反应。(3)通过BMDM模型发现,与野生型BMDM比较,NLRP3缺陷的BMDM分泌IL-1β的能力显著下降。通过体外共培养实验发现,与野生型BMDM培养上清处理组相比较,NLRP3缺陷BMDM培养上清刺激Th17细胞分化的能力显着下降;ELISA的结果显示,NLRP3缺陷BMDM培养上清诱导产生的Th17细胞分泌IL-17的能力也明显下降。上述结果表明IL-1β可促进Th17细胞免疫反应。(4)与对照组相比,IL-17中和性抗体可明显延长角膜植片存活时间;病理分析结果显示:IL-17中和性抗体可有效抑制角膜植片炎性细胞浸润。上述结果表明Th17细胞免疫反应参与角膜移植免疫排斥的病理过程。结论:(1)角膜移植免疫排斥过程中,角膜植片中IL-1β的表达水平显著增强,中和IL-1β可延长角膜植片存活时间。(2)角膜移植免疫排斥过程中,角膜植片中的NLRP3表达水平明升高,通过干预NLRP3炎症小体抑制IL-1β的成熟可有效抑制角膜移植免疫排斥反应。(3)IL-1β通过诱导Th17细胞参与角膜移植免疫排斥反应,中和IL-17可延长角膜植片存活时间。(本文来源于《青岛大学》期刊2018-05-25）
张鲁天[3]（2017）在《他克莫司滴眼液预防高危角膜移植免疫排斥反应的研究》一文中研究指出目的:观察他克莫司(Tacrolimus,FK506)滴眼液在高危角膜移植术后预防免疫排斥反应的效果,分析导致术后预防效果欠佳的危险因素。方法:回顾性研究,病例选取山东省眼科医院2013年至2015年间成功施行高危角膜移植术患者48例(50眼),根据术后局部免疫抑制剂使用种类,分为他克莫司组23例(25眼)和环孢素组25例(25眼),所有患者均根据病情联合糖皮质激素治疗。术前进行排斥风险评分,他克莫司组与环孢素组差异无统计学意义,(t=0.65,p=0.52>0.05)。以排斥反应指数(Rejection Index,RI)评分判断植片免疫排斥反应发生,当RI≥5时视为发生免疫排斥反应。术后随访1年,观察两组患者术后植片免疫排斥发生率及发生时间曲线,对导致术后应用他克莫司滴眼液发生免疫排斥反应的危险因素进行分析。结果:1.术后1年内免疫排斥发生率,环孢素组10例(10眼)发生排斥,免疫排斥发生率为40.00%,他克莫司组3例(3眼)发生排斥,免疫排斥发生率为12.00%,他克莫司组免疫排斥率明显低于环孢素组,具有显着性差异(X~2=5.09,p<0.05)。2.术后2月内,他克莫司组和环孢素组排斥发生率均为4%(1眼),排斥发生率无差异。术后2月至12月,他克莫司组免疫排斥发生率为8%(2眼),环孢素组为36%(9眼),他克莫司组免疫排斥发生率明显低于环孢素组。3.术后应用他克莫司滴眼液3眼仍出现排斥:2眼为多次角膜移植手术且全周植床基质中均有大量新生血管生长,其中1眼经历5次角膜移植手术,术后1月出现排斥,1眼经历4次角膜移植手术,术后10月出现排斥;1眼为手术3月后不规律应用他克莫司滴眼液,术后10月出现排斥。结论:1.高危角膜移植术后应用他克莫司滴眼液能够有效预防免疫排斥反应的发生。2.高危角膜移植术后患者分别应用他克莫司滴眼液与应用环孢素滴眼液,2月内预防排斥效果差异不显着,2月后他克莫司滴眼液预防排斥效果明显好于环孢素滴眼液。3.高危角膜移植术后患者应用他克莫司滴眼液并不能完全避免排斥。经历多次角膜移植、全周植床新生血管、术后不规律用药为应用他克莫司滴眼液仍出现排斥反应的危险因素。(本文来源于《青岛大学》期刊2017-05-25）
王菡[4]（2017）在《ResolvinE1对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用》一文中研究指出目的:观察在高危角膜移植动物模型中,ResolvinE1(RvE1)对术后免疫排斥反应的抑制及延长角膜植片存活时间的作用。方法:采用随机数字表法将90只BALB/C小鼠分成异体角膜移植+生理盐水组(Control组)、异体角膜移植+RvE1组(RvE1组)及自体角膜移植组(Syngeneic组),每组各30只。以BALB/c小鼠为受体,C57BL/6小鼠为供体,受体右眼缝线法诱导2周后行穿透性角膜移植手术。在术后连续7天每日对Control组给予不含药物的生理盐水10ul结膜下注射,RvE1组给予ResolvinE1 1ug/10ul,Syngeneic组给予生理盐水10ul。在裂隙灯下观察小鼠角膜移植物透明情况并对其排斥反应进行评分。术后3周对移植物做HE染色,观察角膜病理学改变;采用免疫组化检测角膜CD4、IFN-γ及IL-17的表达;流式细胞术检测术眼侧颈部淋巴结Th1、Th17和Treg细胞的表达情况;荧光定量PCR法及CBA检测Th1、Th2及Th17细胞相关因子的表达水平。结果:RvE1组与Control组相比,植片存活时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。RvE1组植片水肿程度、炎症细胞及CD4+T细胞(Th1/Th17)浸润程度较Control组明显减轻。术后3周,与Control组相比,RvE1组术眼测引流淋巴结中Th1细胞、Th17细胞比例明显减少;植片中IL-1α,IL-1β,TNF-α,IL-2,IL-6,IFN-γ,IL-17A,IL-17F,IL-21和IL-22 mRNA水平明显降低,IL-2,TNF,IL-6,IFN-γ和IL-17蛋白水平也显着降低(差异均有统计学意义)。然而,RvE1组引流淋巴结中Treg细胞比例较Control组无明显改变,IL-4,IL-5和IL-10细胞因子水平亦无明显差异。结论:一、ResolvinE1可抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应,减少植片水肿及炎症细胞的浸润,延长植片存活时间。二、Resolvin E1可能是通过下调Th1/Th17细胞相关的炎症反应来达到抑制免疫排斥的作用。叁、ResolvinE1可能不是通过上调Treg细胞相关的免疫赦免反应来达到抑制免疫排斥的作用。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
张婷[5]（2017）在《虹膜在角膜移植免疫排斥反应中的病理、功能变化及其机制研究》一文中研究指出目的:研究角膜移植免疫排斥反应中虹膜的病理及功能改变,在此基础上探讨前房植入环孢素A缓释片(Cyclosporine A drug delivery system,Cs A DDS)防治角膜移植免疫排斥反应的可能机制。方法:(1)角膜移植免疫排斥时虹膜的病理改变建立以BALB/C小鼠为角膜供体及受体的同系移植组,以C57BL/6J小鼠为角膜供体、BALB/C小鼠为角膜受体的异系移植组,在此基础上着重对虹膜的病理变化进行分析。于术后2周异系移植组小鼠发生角膜移植免疫排斥反应时进行以下实验:(1)血管通透性变化检测:分别采用异硫氰酸荧光素葡聚糖(FITC-Dextran)及伊文思蓝(Evans Blue)为染料行血管造影观察各组小鼠虹膜血管通透性的变化,并通过房水涂片瑞氏-吉姆萨染色观察房水中免疫细胞的浸润情况;(2)细胞因子检测:通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)比较各组小鼠虹膜内主要细胞因子白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-12等表达水平的差异;(3)免疫细胞分析:应用免疫荧光染色观察各组小鼠虹膜内CD4+T淋巴细胞的浸润情况;(4)NF-κB活性分析:利用免疫荧光技术检测虹膜内NF-κB活性的变化(主要检测p65、磷酸化p65的表达和细胞内定位)。(2)免疫微环境改变对虹膜色素上皮细胞功能的影响及其可能机制利用小鼠虹膜色素上皮细胞(Iris pigment epithelial cells,IPEs)与脾淋巴细胞共培养模型,研究IFN-γ模拟的炎性免疫微环境对IPE细胞功能的影响。将IPE细胞分为正常对照组、IFN-γ组、IFN-γ+Cs A组、IFN-γ+NF-κB抑制剂(JSH23)组,分别刺激48小时,收集各组IPE细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记的脾淋巴细胞共培养96h,进行以下分析:(1)通过流式细胞技术检测各组IPE细胞对CD4+T细胞增殖的抑制率;(2)采用ELISA检测各组共培养上清中IFN-γ和IL-2的含量;(3)应用Western blot技术分析IPE细胞中NF-κB活性的变化。(3)前房植入Cs A DDS对虹膜的影响及其抑制角膜移植免疫排斥反应的可能机制利用缝线法诱导兔角膜新生血管并在新生血管化的植床上行穿透性角膜移植,将实验动物随机分为对照组及Cs A DDS组,其中对照组术后未予药物干预,Cs ADDS组在行角膜移植术时前房植入Cs A DDS。术后观察角膜植片的变化情况并着重分析虹膜的病理改变,行如下实验:(1)临床观察:利用裂隙灯显微镜评估角膜植片的排斥情况并绘制角膜生存曲线,通过激光共聚焦显微镜(in vivo laser scanning confocal microscopy)和眼前节光学相干断层成像(anterior segment optical coherence tomography,AS-OCT)等检查评估前房植入Cs A DDS防治角膜移植免疫排斥反应的效果;(2)虹膜及房水病理改变:借助虹膜苏木素-伊红染色、房水涂片瑞氏-吉姆萨染色观察前房植入Cs A DDS对虹膜及房水的影响;(3)虹膜中细胞因子检测:应用q RT-PCR比较各组虹膜中细胞因子和共刺激分子的表达水平差异;(4)房水中细胞因子测定:采用ELISA技术检测房水中IL-2的含量;(5)虹膜中免疫细胞分析:利用免疫荧光技术比较各组虹膜中CD4+T淋巴细胞的浸润情况;(6)虹膜内NF-κB活性分析:通过免疫荧光技术比较各组虹膜中NF-κB的活性变化(主要检测p65的表达和细胞内定位)。结果:(1)角膜移植免疫排斥时虹膜内的炎症反应增强与同系移植组相比,异系移植组小鼠虹膜内血管管腔明显扩大,血管的渗漏性显着增强;虹膜和角膜中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-15的m RNA表达水平显着上调、并出现大量CD4+T淋巴细胞的浸润;虹膜和角膜中p65及磷酸化p65的表达水平均明显增强,且主要定位于细胞核,提示角膜移植免疫排斥过程中虹膜及角膜中的NF-κB处于活化状态。(2)NF-κB活性增强导致IPE细胞免疫抑制功能下降在IFN-γ模拟的炎性免疫微环境下,IPE细胞抑制CD4+T细胞增殖的能力明显降低,其共培养上清中IL-2及IFN-γ的含量显著增加;而Cs A可显着增强IPE细胞对CD4+T细胞增殖的抑制作用(P<0.01),并有效减少共培养上清中IL-2及IFN-γ的含量(P<0.01)。此外,在IFN-γ刺激下IPE细胞的NF-κB活性显着增强(主要表现为p65的磷酸化水平明显增加),而Cs A则可明显抑制IPE细胞的NF-κB活性(主要表现为p65磷酸化水平显着下降);同时利用小分子化合物JSH23抑制NF-κB也能增强IPE细胞的免疫抑制功能,提示Cs A可通过抑制NF-κB的活性改善IPE细胞的免疫抑制功能。(3)前房植入Cs A DDS可有效减轻虹膜内的炎症反应与对照组相比,前房植入Cs A DDS除可以显着抑制角膜内的免疫反应外,还可以显着改善虹膜及房水的病理变化:前房植入Cs A DDS可明显抑制虹膜内的血管扩张并减少房水中免疫细胞的浸润,降低虹膜中IFN-γ、IL-2、IL-6及共刺激分子CD80、CD86的表达水平,抑制房水内IL-2的表达水平(P<0.01),减少虹膜内CD4+T淋巴细胞的浸润。此外,Cs A DDS组虹膜中p65的表达水平及其细胞核定位也较对照组明显减少,提示Cs A DDS对上述病理变化的改善作用可能与NF-κB活性降低有关。结论:(1)角膜移植免疫排斥过程中,虹膜内炎症反应增强,NF-κB异常活化。(2)在IFN-γ模拟的炎性免疫微环境下,IPE细胞NF-κB的活性增强导致其免疫抑制功能下降,而Cs A可通过抑制NF-κB的活性显着改善IPE细胞的免疫抑制功能。(3)前房植入Cs A DDS除抑制角膜内的免疫反应外,还可通过抑制虹膜内的炎症反应有效防治角膜移植免疫排斥。(本文来源于《青岛大学》期刊2017-04-11）
孙璐,赵海霞,关文英[6]（2016）在《联合阻断共刺激信号对兔新生血管化角膜移植术后免疫排斥反应的影响》一文中研究指出目的通过阻断新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后共刺激信号配体和受体的结合,探讨联合阻断共刺激信号对兔高风险角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法缝线法制作新生血管化角膜兔动物模型,随机数字表法将其分组:对照组、MR1组、抗B7-1组、联合处理组,每组12只。术后裂隙灯显微镜下观察角膜排斥反应排斥情况,并记录各组角膜植片存活时间、制作植片生存曲线,比较其差异;术后4周或免疫排斥反应发生时各组随机选取5只兔模型摘取术眼角膜,对植片行组织病理学检查角膜组织结构改变及炎性细胞浸润情况,通过免疫组织化学方法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在角膜植片中的表达。结果与对照组比较,MR1组、抗B7-1组和联合处理组角膜植片均获得了较长的存活时间,差异有统计学意义(P<0.05)。联合处理组分别与MR1组和抗B7-1组比较,生存时间更长,差异均有统计学意义(均为P<0.05);MR1组和抗B7-1组角膜植片生存时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合处理组兔角膜植片炎性细胞浸润较其他叁组明显减少,TNF-α表达平均光密度值显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而MR1组与抗B7-1组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合应用CD40L和抗B7-1单克隆抗体阻断共刺激通路受体和配体的结合,比单独应用其中一种抗体能更有效地降低新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后植片排斥反应的发生率,延长植片的生存时间,提高植片的存活率。(本文来源于《眼科新进展》期刊2016年09期）
王小琳,吴爽,许丽萍,牟孝硕,刘铮[7]（2016）在《他克莫司滴眼液抑制家兔全角膜移植免疫排斥反应》一文中研究指出目的通过家兔全角膜移植动物实验,考察他克莫司滴眼液抑制家兔角膜移植免疫排斥反应的量效关系,为他克莫司滴眼液的临床应用提供实验依据。方法建立家兔全角膜移植排斥反应模型,随机分成A组、B组、C组、D组、E组和F组。其中A组为溶剂对照组,B组、C组、D组、E组质量分数分别为0.01%、0.025%、0.05%、0.1%的他克莫司滴眼液,F组为环孢霉A滴眼液。用裂隙灯记录比较各组排斥反应指数(rejection index,RI)和植片存活时间,连续给药28 d后摘取角膜进行组织学检查。结果术后B组、C组、D组、E组和F组各组与A组比较,角膜植片RI和植片存活时间均有显着差异(P<0.05或P<0.01),呈剂量-效应关系,淋巴细胞浸润及新生血管生成均明显减少。结论质量分数0.05%的他克莫司滴眼液可抑制家兔全角膜移植免疫排斥反应。(本文来源于《沈阳药科大学学报》期刊2016年01期）
张旺,赵敏[8]（2015）在《角膜移植免疫排斥反应局部治疗的研究进展》一文中研究指出角膜移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的重要原因。角膜移植术后局部抗排斥治疗以其用药剂量小而局部药物浓度高、副反应少,具有巨大的发展潜力。本文主要回顾了近年来用于局部抗角膜移植排斥反应药物的相关研究,分析该类药物的作用机制,并评价其疗效及安全性,探讨局部用药防治角膜移植术后免疫排斥反应的发展方向。(本文来源于《眼科新进展》期刊2015年08期）
李萍萍,吴京,马明,于健,王博[9]（2015）在《白细胞介素-33在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用》一文中研究指出目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-33在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后免疫排斥反应中的作用。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体建立同种异体大鼠穿透性角膜移植模型,随机分为4组,取Wistar鼠4只(8眼)为正常对照组(A组),另取24只Wistar鼠作为自体角膜移植组(B组),最后取24只SD鼠和48只Wistar鼠行SD-Wistar鼠之间同种异体角膜移植(C组、D组),术后D组每日滴典必殊眼液(每日2次),共2周。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评估;分别于术后第5天、第14天取材,行实时荧光定量PCR、组织病理学观察,检测各组角膜组织内IL-33 mR NA的表达水平。结果 C组角膜植片的存活时间为(10.13±0.44)d,D组为(18.00±0.66)d,两组间差异有统计学意义(P=0.000)。IL-33 mR NA在A组和B组角膜组织中均有表达,C组角膜组织中IL-33 mR NA表达水平明显升高,而在D组中表达显着降低(P<0.05)。结论IL-33可能参与大鼠角膜移植术后免疫排斥反应。(本文来源于《眼科新进展》期刊2015年06期）
张旺[10]（2015）在《角膜移植免疫排斥反应的局部治疗研究进展》一文中研究指出角膜移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的重要原因。角膜移植术后局部抗排斥治疗以其用药剂量小而局部药物浓度高、副反应少,具有巨大的发展潜力。本文主要回顾了近年来用于局部抗角膜移植排斥反应药物的相关研究,分析该类药物作用机制,并评价其疗效及安全性,探讨局部用药防治角膜移植术后免疫排斥反应的发展方向。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2015-05-01）
角膜移植免疫排斥反应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究白介素-1(interleukin-1β,IL-1β)在角膜移植免疫排斥反应中的作用,进一步探讨IL-1β参与角膜移植免疫排斥反应的机制。方法:(1)构建小鼠穿透性角膜移植模型,并随机分为正常对照组、同系移植组、异系移植组、异系移植并IL-1β中和性抗体处理组。在此基础上,通过裂隙灯观察IL-lβ中和性抗体对角膜移植免疫排斥反应的影响;并利用Real-time PCR和Western blot检测各组小鼠角膜植片中IL-lβ及其受体IL-1R1等的表达水平;免疫荧光分析IL-lβ受体IL-1R1的表达水平及其分布情况。(2)分别利用野生型小鼠和NLRP3缺陷小鼠构建穿透性角膜移植模型,并随机分为正常对照组、同系移植组和异系移植组。在此基础上,通过临床观察研究干预NLRP3炎症小体抑制IL-lβ成熟对角膜抑制免疫排斥反应的影响;并进一步利用Western Blot和免疫荧光技术分析角膜移植免疫排斥过程中NLRP3和IL-1β表达水平的变化;使用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测角膜植片中白介素-17(Interleukin-17,IL-17)和干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的含量。此外,我们还利用NLRP3炎症小体抑制剂Glubide验证阻断NLRP3炎症小体活化对角膜移植免疫排斥反应的影响。(3)体外无菌分离小鼠骨髓,通过巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage-colony stimulating factor,M-SCF)诱导骨髓源巨 噬细胞(Bone marrow derived macrophages,BMDMs)在此基础上,行脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和叁磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)刺激,并通过Western Blot分析不同组别内巨噬细胞中IL-1β表达水平的变化,ELISA检测各组细胞培养上清中IL-1β的含量。(4)无菌分离脾细胞,并将其分成空白对照组、IL-6+TGFβl处理组以及IL-6+TGFβl+IL-1β 处理组;同时利用 Anti-CD3(15μg/ml)和 anti-CD28(5μg/ml)刺激96h,通过流式细胞术检测不同组别细胞中Th17细胞的相对含量,并采用FLLSA检测不同组别细胞培养上清中IL-17的含量。(5)构建小鼠穿透性角膜移植模型,随机分为异系移植组、异系移植并IL-17抗体治疗组。在此基础上,通过临床观察评估IL-17中和性抗体对角膜移植免疫排斥反应的影响;通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)评估不同组别角膜植片的病理改变。结果:(1)与同系移植组相比较,异系移植组小鼠角膜植片中的IL-1β mRNA水平明显着增加;Western blot结果显示:活化形式的IL-1β在异系移植组中的水平明显高于同系移植组。同时,IL-1β受体IL-1R1的表达水平在角膜免疫排斥过程中也显着增强,且广泛表达于发生免疫排斥小鼠角膜植片的上皮层、基质层和内皮层。IL-1β中和实验表明IL-1β中和性抗体可显著延长角膜植片的存活时间。以上结果提示IL-1β可促进角膜移植免疫排斥反应的发生。(2)Western blot结果表明,发生免疫排斥反应的小鼠角膜植片中NLRP3的表达水平显着增加,且主要表达于角膜植片的上皮层、基质层以及内皮层。与对照组相比,利用Glubide抑制NLRP3炎症小体的活性可明显延长角膜植片的存活时间,并有效减轻角膜移植排斥反应。与野生型小鼠模型比较,NLRP3缺陷小鼠角膜植片存活时间明显延长;但向NLRP3缺陷小鼠回输IL-1β则可明显促进角膜移植免疫排斥反应的发生。通过ELISA检测发现,NLRP3缺陷小鼠角膜植片中IL-17的水平显着降低,而IFN-γ的水平则没有显著变化,提示NLRP3炎症小体可能通过影响Th17细胞免疫反应参与角膜移植免疫排斥反应。(3)通过BMDM模型发现,与野生型BMDM比较,NLRP3缺陷的BMDM分泌IL-1β的能力显著下降。通过体外共培养实验发现,与野生型BMDM培养上清处理组相比较,NLRP3缺陷BMDM培养上清刺激Th17细胞分化的能力显着下降;ELISA的结果显示,NLRP3缺陷BMDM培养上清诱导产生的Th17细胞分泌IL-17的能力也明显下降。上述结果表明IL-1β可促进Th17细胞免疫反应。(4)与对照组相比,IL-17中和性抗体可明显延长角膜植片存活时间;病理分析结果显示:IL-17中和性抗体可有效抑制角膜植片炎性细胞浸润。上述结果表明Th17细胞免疫反应参与角膜移植免疫排斥的病理过程。结论:(1)角膜移植免疫排斥过程中,角膜植片中IL-1β的表达水平显著增强,中和IL-1β可延长角膜植片存活时间。(2)角膜移植免疫排斥过程中,角膜植片中的NLRP3表达水平明升高,通过干预NLRP3炎症小体抑制IL-1β的成熟可有效抑制角膜移植免疫排斥反应。(3)IL-1β通过诱导Th17细胞参与角膜移植免疫排斥反应,中和IL-17可延长角膜植片存活时间。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
角膜移植免疫排斥反应论文参考文献
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